一种大鼠子宫灌流模型及其构建方法与应用

本发明属于动物模型，尤其涉及一种大鼠子宫灌流模型及其构建方法与应用。

背景技术：

1、胎儿期是人类生长发育的关键期，此时期母婴人群对化学物质的暴露最为敏感，母婴人群是环境暴露的高风险敏感人群。流行病学证据表明，胎儿在孕期通过胎盘传递直接接触了多种化学物质(如农药、医药、环境污染物等)。然而，目前对于化学物质的母婴传递相关研究缺乏技术的支撑，关于化学物质和胎盘转运蛋白之间相互作用的知识仍然局限于少数物质和极少数转运蛋白。另外，孕妇在妊娠期间可能并发各种急性、慢性疾病，这类孕妇需要在妊娠过程中用药治疗。据who对4个洲22个国家14778名妊娠期妇女用药的调查，86％的女性在妊娠期服用药物，平均每人接受2.9种药物，使得妊娠期用药安全性受到社会的日益关注。药物经胎盘转运的程度，即药物暴露量是胎儿风险评估中一个关键性因素。因此，进行药物的胎盘透过性研究是评价妊娠期用药安全性的重要依据。

2、胎盘来源于胎儿和母体组织，被认为是第一个暴露于外源性物质的胎儿器官。胎盘由胎儿部分的叶状绒毛膜和羊膜以及母体部分的底蜕膜共同构成。胎盘是母体循环和胎儿循环的分隔，让胎儿处于一个相对稳定且不易受外界环境影响的状态，故又称之为胎盘屏障。胎盘屏障能进行母胎间的物质交换，在为胎儿提供养分的同时排出胎儿的代谢产物。胎盘的传递和屏障功能是胎儿营养和保护的关键因素。如何建立简单、易得且可靠的技术体系，探究化学物质的母婴传递规律及机制，进一步明确化学物质对婴儿造成的健康风险，得到了研究人员的重点关注。

3、而人类体内的化合物胎盘透过性研究有悖伦理原则，目前较常用的体外实验模型如细胞培养，由于不能保留完整的胎盘组织，需要大量资金，其细胞培养周期长对设备的要求高，且不能准确模拟人胎盘屏障结构在妊娠期间的动态变化，在研究上有一定的局限性。相比较而言，人类胎盘离体循环灌注模型是目前唯一在离体保留完整胎盘组织的前提下进行药物胎盘透过性研究的离体实验模型，其生理状态最接近体内环境，是最具价值的研究方法，但存在模型制备复杂、维持时间短不能用于早期妊娠等缺点。胎盘组织制备模型操作简便，妊娠各期的胎盘组织皆可进行培养，但其不能用于跨胎盘转运的研究。

4、大鼠性周期稳定，生长快，繁育性能好，广泛用于毒理学及病理生理学等的研究，大鼠的基因与人类的基因高度相似，包括大鼠在内的啮齿类动物胎盘由于与人类胎盘结构相似，而常被用作人类胎盘的模型。因此，建立一种大鼠子宫灌流模型，从而为研究化合物胎盘透过性提供新的研究对象显得尤为必要。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种大鼠子宫灌流模型及其构建方法与应用，该大鼠子宫灌流模型保留完整胎盘组织，最大程度保证胎盘活性，模型制备简单易获得，在整个透过性实验中能够更真实准确地模拟孕妇体内温度、胎盘中完整的营养物质经母体、胎盘再供给胎儿的循环过程，从而更客观地研究化合物在胎盘内的透过性。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种大鼠子宫灌流模型的构建方法，包括以下步骤：

4、对死亡的妊娠期大鼠的左肾处血管，左肾上端分叉处血管、下端髂内动脉和髂内静脉分叉处上侧、两侧髂腰动脉和髂腰静脉、右肾与腹主动脉和后腔静脉的分叉处进行结扎，然后对腹主动脉和后腔静脉插管，插管后从腹主动脉泵入灌流液，即得大鼠子宫灌流模型；

5、所述灌流液包括以下浓度的成分：120～130mm nacl，2.5～3.5mm kcl，1.0～1.5mm kh2po4，1.0～1.5mm mgso4，2.0～2.8mm cacl2，8～12mm葡萄糖，25～30mm nahco3，体积百分比2.0％～3.0％葡聚糖和体积百分比2.5％～3.5％葡聚糖70。

6、优选的，所述死亡的妊娠期大鼠的体温维持在37℃，所述死亡的妊娠期大鼠腹部中组织用37℃的磷酸盐缓冲液进行湿润处理。

7、优选的，所述腹主动脉插管使用的是直径为0.65mm的置留针；所述后腔静脉插管使用的是直径为1.2mm的置留针。

8、优选的，所述泵入的流速为1.5～3.5ml/min。

9、优选的，所述灌流液中充入95％o2，5％co2。

10、本发明还提供了一种上述构建方法得到的大鼠子宫灌流模型。

11、本发明还提供了一种用于构建大鼠子宫灌流模型的灌流液，所述灌流液包括以下浓度的成分：120～130mm nacl，2.5～3.5mm kcl，1.0～1.5mm kh2po4，1.0～1.5mm mgso4，2.0～2.8mm cacl2，8～12mm葡萄糖，25～30mm nahco3，体积百分比2.0％～3.0％葡聚糖和体积百分比2.5％～3.5％葡聚糖70。

12、优选的，所述灌流液中充入95％o2，5％co2。

13、本发明还提供了一种上述的灌流液或大鼠子宫灌流模型在制备化合物胎盘透过性研究产品中的应用。

14、本发明还提供了一种上述的灌流液在构建大鼠子宫灌流模型中的应用。

15、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

16、本发明提供了一种大鼠子宫灌流模型及其构建方法与应用，该大鼠子宫灌流模型对腹主动脉插管及后腔静脉插管形成生殖动脉—胎盘—胎儿—胎盘—生殖静脉回流，用灌流液马上对子宫进行灌流，最大程度保证胎盘活性，同时保留完整胎盘组织，该模型制备简单易获得，在整个透过性实验中能够更真实准确地模拟孕妇体内温度、胎盘中完整的营养物质经母体、胎盘再供给胎儿的循环过程，从而更客观地研究化合物在胎盘内的透过性，相对于人胎盘离体灌流模型更加可靠，为阐明和揭示化学物质(如农药、医药、环境污染物等)从母体迁移至子代的特征和相关机制、母体暴露对子代的影响等研究提供技术支持。本发明应用广泛，可用于化学物质跨胎盘传递规律、跨胎盘转运机制的研究。

技术特征：

1.一种大鼠子宫灌流模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述死亡的妊娠期大鼠的体温维持在37℃，所述死亡的妊娠期大鼠腹部中组织用37℃的磷酸盐缓冲液进行湿润处理。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述腹主动脉插管使用的是直径为0.65mm的置留针；所述后腔静脉插管使用的是直径为1.2mm的置留针。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述泵入的流速为1.5～3.5ml/min。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述灌流液中充入95％o2，5％co2。

6.一种根据权利要求1～5任意一种构建方法得到的大鼠子宫灌流模型。

7.一种用于构建大鼠子宫灌流模型的灌流液，其特征在于，所述灌流液包括以下浓度的成分：120～130mm nacl，2.5～3.5mm kcl，1.0～1.5mm kh2po4，1.0～1.5mm mgso4，2.0～2.8mm cacl2，8～12mm葡萄糖，25～30mm nahco3，体积百分比2.0％～3.0％葡聚糖和体积百分比2.5％～3.5％葡聚糖70。

8.根据权利要求7所述的灌流液，其特征在于，所述灌流液中充入95％o2，5％co2。

9.一种权利要求7或8所述的灌流液或权利要求5所述的大鼠子宫灌流模型在制备化合物胎盘透过性研究产品中的应用。

10.一种权利要求7或8所述的灌流液在构建大鼠子宫灌流模型中的应用。

技术总结
本发明提供了一种大鼠子宫灌流模型及其构建方法与应用，属于动物模型技术领域。构建方法包括：对死亡的妊娠期大鼠的左肾处血管，左肾上端分叉处血管、下端髂内动脉和髂内静脉分叉处上侧、两侧髂腰动脉和髂腰静脉、右肾与腹主动脉和后腔静脉的分叉处进行结扎，然后对腹主动脉和后腔静脉插管，从腹主动脉泵入灌流液即得。该模型形成生殖动脉—胎盘—胎儿—胎盘—生殖静脉回流，最大程度保证胎盘活性，同时保留完整胎盘组织，该模型制备简单易获得，在整个透过性实验中能够更真实准确地模拟孕妇体内温度以及胎盘中完整的营养物质经母体、胎盘供给胎儿的循环过程，从而更客观地研究化合物在胎盘内的透过性，相对于人胎盘离体灌流模型更加可靠。

技术研发人员：程志鹏,孙红文,张绍晗
受保护的技术使用者：南开大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16