黄刺蛾茧的抗菌蛋白NRP3在制备抗菌剂中的应用

本发明涉及生物医药领域，具体涉及黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用。

背景技术：

1、黄刺蛾(monema(cnidocampa)flavescens walker)为鳞翅目(lepidoptera)刺蛾科(limacodidae)黄刺蛾属(cnidocampa)，俗称洋辣子、八角丁等。黄刺蛾是林场和果园中的杂食性昆虫，其寄主植物主要有油桐、枫香、乌柏、苹果树、梨树、杏树等。

2、黄刺蛾的茧呈椭圆形，坚硬，有明显的棕色和白色纵向条纹，与麻雀蛋相似，长轴约1.2cm，短轴约0.9cm。黄刺蛾茧是由丝腺分泌的丝蛋白和唾液腺分泌的草酸钙构成的。黄刺蛾茧蛋白中含有丰富的asx(25％)、ser(18％)和gly(17％)。

3、黄刺蛾的老熟幼虫排空食物残渣后开始吐丝结茧。其结茧过程如下：幼虫先选择合适的结茧位置，选定以后用大颚咬掉树皮，然后沿着咬的位置旋转吐一层丝，形成茧褥；接下来，它将丝纺成一个杯状的网状茧，一端有一个圆孔，随后纺丝密封茧；当丝网构造完成后，幼虫从肛门排出一种白色的钙质泥状物质，从口中吐出棕色粘液，将它们贴在丝网内。最后，幼虫再纺出少量的丝，以形成光滑的内丝层。

4、lixia qin等公开了用9m liscn溶液过夜提取黄刺蛾茧丝蛋白，通过质谱共鉴定到了467个丝蛋白。在黄刺蛾丝蛋白中有25个是富含天冬酰胺的丝蛋白(asn-richprotein,nrp)，但是并未研究蛋白的功能。为了能对黄刺蛾茧丝蛋白的开发应用，有必要对黄刺蛾茧丝蛋白的功能进行研究。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用。

2、黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，所述抗菌蛋白nrp3的氨基酸序列如seq id no.4所示。

3、本发明优选的，所述抗菌为抗真菌或抗细菌。

4、本发明优选的，所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3为重组蛋白。

5、本发明优选的，所述重组蛋白为seq id no.3连入pgex-4t-2表达载体bamhⅰ和xhoⅰ酶切位点处，然后在表达菌株bl21(de3)中诱导表达获得。

6、本发明优选的，所述诱导表达是在16℃下诱导20h。

7、本发明优选的，所述诱导表达后还包括纯化，具体步骤如下：将表达的蛋白用gst柱亲和层析法纯化，使用1～10mm的还原型谷胱甘肽洗脱，洗脱液用tev酶酶切去除gst标签，酶切后用加入镍柱，用200～500mm的咪唑洗脱，并浓缩、脱盐得到nrp 3重组蛋白。

8、本发明的有益效果在于：本发明提供了黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，抗菌蛋白nrp3的氨基酸序列如seq id no.4所示，将该蛋白进行原核表达和纯化，获得了nrp3重组蛋白，对nrp 3重组蛋白进行了抗菌功能的研究，结果显示该蛋白具有抗真菌或抗细菌的效果，为抗菌制剂的开发提供了新的蛋白备选。

技术特征：

1.黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述抗菌蛋白nrp3的氨基酸序列如seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述抗菌为抗真菌或抗细菌。

3.根据权利要求1所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3为重组蛋白。

4.根据权利要求3所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述重组蛋白为seq id no.3连入pgex-4t-2表达载体bamhⅰ和xhoⅰ酶切位点处，然后在表达菌株bl21(de3)中诱导表达获得。

5.根据权利要求3所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述诱导表达是在16℃下诱导20h。

6.根据权利要求3所述黄刺蛾茧的抗菌蛋白nrp3在制备抗菌剂中的应用，其特征在于：所述诱导表达后还包括纯化，具体步骤如下：将表达的蛋白用gst柱亲和层析法纯化，使用1～10mm的还原型谷胱甘肽洗脱，洗脱液用tev酶酶切去除gst标签，酶切后用加入镍柱，用200～500mm的咪唑洗脱，并浓缩、脱盐得到nrp 3重组蛋白。

技术总结
本发明公开了黄刺蛾茧的抗菌蛋白NRP3在制备抗菌剂中的应用，抗菌蛋白NRP3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，将该蛋白进行原核表达和纯化，获得了NRP3重组蛋白，对NRP 3重组蛋白进行了抗菌功能的研究，结果显示该蛋白具有抗真菌或抗细菌的效果，因此可以作为抗菌制剂的开发。

技术研发人员：董照明,赵萍,夏庆友,秦莉霞
受保护的技术使用者：西南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15