一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液及冻干方法与流程

本发明属于血液制品领域，尤其涉及一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液及冻干方法。

背景技术：

1、人纤维蛋白原(human fibrinogen，fg)是血浆中的蛋白成分，含量高达2-4g/l，在人凝血系统中发挥着关键作用,凝血的最后阶段是fg在凝血酶的作用下转变为纤维蛋白，纤维蛋白和其他血细胞成分聚集成不溶性团状物达到止血的目的。

2、目前,国内大部分厂家均采取低温乙醇工艺来制备fg制剂，并采用s/d法与干热灭活相结合的方式，对病毒进行灭活：在原液生产中加入了s/d法以灭活脂包膜病毒和制品冻干后采用100℃干热法来灭活非脂包膜病毒。但是由于使用的试剂选择不合适、生产工艺设置不合理等问题，在经过干热灭活后产品均出现凝固活力不佳、复溶时间长(一般都大于20min)、纤维结合蛋白会发生变性、复溶后有大量变性蛋白析出、制品在干热后缩坨及凝固活力时间长等问题。

技术实现思路

1、鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液及冻干方法。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、本发明提供一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液，包括枸橼酸钠和盐酸精氨酸，枸橼酸钠的含量为1.3％，盐酸精氨酸的含量为3.1％。优选地，配制液由枸橼酸钠和盐酸精氨酸组成，配制液中，枸橼酸钠的含量为1.3％，盐酸精氨酸的含量为3.1％。

4、本发明的有益效果包括：发明人筛选了多组配方，在研究中意外发现，采用上述的配制液可以提高人纤维蛋白原的质量，有效的缩短复溶时间以及凝固活力时间，并极大的提高了复溶后的制品的外观。

5、进一步，配制液的ph为6.80-7.20，使用温度为24-33℃。

6、采用上述方案的有益效果包括：发明人才研究中意外发现，采用上述ph和温度范围内的配制液是最适宜的缓冲体系。

7、本发明提供上述配制液在人纤维蛋白原制备中的应用。

8、本发明提供一种提高人纤维蛋白原制备质量的冻干方法，包括以下步骤：预冻、降温抽真空、一次升华、二次升华。

9、采用上述方案的有益效果包括：采用上述的配制液可以提高人纤维蛋白原的质量，有效的缩短复溶时间以及凝固活力时间，并极大的提高了复溶后的制品的外观。

10、进一步，预冻包括以下操作条件：板温由常温降温至设定温度0℃保持2h30min，板温降温至设定温度-10℃保持2h，板温降温至-28℃保持1h，板温降温至设定温度-48℃保持4h。

11、采用上述方案的有益效果包括：根据实验验证，本发明提供的优化后的冻干曲线对复溶时间及凝固活力结果有较好的提升。

12、进一步，降温抽真空包括以下操作条件：降温冷凝器至设定温度-50℃后开始抽真空，真空达10pa以内后稳定真空1h。

13、采用上述方案的有益效果包括：根据实验验证，本发明提供的优化后的冻干曲线对复溶时间及凝固活力结果有较好的提升。

14、进一步，一次升华包括以下操作条件：经2h匀速升温板层至设定温度-20℃保持5h，板层经4h匀速升温至设定温度-15℃保持10h，板层经4h匀速升温升温至设定温度-10℃保持16h40min，板层经3h匀速升温至设定温度-5℃保持10h，板层经3h匀速升温至设定温度-2℃保持10h，板层经4h匀速升温至设定温度0℃保持4h，板层经2h匀速升温至设定温度10℃保持1h。

15、采用上述方案的有益效果包括：根据实验验证，本发明提供的优化后的冻干曲线对复溶时间及凝固活力结果有较好的提升。

16、进一步，二次升华包括以下操作条件：经6h匀速升温至设定温度35℃，保持板温32-35℃持续干燥逐渐抽至最高真空，升华结束。

17、采用上述方案的有益效果包括：根据实验验证，本发明提供的优化后的冻干曲线对复溶时间及凝固活力结果有较好的提升。

18、本发明提供一种提高人纤维蛋白原制备质量的方法，采用上述配制液制备人纤维蛋白原，和/或采用上述冻干方法制备人纤维蛋白原。

19、进一步，包括以下步骤：

20、(1)制取组分i沉淀：将去冷沉淀血浆，调整ph、调整乙醇浓度，离心，得到组分i沉淀和上清液；

21、(2)溶解组分i沉淀，过滤，得到滤液a；

22、(3)将滤液a灭活病毒，得到病毒灭活液；

23、(4)纤原首次纯化沉淀：将病毒灭活液利用乙醇沉淀；

24、(5)离心分离纤原首次纯化沉淀；

25、(6)离心分离纤原首次纯化沉淀的溶解，过滤；

26、(7)纤原精制沉淀：将过滤后的溶解液利用乙醇沉淀，得到混合液b；

27、(8)离心分离纤原精制沉淀：将混合液b进行离心，得到纤原精制沉淀；

28、(9)将离心分离纤原精制沉淀采用配制液溶解，溶解之后过滤；

29、(10)超滤：初浓缩，之后用配制液进行恒体积透析，终浓缩；

30、(11)利用配制液配制半成品；

31、(12)除菌、分装；

32、(13)冻干；

33、(14)干热病毒灭活。

34、采用上述方案的有益效果包括：采用上述方法可以提高人纤维蛋白原的质量，有效的缩短复溶时间以及凝固活力时间，并极大的提高了复溶后的制品的外观。

技术特征：

1.一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液，其特征在于，包括枸橼酸钠和盐酸精氨酸，枸橼酸钠的含量为1.3％，盐酸精氨酸的含量为3.1％。

2.根据权利要求1所述配制液，其特征在于，配制液的ph为6.80-7.20，使用温度为24-33℃。

3.权利要求1或权利要求2所述配制液在人纤维蛋白原制备中的应用。

4.一种提高人纤维蛋白原制备质量的冻干方法，包括以下步骤：预冻、降温抽真空、一次升华、二次升华。

5.根据权利要求4所述冻干方法，其特征在于，预冻包括以下操作条件：板温由常温降温至设定温度0℃保持2h30min，板温降温至设定温度-10℃保持2h，板温降温至-28℃保持1h，板温降温至设定温度-48℃保持4h。

6.根据权利要求4或5所述冻干方法，其特征在于，降温抽真空包括以下操作条件：降温冷凝器至设定温度-50℃后开始抽真空，真空达10pa以内后稳定真空1h。

7.根据权利要求4或5所述冻干方法，其特征在于，一次升华包括以下操作条件：经2h匀速升温板层至设定温度-20℃保持5h，板层经4h匀速升温至设定温度-15℃保持10h，板层经4h匀速升温升温至设定温度-10℃保持16h40min，板层经3h匀速升温至设定温度-5℃保持10h，板层经3h匀速升温至设定温度-2℃保持10h，板层经4h匀速升温至设定温度0℃保持4h，板层经2h匀速升温至设定温度10℃保持1h。

8.根据权利要求4或5所述冻干方法，其特征在于，二次升华包括以下操作条件：经6h匀速升温至设定温度35℃，保持板温32-35℃持续干燥抽至最高真空升华结束。

9.一种提高人纤维蛋白原制备质量的方法，其特征在于，采用权利要求1或权利要求2所述配制液制备人纤维蛋白原，和/或采用权利要求4-8任一项所述冻干方法制备人纤维蛋白原。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明涉及一种提高人纤维蛋白原制备质量的配制液及冻干方法。配制液包括枸橼酸钠和盐酸精氨酸，枸橼酸钠的含量为1.3％，盐酸精氨酸的含量为3.1％。冻干方法包括预冻、降温抽真空、一次升华、二次升华步骤。本发明提供的配制液及冻干方法可以提高人纤维蛋白原的质量，有效的缩短复溶时间以及凝固活力时间，并极大的提高了复溶后的制品的外观。

技术研发人员：杨莉,亓利思,夏爽,闫磊,孙婷,程海波,胡宗仁
受保护的技术使用者：哈尔滨派斯菲科生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13