一种从刺蒺藜中提取皂苷、黄酮、多糖的方法与流程

本发明涉及刺蒺藜中有效物质提取，具体设计一种从刺蒺藜中提取皂苷、黄酮、多糖的方法。

背景技术：

1、蒺藜（tribulus terrestris l.），又名白蒺藜、刺蒺藜，蒺藜科蒺藜属植物的成熟果实，主要生长于山东省、山西省、河南省、河北省、四川省等地区.其全草含有黄酮类、皂甙类、氨基酸类及糖类等成分，在心血管系统方面及抗衰老、增强性功能等方面表现出较强的活性，蒙医临床刺蒺藜有祛肾寒，镇赫依，利尿等功能，用于治疗尿频，肾寒，肾赫依病，蒺藜主要含有皂苷、黄酮、生物碱、多糖、氨基酸等黄酮广泛存在于自然界中，多显黄色，具有降血糖、抗菌、抗肿瘤、止血、调血脂、改善微循环等药理作用。

2、cn105125599a公开了一种刺蒺藜皂苷的分离纯化方法，本发明提供了一种刺蒺藜提取物的制备方法，包括如下步骤：原料经食醋水蒸煮后堆埋、乙酸乙酯提取、聚酰胺柱层析以及干硅胶柱层析，微波真空干燥。该方法中使用硅胶柱用于工业化生产，存在制备工艺流程复杂，柱效低、制备周期长、检测操作复杂等各种弊端。

3、cn102178706a公开了一种提取刺蒺藜皂苷的方法，取刺蒺藜药材粉碎，加适量水拌湿，加生物酶常温酶解3-5天，得酶解原料，加5-10倍量70-85％甲醇超声提取2-3次，提取液加热加活性炭脱色，滤过回收甲醇，浓缩液加氧化铝烘干，装柱，5-8bv70-90％乙醇溶液洗脱，洗脱液减压回收乙醇，浓缩液真空干燥或喷雾干燥。该方法并未将刺蒺藜中的不同活性成分分离。

4、目前, 刺蒺藜活性成分的提取大多是单一成分, 至多为两种成分的研究, 从刺蒺藜中复合提取皂苷、黄酮、多糖工艺未见报道, 传统单一成分的提取工艺没有充分利用原料, 只提取出刺蒺藜中一种或两种有效成分, 对资源造成很大的浪费。

5、常规提取方法单用乙醇水溶液提取，难以获得高醇度的蒺藜皂苷，自身酶解法存在提前获取分解酶的繁杂步骤，且分解酶难以高效率地获得，目前，从刺蒺藜中提取蒺藜皂苷通常采用高浓度乙醇水溶液提取再经过大孔树脂纯化精制而成，也有人提出来采用酶解后甲醇提取氧化铝精制的方法。

6、因此，本发明通过潜心研究，结合大量实验，研究一种从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷和多糖的制备方法具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷和多糖的制备方法，要求可以用一套工艺同时提取得到刺蒺藜黄酮、刺蒺藜皂苷和刺蒺藜多糖，且三者的提取率高、纯度高。

2、本发明的技术方案是：

3、一种从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，包括以下步骤：

4、（1）取刺蒺藜原料，隔水蒸煮0.5-2小时，加入乙酸调ph到5-6，自然冷却；

5、（2）向浸润后的原料中加入相对于刺蒺藜原料质量体积比5-8倍乙醇，乙醇溶液的体积浓度为70％～80％，提取1-2小时，搅拌溶解后静置萃取，得到刺蒺藜渣和萃取液；将萃取液脱色除杂后减压浓缩至干得到刺蒺藜粗品，回收乙醇；往粗品中加入混合有机溶剂进行搅拌萃取，将萃取液浓缩、冷置析出晶体，将晶体干燥获得第一产品；将第一产品重结晶，在0-4℃下放置结晶析出，得到第二产品；

6、（3）向步骤2中醇提后的刺蒺藜渣中加入蒸馏水，超声时间 30-40 min, 料液比1：15-20 ，水提取液冷却后进行超滤，超滤透过液依次通过阴离子交换树脂柱和阳离子交换树脂柱，得脱色液，将脱色液浓缩，醇沉，过滤，干燥，得刺蒺藜多糖；

7、（4）取第二产品溶于水中，调ph至中性，通过大孔树脂，上样量与树脂量比为1：5-7，树脂柱径高比为1：4-6，质量浓度为20%-40%乙醇溶液洗脱，得到刺蒺藜黄酮，再用4倍柱体积的质量浓度为75%-95%乙醇溶液洗脱，得到刺蒺藜皂苷。

8、优选的，步骤（2）中所述混合有机溶剂为：有机溶剂-水溶液，有机相与水相的体积比为85-95:10之间，有机相选自甲醇、乙腈、乙酸乙酯中的一种。进一步优选的比例是有机相与水相的体积比为90:10。

9、优选的，所述超滤的超滤膜的截留分子量为50～100kda，过滤的压力为0 .5～1.0mpa。使用超滤膜过滤的目的，是除去提取液中的大分子杂质(蛋白质、鞣质胶体等)和细小的原料粉末，使物料澄清。

10、优先的，所述的阴离子交换树脂为强碱性大孔型阴离子交换树脂，树脂型号包括但不限于d945、lsa-700。优选的，在步骤(3)中，所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，树脂型号包括但不限于001×7、001×8。优选的，在步骤(3)中，所述阴、阳离子交换树脂和刺蒺藜上柱的流速为0.5～1bv/h。通过阴、阳离子交换树脂的目的，是除去滤液中的色素、甾醇、生物碱、有机酸、酚酸等杂质。

11、优选的，所述步骤3中所得脱色液浓缩，浓缩液的固形物含量为20％～35％，所述醇沉的物料中的含醇量为60％～80％。

12、优选的，步骤4中所述大孔树脂的型号为hpd400、hpd100或ab-8。

13、需要说明的是，本发明中蒸煮刺蒺藜原料时，加入乙酸调节ph，使刺蒺藜原料的酶发生一定作用，蒺藜皂苷更加容易溶出。

14、经过二次结晶产品的纯度得到了很大的提高，综合考虑工业生产，二次结晶后上柱更利于后续操作。

15、与现有技术相比，本发明的优势是：

16、本发明的方法可以用一套工艺同时提取得到刺蒺藜黄酮、刺蒺藜皂苷和刺蒺藜多糖，且三者的提取率高、纯度高。

17、本发明工艺过程可操作性强，不使用酸、碱，不使用有毒有害、易燃易爆的化工溶剂，该制备工艺方法简单，耗能低，操作工艺条件易于控制，工艺重复性好，乙醇回收率高，整体生产成本较低，适合工业化推广生产。

18、以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。

技术特征：

1.一种从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，步骤（2）中所述混合有机溶剂为：有机溶剂-水溶液，有机相与水相的体积比为85-95:10之间，有机相选自甲醇、乙腈、乙酸乙酯中的一种。

3.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，在步骤(3)中，所述超滤的超滤膜的截留分子量为50～100kda，过滤的压力为0 .5～1 .0mpa。

4.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，所述的阴离子交换树脂为强碱性大孔型阴离子交换树脂，树脂型号包括但不限于d945、lsa-700。

5.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，在步骤(3)中，所述阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，树脂型号包括但不限于001×7、001×8。

6.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，在步骤(3)中，所述阴、阳离子交换树脂和刺蒺藜上柱的流速为0.5～1bv/h。

7.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，所述步骤3中所得脱色液浓缩，浓缩液的固形物含量为20％～35％，所述醇沉的物料中的含醇量为60％～80％。

8.根据权利要求1或2所述从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，其特征是，步骤4中所述大孔树脂的型号为hpd400、hpd100或ab-8。

技术总结
本发明提供了一种从刺蒺藜中提取黄酮、皂苷、多糖的方法，包括加入乙酸调pH，然后加入乙醇溶解后萃取得到刺蒺藜粗品；往粗品中加入混合有机溶剂进行搅拌萃取，得第一产品；将第一产品重结晶得到第二产品；再向醇提后的刺蒺藜渣中加入蒸馏水，超声提取，水提取液冷却后进行超滤，依次过阴、阳离子交换树脂柱，得脱色液，将脱色液浓缩，醇沉，过滤，干燥，得刺蒺藜多糖；最后取第二产品溶于水中，调pH至中性，通过大孔树脂，质量浓度为20%‑40%乙醇溶液洗脱，得到刺蒺藜黄酮，再质量浓度为75%‑95%乙醇溶液洗脱，得到刺蒺藜皂苷。该方法用一套工艺同时提取得到刺蒺藜黄酮、刺蒺藜皂苷和刺蒺藜多糖，且三者的提取率高、纯度高。

技术研发人员：蒋乐文,张宝堂,谭家忠,鞠祥枚
受保护的技术使用者：湖南绿蔓生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17