细胞核靶向纳米粒、药物组合物、相关制备方法及应用

本发明涉及基因治疗，特别涉及一种细胞核靶向纳米粒、药物组合物、相关制备方法及应用。

背景技术：

1、基因治疗一直吸引着国内外学者的关注。基因治疗的临床实验展现了其显著的疗效与卓越的稳定性，为基因治疗的长期发展可行性提供了依据，在未来基因治疗有望发展为一种重要的治疗方法。然而，基因治疗付诸实践仍有许多障碍，如向目标细胞转染入新的治疗性基因必须克服复杂的组织和细胞的屏障，才能导入新的遗传信息并在不破坏细胞中重要调控过程的前提下产生治疗性蛋白。因此，基因治疗需要把目的基因高效地导入靶细胞，选取一种合适的载体来运载目的基因，使其稳定、有效、特异性地表达就显得尤为重要。

2、靶向递送系统可以将基因选择性地递送至目的细胞,并且在持续释放过程中维持有效的药物浓度，延长作用时间。聚乙酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid)，plga)已获得fda批准，是亲脂性高分子聚合物,具有稳定性强、生物可降解性好和安全性高等优点,被认为是制备基因纳米递送系统最成熟的载体之一，然而，现有基于plga纳米递送系统表面通常为负电荷，导致较少的细胞摄取与较低的基因负载，并且，现有基于plga的纳米递送系统只是将基因递送至细胞质中，而基因需要在细胞核中才能发挥作用，这限制了治疗性基因的转染与高效地生物利用，现有技术缺乏一种对细胞核具有靶向递送能力的纳米粒。

3、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、本发明提供了一种细胞核靶向纳米粒、制备方法、药物组合物及应用，旨在解决背景技术中所提到的现有基因递送纳米粒所存在的技术问题。

2、本发明技术方案如下：

3、本发明第一方面提供了一种细胞核靶向纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

4、提供含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液、含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液、聚乙烯醇溶液以及抗核纤层蛋白b1抗体；

5、将含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液添加到含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液中，并搅拌第一时长，获得第一混合溶液；

6、将所述第一混合溶液滴加至聚乙烯醇溶液中，并搅拌第二时长，获得第二混合溶液；

7、持续搅拌所述第二混合溶液挥发第三时长之后加入抗核纤层蛋白b1抗体并混匀，制得细胞核靶向纳米粒。

8、在本发明第一方面一种可选的实施方式中，将含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液添加到含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液中在高速搅拌和冰浴的条件下进行。

9、在本发明第一方面一种可选的实施方式中，在所述第一混合溶液的原料中，含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液和含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液的质量比大于1:2。

10、在本发明第一方面一种可选的实施方式中，所述第一时长大于等于5min，所述第二时长大于等于20min，所述第三时长大于等于3h。

11、在本发明第一方面一种可选的实施方式中，含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液的质量为80mg；聚乙烯醇溶液的质量浓度为1％，聚乙烯醇溶液的体积为15ml；抗核纤层蛋白b1抗体的体积为50μl。

12、在本发明第一方面一种可选的实施方式中，所述细胞核靶向纳米粒的制备方法还包括：

13、在制备细胞核靶向纳米粒时，分别将香豆素6和gfp质粒作为模拟载体药物添加到2份预留的所述第一混合溶液中，以通过2份预留的所述第一混合溶液分别制得第一模拟药物组合物和第二模拟药物组合物；

14、利用所述第一模拟药物组合物和所述第二模拟药物组合物对所述细胞核靶向纳米粒的基因转染性能进行表征。

15、本发明第二方面提供了一种细胞核靶向纳米粒，由上述任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制得。

16、本发明第三方面提供了一种药物组合物的制备方法，在通过上述任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制作细胞核靶向纳米粒的过程中，在获得所述第一混合溶液之后，向所述第一混合溶液中加入载体药物，再将混有所述载体药物的所述第一混合溶液滴加至聚乙烯醇溶液中，以使最后制得的细胞核靶向纳米粒附带所述载体药物得到药物组合物。

17、本发明第四方面提供了一种药物组合物，由上述所述的药物组合物的制备方法制得。

18、本发明第五方面提供了一种细胞核靶向纳米粒作为基因转染工具的应用，所述细胞核靶向纳米粒由上述任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制得。

19、有益效果：本发明提供了一种细胞核靶向纳米粒、药物组合物、相关制备方法及应用，本发明的纳米粒以含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液、含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液、聚乙烯醇溶液以及抗核纤层蛋白b1抗体作为原料，制作得到细胞核靶向纳米粒。本发明的细胞核靶向纳米粒由于采用聚乳酸羟基乙酸为载体构建基因纳米递送系统，通过聚乳酸羟基乙酸的-cooh与抗核纤层蛋白b1抗体自带的游离-nh2的缩合作用将抗核纤层蛋白b1抗体链接至聚乳酸羟基乙酸纳米粒的表面，通过抗原抗体反应使其能够特异性地与细胞核表面标志物核纤层蛋白结合而被赋予细胞核靶向功能，且进一步提高基因递送效率。

技术特征：

1.一种细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，将含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液添加到含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液中在高速搅拌和冰浴的条件下进行。

3.根据权利要求1所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，在所述第一混合溶液的原料中，含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液和含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液的质量比大于1:2。

4.根据权利要求1所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，所述第一时长大于等于5min，所述第二时长大于等于20min，所述第三时长大于等于3h。

5.根据权利要求1所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液的质量为80mg；聚乙烯醇溶液的质量浓度为1％，聚乙烯醇溶液的体积为15ml；抗核纤层蛋白b1抗体的体积为50μl。

6.根据权利要求1所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法，其特征在于，还包括：

7.一种细胞核靶向纳米粒，其特征在于，由上述权利要求1-5任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制得。

8.一种药物组合物的制备方法，其特征在于，在通过上述权利要求1-5任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制作细胞核靶向纳米粒的过程中，在获得所述第一混合溶液之后，向所述第一混合溶液中加入载体药物，再将混有所述载体药物的所述第一混合溶液滴加至聚乙烯醇溶液中，以使最后制得的细胞核靶向纳米粒附带所述载体药物得到药物组合物。

9.一种药物组合物，其特征在于，由上述权利要求8所述的药物组合物的制备方法制得。

10.一种细胞核靶向纳米粒作为基因转染工具的应用，其特征在于，所述细胞核靶向纳米粒由上述权利要求1-5任一项所述的细胞核靶向纳米粒的制备方法制得。

技术总结
本发明提供了一种细胞核靶向纳米粒、药物组合物、相关制备方法及应用，本发明的纳米粒以含有聚乳酸羟基乙酸的二氯甲烷溶液、含有鱼精蛋白的蒸馏水溶液、聚乙烯醇溶液以及抗核纤层蛋白B1抗体作为原料，制作得到细胞核靶向纳米粒。本发明的细胞核靶向纳米粒由于采用聚乳酸羟基乙酸为载体构建基因纳米递送系统，通过聚乳酸羟基乙酸的‑COOH与抗核纤层蛋白B1抗体自带的游离‑NH2的缩合作用将抗核纤层蛋白B1抗体链接至聚乳酸羟基乙酸纳米粒的表面，通过抗原抗体反应使其能够特异性地与细胞核表面标志物核纤层蛋白结合而被赋予细胞核靶向功能，且进一步提高基因递送效率。

技术研发人员：陈伟,陈友渌,吴钢伟,严素玲,田蕾
受保护的技术使用者：福建医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5