一种Phb2基因或Phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用

本发明涉及生物医药以及生物，尤其涉及一种phb2基因或phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用。

背景技术：

1、酒精性肝病(ald)是一种由于过量饮酒导致的肝脏疾病，其主要特征表现为肝脂肪堆积、炎症反应和肝硬化，是肝癌最常见的病因之一。酒精性肝病的主要临床特征是恶心、呕吐、黄疸、肝脏肿大和压痛，还可能合并肝功能衰竭和上消化道出血等并发症。在严重酗酒的情况下，还可导致肝细胞坏死，甚至引发肝功能衰竭。酒精性肝病是一种常见的肝脏疾病，严重影响人民健康。

2、目前为止，酒精性肝病仍然是一个治疗难题，缺乏特效疗法。由于尚无可供选择的靶向药物，戒酒似乎是酒精性肝病患者唯一的治疗选择。然而对于长期酗酒者来说，突然戒酒可能导致戒断症状或其他并发症，给疾病的治疗预后带来许多困难。因此，迫切需要深入了解酒精性肝病的病理机制，以促进新型干预药物的开发，为酒精性肝病患者提供更有效的治疗策略。

3、因此，当前技术还有待于进一步改进和发展。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种phb2基因或phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用，旨在解决目前对酒精性肝病的病理机制研究不足，且缺乏针对性的干预药物的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种phb2基因或phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用。

4、所述的应用，其中，所述phb2基因包括野生型phb2基因或突变型phb2基因，所述phb2蛋白包括野生型phb2蛋白或phb2蛋白突变体。

5、所述的应用，其中，所述phb2蛋白突变体缺失phb结构域，所述突变型phb2基因缺失编码phb结构域的核苷酸序列。

6、所述的应用，其中，所述phb2蛋白突变体的第91位丝氨酸发生突变，所述突变型phb2基因编码第91位丝氨酸的核苷酸序列发生突变。

7、所述的应用，其中，所述phb2蛋白突变体的第91位丝氨酸突变为丙氨酸或天冬氨酸，所述突变型phb2基因编码第91位丝氨酸的核苷酸序列突变为编码丙氨酸或天冬氨酸的核苷酸序列。

8、一种phb2突变质粒，其中，所述phb2突变质粒包括质粒骨架以及突变型phb2基因；所述突变型phb2基因缺失编码phb结构域的核苷酸序列，或者其编码第91位丝氨酸的核苷酸序列突变为编码丙氨酸或天冬氨酸的核苷酸序列。

9、一种phb2蛋白突变体，其中，所述phb2蛋白突变体缺失phb结构域，或者其第91位丝氨酸突变为丙氨酸或天冬氨酸。

10、一种治疗酒精性肝病的药物，其中，所述药物包括如上所述的phb2突变质粒和如上所述的phb2蛋白突变体中的一种或两种。

11、所述的药物，其中，所述药物还包括药学上可接受的载体和/或赋型剂。

12、一种用于酒精性肝病检测或治疗的试剂盒，其中，所述试剂盒包括如上所述的phb2突变质粒和如上所述的phb2蛋白突变体中的一种或两种。

13、有益效果：本发明提供了一种phb2基因或phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用。本发明构建了phb2突变体，所述phb2的突变体是指缺乏phb结构域的phb2突变体，以及模拟ser91位点磷酸化的phb2突变体phb2s91d。本发明将缺失phb结构域的突变质粒phb2δphb转染到肝细胞中，并给予酒精刺激。结果发现，在经酒精刺激的肝细胞中，转染了phb2δphb的细胞可以有效的恢复线粒体atp的含量，保持线粒体膜电位的稳定，并且减少线粒体ros的产生。同时，这些细胞中mptp开放率也恢复到基线水平。这些结果表明，phb2δphb突变体能维持酒精胁迫下肝细胞中的线粒体功能。本发明还评估了突变质粒phb2δphb转染后的肝细胞的功能。结果发现对照细胞在酒精处理后细胞活力明显下降，而这种改变被转染突变质粒phb2δphb所逆转。在酒精应激下，转染phb2δphb突变质粒后，促炎症基因tgfβ、il-1和mcp1α的表达也被抑制。此外，转染phb2δphb突变质粒还可以恢复肝细胞的adh/aldh活性，并抑制酒精诱导cyp2e1的上调。而且，转染phb2δphb突变质粒还可以增加酒精刺激下肝细胞中抗氧化物sod和gsh的水平，并阻止脂质过氧化产物mda的生成。本发明证明了phb2δphb突变体能够逆转乙醇(etoh)诱导的肝细胞功能障碍。

14、本发明还通过转基因敲入的方法，获得了携带phb2s91d突变体的转基因敲入小鼠。在酒精处理下，与野生型(wt)小鼠相比，携带phb2s91d的突变体小鼠能够维持血清中alt和ast活性保持在正常水平，并且抑制血清和肝脏中tg的含量，减少肝细胞空泡和肝纤维化的发生，从而缓解小鼠的酒精性肝损伤。此外，本发明还证实了在酒精刺激下，携带phb2s91d突变体的小鼠相比于野生型小鼠具有更高的细胞活力和较低水平的促炎因子tgfβ、il-1和mcp1α。携带phb2s91d突变体的小鼠还表现出增强了酒精代谢相关酶adh/aldh以及抗氧化酶sod的活性。同时，突变体小鼠的抗氧化物gsh的含量也显著升高，这增强了小鼠的酒精代谢和抗氧化的能力，以抑制酒精氧化酶cyp2e1的活性和活性氧ros的产生，同时维持线粒体势能的恒定并降低mptp的开放率，以保护线粒体和肝细胞功能免受酒精所致的损伤。本发明所有结果表明，phb2δphb突变体和模拟磷酸化的phb2s91d突变体均能够逆转etoh诱导的肝细胞功能障碍，减少了酒精性的肝损伤以及线粒体损伤，具有明显的治疗酒精性肝损伤及线粒体损伤的作用。上述结果也进一步揭示了酒精肝病的线粒体损伤的发病机理，为酒精性肝病的防治提供了新的思路和方法，在制备治疗酒精性肝病药物方面具有极高的潜在应用价值。

技术特征：

1.一种phb2基因或phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述phb2基因包括野生型phb2基因或突变型phb2基因，所述phb2蛋白包括野生型phb2蛋白或phb2蛋白突变体。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述phb2蛋白突变体缺失phb结构域，所述突变型phb2基因缺失编码phb结构域的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述phb2蛋白突变体的第91位丝氨酸发生突变，所述突变型phb2基因编码第91位丝氨酸的核苷酸序列发生突变。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述phb2蛋白突变体的第91位丝氨酸突变为丙氨酸或天冬氨酸，所述突变型phb2基因编码第91位丝氨酸的核苷酸序列突变为编码丙氨酸或天冬氨酸的核苷酸序列。

6.一种phb2突变质粒，其特征在于，所述phb2突变质粒包括质粒骨架以及突变型phb2基因；所述突变型phb2基因缺失编码phb结构域的核苷酸序列，或者其编码第91位丝氨酸的核苷酸序列突变为编码丙氨酸或天冬氨酸的核苷酸序列。

7.一种phb2蛋白突变体，其特征在于，所述phb2蛋白突变体缺失phb结构域，或者其第91位丝氨酸突变为丙氨酸或天冬氨酸。

8.一种治疗酒精性肝病的药物，其特征在于，所述药物包括权利要求6所述的phb2突变质粒和权利要求7所述的phb2蛋白突变体中的一种或两种。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体和/或赋型剂。

10.一种用于酒精性肝病检测或治疗的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求6所述的phb2突变质粒和权利要求7所述的phb2蛋白突变体中的一种或两种。

技术总结
本发明提供了一种Phb2基因或Phb2蛋白在制备治疗酒精性肝病药物中的应用。本发明构建了Phb2突变体，所述Phb2的突变体是指缺乏PHB结构域的Phb2<supgt;ΔPHB</supgt;突变体，以及模拟Ser91磷酸化的Phb2突变体Phb2<supgt;S91D</supgt;。本发明发现Phb2<supgt;ΔPHB</supgt;突变体逆转了EtOH诱导的肝细胞功能障碍，减少了酒精性的肝损伤以及线粒体损伤，具有治疗酒精性肝损伤及线粒体损伤的作用；同样，突变体Phb2<supgt;S91D</supgt;也能够保护线粒体和肝细胞功能免受酒精性损伤。这些结果进一步揭示了酒精肝病的线粒体损伤的发病机理，为酒精性肝病的防治提供了新的思路，在制备治疗酒精性肝病药物方面具有极高的潜在应用价值。

技术研发人员：王艺瑾,王春玲,戴哲,李芮冰
受保护的技术使用者：南方科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/6