基质金属蛋白酶-9阻断剂在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用

本发明属于慢性hbv感染治疗药物，具体涉及基质金属蛋白酶-9(mmp-9)阻断剂在制备治疗慢性hbv感染药物中的应用。

背景技术：

1、目前尽管有针对乙型肝炎病毒(hepatitis b virus，hbv)的高效预防性疫苗，但仍有大量的慢性乙肝病毒携带者，其中相当一部分人发展为慢性乙型肝炎(chronichepatitis b，chb)，并逐步进展为严重的肝脏疾病，包括肝纤维化、肝硬化甚至是肝细胞癌。目前，临床指南中批准了两种类型的药物作为chb的一线治疗药物：核苷类似物(nucs)和聚乙二醇化干扰素α(peg-ifnα)。虽然目前的治疗方法可以有效地控制hbv感染，但它们很少能实现慢性乙肝病毒感染的治愈。这主要是因为hbv dna、共价闭合环状dna(cccdna)与宿主基因组整合，使用这些药物难以将病毒彻底清除。

2、hbv感染的结局主要由病毒与宿主免疫系统特别是适应性免疫应答的相互作用决定的。近几十年来，大多数关于抗hbv适应性免疫应答的研究都集中在t细胞免疫方面。急性和慢性hbv感染患者在t细胞免疫应答的程度和功能上存在明显差异，hbv特异性cd8 t细胞在慢性感染患者中检测到的频率明显低于急性感染患者。作为适应性免疫的重要组成部分之一，b细胞介导体液免疫反应产生hbv特异性抗体中和病毒颗粒。此外，b细胞还可以通过抗原呈递和免疫调节等各种机制参与抗hbv体液免疫的发展和调控。le bert等人通过荧光抗体标记法在chb患者中分离出乙型肝炎表明抗原(hbsag)和乙型肝炎核心抗原(hbcag)特异性的b细胞，发现hbsag特异性b细胞的表型和功能存在显著异常，处于功能低下的状态。

3、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，mmps)是一种依赖锌的蛋白水解金属酶。基质金属蛋白酶9(mmp-9)是基质金属蛋白酶最复杂的形式之一，以酶原或非活性形式由内皮细胞、白细胞、成纤维细胞、中性粒细胞和巨噬细胞等分泌，具有降解细胞外基质(extracellular matrix，ecm)成分的能力，在病理生理功能中具有重要作用。mmp-9的过表达和调控异常与多种疾病有关，在正常生理状态下，基质金属蛋白酶受到严格调控，表达量低。这些酶的失调和过度表达与各种疾病有关。mmp-9在慢性hbv感染的建立和免疫导致的肝脏炎症中发挥作用，chen等人报道了hbv感染可以诱导患者的白细胞产生mmp-9，mmp-9通过结合i型干扰素受体，抑制其下游的jak/stat信号通路，从而削弱了i型干扰素的抗病毒作用，促进了hbv复制；hbv可能利用这一机制建立和维持其慢性感染。sitia等人报道了在hbv转基因小鼠模型中，中性粒细胞可以通过分泌mmp-9募集非抗原特异性的单个核细胞浸润至肝脏中，从而导致肝脏的炎症损伤。与此发现一致的是，li等人报道了mmp-9在不同程度chb患者中均显著升高，可能在肝脏病理进展中起重要作用，且与炎症密切相关。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提出应用于治疗慢性hbv感染的可靠性药物，解决现有技术采用治疗方法以及其他药物的缺陷。

2、本发明提出基质金属蛋白酶-9阻断剂在制备治疗慢性hbv感染药物中的应用。

3、进一步地，所述药物能够降低hbsag和hbeag的含量。

4、进一步地，所述阻断剂包括mmp-9基因敲除试剂、mmp-9蛋白抑制剂。

5、优选地，所述基因敲除试剂包括mmp-9基因敲除质粒或rnai腺相关病毒中的一种或多种。

6、优选地，所述基因敲除试剂基于如下核苷酸序列作为目标序列进行设计：gctctgctgccccttaccagc。

7、优选地，所述rnai腺相关病毒构建方法步骤为：1)基于序列靶点合成含干扰序列的双链dnaoligo，通过其两端含酶切位点直接连入酶切后的rna干扰腺相关病毒目的载体上；2)将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落先进行pcr鉴定，对阳性菌落再进行测序鉴定，所鉴定阳性的克隆即为rnai腺相关病毒。

8、优选地，所述目的载体为gv478。

9、进一步地，所述mmp-9蛋白抑制剂包括阻断肽、中和抗体或timp-1中的一种或多种，用于抑制mmp-9蛋白酶的活性。

10、相比现有技术，本发明的有益效果在于：

11、本发明提供了以mmp-9作为新的免疫作用靶点，在慢性hbv感染过程中，通过基质金属蛋白酶-9阻断剂可以达到促进hbv病毒清除的免疫治疗作用，在临床应用上有重要意义。

技术特征：

1.基质金属蛋白酶-9阻断剂在制备治疗慢性hbv感染药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于降低hbsag和hbeag。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述阻断剂包括mmp-9基因敲除试剂、mmp-9蛋白抑制剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因敲除试剂包括mmp-9基因敲除质粒或rnai腺相关病毒中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因敲除试剂基于如下核苷酸序列作为目标序列进行设计：gctctgctgccccttaccagc。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述rnai腺相关病毒构建方法步骤为：1)基于序列靶点合成含干扰序列的双链dnaoligo，通过其两端含酶切位点直接连入酶切后的rna干扰腺相关病毒目的载体上；2)将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落先进行pcr鉴定，对阳性菌落再进行测序鉴定，所鉴定阳性的克隆即为rnai腺相关病毒。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述目的载体为gv478。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述mmp-9蛋白抑制剂包括阻断肽、中和抗体或timp-1中的一种或多种。

技术总结
本发明提出了基质金属蛋白酶‑9(Mmp‑9)阻断剂在制备治疗慢性HBV感染药物中的应用；所述阻断剂以Mmp‑9作为新的免疫作用靶点，在慢性HBV感染过程中，通过基质金属蛋白酶‑9阻断剂可以达到促进HBV病毒清除的免疫治疗作用，在临床应用上有重要意义。

技术研发人员：刘嘉,迪丽胡玛尔·阿不力克木,王璐,郑昕
受保护的技术使用者：华中科技大学同济医学院附属协和医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14