一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备含有修复作用的产品中的应用的制作方法

本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备含有修复作用的产品中的应用。

背景技术：

1、皮肤覆于机体的表面其作为第一道天然屏障直接于外界接触，长时间的紫外线辐射，如果没有及时防护和修复，会导致脸部皮肤角质层变薄，容易出现过敏、红肿以及损伤等症状。

2、间充质干细胞来源于中胚层，是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能细胞，是组织再生、修复的重要干细胞群，干细胞外泌体同干细胞具有相似的生理学性能，能调节皮肤成纤维细胞增殖分化，更加安全稳定，基于此，借助干细胞外泌体修复组织的是目前研究的一大方向。

技术实现思路

1、本发明首先提供一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备含有修复作用的产品中的应用，所述组合物能够为皮肤提供所需要的营养，调节皮肤成纤维细胞增殖分化，修复肌肤屏障，改善肌肤状态。

2、本发明解决技术问题采用如下技术方案：

3、本发明提供一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计包括：0.05-0.5份脐带间充质干细胞外泌体、2-6份马齿苋提取物、1-3份海藻多糖、3-7份玻色因、0.6-1.5份四氢甲基嘧啶羧酸、0.6-1.2份棕榈酰三肽-5、0.25-0.45份透明质酸钠、0.2-1份羟乙基纤维素、0.1-0.6份神经酰胺-2、0.08-0.18份1-2戊二醇、25-35份去离子水。

4、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.21-0.34份脐带间充质干细胞外泌体、3-5份马齿苋提取物、1.5-2.5份海藻多糖、4-6份玻色因、0.9-1.2份四氢甲基嘧啶羧酸、0.8-1份棕榈酰三肽-5、0.3-0.4份透明质酸钠、0.4-0.8份羟乙基纤维素、0.3-0.4份神经酰胺-2、0.12-0.14份1-2戊二醇、28-32份去离子水。

5、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.28份脐带间充质干细胞外泌体、4份马齿苋提取物、2份海藻多糖、5份玻色因、1.1份四氢甲基嘧啶羧酸、0.9份棕榈酰三肽-5、0.35份透明质酸钠、0.6份羟乙基纤维素、0.35份神经酰胺-2、0.13份1-2戊二醇、30份去离子水。

6、优选地，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：

7、s1、取脐带组织，放入pbs缓冲液中清洗3-5次，每次7-10min，去除动静脉得到沃顿胶，将沃尔顿胶剪碎成3-5mm的组织块，用去离子水冲洗15-30min,再用pbs缓冲液清洗4-6次，每次5-7min，得到组织块；

8、s2、将组织块和复合酶溶液按照重量比1:（8-10）混合，反应30-60min，得到第一物料；

9、s3、将第一物料和胶原酶i溶液按照重量比1：（0.2-0.28）混合，反应15-30min，得到第二物料；

10、s4、将第二物料置于800-1200r/min条件下离心20-30min，过0.35μm无菌滤膜，得到细胞沉淀，用pbs缓冲液洗涤3次；

11、s5、用平衡盐缓冲溶液洗涤细胞沉淀3次，再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞，利用密度梯度离心法纯化细胞悬液，得到脐带间充质元代干细胞；

12、s6、将脐带间充质元代干细胞以1×10个/ml的密度接种至培养基中，放置于培养箱中培养3-5d，传代次数控制在p10以内，待细胞融合率达到80-90%时，收集培养液上清液；

13、s7、将培养液上清液于4℃、1200r/min条件下离心20-30min，收集上清液，超滤浓缩去除小分子后，过0.22μm无菌滤膜过滤除菌，得到脐带间充质干细胞外泌体。

14、作为一种优选方案，所述的pbs缓冲液包含1.5-2.5wt%的青霉素和1-3wt%的硫酸链霉素；所述的复合酶溶液由弹性蛋白酶和中性蛋白酶按照重量比1：（0.28-0.32）组成；所述的培养基为含8-10wt%fbs的dmem培养基；所述的培养箱培养条件为35-39℃、4.5-5.5%co2饱和湿度。

15、优选地，所述马齿苋提取物的制备方法为：

16、s21、将马齿苋用去离子水清洗，烘干，粉碎至20-40目后，得到马齿苋粉末；

17、s22、将马齿苋粉末、复合酶溶液按照重量比为1：（3-6）混合后，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液调节提取体系的ph为4-6，在35-55℃下酶解1-3h,离心，过滤，得到提取液a和滤渣；

18、s23、将滤渣、60-80%乙醇溶液按照重量比为1：（5-10）混合后，在40-60℃下提取2-4h，离心，过滤，得到提取液b和滤渣；

19、s24、将提取液a和提取液b合并，用旋转蒸发仪在40-50℃下旋蒸浓缩回收乙醇，将旋蒸产物用乙酸乙酯萃取，所得产物离心，再次旋蒸浓缩，冻干得到马齿苋提取物。

20、作为一种优选方案，所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶按照重量比1：（0.21-0.35）组成；所述的离心条件为25℃、12000r/min，离心时间为30min；所述的滤膜孔径为0.4μm。

21、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物的制备方法为：

22、s31、将海藻多糖、玻色因、四氢甲基嘧啶羧酸、棕榈酰三肽-5、透明质酸钠、羟乙基纤维素、神经酰胺-2、1-2戊二醇溶于去离子水中，恒温搅拌25-45min，使其完全溶解后，过滤得到第一滤液;

23、s32、将马齿苋提取物缓慢加入到第一滤液中，恒温搅拌10-30min，过滤得到第二滤液;

24、s33、将第二滤液降温至37℃，边搅拌边倒入脐带间充质干细胞外泌体，混合完成后在35-40℃下回流1-3h后，冷却并置于30℃下杀菌1h后进行萃取，得到含干细胞外泌体的组合物。

25、作为一种优选方案，所述的s31步骤中的恒温搅拌温度为45-50℃，搅拌速度为120-180rmp；所述的s32步骤中的恒温搅拌温度为40-45℃，搅拌速度为90-150rmp；s33步骤中的搅拌速度为50-80rmp；所述的滤膜孔径为0.4μm。

26、本发明还提供了一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有修复作用的产品中的应用。

27、本发明的有益效果：

28、本发明所述的一种含干细胞外泌体的组合物，间充质干细胞外泌体能调节皮肤微环境中促炎细胞因子分泌，促进皮肤成纤维细胞的增殖分化，马齿苋提取物作为温和的植物有效成分提取物，可帮助肌肤建立屏障，减少对皮肤的刺激，有效修复肌肤，增加皮肤弹性，改善皮肤状态。

技术特征：

1.一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计包括：0.05-0.5份脐带间充质干细胞外泌体、2-6份马齿苋提取物、1-3份海藻多糖、3-7份玻色因、0.6-1.5份四氢甲基嘧啶羧酸、0.6-1.2份棕榈酰三肽-5、0.25-0.45份透明质酸钠、0.2-1份羟乙基纤维素、0.1-0.6份神经酰胺-2、0.08-0.18份1-2戊二醇、25-35份去离子水。

2.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计包括：0.21-0.34份脐带间充质干细胞外泌体、3-5份马齿苋提取物、1.5-2.5份海藻多糖、4-6份玻色因、0.9-1.2份四氢甲基嘧啶羧酸、0.8-1份棕榈酰三肽-5、0.3-0.4份透明质酸钠、0.4-0.8份羟乙基纤维素、0.3-0.4份神经酰胺-2、0.12-0.14份1-2戊二醇、28-32份去离子水。

3.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计包括：0.28份脐带间充质干细胞外泌体、4份马齿苋提取物、2份海藻多糖、5份玻色因、1.1份四氢甲基嘧啶羧酸、0.9份棕榈酰三肽-5、0.35份透明质酸钠、0.6份羟乙基纤维素、0.35份神经酰胺-2、0.13份1-2戊二醇、30份去离子水。

4.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：

5.根据权利要求4所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述的pbs缓冲液包含1.5-2.5wt%的青霉素和1-3wt%的硫酸链霉素；所述的复合酶溶液由弹性蛋白酶和中性蛋白酶按照重量比1：（0.28-0.32）组成；所述的培养基为含8-10wt%fbs的dmem培养基；所述的培养箱培养条件为35-39℃、4.5-5.5%co2饱和湿度。

6.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述马齿苋提取物的制备方法为：

7.根据权利要求6所述的一种含干细胞外泌体的组合物，所述的复合酶由纤维素酶和果胶酶按照重量比1：（0.21-0.35）组成；所述的离心条件为25℃、12000r/min，离心时间为30min；所述的滤膜孔径为0.4μm。

8.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物的制备方法为：

9.根据权利要求8所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述的s31步骤中的恒温搅拌温度为45-50℃，搅拌速度为120-180rmp；所述的s32步骤中的恒温搅拌温度为40-45℃，搅拌速度为90-150rmp；s33步骤中的搅拌速度为50-80rmp；所述的滤膜孔径为0.4μm。

10.根据权利要求1-9任一项所述的一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有修复作用的产品中的应用。

技术总结
本发明公开了一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有修复作用的产品中的应用，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.05‑0.5份脐带间充质干细胞外泌体、2‑6份马齿苋提取物、1‑3份海藻多糖、3‑7份玻色因、0.6‑1.5份四氢甲基嘧啶羧酸、0.6‑1.2份棕榈酰三肽‑5、0.25‑0.45份透明质酸钠、0.2‑1份羟乙基纤维素、0.1‑0.6份神经酰胺‑2、0.08‑0.18份1‑2戊二醇、25‑35份去离子水。间充质干细胞外泌体能调节皮肤成纤维细胞增殖分化，马齿苋提取物可帮助肌肤建立屏障，抵御外来刺激，各组分协同增效，为肌肤防护和修复提供所需营养，改善肌肤状态。

技术研发人员：陈忠平
受保护的技术使用者：朗姿赛尔生物科技（广州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15