一种间充质干细胞外泌体冻干保护剂及其应用的制作方法

本发明属于外泌体冻干保护，更具体的，涉及一种间充质干细胞外泌体冻干保护剂及其应用。

背景技术：

1、外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。

2、外泌体的储存具有非常重要的意义，如果没有合格的储存技术，就无法实现长期储存，已有现有研究发现-80℃是长期储存的最佳温度，在此温度下可以有效抑制生物活性蛋白(包括外泌体)的损失，但在该储存条件下，外泌体的性质仍然会存在一定程度的改变，且这种温度下很难实现外泌体的稳定运输和储存。冻干通常用于保存生物活性化合物，现在已被用于外泌体的储存，现有报道的外泌体冻干保护剂有海藻糖、甘露醇等多种糖类、醇类物质，以及其他物质的组合，但多种研究发现对于具体种类的外泌体，所使用的外泌体冻干保护剂多有不同，且已知的外泌体冻干保护剂还不能较好的保护外泌体的形貌完整性，对外泌体的生物学功能影响也较大。

3、源自于间充质干细胞内分泌的外泌体，富含一百多种胞外基质蛋白，mrna信使核糖核酸和多重生长因子。在临床上，干细胞外泌体主要治疗烧伤、烫伤、皮肤溃疡，再生健康皮肤；在护肤方面，主要是对外伤受损、衰老中毒皮肤进行修复，全面调理皮肤、改善肤质，令肌肤恢复年轻、健康的状态。间充质干细胞外泌体是目前研究皮肤学领域的研究热点。然而现有技术目前还缺乏针对间充质干细胞的外泌体的冻干保护剂。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的上述问题，首先提供一种针对间充质干细胞外泌体的冻干保护剂。

2、本发明的第二个目的是提供上述冻干保护剂的应用。

3、本发明的第三个目的是提供一种间充质干细胞外泌体冻干制剂。

4、本发明的目的通过以下技术方案实现：

5、一种间充质干细胞外泌体冻干保护剂，由0.1～0.2v/v％神经酰胺、赖氨酸和0.8～1.5v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为50～80mm。

6、优选的，所述的间充质干细胞外泌体冻干保护剂，由0.18v/v％神经酰胺、赖氨酸和1.3v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为70mm。

7、本发明还保护上述冻干保护剂在制备外泌体冻干制剂中的应用。

8、本发明还保护上述冻干保护剂在改善外泌体形貌中的应用。

9、优选的，所述改善外泌体形貌是指提高外泌体分散程度和/或降低外泌体膜融合。

10、本发明还保护一种间充质干细胞外泌体冻干制剂，含有上述间充质干细胞外泌体冻干保护剂。

11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

12、本发明提供了一种间充质干细胞外泌体冻干保护剂，由0.1～0.2v/v％神经酰胺、赖氨酸和0.8～1.5v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为50～80mm；该冻干保护剂能维持外泌体形貌完整性，避免外泌体聚集，且能很好的维持外泌体的生物学功能，可以用于外泌体冻干技术上，具有广泛的应用价值。

技术特征：

1.间充质干细胞外泌体冻干保护剂，其特征在于，由0.1～0.2v/v％神经酰胺、赖氨酸和0.8～1.5v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为50～80mm。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体冻干保护剂，其特征在于，由0.18v/v％神经酰胺、赖氨酸和1.3v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为70mm。

3.权利要求1或2所述冻干保护剂在制备外泌体冻干制剂中的应用。

4.权利要求1或2所述冻干保护剂在改善外泌体形貌中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述改善外泌体形貌是指提高外泌体分散程度和/或降低外泌体膜融合。

6.一种间充质干细胞外泌体冻干制剂，其特征在于，含有权利要求1或2所述间充质干细胞外泌体冻干保护剂。

技术总结
本发明属于外泌体冻干保护技术领域，公开了一种间充质干细胞外泌体冻干保护剂，由0.1～0.2v/v％神经酰胺、赖氨酸和0.8～1.5v/v％甘油组成，其中，外泌体冻干保护剂和外泌体混合后，赖氨酸的终浓度为50～80mM；该冻干保护剂能维持外泌体形貌完整性，避免外泌体聚集，且能很好的维持外泌体的生物学功能，可以用于外泌体冻干技术上，具有广泛的应用价值。

技术研发人员：魏欣,吴曙霞,谭国华,李玉霞,邵佳青
受保护的技术使用者：广东康百医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11