利用超临界流体提取制备的无细胞真皮组织及其用途的制作方法

本发明涉及一种利用超临界流体提取制备的无细胞(acellular)真皮组织。更具体地说，本发明涉及一种通过使用超临界流体提取而具有改进的细胞外基质保留水平和优化的机械性能(例如临界载荷和弹性恢复力)的无细胞真皮组织。

背景技术：

1、人体的皮肤组织由最外层的表皮层、其下的真皮层和皮下组织组成。其中，表皮层是由将表皮层与真皮层牢固结合的基底膜分化成数层的上皮细胞、黑色素细胞、免疫细胞所构成。表皮层下面的真皮层主要由成纤维细胞和由胶原蛋白、弹性蛋白等组成的细胞外基质构成。

2、皮肤组织或内脏器官组织可能由于烧伤、外伤、溃疡等原因而部分受损。在这种情况下，采用移植自身皮肤组织或内脏器官组织的方法来治愈受损组织或用于进行重建整形手术。在这种情况下，接受者必须承受额外提取其自身皮肤组织或器官组织的手术负担，如果接受者的健康状况不佳，这可能会很危险。此外，还有使用异种移植物或合成生物材料进行移植的方法。但这些方法可能引起免疫排斥反应，导致移植后出现长期炎症反应，导致需要再次手术。

3、为了解决上述问题，韩国专利注册号10-0469661和10-0791502中公开了从供体提取的皮肤组织制备用于移植的无细胞真皮层的方法。然而，这些方法遵循表面活性剂处理过程。表面活性剂处理可能会引起胶原蛋白等蛋白质变性、生长因子破坏等问题。此外，结构形态和组织学形态难以保持，临界载荷、弹性等力学性能可能减弱。而且，残留的表面活性剂不容易去除，如果去除不彻底，可能会有毒性。

4、此外，为了制备无细胞真皮基质，还已经使用胰蛋白酶或分散酶等蛋白水解酶作为免疫原性细胞去除方法，或使用反复冻融、nacl和sds处理等方法。然而，通过这些工艺制备的无细胞真皮基质含有许多抗原成分，移植到受体部位时容易引起免疫排斥反应，从而导致低植入率(r.j.walter et.al,burns,24:104-113,1998)。

技术实现思路

1、技术问题

2、因此，本发明人进行了研究，以开发一种无细胞真皮移植物材料，该材料改善了移植排斥和成本问题，同时还改进了因化学处理脱细胞(decellularization)所造成的机械性能减弱的问题。结果，建立了无需表面活性剂处理的优化超临界流体处理工艺，并获得了机械性能改进、细胞外基质保留水平提高的无细胞真皮组织。基于上述内容，发明人完成了本发明。

3、解决方案

4、为了解决上述问题，在本发明的一个方面，提供了一种无细胞真皮组织移植物，其中，无细胞真皮组织的临界荷载为11至19n，无细胞真皮组织的杨氏模量为0.5至1.2mpa。

5、本发明的另一个方面，提供了一种制备无细胞真皮组织移植物的方法，该方法包括以下步骤：a)将从对象分离的皮肤组织分离成表皮层和真皮层；b)用超临界流体提取分离的真皮层；以及c)用磷酸盐缓冲液清洗用超临界流体提取的真皮层。

6、发明效果

7、根据本发明的无细胞真皮组织是通过脱细胞而获得的，不经过表面活性剂处理，因此保留了临界载荷、弹性等力学性能，同时不具有表面活性剂残留而引起的毒性，因此适合移植到烧伤、外伤等皮肤组织受损的患者身上。因此，本发明通过优化的超临界流体处理工艺所获得的无细胞真皮组织不具有毒性及移植排斥，所以可有效用于治疗皮肤组织受损的患者。

技术特征：

1.一种无细胞真皮组织移植物，其中，所述无细胞真皮组织的临界荷载为11n至19n，所述无细胞真皮组织的杨氏模量为0.5mpa至1.2mpa。

2.根据权利要求1所述的无细胞真皮组织移植物，其中，基于干重，所述无细胞真皮组织具有选自下列特征中的任一个特征：

3.根据权利要求1所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述无细胞真皮组织具有与原始组织相比的选自下列特征中的任一个特征：

4.根据权利要求1所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述无细胞真皮组织具有与原始组织相比的选自下列特征中的任一个特征：

5.根据权利要求1所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述无细胞真皮组织是通过包括用超临界流体提取的步骤的制备方法制备的。

6.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，用作所述超临界流体的溶剂为二氧化碳。

7.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述超临界流体还包含乙醇作为共溶剂。

8.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述提取是在30℃至40℃的温度条件下进行的。

9.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述提取是在50bar至400bar的压力条件下进行的。

10.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述提取进行1小时至3小时。

11.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，在用超临界流体提取的步骤之前包括分离表皮层和真皮层的步骤。

12.根据权利要求5所述的无细胞真皮组织移植物，其中，所述制备方法在用超临界流体提取的步骤之后包括以下步骤中的任一个步骤：

13.一种无细胞真皮组织移植物的制备方法，包括以下步骤：

14.根据权利要求13所述的制备方法，其中，步骤b)中的所述超临界流体还包含共溶剂。

技术总结
本发明涉及一种利用超临界流体提取制备的脱细胞的无细胞真皮组织。更具体地说，本发明涉及一种通过使用超临界流体提取而具有改进的细胞外基质保留水平和优化的机械性能(例如临界载荷和弹性恢复力)的无细胞真皮组织。本发明的无细胞真皮组织是通过脱细胞而获得的，不经过表面活性剂处理，因此保留了机械性能，不具有残留表面活性剂引起的毒性，并且最大程度地减少了移植排斥，因此可以有效用于治疗皮肤组织受损的患者。

技术研发人员：辛龙雨,卢成来
受保护的技术使用者：株式会社多富
技术研发日：
技术公布日：2024/12/19