戊糖片球菌SMM914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用的制作方法

本发明涉及益生菌的应用领域，具体而言涉及戊糖片球菌smm914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用。

背景技术：

1、慢性阻塞性肺病是一种具有不可逆性气流阻塞特征的慢性支气管炎或肺气肿，且吸入空气污染物导致呼吸道慢性炎症反应增强，可进一步发展为肺源性心脏病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。

2、氧化应激是慢性阻塞性肺病的主要驱动机制，由于香烟烟雾、pm2.5等外源性氧化剂对肺部的刺激，使其产生大量的内源性活性氧，导致气道乃至全身的氧化应激水平系统性增加。同时，氧化应激水平的上调促进了慢性炎症的进展，加速了dna损伤以及肺组织衰老，甚至引起类固醇耐药性，且当机体处于慢性阻塞性肺病的发展进程中，常常会诱发众多并发症。

3、目前临床中常用的有布地奈德、氟替卡松等类固醇类激素。除此之外，还有β2受体激动剂类药，抗胆碱药以及抗氧化剂都可用于慢性阻塞性肺病的治疗。但是，这些药物均存在一些毒副作用，长期使用影响身体的健康，给患者带来了沉重的生理和经济负担。

4、根据2014年联合国粮食及农业组织和世界卫生组织对益生菌的定义，将其认定为一种“活微生物”。当给宿主足够数量的益生菌时，会给宿主带来有益的健康影响。国际益生菌和益生元科学协会于2017年更新并扩展了益生菌的概念：一种被宿主微生物选择性地使用的底物，对健康有益。

5、采用益生菌作为膳食性药剂，对人体无毒副作用，且更为经济，但目前市场上还未出现此类药剂以提高内源性抗氧化能力从而改善慢性阻塞性肺病。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供戊糖片球菌smm914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用，该菌株可在慢性阻塞性肺病模型小鼠中发挥抗氧化作用并改善肠道菌群组成，克服了现有抗氧化剂无法高效的提高内源性氧化性的难题，拓宽了戊糖片球菌smm914的使用范围，开发了一种有效、新的、无毒副作用的治疗慢性阻塞性肺病的药物。

2、本发明第一方面涉及保藏编号为cgmcc:20160的戊糖片球菌smm914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用。

3、优选地，戊糖片球菌smm914通过提高内源性活性氧的水平，提高肺部抗氧化能力，并通过调控肠道益生菌，改善肠道菌群组成，为机体良好的内环境提供帮助，从而有效延缓慢性阻塞性肺病的发展进程。

4、本发明第二方面涉及一种用于治疗慢性阻塞性肺病的药物，包括保藏编号为cgmcc:20160的戊糖片球菌smm914。

5、本发明第三方面涉及一种用于治疗慢性阻塞性肺病的药物的制备方法，包括以下步骤：

6、s1、将在-80℃冰箱保藏的戊糖片球菌smm914种放入预先置入冰块的烧杯中，缓慢融化，得到菌液；

7、s2、将s1得到的菌液用一次性涂布棒适量蘸取后，均匀涂抹至mrs固体培养板上；

8、s3、将s2得到的mrs固体培养板隔绝氧气，并于恒温培养箱中进行培养；

9、s4、在s3培养后的培养板中挑取单个菌落进行划线，隔绝氧气，并于恒温培养箱中培养，对菌落进行纯化处理，得到单克隆菌株；

10、s5、挑取部分s4得到的单克隆菌株，并转移至mrs液体培养基中振荡培养，得到处于生长平台期的戊糖片球菌液；

11、s6、当s5得到的戊糖片球菌液达到所需od值后，用pbs溶液洗涤、重悬菌体，得到所述药物。

12、优选地，所述步骤s3中，培养条件为：置于37℃培养箱中，先正置培养板30min后，倒置培养12～24h。

13、优选地，所述步骤s4中，培养条件为：置于37℃培养箱中先正置培养板30min后，倒置培养48h。

14、优选地，所述步骤s5中，用移液枪枪头挑取部分步骤s4所得单克隆菌株，转移至1ml的37℃的mrs液体培养基中，在37℃、900rpm条件下振荡培养12～18h，得到处于生长平台期的戊糖片球菌液。

15、优选地，通过以下方法，确定是否获得处于生长平台期的戊糖片球菌液：

16、在步骤s5培养的过程中，吸取500μl培养的戊糖片球菌液至比色皿中，提前用mrs液体培养基为溶剂校零后，在od600 nm处测定用2mlmrs培养基稀释5倍后菌液的od值，当od值乘以对应的稀释倍数后为109cfu/ml，即得到处于生长平台期的戊糖片球菌液。

17、优选地，若od值乘以对应的稀释倍数没有达到109cfu/ml，则继续培养，并再次测量od值，如此循环，直至得到处于生长平台期的戊糖片球菌液。

18、优选地，所述步骤s6中，洗涤、重悬菌体的过程为：室温离心步骤s5得到的处于生长平台期的戊糖片球菌液，弃去上清液，再将得到的菌体采用pbs溶液重复室温离心洗涤2次，将洗涤完成的菌体采用pbs溶液重悬。

19、本发明的有益效果在于：

20、本发明提供了糖片球菌smm914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物领域的新用途，通过实验，验证了戊糖片球菌smm914具有强大的抗氧化能力，提高内源性活性氧的水平，缓解由氧化应激导致的慢性炎症甚至是肺损伤。另外，此菌株利用自身特性，能够抑制多种致病菌的生长，为机体良好的内环境提供帮助，达到治疗慢性阻塞性肺病的目的。

21、本发明提供的药物克服了膳食用抗氧化剂提高内源性活性氧不足的难题，通过体内多种抗氧化途径，调节活性氧水平，能够有效延缓并治疗慢性阻塞性肺病小鼠。

22、本发明提供的药物相较与传统的化学药物，具有绿色环保，无任何毒副作用，可以作为患者预防性和治疗性药物进行长期服用，且通过mrs培养基进行选择培养，用pbs溶液清洗、重悬菌体，制备方法简单有效。

技术特征：

1.保藏编号为cgmcc:20160的戊糖片球菌smm914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，戊糖片球菌smm914通过提高内源性活性氧的水平，提高肺部抗氧化能力，并通过调控肠道益生菌，改善肠道菌群组成，为机体良好的内环境提供帮助，从而有效延缓慢性阻塞性肺病的发展进程。

3.一种用于治疗慢性阻塞性肺病的药物，其特征在于，包括保藏编号为cgmcc:20160的戊糖片球菌smm914。

4.一种用于治疗慢性阻塞性肺病的药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤s3中，培养条件为：置于37℃培养箱中，先正置培养板30min后，倒置培养12～24h。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤s4中，培养条件为：置于37℃培养箱中先正置培养板30min后，倒置培养48h。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤s5中，用移液枪枪头挑取部分步骤s4所得单克隆菌株，转移至1ml的37℃的mrs液体培养基中，在37℃、900rpm条件下振荡培养12～18h，得到处于生长平台期的戊糖片球菌液。

8.根据权利要求4或7所述的方法，其特征在于，通过以下方法，确定是否获得处于生长平台期的戊糖片球菌液：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，若od值乘以对应的稀释倍数没有达到109cfu/ml，则继续培养，并再次测量od值，如此循环，直至得到处于生长平台期的戊糖片球菌液。

10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤s6中，洗涤、重悬菌体的过程为：室温离心步骤s5得到的处于生长平台期的戊糖片球菌液，弃去上清液，再将得到的菌体采用pbs溶液重复室温离心洗涤2次，将洗涤完成的菌体采用pbs溶液重悬。

技术总结
本发明提供戊糖片球菌SMM914在制备治疗慢性阻塞性肺病药物中应用，该菌株可在慢性阻塞性肺病模型小鼠中发挥抗氧化作用并改善肠道菌群组成，克服了现有抗氧化剂无法高效的提高内源性氧化性的难题，拓宽了戊糖片球菌SMM914的使用范围，开发了一种有效、新的、无毒副作用的治疗慢性阻塞性肺病的药物。

技术研发人员：张允雷,刘怡婷,冯静
受保护的技术使用者：南京市江宁医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14