本发明涉及组织工程材料，具体为一种脱细胞组织支架材料及其制备方法和应用。
背景技术：
1、由于骨软、骨炎、骨性关节炎等引发的关节创伤性的损伤在临床上的治疗十分困难，并且由于软骨缺乏血管供应和分化为成熟软骨细胞的干细胞，因此对于软骨的损伤自身难以对其进行修复。而组织工程学是软骨的修复的一种方法。
2、组织工程学是利用生命科学和工程学的原理和方法，研究动物的正常和病理组织的结构和功能的相互关系，用以开发以修复、维护。改善组织器官功能和形态的一门学科。现如今广泛应用于组织工程支架主要有天然生物材料胶原、纤维素、透明质酸等，合成高分子材料聚乳酸、聚乙烯酸、几丁质等。
3、聚乳酸是一种高分子材料，具有良好的生物相容性、降解性，广泛应用于生物医药、塑料、涂料等领域。并且以聚乳酸材料制备而成的组织工程支架，能够诱导细胞粘附、增殖、分化、形成组织，但是其性脆，亲水性较差，因此如何提升其亲水性和力学性能以扩大其应用范围以及应用领域是当前研究的热点。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种脱细胞组织支架材料及其制备方法和应用，制备得到的脱细胞组织支架材料具有优异的力学性能和亲水性。
3、(二)技术方案
4、一种脱细胞组织支架材料的制备方法，所述制备方法如下：
5、(1)取新鲜干净的猪关节软骨，用磷酸盐缓冲溶液进行冲洗1-3h，冷冻过夜，将软骨切成软骨片，放入氯化钾溶液中浸泡3-6h，磷酸盐缓冲液冲洗10-15h，再将软骨片放入ph为7.5-7.8的胰酶溶液中，再将胰酶软骨置于30-40℃的二氧化碳水浴箱中震荡70-100h，磷酸盐缓冲液冲洗10-15h，得到脱细胞软骨基质。
6、(2)将改性聚乳酸、脱细胞软骨基质置于1,4-二氧六环溶剂中，配置成浓度为10％的聚乳酸脱细胞骨基质溶液，搅拌24-36h，置于-45至-35℃预冷1-3h，转移至冷冻干燥机中升华干燥36-48h，得到脱细胞组织支架材料。
7、优选的，所述步骤(1)中磷酸盐缓冲溶液ph为7-7.5。
8、优选的，所述步骤(1)中冷冻过夜的温度为-5至0℃。
9、优选的，所述步骤(1)中软骨片的大小为0.5-1cm×0.5-1cm×1-3mm。
10、优选的，所述步骤(1)中氯化钾溶液的浓度为1-3mmol/l。
11、优选的，所述步骤(1)中二氧化碳水浴箱中二氧化碳的体积分数为0.04-0.08。
12、优选的，所述步骤(2)中改性聚乳酸：脱细胞软骨基质的质量比为1.5-3:1。
13、优选的，所述步骤(2)中改性聚乳酸的制备方法为：
14、(3)在氮气氛围下，将二乙酸甘油酯和马来酸酐置于甲苯溶剂中搅拌分散，再向其中加入辛酸亚锡的甲苯溶液，抽真空除去甲苯，于120-140℃下，聚合反应20-30h，氯仿溶解，甲醇沉淀，过滤，干燥，得到乙烯基二乙酸丙二脂。
15、(4)将聚乳酸置于四氢呋喃溶剂中，搅拌溶解，再向其中加入过氧化二苯甲酰、乙烯基二乙酸丙二脂、乙烯基吡咯烷酮搅拌分散，升温至60-75℃反应5-10h，向其中加入去离子水进行沉降，过滤、水洗，干燥，得到改性聚乳酸。
16、优选的，所述步骤(3)中二乙酸甘油酯、马来酸酐、辛酸亚锡的质量比为1:2.7-3:0.0035-0.005。
17、优选的，所述步骤(4)中聚乳酸、过氧化二苯甲酰、乙烯基二乙酸丙二脂、乙烯基吡咯烷酮的质量比为1:0.005-0.012:0.03-0.06:0.05-0.08。
18、(三)有益的技术效果
19、二乙酸甘油酯与马来酸酐在辛酸亚锡的催化下，发生聚合反应得到乙烯基二乙酸丙二脂。聚乳酸与乙烯基二乙酸丙二脂、乙烯基吡咯烷酮在过氧化二苯甲酰的引发下反应得到改性聚乳酸。将猪关节软骨冷冻、切片，氯化钾溶液浸泡，磷酸盐缓冲液冲洗，再将软骨片放入胰酶溶液中，再将其放入二氧化碳水浴箱中震荡，冲洗，得到脱细胞软骨基质。最后将改性聚乳酸、与脱细胞软骨基质溶于1,4-二氧六环溶剂中，搅拌均匀，升华干燥36-48h，得到脱细胞组织支架材料。
20、本发明制备得到的改性聚乳酸，其中具有的乙烯基吡咯烷酮是一种亲水型物质，具有较强的亲水性，并且由于改性聚乳酸中具有乙烯基吡咯烷酮这种亲水链段的存在，提高了水在支架中的浸润和扩散，提升了材料的保水性能，有利于对蛋白和细胞的粘附。其中含有的乙烯基二乙酸丙二脂其中具有电负性较强的氧原子，与水分子间存在氢键，能够提升其对水的吸附，并且将其接枝到聚乳酸中，由于其具有柔性链段，能够促使聚乳酸链段的运动，提升聚乳酸的韧性，进而提升其力学性能。本发明所使用的聚乳酸与乙烯基吡咯烷酮、乙烯基二乙酸丙二脂引发共聚形成一种交联网状结构，当其受到冲击时，交联网络结构由于具有较多的交联网络位点，因此能够吸收较多的能量，以提升其力学性能。本发明制备得到而脱细胞组织支架材料具有优异的力学性能和亲水性。
1.一种脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：
2.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中磷酸盐缓冲溶液ph为7-7.5。
3.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中冷冻过夜温度为-5至0℃。
4.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中软骨片的大小为0.5-1cm×0.5-1cm×1-3mm。
5.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中氯化钾溶液的浓度为1-3mmol/l。
6.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中二氧化碳水浴箱中二氧化碳的体积分数为0.04-0.08。
7.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中改性聚乳酸、脱细胞软骨基质的质量比为1.5-3:1。
8.根据权利要求1所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中改性聚乳酸的制备方法为：
9.根据权利要求8所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中二乙酸甘油酯、马来酸酐、辛酸亚锡的质量比为1:2.7-3:0.0035-0.005。
10.根据权利要求8所述的脱细胞组织支架材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中聚乳酸、过氧化二苯甲酰、乙烯基二乙酸丙二脂、乙烯基吡咯烷酮的质量比为1:0.005-0.012:0.03-0.06:0.05-0.08。