一种藜活性组分的提取方法及其在制备抗血栓药物中的应用

本发明涉及天然药物，具体是一种藜活性组分的提取方法及其在制备抗血栓药物中的应用。

背景技术：

1、藜(chenopodium album l.)，别名落藜、灰条菜，为藜科藜属的一种草本植物。藜分布广泛，存在于温带及热带地区，具有药用、食用和用作饲料等价值。目前，藜已被发现具有丰富的营养价值，其中含有膳食纤维、氨基酸、维生素c、β-胡萝卜素以及fe、zn、mn和cu等对人体健康有益的营养物质。藜自古就是一种优良的药用植物，具有止痒、镇痛、抗氧化、抑菌、杀虫等作用，在《中国沙漠地区药用植物》中有记载，其可治疥癣湿疮、毒虫咬伤、癜风、龋齿等。

2、藜作为一种中草药，其中含有酚类、生物碱、黄酮类、萜类、甾醇类等丰富的活性物质。目前，已有多篇文献对藜中的具体组分进行了提取和研究，例如：《ibrahlm l f,kawashty s a,baiuomy a r,et al.a comparative study of the flavonoids and somebiological activities of two chenopodium species[j].chem nat compd,2007,43(1):24-28.》一文中，ibrahim l f等人在室温下用70％乙醇/水浸泡藜干燥粉末3天后获得粗提物，经过后续分离得到山萘酚糖苷、槲皮素糖苷及鼠李糖糖苷等8种黄酮苷类化合物。《刘松艳,张沐新,吴月红,等.藜中黄酮类的化学成分[j].吉林大学学报：理学版,2011,49(1):149-152.》一文中，刘松艳等将6kg的藜全草粉末使用95％乙醇进行热回流提取，经过反复硅胶柱洗脱分离，在藜中分离出了4种黄酮类化合物：槲皮素3-o-芸香糖苷、芹菜素6,8-二-c-β-d-葡萄糖苷、槲皮素3-o-[α-l-鼠李糖(1→4)-α-l-鼠李糖(1→6)-β-d-葡萄糖]、异鼠李素3-o-[α-l-鼠李糖(1→4)-α-l-鼠李糖(1→6)-β-d-葡萄糖]。《lavaud c,voutquenne l,bala p,et al.saponins from chenopodium album[j].fitoterapia,2000,71(3):338-340.》一文中，lavaud c等在藜的根中分离出了三种皂苷：金盏花苷e及两种齐墩果酸。《cutilllo f,d'abrosca b,della greca m,et al.chenoalbicin,a novelcinnamic acid amide alkaloid from chenopodium album l.[j].chem biodivers,2004,1(10):1579-1583.》一文中，cutillo f等学者对藜进行甲醇浸泡提取，后续分离得到7种肉桂酸酰胺生物碱。可见，藜具有丰富的活性物质，利用不同的提取分离方式可以进一步挖掘藜中的化学成分，明确其活性物质，进而开发其在不同领域中的更多应用。

3、近年来，血栓性疾病已成为世界上最受关注的慢性疾病之一。血小板过度活化在血栓性疾病的发生发展中起着非常重要的作用，血小板活化后将促进血小板的粘附聚集，形成富血小板血栓，阻塞动脉，影响动脉血流，从而引发等血栓性疾病。血栓的形成广泛引起多种疾病，其中包括动脉粥样硬化、脑血栓性疾病、缺血性心脏病、缺血性脑中风、冠心病、下肢深静脉血栓形成等。因此，抑制血小板活化是血栓性疾病的主要预防和治疗手段。近年来，中药治疗血栓性疾病的研究越来越广泛，如丹参、三七、天麻等具有活血化瘀，疏通经络等作用，可被应用于治疗血栓；中药因副作用小，作用靶点多，在疾病治疗方面有独特的优势，具有很高的开发利用价值。

4、为了进一步探究中药在治疗血栓性疾病中的应用潜力，本发明以藜作为研究对象，拟通过一种新的提取方法获取藜中更多的活性成分，并探究活性成分在抗血栓中的应用。

技术实现思路

1、本发明提供了一种藜活性组分的提取方法及其在制备抗血栓药物中的应用，采用特定的提取方法，提取到了藜中的更多新的活性成分，且提取出的藜活性组分具有抗血栓活性。

2、本发明技术方案如下：

3、一种藜活性组分的提取方法，是将藜地上部位用95％(v/v)乙醇溶液进行提取，提取方法为使用95％(v/v)乙醇溶液于20～40℃下浸泡30～45天，得总提物；将总提物萃取除脂后，利用大孔吸附树脂层析柱进行分离，使用30％(v/v)或60％(v/v)乙醇溶液进行洗脱，得藜活性组分。

4、优选的，所述藜活性组分的提取方法，具体包括如下步骤：

5、(1)取藜地上部位，粉碎成粉末，向粉末中加入95％(v/v)乙醇溶液，20～40℃浸泡30～45天，得提取液；

6、(2)对提取液进行减压浓缩，得总提物，向总提物中加入蒸馏水混悬，得混悬液；对混悬液进行萃取除脂，将萃取后的水相部分减压浓缩，得萃取物；

7、(3)将萃取物用蒸馏水溶解，湿法上样，利用大孔吸附树脂层析柱进行分离，使用30％(v/v)或60％(v/v)乙醇溶液为洗脱剂进行洗脱，得洗脱液；

8、(4)将洗脱液经过减压浓缩、真空干燥后，得藜活性组分。

9、优选的，步骤(1)中在浸泡30～45天后，收集浸泡后的液体，备用；继续用95％(v/v)乙醇溶液对粉末进行重复浸泡2～4次，每次浸泡5～7天，将浸泡后的液体合并，得提取液。

10、优选的，步骤(1)中所述粉末的粒度大小为20～40目。

11、优选的，步骤(1)中所述粉末与95％(v/v)乙醇溶液之间的比例为1:(5～10)(g/ml)。

12、优选的，步骤(2)中所述萃取除脂的方法为：采用与混悬液相同体积的石油醚萃取，萃取次数为3～5次。

13、优选的，步骤(3)中所述大孔吸附树脂层析柱为d101大孔吸附树脂层析柱，径高比为1：9。

14、进一步优选的，步骤(3)中所述层析的流速为2bv·h-1，洗脱6～10bv。

15、进一步优选的，步骤(3)中所述洗脱剂为60％(v/v)乙醇溶液。

16、所述藜活性组分在制备抗血栓药物中的应用。

17、其中，所述藜活性组分通过toll样受体信号通路、c型凝集素受体信号通路、vegf信号通路发挥抗血栓作用。

18、优选的，所述藜活性组分在制备治疗动脉粥样硬化、脑血栓性疾病、冠心病、下肢深静脉血栓形成药物中的应用。

19、有益效果：

20、本发明提供了一种藜活性组分的提取方法及其在制备抗血栓药物中的应用，采用特定的提取方法对藜中的活性组分进行提取，不仅发现了forskoditerpenoside c、spinasaponin a、ajugasalicioside f和ochangoside analogues等在藜中首次发现的化合物，且获得的藜活性组分ca-c还具有抗血栓活性。

技术特征：

1.一种藜活性组分的提取方法，其特征在于，是将藜地上部位用95％(v/v)乙醇溶液进行提取，提取方法为使用95％(v/v)乙醇溶液于20～40℃下浸泡30～45天，得总提物；将总提物萃取除脂后，利用大孔吸附树脂层析柱进行分离，使用30％(v/v)或60％(v/v)乙醇溶液进行洗脱，得藜活性组分。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

3.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中在浸泡30～45天后，收集浸泡后的液体，备用；继续用95％(v/v)乙醇溶液对粉末进行重复浸泡2～4次，每次浸泡5～7天，将浸泡后的液体合并，得提取液。

4.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述粉末的粒度大小为20～40目。

5.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述粉末与95％(v/v)乙醇溶液之间的比例为1:(5～10)(g/ml)。

6.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述萃取除脂的方法为：采用与混悬液相同体积的石油醚萃取，萃取次数为3～5次。

7.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述大孔吸附树脂层析柱为d101大孔吸附树脂层析柱。

8.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述洗脱剂为60％(v/v)乙醇溶液。

9.权利要求1所述藜活性组分在制备抗血栓药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述藜活性组分在制备治疗动脉粥样硬化、脑血栓性疾病、冠心病、下肢深静脉血栓形成药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种藜活性组分的提取方法及其在制备抗血栓药物中的应用，属于天然药物技术领域，是将藜地上部位用乙醇溶液进行提取，提取方法为20～40℃下浸泡30～45天，得总提物；将总提物萃取除脂，利用大孔吸附树脂层析柱进行分离，使用30％(v/v)或60％(v/v)乙醇溶液进行洗脱，得藜活性组分。本发明采用特定的提取方法对藜中的活性组分进行提取，不仅发现了Forskoditerpenoside C、Spinasaponin A、Ajugasalicioside F和Ochangoside analogues等在藜中首次发现的化合物，且获得的藜活性组分还具有抗血栓的活性。

技术研发人员：李晓彬,王熙玥,董宇晴,王淼韫欢,潘馨慧,刘可春,林厚文,张姗姗,夏青,于嘉豪,盛文龙,孙晨
受保护的技术使用者：山东省科学院生物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/11/28