一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用

本发明属于中药有效成分的应用，具体涉及一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用。

背景技术：

1、肝脏是人体内脏里最大的器官，位于人体中的腹部位置，是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用。近年来，许多肝脏疾病，如急性肝损伤、病毒性肝炎、脂肪肝、酒精性肝病和肝癌，仍在不断影响着人类的健康。

2、急性肝损伤(acute liver injury,ali)是指各种原因引起的肝脏功能的异常，肝损伤是急性肝功能衰竭的基础，严重或持续的肝损伤最终导致肝功能衰竭。引起肝急性损伤的原因很多，主要有细菌病毒感染、用药不当、食物添加剂、乙醇摄入过多及接触、食入有毒食物、放射性损伤等。根据统计目前以细菌病毒感染和用药不当居多。

3、脂多糖(lipopolysaccharide,lps)是革兰阴性菌胞壁内内毒素的主要成分，也是革兰阴性菌激发宿主免疫应答导致机体损伤的主要原因。研究表明，lps会引起急性的肝损伤，这种损伤是lps与tlr4受体结合，通过tlr4/myd88信号通路进而引起一系列的严重的炎症反应。ali传统的保护药物包括水飞蓟宾、谷胱甘肽、多烯磷脂酰胆碱和双环醇等。然而，这些药物的治疗效果还不够明显，从天然产物中发现和分离良好、安全的生物活性成分对于药物研发意义重大。多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。例如淀粉，纤维素，葡聚糖等均为生活中常见的多糖类物质。由于来源广泛且低毒的特性，使其已被广泛应用于食品，化妆品，材料和生物活性等的研究和使用当中。天然植物中的多糖，是极其重要的资源，在抗肿瘤，抗糖尿病，抗氧化和免疫调节等的研究中有着不可估量的作用，探索植物多糖的结构，将其更好地应用于生物医学当中，既是响应国家对中药材保护与开发的政策，也将为新药研发提供更多的选择，意义重大。

4、芸香科植物橘果皮，青皮，为药食两用植物果皮，《珍珠囊》记载“青橘皮气味俱浓，沉而降，阴也”，所治的是“肝胆之病”。现代药用青皮中四花青皮。以7-8月采收未成熟的果实，在果皮上纵剖成四瓣至基部，除尽额晒干，习称“四花青皮”。查阅历代本草医书如《本草精品汇要》、《本草蒙签》、《本逢原》等发现古人多用“四花青皮”。而在《北京市中药饮片标准》写明四花青皮以调肝理气为主。现如今对于中草药的研究，主要是分离纯化出其中的各种化学成分，利用先进的色谱光谱技术确定其化学结构，进而评估不同中草药当中不同组分的活性，以此来更加高效合理地用药。目前研究已证明四花青皮中生物碱、萜、黄酮等成分在低血压，肌无力，抗炎，抗癌等疾病中具有显著活性，但是其多糖的活性的研究还未见报道。

技术实现思路

1、本发明发现四花青皮酸性多糖对肝损伤具有保护作用，提供一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用。

2、本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用。

4、基于上述技术方案，进一步地，所述的四花青皮酸性多糖的制备方法包括以下步骤：

5、(1)向粉碎后的四花青皮中加入10～50倍质量的去离子水，煮沸提取1-5次，浓缩所得滤液，离心，取上清，加入2～10倍体积的95％乙醇，搅拌均匀后于1～5℃静置过夜，所得的沉淀经干燥、研碎后，得到四花青皮总糖；

6、(2)取步骤(1)得到的四花青皮总糖加去离子水溶解，离心取上清，上样至纤维素层析柱上，依次使用去离子水、0.1、0.2、0.3、0.4mol/l的nacl水溶液洗脱，合并相同流份，浓缩后透析，冷冻干燥；

7、(3)取步骤(2)得到的四花青皮多糖加去离子水溶解，0.45μm滤膜过滤，上样至凝胶层析柱，去离子水洗脱，合并相同流份，浓缩后透析，冷冻干燥后即得。

8、基于上述技术方案，进一步地，步骤(1)中四花青皮与去离子水质量比为1：10～1：30；所得滤液经旋转蒸发浓缩10～50倍。

9、基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中四花青皮粗多糖溶液的浓度为0.1-5mg/ml；洗脱流速为1ml/min；透析袋的截留分子量为3500da。

10、基于上述技术方案，进一步地，步骤(3)中四花青皮多糖溶液的浓度为1-10mg/ml；洗脱流速为1ml/min；透析袋的截留分子量为3500da。

11、基于上述技术方案，进一步地，所述的功能性产品包括功能性食品和药物。

12、基于上述技术方案，进一步地，所述肝损包括lps引起的急性肝损伤。

13、基于上述技术方案，进一步地，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊制剂、滴丸剂、口服液体制剂。

14、基于上述技术方案，进一步地，所述的片剂包括糖衣片、口腔崩解片、泡腾片、咀嚼片和缓释片。

15、基于上述技术方案，进一步地，具体给药方式为口服给药情况下，其中，小鼠口服四花青皮酸性多糖(100，200和300mg/kg)对lps引起急性肝损伤具有明显的保护作用，应用在临床上，推算出一个成人(60kg)每日口服约488～1464mg(即8.13～24.39mg/kg体重)四花青皮酸性多糖对急性肝损伤有明显地保护作用。

16、基于上述技术方案，进一步地，所述药物中包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

17、基于上述技术方案，进一步地，所述的药学上可接受的载体和/或赋形剂包括填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂和矫味剂。

18、本发明相对于现有技术具有的有益效果如下：

19、本发明发现一种四花青皮酸性多糖具有抗肝损伤的作用，可用于制成肝损伤保护药物。与模型组相比，四花青皮酸性多糖给药组显著改善小鼠的肝功能。同时，由于肝损伤引起的氧化应激水平和炎症反应也均被减轻，四花青皮酸性多糖能够显著抑制建立模型引起的ldh和tnf-α水平升高。经过四花青皮酸性多糖干预后，肝组织大面积的出血性坏死和肝架构破坏的情况明显被改善，同时能够加固肝窦。he染色结果中，模型组小鼠肝组织大面积的出血性坏死和肝架构破坏，而在给予四花青皮酸性多糖后这些损伤明显被改善。免疫荧光实验结果显示，在给予四花青皮酸性多糖后tunel和f4/80这两种细胞凋亡和巨噬细胞激活相关的信号表达显著降低，并且western blot结果显示，四花青皮多糖能够显著抑制tlr4/myd88介导的信号通路蛋白的异常表达，证明四花青皮酸性多糖能够加固肝组织，预防肝损伤。因此，可将四花青皮酸性多糖作为单一有效成分制成药物，也可与其他药物合用制成复方制剂用于治疗肝损伤。四花青皮酸性多糖具有安全(无毒副作用)、有效、经济、实用等优点，对临床治疗肝损伤药物的开发具有重大意义。

技术特征：

1.一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的四花青皮酸性多糖的制备方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)中四花青皮与去离子水质量比为1：10～1：30；所得滤液经旋转蒸发浓缩10～50倍。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中四花青皮总糖溶液的浓度为0.1-5mg/ml；洗脱流速为1ml/min；透析袋的截留分子量为3500da；步骤(3)中四花青皮多糖溶液的浓度为1-10mg/ml；洗脱流速为1ml/min；透析袋的截留分子量为3500da。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的功能性产品包括功能性食品和药物。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肝损伤包括急性肝损伤。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊制剂、滴丸剂、口服液体制剂。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的片剂包括糖衣片、口腔崩解片、泡腾片、咀嚼片和缓释片。

9.根据权利要求5-8任一项所述的应用，其特征在于，所述药物中包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的药学上可接受的载体和/或赋形剂包括填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂吸附载体、润滑剂和矫味剂。

技术总结
本发明公开了一种四花青皮酸性多糖在制备抗肝损伤功能性产品中的应用，属于中药有效成分的应用技术领域。本发明发现四花青皮酸性多糖具有抗肝损伤的作用，可用于制成肝损伤保护药物，与模型组相比，本发明制备的四花青皮酸性多糖给药组显著改善小鼠的肝功能。同时，肝损伤引起的氧化应激水平和炎症反应也均被减轻，四花青皮酸性多糖能够显著抑制建立模型引起的ALT、AST、LDH和TNF‑α水平升高，经过四花青皮酸性多糖干预后，肝组织大面积的出血性坏死和肝架构破坏的情况明显被改善，同时能够减少细胞凋亡和显著抑制小鼠肝损伤引起的炎症反应，对临床预防治疗肝损伤药物的开发具有重大意义。

技术研发人员：许丽娜,彭金咏,杨森,尹连红,孙鹏远,高萌,赵雪融,王宁
受保护的技术使用者：大连医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29