Tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用

本发明涉及生物医学，尤其涉及tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用。

背景技术：

1、神经损伤修复是临床上常见难题，给社会及家庭造成极大的负担。周围神经受损后可以自发的再生，但由于再生速度有限，最终导致功能难以恢复，同时脊髓损伤是导致神经功能受损、生活质量下降的毁灭性疾病之一，发病率和死亡率高，经济和社会负担沉重。因此，充分探索神经损伤再生的细胞与分子机制，有助于促进神经功能修复，为临床治疗提供理论基础。。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中缺乏对神经损伤治疗的相关医疗手段。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用。

4、优选的，所述神经损伤为周围神经系统坐骨神经损伤。

5、优选的，所述药物通过抑制dgr神经元中的tgif1的表达促进轴突再生。

6、本申请还提供了一种促进神经再生和修复神经损伤的药物，包含以tgif1作为分子靶点的抑制物。

7、本申请还提供了一种体外抑制dgr神经元中tgif1的表达促进轴突再生的验证方法，包含以下步骤：

8、s1：培养原代drg神经元细胞；

9、s2：神经元细胞s irna转染；

10、s3：细胞免疫荧光染色及轴突再生长度测量。

11、优选的，所述s1包含以下步骤：在1d-sd大鼠红皮上取用dgr神经元，将将背根神经节取出后放到解剖液ha中，适量3mg/ml胶原酶消化，37℃，30mi n；

12、弃胶原酶，加适量0.25％的胰酶消化，37℃，20mi n；

13、用含有10％胎牛血清的dmem终止胰酶作用，离心后弃上清；

14、用2％b-27和2mm谷氨酰胺的neurobasa l培养基重悬细胞，过70μm筛网；

15、离心后弃上清，用5ml的10％bsa重悬细胞，离心弃上清；

16、用1ml的2％b-27和2mm谷氨酰胺的neurobasa l培养基重悬细胞，后计数。

17、优选的，所述s2包含以下步骤：待s1技术完成后，将浓度2*104/孔的细胞悬液、rnaimax reagent和sirna-tgif1及阴性对照混匀后加入到培养的神经元中，并种到用多聚赖氨酸包被的24孔板内，培养12h后替换为含有10mm的阿糖胞苷的神经元培养基用于去除非神经元细胞。

18、优选的，所述s3包含以下步骤：drg神经元细胞转染72h后，用pbs润洗两遍，加入4％的多聚甲醛，固定30min；

19、弃掉多聚甲醛后，pbs洗三遍，每遍5min；

20、加入免疫组化封闭液，室温封闭1h；

21、用免疫组化一抗稀释液稀释一抗anti-tuj1 antibody(1：500，abcam)，加好一抗后，4℃过夜；

22、弃掉一抗，pbs洗3遍，每遍5min；

23、用免疫组化二抗稀释液稀释荧光二抗anti-mouse 594(1：500，invitrogen)，加好二抗后，避光室温2h；

24、弃掉二抗，pbs洗3遍，每遍5min；

25、加入适量pbs，leica荧光显微镜下观察，拍照，观察突起的再生情况，拍照并统计各组突起长度的分布。

26、本申请中通过以tgif1作为分子干预靶点，抑制tgif1表达从而促进drg神经元轴突的生长。并在体外drg神经元中，转染sirna-tgif1，可以通过靶向tgif1显著促进原代培养的drg神经元轴突的生长。本发明所述tgif1调节drg神经元轴突生长参与周围神经损伤修复，有助于更好地理解转录抑制因子在神经损伤修复过程中的重要作用，并为神经损伤后的治疗提供新的靶点。

技术特征：

1.tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用，其特征在于：所述神经损伤为周围神经系统坐骨神经损伤。

3.根据权利要求1所述的tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用，其特征在于：所述药物通过抑制dgr神经元中的tgif1的表达促进轴突再生。

4.一种促进神经再生和修复神经损伤的药物，其特征在于：包含以tgif1作为分子靶点的抑制物。

5.一种体外抑制dgr神经元中tgif1的表达促进轴突再生的验证方法，其特征在于：包含以下步骤：

6.根据权利要求5所述的体外抑制dgr神经元中tgif1的表达促进轴突再生的验证方法，其特征在于：所述s1包含以下步骤：在1d-sd大鼠红皮上取用dgr神经元，将将背根神经节取出后放到解剖液ha中，适量3mg/ml胶原酶消化，37℃，30min；

7.根据权利要求6所述的体外抑制dgr神经元中tgif1的表达促进轴突再生的验证方法，其特征在于：所述s2包含以下步骤：待s1技术完成后，将浓度2*104/孔的细胞悬液、rnaimaxreagent和sirna-tgif1及阴性对照混匀后加入到培养的神经元中，并种到用多聚赖氨酸包被的24孔板内，培养12h后替换为含有10mm的阿糖胞苷的神经元培养基用于去除非神经元细胞。

8.根据权利要求7所述的体外抑制dgr神经元中tgif1的表达促进轴突再生的验证方法，其特征在于：所述s3包含以下步骤：drg神经元细胞转染72h后，用pbs润洗两遍，加入4％的多聚甲醛，固定30min；

技术总结
本发明提供Tgif1作为分子靶点在制备促进神经再生和修复神经损伤药物中的应用，涉及生物医药技术领域，本申请中通过以Tgif1作为分子干预靶点，抑制Tgif1表达从而促进DRG神经元轴突的生长。并在体外DRG神经元中，转染siRNA‑Tgif1，可以通过靶向Tgif1显著促进原代培养的DRG神经元轴突的生长。本发明所述Tgif1调节DRG神经元轴突生长参与周围神经损伤修复，有助于更好地理解转录抑制因子在神经损伤修复过程中的重要作用，并为神经损伤后的治疗提供新的靶点。

技术研发人员：周松林,丁斐,刘畅,周强,郑梦如,叶欣丽,王丽娟,贺倩茹,张琦
受保护的技术使用者：南通大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15