人参多糖在制备免疫调节产品中的应用

本发明涉及免疫调节，具体涉及人参多糖在制备免疫调节产品中的应用。

背景技术：

1、为了帮助免疫系统识别抗原，在疫苗研发和生产过程中，将佐剂加入到抗原中，达到增强免疫反应的作用。佐剂是疫苗核心成分，超过90％的疫苗含有佐剂。在mrna疫苗中，缺少脂质体佐剂会使疫苗几乎无效。此外，针对不同疫苗采用适宜的佐剂，还可以提高婴幼儿、老年人、免疫功能低下人群疫苗接种效果。

2、根据结构和化学组成不同，佐剂可以分为矿物盐类佐剂、乳化剂、脂质体、模式识别受体激动剂和其他类佐剂。

3、矿物盐类铝佐剂是最早、应用最广泛的疫苗佐剂，它可以通过形成抗原贮存库和诱导炎症信号来使药效持久，促进抗体的产生。此外，铝佐剂还可以促进th2型免疫应答，促进apc的抗原摄取，但对th1型免疫应答的反应不佳，且无法直接激活dc。有关铝盐产生刺激固有免疫的信号仍然存在争议。

4、乳化剂，如mf59和as03已被批准用于人体疫苗，其有优于铝佐剂的佐剂效果，但其免疫刺激潜在分子机制是未知的。

5、目前含有脂质体的疫苗，如流感病毒疫苗和甲型肝炎疫苗已被批准。使用脂质体佐剂的流感疫苗inflexal v在各个年龄组都有较好的免疫原性。但其成本高，高剂量时会产生高毒性，且在静脉给药时因缺乏靶向性会导致手足综合征等不良反应，生产时对工艺、储存要求高，不利于疫苗生产储备。

6、但是目前人用佐剂种类很少，除铝佐剂外，目前仅批准了6种人用佐剂。现有佐剂存在成本高、毒副作用大、机制不清晰等问题，且因可选择性低，需要在疫苗佐剂上需要进一步研究更多新型的佐剂来加速其发展。

7、sars-cov-2属于冠状病毒家族，是一种编码包膜和单链rna的rna病毒。病毒粒子的结构蛋白包括刺突(s)蛋白、核蛋白(n)、包膜(e)蛋白和细胞膜(m)蛋白。其中，s蛋白作为新型冠状病毒(sars-cov-2)进入细胞的“钥匙”，主要通过rbd结构域与宿主细胞表面ace2受体结合，继而感染宿主细胞。结合针对sars-cov相关研究，rbd是一个关键的中和抗体结合区，被证明能够在动物免疫中引起有效的中和抗体反应，因此可以成为重组蛋白疫苗的候选抗原。

8、目前针对sars-cov-2rbd区的核酸成分已经开发出许多疫苗，这些疫苗的设计及制备都相对简单，它们都以结构蛋白为目标，需要特定的佐剂才能有效发挥生物活性，并且随着sars-cov-2变异的增加和其他冠状病毒的长期威胁，失效风险较高。因此，研发sars-cov-2下一代疫苗至关重要。

技术实现思路

1、人参多糖(ginseng polysaccharide，gps)作为中成药已在临床制备成人参多糖注射液、人参多糖口服液，有多年应用基础，毒副作用少见，主要用于肺系疾病慢性阻塞性肺疾病、非小细胞肺癌、慢性心力衰竭、乳腺癌、胃癌等。具有良好的免疫调节功能，并适用于多种肺部相关疾病。本发明尝试将人参多糖作为sars-cov-2rbd抗原的佐剂，进行免疫调节作用研究，进而提供sars-cov-2疫苗佐剂及其应用，以刺激机体相关免疫细胞的活化并产生抵抗sars-cov-2的抗体，尽量提升抗体滴度以及延长免疫记忆维持时间。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

3、第一方面，本发明提供人参多糖在制备免疫调节产品中的应用。

4、优选地，所述免疫调节产品包括免疫调节药品、免疫调节化妆品或免疫调节食品。

5、第二方面，本发明提供人参多糖作为免疫佐剂在制备疫苗上的应用。

6、第三方面，本发明提供一种疫苗，包括人参多糖佐剂和蛋白。

7、进一步地，所述蛋白选自sars-cov-2rbd蛋白、sars-cov-2rbd-ferritin蛋白、sars-cov-2m蛋白、sars-cov-2e蛋白、sars-cov-2n蛋白、sars-cov-2n-ferritin蛋白中的至少一种。

8、优选地，所述蛋白为sars-cov-2rbd重组蛋白，具有以下t细胞表位：peptide 1：vgyqpyrvvvlsfel，peptide 2：vrqiapgqtgkiad。

9、优选地，所述sars-cov-2rbd重组蛋白的表达载体选自以下质粒中的一种：pet28a、pcdna3.1、pfastbac、psectag、pet22b(+)、pgex-6p-1、psg5；

10、和/或，所述sars-cov-2rbd重组蛋白通过以下表达系统中的一种表达：大肠杆菌表达系统、昆虫表达系统、酵母表达系统。

11、更加优选地，所述sars-cov-2rbd重组蛋白的表达载体为pet28a；

12、和/或，所述表达系统为大肠杆菌；进一步优选地，所述大肠杆菌为e.coli bl21(de3)菌株。

13、优选地，所述sars-cov-2rbd重组蛋白的纯化方法包括：将sars-cov-2rbd重组蛋白包涵体通过预装重力柱预纯化后，采用20mm咪唑洗脱液对sars-cov-2rbd重组蛋白粗品进行多次洗脱，再采用elution洗脱液进一步进行多次洗脱。

14、优选地，所述疫苗给药方式包括口服和皮下注射；更为优选地，所述疫苗的给药方式为皮下注射。

15、本发明提供一种sars-cov-2疫苗佐剂，该疫苗佐剂具有毒副作用小、性价比高、可扩大中草药效用价值的优势。该佐剂和sars-cov-2rbd重组蛋白共同作用下，有望刺激机体相关免疫细胞的活化并产生抵抗sars-cov-2的抗体，且抗体的滴度更高、免疫记忆维持时间更长。

技术特征：

1.人参多糖在制备免疫调节产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述免疫调节产品包括免疫调节药品、免疫调节化妆品或免疫调节食品。

3.人参多糖作为免疫佐剂在制备疫苗上的应用。

4.一种疫苗，其特征在于：包括人参多糖和蛋白。

5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述蛋白选自sars-cov-2rbd蛋白、sars-cov-2rbd-ferritin蛋白、sars-cov-2m蛋白、sars-cov-2e蛋白、sars-cov-2n蛋白、sars-cov-2n-ferritin蛋白中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于：所述蛋白为sars-cov-2rbd重组蛋白，具有以下t细胞表位：peptide 1：vgyqpyrvvvlsfel，peptide 2：vrqiapgqtgkiad。

7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述sars-cov-2rbd重组蛋白的表达载体选自以下质粒中的一种：pet28a、pcdna3.1、pfastbac、psectag、pet22b(+)、pgex-6p-1、psg5；

8.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于：所述sars-cov-2rbd重组蛋白的表达载体为pet28a；

9.根据权利要求8所述的疫苗，其特征在于：所述sars-cov-2rbd重组蛋白的纯化方法包括：将sars-cov-2rbd重组蛋白包涵体通过预装重力柱预纯化后，采用20mm咪唑洗脱液对sars-cov-2rbd重组蛋白粗品进行多次洗脱，再采用elution洗脱液进一步进行多次洗脱。

10.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗给药方式包括口服和皮下注射；更为优选地，所述疫苗的给药方式为皮下注射。

技术总结
本发明提供人参多糖在制备免疫调节产品中的应用。本发明尝试将人参多糖作为SARS‑CoV‑2RBD抗原的佐剂，进行免疫调节作用研究，进而提供SARS‑CoV‑2疫苗佐剂及其应用，以刺激机体相关免疫细胞的活化并产生抵抗SARS‑CoV‑2的抗体，尽量提升抗体滴度以及延长免疫记忆维持时间。

技术研发人员：张荣信,李冰,张晶,黄垟,冯景,李岩,唐久人,张浩,庾兆安,吴泳棋
受保护的技术使用者：广东药科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14