沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备皮肤美白产品中的应用与流程

本发明属于护肤品或药品，涉及一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备皮肤美白产品中的应用。

背景技术：

1、沙漠蔷薇，又称沙漠玫瑰是夹竹桃科天宝花属多肉灌木或小乔木植物。原产地非洲的肯尼亚、坦桑尼亚，后引入中国华南地区栽培，在中国大部分地区都有分布。沙漠蔷薇自花结实率低，种子不耐贮藏，扦插繁殖是目前沙漠玫瑰的主要繁殖方式。研究表明沙漠蔷薇中含有强心苷和孕烷，海藻糖等药用价值或美容价值的化学物质。

2、植物类囊泡为直径大小在40-150nm之间的类囊泡，其包含植物特有的dna、rna等其他药理活性分子。

3、目前国内并没有相关专利研究关于从沙漠蔷薇愈伤组织培养液分泌的类囊泡功效。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备皮肤美白产品中的应用。

2、本发明研究发现沙漠蔷薇愈伤组织培养上清液中富含大量类囊泡。从沙漠蔷薇愈伤组织培养液中分离的类囊泡保留沙漠蔷薇的多种功效成份和dna、rna药理活性分子。沙漠蔷薇的类囊泡能被皮肤组织吸收，这些类囊泡能够诱发放大其中对皮肤有益的次级代谢产物，促进皮肤的抗氧化和抑制黑色素的生成，达到美白皮肤的作用。

3、植物愈伤组织是一团不断增长的无组织植物薄壁组织细胞。研究发现，相比较整株植物，植物愈伤组织具有植物多种功效成份且成份浓度更高。研究表明植物愈伤组织具有多能干细胞属性，植物愈伤组织可以分泌直径粒径大小在40-150nm之间的类囊泡，研究表面植物愈伤组织分泌的类囊泡不仅包含植物的多种功效成份，还包含植物特有的dna、rna等其他药理活性分子。

4、解决方案

5、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

6、第一方面，本发明提供一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在制备皮肤美白产品中的应用，可选地，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡来源于沙漠蔷薇愈伤组织培养液。

7、进一步地，所述皮肤美白产品包括抑制黑色素生成和/或抗氧化的皮肤美白产品。可选地，抑制黑色素生成包括抑制酪氨酸酶活性，可选地，抗氧化包括抑制ros的形成。

8、进一步地，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为109~1012particles/ml或1010~1012particles/ml。

9、进一步地，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡采用如下方法制备：

10、1）将沙漠蔷薇愈伤组织进行光照培养，收集培养液；

11、2）从步骤1）的培养液中分离获得沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡，分离方法包括：离心收集上清、过滤收集滤液，将滤液浓缩，纯化，获得沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡。

12、第二方面，提供一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法，包括如下步骤：

13、1）将沙漠蔷薇愈伤组织进行光照培养，收集培养液；

14、2）从步骤1）的培养液中分离获得沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡，分离方法包括：过滤收集滤液，将滤液浓缩，纯化，获得沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡。

15、上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，中空纤维的截留分子量≥100kd，可选地为100kd~750kd或100kd~300kd。

16、上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，过滤方法采用0.2μm至1μm间不同孔径（可选地孔径为0.45~1μm，可选地孔径为0.6~1μm，可选地孔径为0.8~1μm，优选1μm）的深层过滤器。

17、上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，浓缩倍数为50~200倍或80~150倍或100~150倍。

18、上述第一方面或第二方面中，所述沙漠蔷薇愈伤组织通过将沙漠蔷薇嫩芽组织诱导获得。

19、上述第一方面或第二方面中，沙漠蔷薇愈伤组织的嫩芽组织经灭菌后，切成小块接入诱导培养基进行诱导培养（可选地，光照<1000，温度为24±2℃），可选地，诱导培养基以木本植物用培养基（wpm）（索莱宝）作为基础培养基，还包括：蔗糖20~50g/l，4~6g/l卡拉胶，3.1-4.5g/l植物凝胶和6.0-9.5g/l琼脂（优选地蔗糖30g/l、卡拉胶6g/l、植物凝胶4.2g/l、琼脂9.2g/l）。在诱导培养基培养10天之后，诱导出愈伤组织。

20、可选地，沙漠蔷薇愈伤组织的嫩芽组织的灭菌方法包括：依次无菌水洗涤，酒精浸泡灭菌，无菌水洗涤，次氯酸钠溶液处理，再用无菌水洗涤，可选地，酒精浓度为70%，次氯酸钠溶液包括3%（wt）有效率次氯酸钠。

21、可选地，沙漠蔷薇愈伤组织的嫩芽组织切小块的方法为：从中间切成直径为1cm-4cm的正方形小块。

22、可选地，选取质地松软，生长速度快愈伤组织进行悬浮培养。

23、进一步地，步骤1）中，光照培养采用悬浮培养基(可选地，充足光照培养)，以悬浮培养基ms为基础，还包括：还包括：蔗糖20~50g/l，0.1~0.3mg/l水解乳蛋白，200~300mg/l胰蛋白胨（优选地蔗糖30g/l，0.2mg/l水解乳蛋白，200mg/l胰蛋白胨）。可选地，培养条件为，100～120r/min的速度旋转震荡培养。温度保持25℃-30℃，光照充足条件下悬浮培养，7天为一周期，对愈伤组织继代培养。

24、第三方面，提供一种含有沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的皮肤美白产品，包括第二方面的提取方法提取的沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡。

25、进一步地，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为109~1012particles/ml或1010~1012particles/ml。

26、有益效果

27、1)本发明首次提出从沙漠蔷薇愈伤组织培养液中提取沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡。本发明使用深层过滤和切向流柱层析相结合的方法从沙漠蔷薇愈伤组织培养液中大量提取沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡，本发明不需要经过繁琐的离心操作减少离心操作中的污染，可大规模生产。本发明提取的沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡不仅纯度高，结构稳定，且有着抑制黑色素的生成和抗氧化的美白效果。

28、2）本发明从沙漠蔷薇愈伤组织培养液中利用深层过滤，切向流流超滤中空纤维和色谱法结合，实现沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡大规模工业化生产。通过一系列的实验发现沙漠蔷薇在抑制黑色素生产和抗氧化等方面上拥有着极好的效果。

29、3）本发明从沙漠蔷薇愈伤组织培养液提取的沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡做一系列功效试验，发现其能够抑制黑色素生成和抗氧化等美白作用。

技术特征：

1.一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在制备皮肤美白产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述皮肤美白产品包括抑制黑色素生成和/或抗氧化的皮肤美白产品；

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡采用如下方法制备：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2）中，浓缩采用中空纤维浓缩，中空纤维的截留分子量≥100kd或100kd~750kd或100kd~300kd；

5.一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，步骤2）中，浓缩采用中空纤维浓缩，中空纤维的截留分子量≥100kd或100kd~750kd或100kd~300kd；

7.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述沙漠蔷薇愈伤组织通过将沙漠蔷薇嫩芽组织诱导获得。

8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，步骤1）中，光照培养采用悬浮培养基，悬浮培养基以悬浮培养基ms为基础，还包括：蔗糖20~50g/l，0.1~0.3mg/l水解乳蛋白，200~300mg/l胰蛋白胨。

9.一种含有沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的皮肤美白产品，其特征在于，包括权利要求5至8任一所述的提取方法提取的沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡。

10.根据权利要求9所述的皮肤美白产品，其特征在于，所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为109~1012particles/ml或1010~1012particles/ml。

技术总结
本发明涉及一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备皮肤美白产品中的应用，提供一种沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在制备皮肤美白产品中的应用，所述皮肤美白产品包括抑制黑色素生成和/或抗氧化的皮肤美白产品；所述沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡来源于沙漠蔷薇愈伤组织培养液。本发明从沙漠蔷薇愈伤组织培养液中利用深层过滤，切向流流超滤中空纤维和色谱法结合，实现沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡大规模工业化生产。通过一系列的实验发现沙漠蔷薇愈伤组织类囊泡在抑制黑色素生产和抗氧化等方面上拥有着极好的效果。

技术研发人员：赵旺宇,张振兴,高琦,张旭辉,陈晨
受保护的技术使用者：北京尧景基因技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15