呼吸道合胞病毒的mRNA疫苗及其构建方法和应用与流程

本发明属于核酸疫苗，具体涉及一种呼吸道合胞病毒的mrna疫苗及其构建方法和应用。

背景技术：

1、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，rsv)是一种可以引起幼儿、老年人呼吸道感染的主要病毒病原体。rsv是一种属于副黏病毒科，肺病毒属的有囊膜、非节段性的单股负链rna病毒，其基因组全长约15.2kb，含有10个基因，基因顺序依次为3′ns1-ns2-n-p-m-sh-g-f-m2-l 5′，编码11种蛋白。

2、rsv基因组编码的两种表面糖蛋白是疫苗研制的主要靶点：吸附蛋白(attachmentglycoprotein，g)和融合蛋白(fusionprotein，f)是疫苗设计的靶点。根据g蛋白的进化特征，rsv可分为a和b两种病毒亚型，两者以1-2年的频率交替感染人群。

3、干扰素是机体免疫细胞产生的一种细胞因子，其中ifn-α是一种常用的疫苗佐剂，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的特性。

4、作为第三代核酸疫苗，mrna疫苗是将含有编码抗原蛋白的mrna导入人体，并进行翻译形成相应的抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性免疫应答，达到预防免疫的作用。目前脂质纳米颗粒(lipidnanoparticle，lnp)作为主流的mrna递送系统，可有效封装并保护核酸进入胞内，并被释放与翻译为有功能的蛋白质。

5、目前国内尚无专门针对rsv病毒的防治性药物，并且，依据传统疫苗研发策略和技术路线生产研发生产rsv疫苗，具有周期长、成本高、有滞后性，很难适应防控rsv大流行的需求等特点。因此，急需一种有效度高的广谱rsv疫苗药物。

技术实现思路

1、第一方面，本申请实施例提供了一种呼吸道合胞病毒的mrna疫苗，包含seq idno:1-2任意一项所示的rna序列。

2、在一些实施例中，rna序列由以下成分组成：5’端非翻译区、信号肽序列、呼吸道合胞病毒的抗原融合蛋白fg的编码rna基因序列或fg与干扰素α组成的抗原融合蛋白fgi的编码rna基因序列、3’端非翻译区和3’端polya尾。

3、在一些实施例中，5’端非翻译区的rna序列如seq id no:5所示，信号肽的rna序列如seq id no:6所示，呼吸道合胞病毒抗原融合蛋白编码基因rna序列如seq id no:1-2所示，3’端非翻译区的rna序列如seq id no:7所示，3’端polya尾的rna序列如seq id no:8所示。

4、在一些实施例中，所述rna序列包含帽结构，所述rna序列经核苷酸类似物修饰。

5、在一些实施例中，mrna疫苗包括递送载体，所述递送载体包覆所述rna序列，所述递送载体包括可离子化脂质体、可离子化蛋白、可离子化聚合物、可离子化胶束和可离子化脂质纳米粒(lipidnanoparticle，lnp)中的任一种，优选可离子化脂质纳米颗粒。

6、在一些实施例中，所述可离子化脂质纳米颗粒组分包含阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质中的一种或几种。

7、在一些实施例中，所述可离子化脂质纳米颗粒组分中，阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质的摩尔比为50:10:38.5:1.5。

8、第二方面，本申请实施例提供了一种mrna疫苗的构建方法，所述制备方法包括：

9、(1)将rna序列溶解于水性溶液中，作为水相；所述rna序列如seq id no:1-2所示；

10、(2)将递送载体溶解于有机溶剂中，作为有机相；

11、(3)混合水相与有机相，自组装得到所述mrna疫苗。

12、所述水性溶液为柠檬酸缓冲液；所述有机溶剂为无水乙醇。

13、第三方面，本申请实施例提供了一种含有第一方面的mrna疫苗的dna分子的重组质粒在制备预防或治疗rsv病毒的mrna疫苗中的应用。

14、第四方面，本申请实施例提供了一种含有第一方面的mrna疫苗的重组微生物细胞在制备预防或治疗rsv病毒的mrna疫苗中的应用。

15、有益效果：

16、本申请实施例提供了一种针对呼吸道合胞病毒的mrna疫苗，seq id no:1-2任意一项所示的rna序列；本发明的针对呼吸道合胞病毒的mrna疫苗可以在细胞和个体水平被翻译成抗原融合蛋白，并诱发机体产生针对rsva和rsv b病毒亚型的高水平中和抗体，以及诱导机体产生针对rsv的特异性细胞免疫应答，从而可有效地预防或治疗呼吸道合胞病毒感染性疾病。本发明的用于呼吸道合胞病毒mrna疫苗的制备方法简便，生产成本低，且生产周期短。鉴于上述，本发明的针对呼吸道合胞病毒的mrna疫苗具有临床应用价值和产业化前景。

技术特征：

1.一种呼吸道合胞病毒的mrna疫苗，其特征在于，包含seq id no:1-2任意一项所示的rna序列。

2.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，rna序列由以下成分组成5’端非翻译区、信号肽序列、呼吸道合胞病毒的抗原融合蛋白fg的编码rna基因序列或fg与干扰素α组成的抗原融合蛋白fgi的编码rna基因序列、3’端非翻译区和3’端polya尾。

3.根据权利要求2所述的mrna疫苗，其特征在于，5’端非翻译区的rna序列如seq idno:5所示，信号肽的rna序列如seq id no:6所示，呼吸道合胞病毒抗原融合蛋白编码基因rna序列如seq id no:1-2所示，3’端非翻译区的rna序列如seq id no:7所示，3’端polya尾的rna序列如seq id no:8所示。

4.根据权利要求2所述的mrna疫苗，其特征在于，所述rna序列包含帽结构，所述rna序列经核苷酸类似物修饰。

5.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，mrna疫苗包括递送载体，所述递送载体包覆所述rna序列，所述递送载体包括可离子化脂质体、可离子化蛋白、可离子化聚合物、可离子化胶束和可离子化脂质纳米粒中的任一种。

6.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，所述可离子化脂质纳米颗粒组分包含阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的mrna疫苗，其特征在于，所述可离子化脂质纳米颗粒组分中，阳离子脂质sm-102、磷脂酰胆碱、胆固醇和聚乙二醇脂质的摩尔比为50:10:38.5:1.5。

8.一种mrna疫苗的构建方法，其特征在于，所述制备方法包括：

9.含有权利要求1-7任意一项所述的mrna疫苗的dna分子的重组质粒在制备预防或治疗rsv病毒的mrna疫苗中的应用。

10.含有权利要求1-7任意一项所述的mrna疫苗的重组微生物细胞在制备预防或治疗rsv病毒的mrna疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种呼吸道合胞病毒的mRNA疫苗及其构建方法和应用，属于核酸疫苗技术领域。呼吸道合胞病毒的mRNA疫苗包含SEQ ID NO:1‑2任意一项所示的RNA序列。本申请的疫苗能够产生针对呼吸道合胞病毒的高水平的中和抗体和特异性细胞免疫应答，从而可有效地预防或治疗呼吸道合胞病毒感染性疾病，具有临床应用价值和前景。

技术研发人员：陈实,李延胜,王连荣
受保护的技术使用者：深圳市第二人民医院（深圳市转化医学研究院）
技术研发日：
技术公布日：2024/5/29