抗肝炎活性组合物及其制备方法和应用

本发明属于药物化学，涉及一种抗肝炎活性组合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、波棱瓜子壳为葫芦科植物波棱瓜的成熟果壳，民间常用来治疗黄疸性肝炎(杨竞生,初称江措.迪庆藏药[m].云南民族出版社,1987.)，对其进行化学成分分析，发现其富含总葫芦素(total cucurbitacins,tcs)。葫芦素类是广泛存在于葫芦科植物中的一类四环三萜类化合物，具有多种药理活性，如抗肿瘤、抗炎、抗氧化以及神经保护等(varela c,melim c,neves b g,et al.cucurbitacins as potential anticancer agents:newinsights on molecular mechanisms[j].journal of translational medicine,2022,20(1):1-16.)。基于其优异的药理活性，20世纪80年代从中药甜瓜蒂中开发出一味中成药-葫芦素片，其主要成分是葫芦素类(标称主要成分为葫芦素b和葫芦素e)，主要用于肝炎和原发性肝癌的辅助治疗。但关于葫芦素片的相关资料很少，受制于当时的技术条件，对于主要成分的分析、分离与鉴定存在疏漏，甚至缺乏必要的安全性评价资料。同时，受提取原料、批次的影响，其主要成分的含量会有差异，从而影响药效稳定性(杨丽玲,吴铁.不同粉碎度对人参皂苷3种不同单体提取率影响[j].长春中医药大学学报,2009,25(05):669-671.doi:10.13463/j.cnki.cczyy.2009.05.066.)。

2、目前国内外尚无对于波棱瓜子壳中tcs的制备、色谱分析优化、含量测定等的研究，更无基于tcs与葫芦素片在有效性、安全性方面的比较研究。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种抗肝炎活性组合物，按质量百分比计，由以下成分组成：葫芦素b 70.3±0.4％、异葫芦素b 26.1±0.2％和葫芦素e 3.6±0.3％。

2、本发明的目的之二在于提供一种上述抗肝炎活性组合物的制备方法，包括以下步骤：

3、步骤1，将干燥的波棱瓜子壳破碎成粉末，然后将粗粉用乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，合并滤液，减压浓缩，得到乙醇提取物；

4、步骤2，将乙醇提取物混悬在水中，并依次使用石油醚和乙酸乙酯萃取，然后将乙酸乙酯相用体积比为8：2～4：6的石油醚-丙酮在硅胶柱上进行梯度洗脱，用薄层色谱法(tlc)以体积比为25：1的二氯甲烷-丙酮为展开剂检测各流份；

5、步骤3、合并步骤2中在254nm紫外灯下rf值在0.15～0.3的流份，减压浓缩，真空干燥，得到由葫芦素b 70.3±0.4％、异葫芦素b 26.1±0.2％和葫芦素e 3.6±0.3％组成的抗肝炎活性组合物。

6、优选地，步骤1中，波棱瓜子壳破碎至30目，波棱瓜子壳粗粉与乙醇的质量体积比为1：10～15，kg：l。

7、优选地，步骤2中，石油醚-丙酮的梯度体积比依次为8：2、7：3、6：4、5：5、4：6。

8、本发明的目的之三在于提供上述抗肝炎活性组合物在制备肝损伤治疗药物中的应用。

9、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

10、(1)本发明的抗肝炎活性组合物与葫芦素片的组成相同，但各成分存在明显差异。与葫芦素片(口服ld50为14±3mg/kg bw)相比，本发明的抗肝炎活性组合物的半数致死量更高(口服ld50为36.21mg/kg bw)，noael为15mg/kg bw，其安全性更高；

11、(2)本发明从成分分离与鉴定、含量测定、组织病理切片、生化分析、给药期间体重变化、相对肝脏指数、1h nmr指认生物标志物、ld50和noael等多方面对抗肝炎活性组合物的抗肝炎效果进行了考察，证明了抗肝炎活性组合物具有显著的抗肝炎效果，甚至优于同等剂量的葫芦素片；

12、(3)本发明提供的抗肝炎活性组合物的制备方法，以来源广泛的波棱瓜子壳为原料，通过优化提取溶剂、洗脱剂组成及色谱检测等方法，获得了纯度高、质量可控的抗肝炎活性组合物，保证了tcs质量的均一性、可控性。

技术特征：

1.抗肝炎活性组合物，其特征在于，按质量百分比计，由以下成分组成：葫芦素b70.3±0.4％、异葫芦素b 26.1±0.2％和葫芦素e 3.6±0.3％。

2.根据权利要求1所述的抗肝炎活性组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，波棱瓜子壳破碎至30目，波棱瓜子壳粗粉与乙醇的质量体积比为1：10～15，kg：l。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，石油醚-丙酮的梯度体积比依次为8：2、7：3、6：4、5：5、4：6。

5.根据权利要求1所述的抗肝炎活性组合物在制备肝损伤治疗药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种抗肝炎活性组合物及其制备方法和应用。所述的抗肝炎活性组合物按质量百分比计，由葫芦素B 70.3±0.4％、异葫芦素B 26.1±0.2％和葫芦素E 3.6±0.3％组成。本发明以来源广泛的波棱瓜子壳为原料，通过优化提取溶剂、洗脱剂组成及色谱检测等方法，获得了纯度高、质量可控的抗肝炎活性组合物，保证了TCs质量的均一性、可控性。本发明的抗肝炎活性组合物与葫芦素片相比，抗肝炎活性组合物的半数致死量更高，NOAEL为15mg/kg BW，具有更高的安全性。

技术研发人员：汪俊松,刘文亚,冯欣
受保护的技术使用者：南京理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15