适用于治疗干眼症泪膜缺乏症的制品及其制备方法与流程

本发明涉及一种适用于治疗干眼症中泪膜缺陷和角膜上皮再生的制品及其制备方法。本发明还涉及一种医学应用中的制品，以及一种用于治疗干眼症的制品，所述制品在干眼病和其他疾病中改善伤口的愈合。

背景技术：

1、泪膜水相的缺乏是导致干眼病泪膜破裂的主要病理因素。氧化应激是由于抗氧化系统和亲氧化系统之间的平衡被破坏而发生的，根据干眼病发病期间升高的炎症活动，氧化蛋白水平会升高，推测氧化应激会损伤眼表，并在干眼病中起着关键作用，此外，角膜上皮完整性的缺失会导致水分流入基质。

2、血清在诊断中有着广泛的应用，也被用于医学治疗。血清是指中去除凝血因子和所有类型细胞的全血的可溶性成分，例如通过血液样本的凝固以及随后的离心和过滤。因此，血清基本上包括所有不参与血液凝固的蛋白质，以及电解质、抗体、抗原和激素。

3、健康受试者的泪液含有多种抗氧化剂，如抗坏血酸、乳铁蛋白、尿酸和半胱氨酸，以保护眼表免受某些自由基的侵害。据推测，人血清中存在的成分可能具有抗氧化作用，可用于治疗干眼症中的泪膜缺乏症。

4、wo 2022/029109 a1描述了用于治疗与眼部疾病相关的受损上皮表面的组合物和生物活性血液组分。wo 2022/029109 a1也描述了相应的制备方法，即通过超速离心和随后从总血清或总血浆中分离获得这些组分。将获得的血液成分配制成滴眼液。发现血清超速离心后获得的血液组分具有生物活性，并对受损的上皮细胞具有愈合作用。所获得的血清组分基本上不含脂质和脂蛋白，可以提高流动性而便于分装，并可以进行无菌过滤以去除病原体，如细菌。

5、健康角膜进入基质的水流入(泄漏)有限，这与后弹力层和内皮单层上的碳酸氢盐、乳酸盐和nacl溶质引起的水流出相平衡。氧化应激是由于泪液破裂，随后抗氧化系统和促氧化系统之间的平衡被破坏而发生的，并会损伤眼表，在干眼症中起着至关重要的作用，因为这些疾病期间炎症活动的增加，氧化蛋白水平会升高。此外，角膜上皮完整性的缺失会导致水分流入基质。所述病症需要得到充分有效的治疗，特别是上皮缺陷需要迅速闭合，泪膜需要稳定，以避免长期损伤和干眼症恶化。

6、然而，本领域已知的药物产品不能提供足够的再生能力，即通过治疗角膜上皮缺陷。因此，对更有效地治疗干眼症和相关病理的新产品的临床需求尚未得到满足。

7、上述目的可通过以上权利要求和以下具体技术方案来实现。

技术实现思路

1、第一方面，本发明涉及一种多供体人血清制品，其包含结合在分子大小至少为30kda的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)，所述制品还包含至少20ng/ml的igf-1，和少于70mg/dl的单糖，所述制品可选地是等渗溶液或等渗凝胶。

2、与此相关方面，本发明涉及一种人血清制品，其包含结合在分子大小至少为30kda的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)，所述制品包含20ng/ml-100ng/ml的igf-1，和少于70mg/dl的单糖，所述制品可选地是等渗溶液或等渗凝胶。

3、发明人发现，人血清包含结合在分子大小至少为30kda的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)，并且当这些大分子复合物保持完整并掺入药品中时，可以改善伤口愈合。除了高浓度的蛋白质如白蛋白和纤维连接蛋白外，人血清还含有特定的促上皮因子，如igf-1、egf等。血清可直接支持上皮细胞的增殖和迁移，或通过结合和中和炎性细胞因子间接提高上皮细胞的存活率。生长因子和细胞因子是重要的调节因子，在伤口愈合过程中刺激细胞的生长、增殖、迁移、分化、粘附以及ecm沉积和蛋白酶调节。

4、第二方面，本发明涉及人血清制品在医学上的应用。

5、与此相关方面，本发明涉及人血清制品在治疗干眼症中的应用。

6、第三个方面，本发明涉及一种制造人血清制品的方法，包括以下步骤：

7、-从多个供体提供人类同种异体血液体积部分，

8、-从至少两个供体中选择体积部分，

9、-从选定的体积部分中提取血清，

10、-合并所有的血清以获得混合血清，可选地，所选的血清来自年龄均为45岁或以下的供体；

11、-从混合血清中获得中间制品，所述中间制品包含至少100ng/mligf-1；以及

12、-从本发明所述中间制品中获得多供体人血清制品。

13、该方法依赖于从众多供体中提供全血体积部分，以确保足够的igf浓度。人体血液中的igf-1浓度因人而异。一些体积部分可能具有非常高的igf-1，而另一些则具有非常低的igf-1浓度。通过选择具有足够igf-1浓度的体积部分，可以获得产品中所需的igf-1浓度。例如，发现人血清中的igf-1浓度随着供体寿命的延长而降低。因此，将献血者的献血年龄限制在45岁或以下有助于提高生产效率，因为需要丢弃的血液部分更少。所述方法提供了一种获得中间制品的方法，其中该中间制品包含100ng/ml或更多的igf-1。所获得的产物包含结合在分子大小为30kda或更大的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)。有利的是，该方法是通用的，可以通过选择变体、参数和条件以从中间制品获得本发明制品，因此本发明提供了一种具有改进的治疗特性的制品，例如用于修复角膜上皮缺陷和抗炎。

14、与所述人血清制品相关方面，本发明还提供了一种中间制品，其包含结合在分子量为30kda或更大的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)，该中间制品包含100-500ng/ml的igf-1。

1.一种多供体人血清制品，其中，所述制品包含结合在分子大小至少为30kda的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igfs)，至少20ng/ml的igf-1，和少于70mg/dl的单糖；

2.根据权利要求1所述的制品，其包含少于40mg/dl的总胆固醇，其中总胆固醇是ldl(低密度脂蛋白)和hdl(高密度脂蛋白)的总和。

3.根据权利要求1或2所述的制品，其中，在体外伤口闭合试验中，以创伤面积为标准，在35小时时，所述制品具有50％或更高的伤口闭合性能。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制品，其中，所述制品在炎症检测中具有抗炎性能，其中抗炎性能标准化表达为lps诱导的tnf-α值(作为参考基值)，其中抗炎性能为50％或更高，

5.根据权利要求1-4任一项所述的制品，其包含一种或多种选自egf、igf-1、igf-bp3、igf-2、pdgf-bb、α2-巨球蛋白、kgf和pedf的生长因子。

6.根据权利要求1-5任一项所述的制品，其包含以下浓度范围内的一种或多种生长因子：

7.权利要求1-6任一项所述的制品在医学中的应用。

8.权利要求1-6任一项所述的制品在治疗干眼症中的应用。

9.根据权利要求7所述医学应用中的制品，或根据权利要求8所述治疗干眼症应用中的制品，其中，所述人血清组合物来源于同种异体血液。

10.眼科用组合物，如滴眼液或凝胶，其中，所述眼科用组合物所述包含权利要求1至6中任一项所述的制品。

11.一种制品的制备方法，其包括以下步骤：

12.根据权利要求11所述的方法，其中，

13.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤(ii)的超滤过程使用截留分子量至少20kda、或至少30kda、或至少50kda或至少100kda的超滤膜进行，或者其中获得人血清制品的步骤还包括稀释所述中间制品。

14.根据权利要求11至13任一项所述的方法，其中，所述中间制品包含少于140mg/dl的单糖，和/或10至200mg/dl的总胆固醇，其中总胆固醇是ldl(低密度脂蛋白)、hdl(高浓度脂蛋白)和vldl(极低密度脂蛋白)的总和。

15.一种中间制品，其包含结合在分子大小为30kda或更大的大分子复合物中的胰岛素样生长因子(igf)，所述中间制品包含100-500ng/ml的igf-1。