一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法及应用

本发明涉及医药，尤其涉及一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法及应用。

背景技术：

1、葡萄膜炎是全球范围内严重危害视觉健康的眼部炎症，是青壮年及少年儿童中常见致盲性眼病，另外全球视力低下的人群中5％-10％与葡萄膜炎有关。

2、但是，目前的葡萄膜炎的动物模型均表现为急性、自愈的单向性疾病，与临床葡萄膜炎慢性、复发性的特点存在较大差异。

3、生物降解聚合物由于其优异的性能，是蛋白质、成像剂和药物等多种生物活性分子的载体首选材料；其性能可控高，同时具有良好的生物相容性以及生物降解性等优异的性能，是蛋白质、成像剂和药物等多种生物活性分子的载体首选材料。其中，聚乳酸-乙醇酸共聚物(plga)被认为是应用最广泛的可生物降解聚合物之一，plga可以在体内降解为h2o和co2排出，对人体无毒，目前已被美国食品管理局(fda)以及欧洲药品管理局(ema)批准为可用于制备药物载体的材料。

4、因此，研究开发一种以plga为载体的葡萄膜炎模型对于葡萄膜炎药物筛选的意义重大。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法及应用。所述慢性葡萄膜炎模型采用载药微泡lps-plga构建得到，所述慢性葡萄膜炎模型可诱导葡萄膜炎反应较长，可持续至6周。

2、为达到以上目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明提供了载药微泡lps-plga在构建慢性葡萄膜炎模型中的应用。以纳米材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)为载体，搭载脂多糖(lps)形成载药微泡用于慢性葡萄膜炎模型的构建。

4、本发明还提供了一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法，通过将载药微泡lps-plga注射于小鼠活体中进行葡萄膜炎模型的构建。

5、所述载药微泡lps-plga中，载体为纳米材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)，药物成分为脂多糖(lps)。

6、优选的，所述脂多糖与聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为(0.5～1.5)：(100～500)。在本发明的一些具体实施例中，所述脂多糖与聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比优选为1:500。

7、所述载药微泡lps-plga为乳白色微球，平均半径优选为719.9±38.69nm。

8、本发明选用纳米材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga)作为眼内缓释脂多糖(lps)药物的载体，建立可以在眼内长时间释放脂多糖(lps)药物的缓释系统，然后构建一种慢性的葡萄炎动物模型。

9、本发明优选的，所述载药微泡lps-plga由复乳溶剂挥发法制备得到。

10、优选的，所述复乳溶剂挥发法包括以下步骤：

11、1)将脂多糖的内水相与含有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的油相混合均匀得到初乳液；

12、2)在上述初乳液中加入含乳化剂的外水相，制备得到复乳液；

13、3)将上述复乳液迅速与聚乙烯醇混合，然后将聚乙烯醇挥发完全，得到微球状的载药微泡lps-plga。

14、本发明优选的，所述步骤1)内水相中脂多糖的浓度为1～3mg/ml。在本发明的具体实施例中，所述内水相中脂多糖的浓度为1mg/ml。

15、优选的，所述步骤1)油相中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的含量为2～10wt％；更优选为5wt％

16、优选的，所述步骤2)外水相中乳化剂的含量为0.3～1wt％；更优选为0.5～1wt％。

17、在本发明中，所述乳化剂包括但不限于泊洛沙姆188、吐温80等。

18、在本发明的一些具体实施例中，所述乳化剂优选为泊洛沙姆188。

19、所述泊洛沙姆188的含量优选为0.5wt％或1wt％。上述复乳溶剂挥发法制备载药微泡lps-plga的过程中，将聚乙烯醇挥发完全后还包括离心、洗涤、干燥等后处理。

20、本发明对上述的离心方法并无特殊限定，可以为差速离心法、密度梯度离心法等本领域人员熟知的方法。

21、本发明对上述干燥的方法也无特殊限定，可以为常压干燥、冷冻干燥、真空干燥等本领域人员熟知的方法。

22、优选的，所述离心为差速离心法；转速优选为8000rpm，时间优选为30min。

23、然后，对离心后产物进行水洗和醇洗。

24、所述醇洗优选为5％甘露醇。

25、最后将洗涤后的产物进行冷冻干燥，制备得到载药微泡lps-plga。

26、本发明还提供了上述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法构建的慢性葡萄膜炎模型在葡萄膜炎药物筛选中的应用。

27、优选的，所述慢性葡萄膜炎模型可诱发葡萄膜炎持续至6周。

28、与现有技术相比，本发明首次将载药微泡lps-plga应用在慢性葡萄膜炎模型的构建中。通过注射载药微泡lps-plga于小鼠活体中进行慢性葡萄膜炎模型的构建，所述载药微泡lps-plga中，载体为纳米材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物，药物成分为脂多糖。所述慢性葡萄膜炎模型能克服现有葡萄膜炎的动物模型的急性、自愈的单向性的缺点，在眼内长时间释放脂多糖，实现接近临床葡萄膜炎的慢性、复发性特点的目的，便于人们对葡萄膜炎药物的筛选以及对葡萄膜炎的发病机制的深入研究。

技术特征：

1.载药微泡lps-plga在构建慢性葡萄膜炎模型中的应用。

2.一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，通过将载药微泡lps-plga注射于小鼠活体中进行葡萄膜炎模型的构建；

3.根据权利要求2所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述脂多糖与聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为(0.5～1.5)：(100～500)。

4.根据权利要求2所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述载药微泡lps-plga的平均半径为719.9±38.69nm。

5.根据权利要求2所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述载药微泡lps-plga由复乳溶剂挥发法制备得到。

6.根据权利要求5所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述复乳溶剂挥发法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述步骤1)内水相中脂多糖的浓度为1～3mg/ml；

8.根据权利要求6所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法，其特征在于，所述步骤2)外水相中乳化剂的含量为0.3～1wt％。

9.权利要求2～8任一项所述的慢性葡萄膜炎模型的构建方法构建的慢性葡萄膜炎模型在葡萄膜炎药物筛选中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述慢性葡萄膜炎模型可诱发葡萄膜炎持续至6周。

技术总结
本发明公开了一种慢性葡萄膜炎模型的构建方法及应用，属于医药技术领域。本发明首次将载药微泡LPS‑PLGA应用在慢性葡萄膜炎模型的构建中。通过注射载药微泡LPS‑PLGA于小鼠活体中进行慢性葡萄膜炎模型的构建，所述载药微泡LPS‑PLGA中，载体为纳米材料聚乳酸‑羟基乙酸共聚物，药物成分为脂多糖。所述慢性葡萄膜炎模型能克服现有葡萄膜炎的动物模型的急性、自愈的单向性的缺点，在眼内长时间释放脂多糖，实现接近临床葡萄膜炎的慢性、复发性特点的目的，便于人们对葡萄膜炎药物的筛选以及对葡萄膜炎的发病机制的深入研究。

技术研发人员：姜春晖,冯华章,史洁梅,程同杰,朱皓皓
受保护的技术使用者：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15