一种炎症靶向性仿生脂质体的制备及其应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种炎症靶向性仿生脂质体的制备及其应用。

背景技术：

1、脂质体是由磷脂双分子层构成的囊泡状药物递送系统，由于脂质分子的双亲性，水溶性药物和难溶性药物均能包载进脂质体中实现递送。生物体质膜的基本结构也是磷脂双分子层膜，脂质体具有与生物体细胞相类似的结构，因此有很好的生物相容性和生物可降解性。在纳米药物的研究中，通过控制脂质体粒径可实现在体内的被动靶向，同时一些特异性的配体和靶向基团被修饰在脂质体表面，可以将脂质体设计成具有主动靶向性能的递送系统。

2、相对于传统剂型，脂质体具有生物相容性高，制备方法稳定可控和可修饰性高的优势，但目前的被动靶向和主动靶向策略在进入复杂的体内环境中仍存在炎症特异性靶向差的缺陷，限制了其在炎症相关疾病中的应用。因此，如何提高炎症靶向性是本领域亟需解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种基于凋亡细胞膜修饰的炎症靶向性载药仿生脂质体的制备与应用，以解决传统纳米脂质体的炎症靶向能力较差的问题，旨在提高其在炎症相关疾病中的可用性；本发明提供的凋亡细胞膜修饰脂质体可应用于对多种炎性疾病的靶向给药。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一方面，提供一种仿生脂质体，所述仿生脂质体包括脂质体和凋亡细胞膜；通过凋亡细胞膜修饰脂质体制备炎症靶向的仿生脂质体。

4、优选地，所述凋亡细胞膜包括凋亡细胞的生物膜；所述生物膜包括细胞内的各种膜结构，包括细胞器膜、核膜、细胞膜等。

5、优选地，所述凋亡细胞包括红细胞，巨噬细胞，中性粒细胞、jurkat细胞中的至少一种。

6、本发明的第二方面，提供本发明第一方面所述仿生脂质体的制备方法，将脂质体和凋亡细胞膜混合制备仿生脂质体。

7、优选地，所述脂质体与凋亡细胞膜的质量比5:1-10:1。

8、优选地，所述脂质体和凋亡细胞膜混合后通过超声法和/或挤出法制备仿生脂质体。

9、优选地，所述超声的条件为：超声功率为5％～20％，和/或，超声时间为3～10min。

10、优选地，所述挤出法的条件为：挤出模孔径为100nm～1000nm，和/或，反复挤出20–30次。

11、优选地，所述仿生脂质体的粒径为200nm–400nm。

12、优选地，所述脂质体的制备原料包括但不限于卵磷脂，大豆磷脂，磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺，三油酰基磷脂酰乙醇胺，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇(dspe-peg)和胆固醇。

13、优选地，所述脂质体的制备原料包括卵磷脂、dspe-peg和胆固醇。

14、制备方法包括以下步骤：

15、s11：将卵磷脂、dspe-peg和胆固醇混合，加入有机溶剂溶解，获得有机溶剂相溶液；

16、s21：将有机相溶液与水相混合，自组装形成脂质体、去除有机溶剂；或，利用旋蒸去除有机溶剂相溶液中的有机溶剂形成脂质膜，再加入水相水化形成脂质体。

17、优选地，所述卵磷脂dspe-peg和胆固醇的质量比为(2～6):(1～4):1。

18、优选地，所述有机溶剂包括但不限于乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃。

19、优选地，所述水相包括但不限于pbs溶液、水、蔗糖溶液。

20、优选地，所述步骤s1中的有机溶剂与步骤s2中的水相的体积比为1:7-9。

21、优选地，步骤s2中所述的混合的条件包括但不限于搅拌。

22、优选地，所述搅拌的转速为100～150rpm。

23、优选地，所述去除有机溶剂的方法包括离心；所述离心的条件为3500～4500rpm离心25～40min。

24、优选地，所述旋蒸温度为≥35℃，气压为10-50kpa。

25、优选地，所述水化时间为2-4h。

26、优选地，所述凋亡细胞的诱导方法包括但不限于紫外照射，加热，低温处理及过氧化氢诱导。

27、优选地，所述过氧化氢诱导的具体过程包括：向细胞悬液中加入过氧化氢诱导凋亡，然后去除过氧化氢终止诱导，重悬细胞。

28、优选地，所述过氧化氢的浓度为0.75-1.5μmol/l。

29、优选地，所述诱导凋亡的时间为0.5～4h。

30、优选地，所述终止诱导的方法包括离心。

31、优选地，所述离心的条件为：离心转速为800～1200rpm，离心时间为4～8min。

32、优选地，所述凋亡细胞膜的制备方法包括以下步骤：用低渗裂解缓冲液重悬并孵育凋亡细胞；然后将孵育后的凋亡细胞离心，收集凋亡细胞膜。

33、优选地，所述离心的条件为：离心转速为1200～1800rpm，离心时间为12～18min。

34、优选地，所述低渗裂解缓冲液包括cacl2、蛋白酶抑制剂、tris-hcl缓冲液，但并不局限于此，本领域用于细胞裂解的常规低渗裂解缓冲液均可。

35、优选地，所述低渗裂解缓冲液包括0.5～2mm cacl2、5～15μl/ml的蛋白酶抑制剂、5～15mm的tris-hcl缓冲液。

36、优选地，所述tris-hcl缓冲液的ph为7～8。

37、本发明的第三方面，提供本发明第一方面所述的仿生脂质体在制备治疗炎症的药物或制备炎症靶向性载体中的应用。

38、本发明的第四方面，提供一种药物，所述药物包含本发明第一方面所述的仿生脂质体。

39、优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述药物可以被制成任何一种药学上可接受的剂型。

40、本发明的有益效果是：

41、本发明制备了一种基于凋亡细胞膜修饰的炎症靶向性载药仿生脂质，利用凋亡细胞膜易被炎性巨噬细胞吞噬的特性，制备了凋亡细胞膜修饰的仿生脂质体，通过实验证明了凋亡细胞膜修饰能显著提高纳米脂质体的炎症靶向能力；克服了传统载药脂质体炎症靶向性低的缺陷，为纳米载药脂质体在抗炎症相关疾病领域提供更多参考。

技术特征：

1.一种仿生脂质体，所述仿生脂质体包括脂质体和凋亡细胞膜。

2.根据权利要求1所述的仿生脂质体，其特征在于，所述凋亡细胞包括红细胞，巨噬细胞，中性粒细胞、jurkat细胞中的至少一种。

3.权利要求1～2任一项所述仿生脂质体的制备方法，将脂质体和凋亡细胞膜混合制备仿生脂质体；优选为通过超声法和/或挤出法制备仿生脂质体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述脂质体与凋亡细胞膜的质量比5:1-10:1。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述超声的条件为：超声功率为5％～20％，和/或，超声时间为3～10min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述挤出法的条件为：挤出模孔径为100nm～1000nm，和/或，反复挤出20–30次。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述仿生脂质体的粒径为200nm–400nm。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述凋亡细胞膜的制备方法包括以下步骤：用低渗裂解缓冲液重悬并孵育凋亡细胞；然后将孵育后的凋亡细胞离心，收集凋亡细胞膜。

9.权利要求1～2任一项所述的仿生脂质体在制备治疗炎症的药物或制备炎症靶向性载体中的应用。

10.一种药物，所述药物包含权利要求1～2任一项所述的仿生脂质体。

技术总结
本发明公开了一种炎症靶向性仿生脂质体的制备及其应用；本发明利用凋亡细胞膜易被炎性巨噬细胞吞噬的特性，制备了凋亡细胞膜修饰的仿生脂质体，通过实验证明了凋亡细胞膜修饰能显著提高纳米脂质体的炎症靶向能力；克服了传统载药脂质体炎症靶向性低的缺陷，为纳米载药脂质体在抗炎症相关疾病领域提供更多参考。

技术研发人员：路嘉宏,郑颖,韩润,任政宇
受保护的技术使用者：澳门大学
技术研发日：
技术公布日：2024/7/15