枸杞功能多糖在制备免疫调节剂和抗肿瘤药物中的应用

本发明涉及一种中药，具体涉及枸杞功能多糖在制备免疫调节剂和抗肿瘤制剂中的应用，属于医药。

背景技术：

1、巨噬细胞是机体内重要的免疫细胞，具有吞噬、加工提成抗原和激活免疫应答等功能。基于其较高的可塑性，巨噬细胞在不同刺激物的作用下可极化为两种不同的表型。一种是m1型，即经典活化的巨噬细胞，这类巨噬细胞表现出较强的抗原提呈能力并促进炎症反应，在肿瘤调节中表现为抑制肿瘤的转移和生长；另一种为m2型，即替代活化的巨噬细胞，能够抑制炎症发展，发挥基质重塑、组织修复以及血管再生等功能，在肿瘤调节中表现出促肿瘤活性的特点。因此，巨噬细胞的表型与免疫调节和肿瘤发展息息相关。

2、枸杞子是宁夏枸杞lycium barbarum l.的干燥成熟果实，性平、味甘，入肝、肾经，具有滋肾润肺、补肝明目的功效。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide，lbp)被认为是枸杞子的主要活性成分，具有多种药理作用，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老和降血糖血脂等。其中，lbp的免疫调节作用主要表现在能够调节多种免疫细胞的功能。

3、关于不同分子量的枸杞多糖对巨噬细胞表型的影响及其抗肿瘤效应尚未有报道。

技术实现思路

1、发明目的：本发明的目的是通过研究不同分子量的lbp对巨噬细胞表型的影响及其抗肿瘤效应，筛选得到疗效最佳的枸杞多糖部位，为临床合理使用枸杞多糖和肿瘤的免疫治疗提供理论依据。

2、本发明将分离小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bmdm)，利用不同分子量枸杞多糖lbp(＜3kd，3～50kd，50～100kd，＞100kd)处理细胞，并通过流式细胞术、qpcr等方法考察不同给药组对bmdm细胞的重塑效应。将重塑后的bmdm细胞与肿瘤细胞以不同比例共培养，通过荧光素酶实验考查bmdm复极化产生的抗肿瘤效应，实验结果表明，枸杞多促进巨噬细胞lbp复极化，促进上调m1型bmdm并下调m2型bmdm，并且具有增加no分泌，降低与bmdm细胞共孵育的肿瘤细胞存活率。证明枸杞多糖能促使m2型巨噬细胞复极化为m1型，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，因此本发明提供的枸杞功能多糖可作为促进巨噬细胞复极化的调节剂和抗肿瘤免疫增强剂。

3、作为优选方案，本发明所述的枸杞功能多糖是采用以下方法制备得到的：称取10kg干燥枸杞子，按固液比10:1加入80％乙醇，加热回流提取2次，每次提取1h，得到醇提取液和醇提药渣。向醇提药渣中加入15倍体积的去离子水，加热回流提取2次，每次1h，过滤浓缩后得到枸杞粗多糖。用去离子水溶解后，将枸杞粗多糖溶液经循环泵输入到超滤设备中，经100kd纤维素膜超滤。将截流液循环超滤，收集的截流液即为分子＞100kd的枸杞多糖样品液。超滤膜透过液即为分子量＜100kd的枸杞粗多糖。同理，依次用50kd和3kd的超滤膜组件分离枸杞粗多糖，可得到50-100kd、3-50kd和＜3kd的枸杞多糖样品液。蒸发浓缩4个分子量段的枸杞多糖，冷冻干燥后备用。

4、本发明可将枸杞多糖和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或丸剂剂型的药物。

5、本发明在制成片剂时，在枸杞多糖中添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

6、在制成胶囊剂时，将枸杞多糖和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

7、本发明在制成颗粒剂时，把枸杞多糖和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

8、有益效果：本发明提供的枸杞多糖和现有技术相比具有以下优点：

9、本发明筛选不同分子量的枸杞多糖(＜3kd，3～50kd，50～100kd，＞100kd)对巨噬细胞复极化和抗肿瘤效应，筛选结果表明，特定分子量50～100kd的枸杞多糖可将m2型巨噬细胞重塑为m1型巨噬细胞，并且能增加bmdm细胞no释放水平，可将特定分子量50～100kd的枸杞多糖应用于巨噬细胞重塑的领域，本发明将最优的50～100kd分子量枸杞多糖作为巨噬细胞复极化的免疫调节剂和抗肿瘤免疫增强剂。

技术特征：

1.枸杞功能多糖在制备免疫调节剂中的应用。

2.枸杞功能多糖在制备促进巨噬细胞复极化的调节剂中的应用。

3.枸杞功能多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的枸杞功能多糖是采用以下方法制备得到的：称取10kg干燥枸杞子，按固液比10:1加入80％乙醇，加热回流提取2次，每次提取1h，得到醇提取液和醇提药渣。向醇提药渣中加入15倍体积的去离子水，加热回流提取2次，每次1h，合并水提液，在水提液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到80％，室温静置过夜，4500rpm离心5min收集沉淀，用无水乙醇洗涤，冷冻干燥，得到枸杞粗多糖。将枸杞粗多糖用去离子水溶解后，将枸杞粗多糖溶液经循环泵输入到超滤设备中，经100kd纤维素膜超滤。将截流液循环超滤，收集的截流液即为分子＞100kd的枸杞多糖样品液。超滤膜透过液即为分子量＜100kd的枸杞粗多糖。同理，依次用50kd和3kd的超滤膜组件分离枸杞粗多糖，可得到50-100kd、3-50kd和＜3kd的枸杞多糖样品液。蒸发浓缩4个分子量段的枸杞多糖，冷冻干燥后备用。

5.根据权利要求1～3任一项所述的应用，将枸杞功能多糖和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、合剂、口服液、膏剂的药物。

技术总结
本发明公开了一种枸杞功能多糖在制备免疫调节剂和抗肿瘤药物中的应用。本发明采用特定的工艺步骤制备得到特定分子量50～100kD的枸杞多糖，该特定分子量的枸杞多糖可促进巨噬细胞LBP复极化，促进上调M1型巨噬细胞并下调M2型巨噬细胞，并且具有增加NO分泌，降低与BMDM细胞共孵育的肿瘤细胞存活率。本发明提供的枸杞功能多糖可作为促进巨噬细胞复极化的调节剂和抗肿瘤免疫增强剂。

技术研发人员：段嘉伦,段金廒,郭盛,刘梦秋,梁小飞
受保护的技术使用者：南京中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24