本发明涉及水产养殖领域,尤其涉及一种苯溴马隆在防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
背景技术:
1、伴随着我国水产养殖业的快速发展,养殖过程中片面追求高密度、高产量、高利润现象普遍,引起水生动物疾病抗病力变差、病害频发。据统计,近年来,我国养殖水产动物因病害造成的经济损失高达数百亿元以上,其中水产病毒性疾病为主要的致病因素。鲤春病毒血症病毒(svcv),是导致鲤科鱼类暴发性出血症鲤春病毒血症的病原,其宿主范围广泛,可以感染多种鲤科鱼类,感染鱼死亡率超过70%。此外,鲤春病毒血症病毒还可以感染非鲤科鱼类如太阳鱼、狗鱼甚至对虾等。目前,鲤春病毒血症也被我国《一、二、三类动物疫病病种名录》列为二类动物疫病,其发生和流行严重威胁鲤科鱼类养殖业的健康和可持续发展。
2、鲤春病毒血症病毒为单股负链rna病毒,病毒基因组包含11029个核苷酸,基因排列顺序为5'-n-p-m-g-l-3',共编码5个结构蛋白,分别核蛋白n(nucleoprotein)、磷蛋白p(phosphoprotein)、基质蛋白m(matrix protein)、糖蛋白g(glycoprotein)和rna聚合酶蛋白l(rna polymerase)。目前,针对鲤春病毒血症病毒尚无有效的疫苗或特异性的治疗药物,现有的防控措施主要是进行病毒检测并对感染鱼进行隔离或扑杀。因此,研究和开发有效的抗鲤春病毒血症病毒感染的药物具有十分重要的意义。
3、苯溴马隆(benzbromarone),别名(3,5-二溴-4-羟基苯基)(2-乙基-3-苯并呋喃基)甲酮,其结构式为:
4、
5、苯溴马隆是一种排尿酸药物,其通过抑制近端肾小管对尿酸的重吸收,以利于尿酸排泄,从而降低血液中尿酸浓度,临床上被广泛用于高尿酸血症、痛风及痛风性关节炎非急性发作期的治疗。目前,很少有关于苯溴马隆抗病毒作用的研究报道,仅流感病毒中研究表明苯溴马隆可以结合病毒的pa亚基,降低病毒的rna聚合酶活性从而发挥抗病毒功能,尚未见将苯溴马隆应用于水生病毒防治的报道。前期,发明人发现鲤春病毒血症病毒感染会引起鲤鱼血液中尿酸水平升高,因此发明人探索了促尿酸排泄的药物苯溴马隆对鲤春病毒血症病毒感染的影响,结果发现其可以显著抑制鲤春病毒血症病毒的复制,且在有效浓度下不影响鱼体细胞的正常生理功能。苯溴马隆已在临床上使用多年,安全性良好。
6、因此,本领域的技术人员致力于开发一种防治鲤春病毒血症病毒感染的药物。
技术实现思路
1、有鉴于现有技术的上述缺陷,本发明所要解决的技术问题是开发一种防治鲤春病毒血症病毒感染的药物。
2、为实现上述目的,本发明提供了一种苯溴马隆在防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
3、进一步地,苯溴马隆的结构式为:
4、
5、进一步地,鲤春病毒血症病毒为单股负链rna病毒,病毒基因组包含11029个核苷酸,基因排列顺序为5'-n-p-m-g-l-3',共编码5个结构蛋白,结构蛋白分别为核蛋白n、磷蛋白p、基质蛋白m、糖蛋白g和rna聚合酶蛋白l。
6、进一步地,苯溴马隆的浓度为1μm、5μm、10μm、25μm或50μm。
7、进一步地,该应用包括苯溴马隆的细胞毒性检测方法。
8、进一步地,苯溴马隆的细胞毒性检测方法为利用cck-8细胞活性检测试剂测定苯溴马隆对svcv敏感细胞草鱼卵巢细胞(co)细胞的细胞活性的影响。
9、进一步地,该应用包括苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法。
10、进一步地,苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法为:将co细胞接于细胞培养板中,形成单层细胞后,吸去培养上清,加入苯溴马隆的新鲜培养基,预处理2h后得到的细胞清洗后接种svcv,加入含苯溴马隆的培养基,继续培养,利用商业化的rna提取试剂盒提取总rna并反转录合成cdna;利用rt-qpcr测定病毒拷贝数。
11、进一步地,该应用包括苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法。
12、进一步地,苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法:将co细胞接于细胞培养板中,形成单层细胞后,吸去培养上清,加入苯溴马隆的新鲜培养基,预处理2h得到的细胞清洗后,接种svcv,加入含苯溴马隆的培养基,继续培养后吸去培养上清,加入细胞裂解液充分裂解细胞,离心后取上清进行sds-page蛋白凝胶电泳和免疫印迹法检测svcv结构蛋白m的表达水平。
13、进一步地,该应用包括苯溴马隆对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织中病毒基因转录水平影响的检测方法。
14、在本发明的较佳实施方式1中,详细说明鲤春病毒血症病毒感染对鲤鱼血清中尿酸水平的影响的实验过程;
15、在本发明的另一较佳实施方式2中,详细说明不同浓度苯溴马隆的细胞毒性检测过程;
16、在本发明的另一较佳实施方式3中,详细说明苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平的影响的实验过程;
17、在本发明的另一较佳实施方式4中,详细说明苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平的影响的实验过程;
18、在本发明的另一较佳实施方式5中,详细说明苯溴马隆对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织病理的影响的实验过程;
19、在本发明的另一较佳实施方式6中,详细说明苯溴马隆对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织中病毒基因转录水平的影响的过程。
20、本发明有益的技术效果如下:
21、本实发明通过一系列的试验验证,表明本发明的苯溴马隆在安全浓度内可有效抑制鲤春病毒血症病毒的感染。本发明为鲤鱼病毒病的防控提供了一种有效措施,可应用于鱼类相关疾病的防治,降低鲤鱼养殖过程中因病毒性疾病导致的经济损失,具有广阔的应用前景。
22、以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明,以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
1.苯溴马隆在防治鲤春病毒血症病毒感染的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述苯溴马隆的结构式为:
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述苯溴马隆的浓度为1μm、5μm、10μm、25μm或50μm。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述苯溴马隆的细胞毒性检测方法。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述苯溴马隆的细胞毒性检测方法为利用cck-8细胞活性检测试剂测定所述苯溴马隆对co细胞的细胞活性的影响。
6.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒基因转录水平影响的检测方法为:将所述co细胞接于细胞培养板中,形成单层细胞后,吸去培养上清,加入苯溴马隆的新鲜培养基,预处理2h后得到的细胞清洗后接种svcv,加入含苯溴马隆的培养基,继续培养,利用商业化的rna提取试剂盒提取总rna并反转录合成cdna;利用rt-qpcr测定病毒拷贝数。
8.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述苯溴马隆对细胞中鲤春病毒血症病毒蛋白表达水平影响的检测方法:将co细胞接于细胞培养板中,形成单层细胞后,吸去培养上清,加入苯溴马隆的新鲜培养基,预处理2h得到的细胞清洗后,接种svcv,加入含苯溴马隆的培养基,继续培养后吸去培养上清,加入细胞裂解液充分裂解细胞,离心后取上清进行sds-page蛋白凝胶电泳和免疫印迹法检测svcv结构蛋白m的表达水平。
10.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用包括所述苯溴马隆对鲤春病毒血症病毒感染后鱼体组织中病毒基因转录水平影响的检测方法。