一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法与流程

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法。

背景技术：

1、布奎那(brequinar)是一种二氢乳酸脱氢酶抑制剂，具有抗病毒、免疫抑制、抗炎、抗肿瘤等多种潜在药理作用。目前布奎那的抗肿瘤作用已得到广泛的研究，如治疗晚期黑色素瘤、头颈部鳞癌、结直肠癌、胃癌和胰腺癌等。但其未表现出足够抗肿瘤活性，而且引起了骨髓抑制、恶性呕吐等不良反应，限制了布奎那的临床应用。

2、线粒体是铁消耗和能量代谢的中心，与肿瘤转移和治疗抵抗有关。线粒体中还存在肿瘤相关的铁死亡防御物质，包括还原性谷胱甘肽和二氢乳清酸脱氢酶，它们维持线粒体中氧化还原平衡并保护细胞免受脂质过氧化。以肿瘤细胞线粒体作为铁死亡诱导剂的作用靶点，可以促使线粒体发生铁死亡。线粒体脂质过氧化为线粒体dna的释放创造了条件，进而激活先天性免疫，是癌症治疗的一种有效手段。然而，现在仍缺乏诱导线粒体铁死亡的有效策略。

3、因此，需开发一种靶向线粒体脂质体的制剂，来提高布奎那抗肿瘤的疗效，并降低其毒副作用。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法，提高布奎那抗肿瘤的疗效，并降低其毒副作用。

2、为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：

3、一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、dspe-mpeg2000、十六烷基三苯基溴化膦和布奎那，质量比范围为80-120∶5-15∶5∶2∶2；制备步骤如下：

4、(1)原料溶解：

5、取溶剂溶解卵磷脂、dspe-mpeg2000、胆固醇和十六烷基三苯基溴化膦，配制成混合溶液；另取溶剂溶解布奎那，配制成布奎那溶液；

6、(2)旋转蒸发：

7、将步骤(1)制备的混合溶液与布奎那溶液混合并混匀，在一定温度下旋转蒸发除去有机溶剂，在旋转蒸发器壁上形成薄膜；

8、(3)真空干燥：

9、取出薄膜，将薄膜放入真空干燥器内干燥，去除残余的有机溶剂；

10、(4)水化：

11、将真空干燥后的薄膜放入pbs缓冲液中进行水合，并用探头超声分散，采用滤器挤出过膜，即得具有靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体制剂。

12、为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：

13、进一步地，步骤(1)中，溶解采用的有机溶剂均为无水乙醇；混合溶液中，卵磷脂溶液的浓度为80-120mg/ml；布奎那溶液的浓度为0.4-0.5mg/ml。

14、进一步地，步骤(2)中，旋转蒸发采用的温度为36℃-38℃。

15、进一步地，步骤(3)中，在真空干燥器内干燥的时间为3-5h，温度为室温。

16、进一步地，步骤(4)中，pbs缓冲溶液的ph为7.4，pbs缓冲溶液的与真空干燥后的薄膜的质量比例为25∶94-144。

17、作为优选的方案，步骤(4)中，探头超声功率为150-250w，超声时间为15-30min。

18、作为优选的方案，步骤(4)中，采用的滤器为0.45μm滤膜的滤器。

19、作为优选的方案，十六烷基三苯基溴化膦与卵磷脂的质量比为1:40。

20、本发明还保护所述的方法制备的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

22、本发明的布奎那脂质体主要由卵磷脂、胆固醇、dspe-mpeg2000(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)、布奎那及十六烷基三苯基溴化膦组成，配伍科学，该布奎那脂质体制剂所带正电荷能选择性将药物蓄积在线粒体，并通过抑制或消耗线粒体内还原性物质引起线粒体铁死亡，是线粒体靶向性制剂上的创新，开拓了肿瘤治疗的新途径。

23、本发明的布奎那脂质体含有dspe-mpeg2000，在肿瘤组织部位具有良好的渗透和滞留效应，能够被动的蓄积在肿瘤组织内，减少在其他组织和器官中的分布，从而降低了布奎那的毒性；其中，两亲性阳离子十六烷基三苯基溴化膦修饰在布奎那脂质体上，使其具备了线粒体靶向的能力，可通过产生活性氧消耗线粒体内还原性谷胱甘肽，联合布奎那抑制二氢乳酸脱氢酶诱导肿瘤细胞线粒体铁死亡，以此提高布奎那的治疗效果。

24、本发明的布奎那脂质体制剂还具有制备方法简单易行、载药量较高和稳定性好的特点。

技术特征：

1.一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、dspe-mpeg2000、十六烷基三苯基溴化膦和布奎那，质量比范围为80-120∶5-15∶5∶2∶2；制备步骤如下：

2.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，溶解采用的有机溶剂均为无水乙醇；混合溶液中，卵磷脂溶液的浓度为80-120mg/ml；布奎那溶液的浓度为0.4-0.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，旋转蒸发采用的温度为36℃-38℃。

4.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，在真空干燥器内干燥的时间为3-5h，温度为室温。

5.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，pbs缓冲溶液的ph为7.4，pbs缓冲溶液与真空干燥后的薄膜的质量比例为25∶94-144。

6.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，探头超声功率为150-250w，超声时间为15-30min。

7.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，采用的滤器为0.45μm滤膜的滤器。

8.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：十六烷基三苯基溴化膦与卵磷脂的质量比为1:40。

9.权利要求1-8任一项所述的方法制备的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体。

技术总结
本发明涉及一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法，采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇、布奎那以及十六烷基三苯基溴化膦；制备步骤如下：(1)原料溶解：取有机溶剂分别溶解各原料；(2)旋转蒸发：将原料溶解得到的溶液混合在一起，混匀，在一定温度下旋转蒸发除去有机溶剂，在旋转蒸发器壁上形成薄膜；(3)真空干燥：取出薄膜，将薄膜放入真空干燥器内干燥，进一步除去残余的有机溶剂；(4)水化：将真空干燥后的薄膜用PBS缓冲液中进行水合，超声分散，采用滤器挤出过膜，即得具有靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体制剂。本发明能提高布奎那抗肿瘤的疗效，并降低其毒副作用。

技术研发人员：郭宏骞,张青,丁秋播,苏志桂,李祥龙
受保护的技术使用者：南京鼓楼医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13