一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺的制作方法

本发明涉及膝关节炎治疗，特别涉及一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。

背景技术：

1、间充质干细胞是来源于中胚层的一类多能干细胞，最早从骨髓中分离得到，因其易于在体外扩增，无致瘤性，在免疫调节及组织再生方面显示出强大的临床应用前景。mscs主要有两个特征：自我更新和分化潜能；同时它还可分泌一些重要的细胞因子，表达特异性受体，能够被基因修饰，从而改变其自然行为的分子易感性。因此，mscs日益受到人们的关注。许多学者先后从人脐带华通氏胶、脐带血管周围组织中通过不同方法分别分离获得类似细胞。与骨髓间充质干细胞相比，脐带具有来源广泛、采集容易，且能够变废为宝的特点。

2、膝关节炎已经是伴随和困扰现代人的一个常见病。一般膝关节软骨在青春期时期软骨厚度为2.5公分，随着年龄的慢慢的增长和使用劳损，软骨厚度会变得越来越薄，一般在55岁时软骨厚度只剩下仅仅0.5公分，而且如果膝关节受损或者长期受压的话，软骨厚度可能更薄，严重时还可能会出现骨刺或破裂。

3、常规的治疗为通过nsaids类药物、润滑剂及类固醇激素关节腔注射、软骨保护剂为主的治疗方法，但是这些治疗方法的疗效较为有限，不能够有效的阻止疾病的进展，随着干细胞研究的不断发展和普及，越来越多的研究者将干细胞技术扩展至骨关节炎治疗之中，通过干细胞治疗，有效的解决上述的这些问题。但是目前现有技术中所涉及到的膝关节炎干细胞药物治疗方法，仍然存在一些问题，比如在诱导分化过程中，诱导分化效果仍然较差，膝关节干细胞药物疗效仍然不稳定，治疗效果仍然不能达到我们所预期的效果等等。

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。该治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的i l-1β、tnf-ɑ和il-6水平，抑制i l-1β、tnf-ɑ和i l-6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。

2、本发明的首要目的是提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其特征在于，所述治疗剂包括：25％-45％骨髓间充质干细胞、5-10％硫酸软骨素、5-10％抗cd47抗体、0.1-1％吐温-80、0.1-1％助悬剂、0.1-1％乳化剂、0.1-1％稳定剂、0.2-0.6％ph调节剂、0.6-2％抗氧化剂，余量为生理盐水。

3、优选地，所述所述治疗剂包括：25％％骨髓间充质干细胞、5％硫酸软骨素、5％抗cd47抗体、0.1％吐温-80、0.1％助悬剂、0.1％乳化剂、0.1％稳定剂、0.2％ph调节剂、0.6％抗氧化剂，余量为生理盐水。

4、优选地，所述所述治疗剂包括：30％骨髓间充质干细胞、8％硫酸软骨素、8％抗cd47抗体、0.5％吐温-80、0.5％助悬剂、0.5％乳化剂、0.5％稳定剂、0.4％ph调节剂、1％抗氧化剂，余量为生理盐水。

5、优选地，所述所述治疗剂包括：45％骨髓间充质干细胞、10％硫酸软骨素、10％抗cd47抗体、1％吐温-80、1％助悬剂、1％乳化剂、1％稳定剂、00.6％ph调节剂、2％抗氧化剂，余量为生理盐水。

6、进一步优选地，所述助悬剂选自甲基纤维素，羧甲基纤维素钠的一种或几种。

7、进一步优选地，所述乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯80、聚维酮、聚乙二醇-40、卵磷脂。

8、进一步优选地，所述稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠。

9、进一步优选地，所述ph调节剂为磷酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、醋酸及其盐、酒石酸及其盐、盐酸及其盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨基丁三醇中的一种或几种。

10、进一步优选地，所述抗氧化剂为维生素c、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。

11、本发明的新一代干细胞治疗剂配方可制作成无菌注射溶液或悬浮液；例如，制作成适合于以膝关节腔注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射或腹膜内注射等方式施用的溶液。

12、本发明的另一个目的在于提供了一种抗cd47抗体，其特征在于，所述抗cd47抗体的重链可变区序列如seq id no.1，轻链可变区序列如seq id no:2所示。

13、优选地，所述抗cd47抗体的重链可变区包括cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，所述cdr-h1-3的序列如seq id no.3-5所示，轻链可变区包括cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3，所述cdr-l1-3的序列如seq id no.6-8所示。

14、进一步地，本发明还提供了抗cd47抗体和骨髓间充质干细胞联合在制备用于治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂中的用途。

15、优选地，所述治疗剂的剂型不限于注射剂。

16、进一步优选地，所述治疗剂为无菌注射溶液或悬浮液；

17、所述注射液是通过膝关节腔注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮下注射或腹膜内注射等方式施用的溶液。

18、本发明的优点如下：本发明首次提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺，本发明所述治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的i l-1β、tnf-ɑ和il-6水平，抑制i l-1β、tnf-ɑ和i l-6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。

技术特征：

1.一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂，其特征在于，所述治疗剂包括：25％-45％骨髓间充质干细胞、5-10％硫酸软骨素、5-10％抗cd47抗体、0.1-1％吐温-80、0.1-1％助悬剂、0.1-1％乳化剂、0.1-1％稳定剂、0.2-0.6％ph调节剂、0.6-2％抗氧化剂，余量为生理盐水。

2.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述助悬剂选自甲基纤维素，羧甲基纤维素钠的一种或几种。

3.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述乳化剂选自聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯80、聚维酮、聚乙二醇-40、卵磷脂。

4.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠。

5.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述ph调节剂为磷酸及其盐、硼酸及其盐、枸橼酸及其盐、醋酸及其盐、酒石酸及其盐、盐酸及其盐、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨基丁三醇中的一种或几种。

6.如权利要求1所述治疗剂，其特征在于，所述抗氧化剂为维生素c、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。

7.权利要求1-6任何一项所述治疗剂的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括如下步骤将上述原料混合后溶解于生理盐水中，ph调节至7.0，经过滤灭菌后，即可得到新一代干细胞治疗剂。

8.一种抗cd47抗体，其特征在于，所述抗cd47抗体的重链可变区序列如seq id no.1，轻链可变区序列如seq id no:2所示。

9.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述抗cd47抗体的重链可变区包括cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，所述cdr-h1-3的序列如seq id no.3-5所示，轻链可变区包括cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3，所述cdr-l1-3的序列如seq id no.6-8所示。

10.抗cd47抗体和骨髓间充质干细胞联合在制备用于治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂中的用途。

11.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述治疗剂为无菌注射溶液或悬浮液。

技术总结
本发明提供了一种治疗膝关节炎的新一代干细胞治疗剂及其制备工艺。本发明首次发现所述治疗剂能够有效降低膝关节炎患者血清中的I L‑1β、TNF‑ɑ和I L‑6水平，抑制I L‑1β、TNF‑ɑ和I L‑6的分泌，减轻膝关节炎性损伤，能够改善和促进软骨组织修复的破坏。

技术研发人员：蔡俊,喻长杰,贾鹏飞
受保护的技术使用者：艾可泰科（浙江）控股有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16