罗伊氏粘液乳杆菌、组合物及其在降尿酸、减肥中的用途的制作方法

本发明涉及高尿酸及痛风防治，具体而言，涉及罗伊氏粘液乳杆菌、组合物及其在降尿酸、减肥中的用途。

背景技术：

1、高尿酸血症(hyperuricemia,hua)是目前继高血压、高血脂、高血糖之后的“第四高”，是由于人体内尿酸生成过多或者排泄不足引起的疾病，持续性的高尿酸血症会导致痛风及肾结石等病症，高尿酸血症也是“三高”(高血糖、高血脂、高血压)的风险因素，引起一系列的代谢并发症。药物治疗高尿酸血症是临床上最常用的手段，见效快且周期短，但药物存在副作用，易引起过敏反应，会不同程度增加患者身体负担，因此，急需一款对高尿酸血症治疗安全有效且无毒副作用的产品。

2、近年来益生菌在调节人体肠道健康方面发挥显著作用，人体中的尿酸约30％由肠道直接排出，肠道益生菌在降尿酸过程中起着重要作用，一些益生菌已经被证实能通过产生影响嘌呤分解和尿酸生产的代谢物来缓解高尿酸血症，具有成为临床上治疗高尿酸血症的新方法的潜力。

3、中国专利202011066042.7公开了一种降嘌呤和尿酸的益生菌株、组合物及其应用，在高尿酸血症的鼠模型中植物乳杆菌klpl-3显示出明显的降血尿酸效果。但该测试方法的筛选条件只有嘌呤前体底物，在实际丰富的肠道营养环境下可能不具备效果。而且该专利披露的耐胆盐实验显示，菌株对于0.2％及以上浓度的胆盐不耐受，活菌数量下降1-2个数量级。对于肠道复杂的环境下，菌株的持续有效性存疑。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供罗伊氏粘液乳杆菌、组合物及其在降尿酸、减肥中的用途以解决上述技术问题。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了一种罗伊氏粘液乳杆菌(limosilactobacillusreuteri)在制备预防和/或治疗如下至少一种疾病或症状的药物中的用途：

4、糖尿病、肥胖及肥胖相关疾病、高尿酸血症、以及高尿酸血症引起的痛风、痛风并发症和肾损伤；

5、罗伊氏粘液乳杆菌的16s rdna序列与保藏号为gdmcc no：m2023591保藏的罗伊氏粘液乳杆菌菌株中存在的16s rdna序列具有至少99％的序列一致性；

6、和/或，罗伊氏粘液乳杆菌的全基因组序列与保藏号为gdmcc no：m2023591保藏的罗伊氏粘液乳杆菌菌株具有至少97.5％的基因组平均核苷酸相似度(ani score)。

7、发明人从健康人粪便中分离筛选、纯化出一株菌。利用illumina pe150平台对分离株进行全基因组测序，并用spades软件进行基因组组装，菌株全长1881471bp，gc含量为38.69％，含有1910个基因。利用gtdbtk软件对菌株的全基因组测序数据分析，通过fastani算法得出其最接近的参考菌株为limosilactobacillus reuteri(gcf_000016825.1)，其ani值为96.22％，当ani值大于95时，则可认为2者为同一菌种，因此该菌株鉴定为罗伊氏粘液乳杆菌，并命名为prs-156。

8、通过对罗伊氏粘液乳杆菌prs-156细菌基因组中的尿酸合成途径相关酶编码基因进行比对分析，结果表明罗伊氏粘液乳杆菌prs-156不含有ec1.17.1.4,ec1.17.3.2,ec3.5.4.3，因此菌株能减少将嘌呤底物转化为黄嘌呤。同时含有ec2.4.2.8，可以将尿酸的前体化合物黄嘌呤转化为其他产物，而不产生尿酸。

9、其中ec3.5.4.3为鸟嘌呤脱氨酶，能催化鸟嘌呤水解脱氨而产生黄嘌呤和氨。

10、ec2.4.2.8为次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶，能催化5-磷酸核糖基-1-焦磷酸与次黄嘌呤、鸟嘌呤或6-巯基嘌呤转变成相应的5′-单核苷酸及焦磷酸。

11、ec1.17.1.4为黄嘌呤脱氢酶。

12、ec1.17.3.2为黄嘌呤氧化酶，能够催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一。

13、第二方面，本发明还提供了一种罗伊氏粘液乳杆菌，其为保藏号为gdmccno：m2023591保藏的罗伊氏粘液乳杆菌菌株。

14、第三方面，本发明还提供了一种组合物，其包括上述的罗伊氏粘液乳杆菌。

15、第四方面，本发明还提供了一种罗伊氏粘液乳杆菌的培养方法，其包括如下步骤：接种上述的罗伊氏粘液乳杆菌，进行条件培养；

16、上述条件培养为厌氧培养。

17、本发明具有以下有益效果：

18、本发明筛选出的罗伊氏粘液乳杆菌具有显著降低血液尿酸含量的效果，能够用于预防和/或治疗高尿酸血症、以及高尿酸血症引起的痛风、痛风并发症和肾损伤。

19、本发明筛选出的罗伊氏粘液乳杆菌还具有降低哺乳动物体重、降低哺乳动物血糖的效果，能够用于预防和/或治疗糖尿病和肥胖。

20、本发明通过模拟人工胃液、人工肠液实验，证实本发明提供的罗伊氏粘液乳杆菌在消化道营养环境(胃液和肠液)中仍具有较高的菌株存活率，活菌数未见明显下降。该结果指示本发明提供的罗伊氏粘液乳杆菌在消化道营养环境中仍具有较高的活性，对治疗或预防改善高尿酸血症、高尿酸血症引起的痛风、痛风并发症或肾损伤具有较好的开发利用前景。

21、保藏说明

22、保藏地址：中国，武汉，武汉大学

23、保藏日期：2023年04月23日

24、菌种名称：罗伊氏粘液乳杆菌prs-156

25、拉丁名：limosilactobacillus reuteri prs-156

26、保藏机构：中国典型培养物保藏中心

27、保藏机构简称：cctcc

28、保藏中心登记入册编号：cctcc no:m 2023591

29、鉴定结果：存活

技术特征：

1.罗伊氏粘液乳杆菌(limosilactobacillus reuteri)在制备预防和/或治疗如下至少一种疾病或症状的药物中的用途：

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述罗伊氏粘液乳杆菌的16srdna序列与保藏号为gdmcc no：m2023591保藏的罗伊氏粘液乳杆菌菌株中存在的16s rdna序列具有至少99.5％的序列一致性；

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述罗伊氏粘液乳杆菌为所述罗伊氏粘液乳杆菌的浓缩物、糊化物、干燥物、液态物和稀释物中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物用于如下任意一种的用途：

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料；

6.一种罗伊氏粘液乳杆菌，其特征在于，其为保藏号为gdmcc no：m2023591保藏的罗伊氏粘液乳杆菌菌株。

7.一种组合物，其特征在于，其包括权利要求6所述的罗伊氏粘液乳杆菌。

8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括药学上可接受的辅料。

9.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物为药物组合物、疫苗组合物或食品。

10.一种罗伊氏粘液乳杆菌的培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：接种权利要求6所述的罗伊氏粘液乳杆菌，进行条件培养；

技术总结
本发明公开了罗伊氏粘液乳杆菌、组合物及其在降尿酸、减肥中的用途，涉及高尿酸及痛风防治技术领域。本发明筛选出的罗伊氏粘液乳杆菌具有显著降低血液尿酸含量的效果，能够用于预防和/或治疗高尿酸血症、以及高尿酸血症引起的痛风、痛风并发症和肾损伤。本发明筛选出的罗伊氏粘液乳杆菌还具有降低哺乳动物体重、降低哺乳动物血糖的效果，能够用于预防和/或治疗糖尿病和肥胖。罗伊氏粘液乳杆菌在消化道营养环境中仍具有较高的活性，对防治肥胖、糖尿病、高尿酸血症、高尿酸血症引起的痛风、痛风并发症或肾损伤具有较好的开发利用前景。

技术研发人员：朱永亮,刘丹
受保护的技术使用者：苏州普瑞森生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/22