一种ATP脂质体的制备方法

本发明属于食品工业生物，具体而言，涉及一种atp脂质体的制备方法。

背景技术：

1、蛋黄卵磷脂脂质体作为药物载体，具有鲜明的靶向性，是最新的第四代给药系统中的一个重要制剂。蛋黄卵磷脂结构上的脂肪酸组成与种类对于脂质体性质影响较大，比如，卵磷脂结构中的饱和脂肪酸可以增强脂质体膜的坚固性和非渗透性，卵磷脂结构中的不饱和脂肪酸，可以使脂质体具有较低的相转变，有很好的流动性和低的粘滞性。然而蛋黄卵磷脂的高度易氧化性限制了其应用。

2、逆向蒸发法是将亲水性药物负载到脂质体中的最优选技术。对于亲水性药物，内部水核是唯一可以装载药物的区域。因此，在脂质体形成过程中能够截留大量水性核心，产生高截留效率并因此产生高药物负载。在逆向蒸发方法中，通过将亲水性药物溶解在水中并将磷脂溶解在与水不混溶的溶剂中来制备w/o乳液。然后在真空下缓慢除去有机溶剂，并形成凝胶相。有机溶剂的进一步蒸发产生脂质体分散体，并在脂质体的内部核心中高度捕获水性核心。目前对于采用逆向蒸发法制备脂质体的方法进行了有效研究，然而其在包封atp方面的应用却少有见闻，同时大多脂质体的应用仅局限于医学领域，在食品工程中的良好应用鲜闻。

技术实现思路

1、本发明提供一种atp脂质体的制备方法。本发明利用蛋黄卵磷脂通过逆向蒸发法制备负载atp的脂质体可以得到较高的atp负载量的脂质体，同时能够更好的提高atp的稳定性。

2、本发明采用如下技术方案实现：

3、一种atp脂质体的制备方法，包括如下制备步骤：

4、s1、称取一定量的蛋黄卵磷脂，加入无水乙醇中，搅拌适当溶解后，同时称取一定量的胆固醇，并量取一定量的ve溶液，加入乙醇中，超声使其充分溶解；

5、s2、称取一定量的atp于5ml离心管中，加入pbs缓冲液使其完全溶解，所述pbs缓冲液的ph为6.5，加入到步骤（1）中的混合液中，超声3min；

6、s3、将步骤s2得到的脂质体溶液倒入圆底烧瓶中，减压蒸发，直到烧瓶表面形成均匀的干燥脂质薄膜；

7、s4、在圆底烧瓶中加入pbs缓冲液，将圆底烧瓶进行简单的超声处理，确保瓶壁上的脂质膜完全脱落到缓冲液中，进行磁力搅拌，得到脂质体悬浮液；

8、s5、将步骤s4得到的脂质体悬浮液通过超高压细胞破碎仪进行高压均质，均质三次，得到atp脂质体，4℃冷藏备用。

9、在本方案步骤s1中，由于蛋黄卵磷脂易氧化，称取过程中要迅速，且称取之后先加无水乙醇后在称取胆固醇，尽量避免过多的氧化损失；超声时用保鲜膜进行简单封口处理，减少溶液外溅。

10、在本方案步骤s4中，在磁力搅拌之前，需将圆底烧瓶进行简单的超声处理，确保瓶壁上的脂质膜完全脱落；搅拌时用保鲜膜封口，减少膜液蒸发、外溅，保鲜膜用细针扎2—4个孔用来排除少量蒸汽；加热温度必须保持在35℃以下。

11、在以上方案的基础上，进一步的，在步骤s1中，所述蛋黄卵磷脂和胆固醇的质量比为4:1，所述ve溶液的浓度为4g/l，加入量为每1mlve溶液对应240mg蛋黄卵磷脂。

12、在以上方案的基础上，进一步的，所述步骤s2中atp和蛋黄卵磷脂的质量比为1:5。

13、在以上方案的基础上，进一步的，所述步骤s3中的减压蒸发的条件为在35℃温度下进行减压蒸发30 min。atp热稳定性差，较低温度可减少制备过程中atp的分解，减少损失。

14、在以上方案的基础上，进一步的，所述步骤s4中的磁力搅拌的条件为在35℃水浴下磁力搅拌50 min，转速控制为300-500r/min，防止转速过快导致包埋损失，同时减少泡沫的产生。

15、在以上方案的基础上，进一步的，所述步骤s5中高压均质的压力设置为258pa，温度为23℃。

16、在本方案中，若均质压力过高，可能会破坏脂质体结构，导致包埋在脂质体中的atp流出，降低包埋率。

17、本发明的有益技术效果：

18、（1）本发明利用蛋黄卵磷脂通过逆向蒸发法制备负载atp的脂质体可以得到较高的atp负载量的脂质体，同时能够更好的提高atp的稳定性。本发明从现有的制备脂质体的材料入手，改变药物与卵磷脂之间的复配比，通过控制脂质体制备条件，获得的负载atp的脂质体在外观、包封率、及稳定性方面都表现出良好的性能。

19、（2）本发明通过改变药脂比（atp：蛋黄卵磷脂）来确定atp的最适包封量，以更好的包封atp，减少atp的包埋损失。通过对atp进行包埋，从而达到增加atp稳定性的作用。

技术特征：

1.一种atp脂质体的制备方法，其特征在于：包括如下制备步骤：

2.根据权利要求1所述的atp脂质体的制备方法，其特征在于：在步骤s1中，所述蛋黄卵磷脂和胆固醇的质量比为4:1，所述ve溶液的浓度为4g/l，加入量为每240mg蛋黄卵磷脂对应1mlve溶液。

3.根据权利要求1所述的atp脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中atp和蛋黄卵磷脂的质量比为1:5。

4.根据权利要求1所述的atp脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中的减压蒸发的条件为在35℃温度下进行减压蒸发30 min。

5.根据权利要求1所述的atp脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中的磁力搅拌的条件为在35℃水浴下磁力搅拌50 min，转速控制为300-500r/min。

6.根据权利要求1所述的atp脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤s5中高压均质的压力设置为258pa，温度为23℃。

技术总结
本发明属于食品工业生物技术领域，涉及一种ATP脂质体的制备方法。本发明利用蛋黄卵磷脂通过逆向蒸发法制备负载ATP的脂质体可以得到较高的ATP负载量的脂质体，同时能够更好的提高ATP的稳定性。

技术研发人员：李玲,姜鑫,韩佳利,冯磊,王相友
受保护的技术使用者：山东理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15