预防结直肠癌的纳米多肽疫苗及其制备方法

本公开涉及生物医药，具体涉及一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗及其制备方法。

背景技术：

1、随着对肿瘤发生发展机制认识的不断深入及肿瘤放疗显现出的诸多缺陷，目前免疫治疗（包括免疫检查点抑制剂、过继细胞治疗、细胞因子和肿瘤疫苗）已成为治疗肿瘤的趋势和主流，特别是肿瘤疫苗利用肿瘤抗原激发机体产生抗肿瘤免疫反应，可诱导机体产生免疫记忆，对预防肿瘤复发具有较强优势，已逐渐引起人们的关注。

2、患者肿瘤异质性和人白细胞抗原异质性是影响肿瘤疫苗药效作用的关键因素，通过鉴定新抗原，体外合成相应抗原肽可制成个体化肽疫苗，个体化肽预防性肿瘤疫苗是根据患者肿瘤异质性和人白细胞抗原异质性制备的一种精准医疗产品，具有抑瘤作用特异性强、不良反应少、抗原序列明确、易于制备和质控、经济成本相对较低等特点。因此，开发个体化预防性肿瘤疫苗显得比较重要和具有现实意义，已成为该领域的研究热点和未来方向。

3、目前，用于程序性死亡受体（pd-1）阻断的免疫检查点抑制剂已被批准用于治疗具有缺陷错配修复（dmmr）或高微卫星不稳定性（msi-h）的结直肠癌。然而，对于具有错配修复（pmmr）或微卫星稳定性（mss）的患者，使用抗pd-1单克隆抗体进行免疫治疗并没有达到预期的效果。这种现象可能与msi-h结直肠癌通常具有较高的肿瘤突变负荷（tmb）有关。由于dna序列中更频繁的插入和缺失突变以及开放阅读框的移码突变，具有msi-h的实体瘤可能会产生和表达更多与自身完全不同的新肿瘤特异性肽。肿瘤特异性肽通过肿瘤细胞表面的主要组织相容性复合物（mhc）展示时被定义为新抗原，可触发t细胞介导的细胞毒性抗肿瘤免疫反应。

4、综上，如何开发一种包载结直肠癌特异性抗原肽的新型疫苗是本领域亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、本公开为了解决现有技术中存在的问题，提供了一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗及其制备方法。

2、根据本公开的第一方面，提供了一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗，所述疫苗包括抗原，所述抗原含有第一多肽片段、第二多肽片段；

3、所述第一多肽片段的氨基酸序列为：vvgavgvgk；

4、所述第二多肽片段的氨基酸序列为：tpqdsrqvl。

5、在本公开的一个实施例中，所述抗原还包括第三多肽片段，所述第三多肽片段的氨基酸序列为：vvvgadgvgk。

6、在本公开的一个实施例中，所述疫苗还包括佐剂。

7、在本公开的一个实施例中，所述佐剂为枸杞多糖。

8、在本公开的一个实施例中，所述疫苗还包括载体。

9、在本公开的一个实施例中，所述载体为脂质体。

10、根据本公开的第二方面，还提供了一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗的方法，用于制备如本公开的第一方面所述的疫苗，包括如下步骤：

11、合成多肽片段：至少合成所述第一多肽片段、第二多肽片段；将不同多肽片段等比混合，以获取多肽混合物；

12、制备脂质体-多肽纳米颗粒：以所述多肽混合物、大豆卵磷脂和胆固醇作为原料，采用薄膜分散-超声法制得脂质体-多肽纳米颗粒；所述脂质体-多肽纳米颗粒带有负电；

13、制备纳米多肽疫苗：将所述脂质体-多肽纳米颗粒与带正电荷的枸杞多糖溶液等比混合，室温下搅拌过夜，制得纳米多肽疫苗。

14、在本公开的一个实施例中，合成多肽片段的步骤还包括：合成第三多肽片段，所述第三多肽片段的氨基酸序列为：vvvgadgvgk。

15、在本公开的一个实施例中，在制备纳米多肽疫苗的步骤之前还包括：

16、制备带正电荷的枸杞多糖溶液：以枸杞多糖为原料，采用还原胺化法使枸杞多糖阳离子化，得到带正电荷的枸杞多糖溶液。

17、在本公开的一个实施例中，制备脂质体-多肽纳米颗粒的步骤中，所述多肽混合物、大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为1:2:1。

18、本公开的一个有益效果在于，本公开提供了一种包载结直肠癌特异性抗原肽的新型疫苗，为结直肠癌的预防提供一种新思路，具有广阔的前景。具体地，基于多肽制备的个体化肿瘤疫苗能促进结直肠癌的消退，并且这些新生抗原肽不会在正常细胞产生和表达，所以能更有效地激发机体免疫反应。本公开选用新抗原多肽作为肿瘤抗原，其优势在于肽疫苗可靶向多种肿瘤相关抗原，序列明确，具有良好的修饰潜力，可操作性强，易于制备和质控，经济成本相对较低。本公开的疫苗安全性良好，对结直肠具有明显的预防作用，能显著延长小鼠生存周期，抑制肿瘤生长，提高结直肠癌抗肿瘤免疫应答，抑制肿瘤细胞增殖。

19、通过以下参照附图对本公开的示例性实施例的详细描述，本公开的其它特征及其优点将会变得清楚。

技术特征：

1.一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗，其特征在于，所述疫苗包括抗原，所述抗原含有第一多肽片段、第二多肽片段；

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述抗原还包括第三多肽片段，所述第三多肽片段的氨基酸序列为：vvvgadgvgk。

3.根据权利要求1或2任一项所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括佐剂。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为枸杞多糖。

5.根据权利要求1或2任一项所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括载体。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述载体为脂质体。

7.一种制备预防结直肠癌的纳米多肽疫苗的方法，用于制备如权利要求1-6任一项所述的疫苗，其特征在于，包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，合成多肽片段的步骤还包括：合成第三多肽片段，所述第三多肽片段的氨基酸序列为：vvvgadgvgk。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在制备纳米多肽疫苗的步骤之前还包括：

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，制备脂质体-多肽纳米颗粒的步骤中，所述多肽混合物、大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为1:2:1。

技术总结
本公开涉及一种预防结直肠癌的纳米多肽疫苗及其制备方法，所述疫苗包括抗原，所述抗原含有第一多肽片段、第二多肽片段；所述第一多肽片段的氨基酸序列为：VVGAVGVGK；所述第二多肽片段的氨基酸序列为：TPQDSRQVL。本公开提供了一种包载结直肠癌特异性抗原肽的新型疫苗，为结直肠癌的预防提供一种新思路，具有广阔的前景。本公开选用新抗原多肽作为肿瘤抗原，其优势在于肽疫苗可靶向多种肿瘤相关抗原，序列明确，具有良好的修饰潜力，可操作性强，易于制备和质控，经济成本相对较低。本公开的疫苗安全性良好，对结直肠具有明显的预防作用，能显著延长小鼠生存周期，抑制肿瘤生长，提高结直肠癌抗肿瘤免疫应答，抑制肿瘤细胞增殖。

技术研发人员：段相国,闫亚娟,苏春霞,马斌,杨小娟
受保护的技术使用者：宁夏医科大学
技术研发日：
技术公布日：2025/1/20