STING激动剂MSA-2的铜盐及其联合的脂质纳米材料的制备和在治疗肿瘤中的应用

本发明涉及生物医学，尤其涉及sting激动剂msa-2的铜盐的制备和在治疗肿瘤药物中的应用以及联合脂质纳米材料1ap27@sting mrna的制备和进一步增强肿瘤免疫治疗的应用。

背景技术：

1、癌症免疫疗法彻底改变了癌症治疗策略，从先天免疫到通过免疫检查点阻断疗法、过继细胞疗法和疫苗的适应性免疫。激活cgas/sting依赖性信号转导以启动先天免疫，在临床应用中正在成为一种很有前途的抗肿瘤策略。近年来，几种sting激动剂显示出的良好的肿瘤免疫治疗效果，包括小分子类的stin g激动剂环二核苷酸(cdn)类的sting激动剂和金属离子(zn2+和mn2+)等sting激动剂。

2、近年来，小分子msa-2(苯并噻吩氧代丁酸)作为非核苷酸sting激动剂被开发出来，具有良好的抗肿瘤活性，它是一种可口服的人sting激动剂，可用于临床全身给药。一种硒替代硫的改造的msa-2显示了一种可用的抗肿瘤药物。包裹msa-2的纳米脂质体囊泡提高了稳定性和抗肿瘤作用。因此，提升ms a-2免疫治疗效果的策略对临床应用具有价值。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了提升msa-2免疫治疗效果。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述msa-2-cu为msa-2的铜盐。

4、优选的，所述msa-2-cu在肿瘤部位释放cu和msa-2，通过cu高效激活cgas-sting信号通路，而msa-2可以选择性靶向肿瘤组织，表现出更高的激活sting通路能力。

5、优选的，所述所述msa-2-cu化学式如下所示：

6、

7、优选的，所述msa-2-cu的合成路径如下所示：

8、

9、优选的，所述msa-2-cu的具体制备方法如下：

10、s1：取4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸、氢氧化钠放入反应器内，加入纯化水，在室温下反应12小时，停止反应，反应不做进一步处理，留待下一步使用；

11、s2：取硫酸铜，使用纯化水溶解后加入到第一步的溶液中，在室温下反应24小时，等待反应完全后停止反应，抽滤得到固体，用水重结晶后烘干，后得到化合物，记为msa-2-cu。

12、优选的，所述产品中还包括脂质纳米材料递送的sting mrna，所述脂质纳米材料为磷脂纳米颗粒。

13、优选的，所述磷脂纳米化合物为1ap27，所述脂质纳米材料递送的sting mrna为1ap27@sting mrna。

14、优选的，所述磷脂纳米化合物的制备方法如下：

15、s1.将2-氯-1,3,2-二氧磷杂环戊烷-2-氧化物缓慢加入装有醇和et3n的烧杯中，并在-15℃下搅拌5分钟；之后，在25℃下继续反应12小时；沉淀过滤，用乙醚冲洗3次。过滤混合物以除去盐酸三乙胺，滤液通过旋转蒸发浓缩，得到烷基化的二氧磷杂环戊烷分子；所有合成的收率均超过90％；

16、s2.向圆底烧瓶中，将烷基化的二氧磷杂环戊烷分子、胺溶解成ch3cn；

17、将所得混合物加热至70℃，搅拌3d-5d；通过tlc分析监测反应，并在硅胶柱中分馏，溶剂梯度为4％甲醇的二氯甲烷溶液至20％甲醇的二氯甲烷溶液；通过旋转蒸发浓缩最终的可电离磷脂，并在真空下干燥24h。

18、优选的，按照磷脂纳米化合物(1ap27):二油酰基l-α-磷脂酰乙醇胺(dope):胆固醇(cholesterol):1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(dmg-peg2000)＝50:40:20:0.25的摩尔比例合成脂质纳米颗粒用于sting mrna的递送。

19、本申请中通过两种改进msa-2的抗肿瘤治疗的策略。首先，本申请中合成了铜修饰的msa-2，该方法显示cu的细胞毒性增强sting途径。本申请中还合成了81个可电离的磷脂纳米颗粒，其中磷脂纳米颗粒1ap27@sting mrna可以有效地传递sting-mrna，增加sting蛋白的表达。将1ap27@sting mrna和msa-2-cu结合，可显著降低b16f10肿瘤的生长，提高小鼠的存活率。本申请中的1ap27@sting mrna+msa-2-cu治疗通过激活cgas-sting通路刺激了强烈的免疫反应，改进了msa-2的抗肿瘤作用，为增强肿瘤免疫治疗提供了一种前景广阔的策略。

技术特征：

1.msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述msa-2-cu为msa-2的铜盐。

2.根据权利要求1所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述msa-2-cu在肿瘤部位释放cu和msa-2，通过cu高效激活cgas-sting信号通路，而msa-2可以选择性靶向肿瘤组织，表现出更高的激活sting通路能力。

3.根据权利要求1所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于所述的msa-2-cu化学式如下所示：

4.根据权利要求1所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述msa-2-cu的合成路径如下所示：

5.根据权利要求1所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述msa-2-cu的具体制备方法如下：

6.根据权利要求1所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述产品中还包括脂质纳米材料递送的sting mrna，所述脂质纳米材料为磷脂纳米颗粒。

7.根据权利要求6所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述磷脂纳米化合物为1ap27，所述脂质纳米颗粒递送的sting mr na为1ap27@sting mrna。

8.根据权利要求7所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述1ap27的制备方法如下：

9.根据权利要求8所述的msa-2-cu在制备治疗肿瘤产品中的应用，其特征在于：所述1ap27@sting mrna按照磷脂纳米化合物(1ap27):二油酰基l-α-磷脂酰乙醇胺(dope):胆固醇(cholesterol):1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(dmg-peg2000)＝50:40:20:0.25的摩尔比例合成脂质纳米颗粒用于sting mrna的递送。

技术总结
本发明提供STING激动剂MSA‑2的铜盐及其联合的脂质纳米材料的制备和在治疗肿瘤中的应用，本申请提供了两种改进MSA‑2的抗肿瘤治疗的策略。首先，本申请中合成了铜修饰MSA‑2的化合物MSA‑2‑Cu，该方法显示Cu的细胞毒性增强STING途径。本申请中还合成了81个可电离的磷脂纳米颗粒，其中磷脂纳米颗粒1AP27@STING mRNA可以有效地传递STIING‑mRNA，增加STING蛋白的表达。将1AP27@STING mRNA和MSA‑2‑Cu结合，可显著降低B16F10肿瘤的生长，提高小鼠的存活率。本申请中的1AP27@STING mRNA+MSA‑2‑Cu治疗通过激活cGAS‑STING通路刺激了强烈的免疫反应，改进了MSA‑2的抗肿瘤作用，为增强肿瘤免疫治疗提供了一种前景广阔的策略。

技术研发人员：李文清,周鹏,汪莫,王贵栓,贺甜
受保护的技术使用者：南通大学
技术研发日：
技术公布日：2024/12/17