一种表皮葡萄球菌H62-3代谢产物凝胶制剂及其制备方法与应用

本发明属于微生物，具体涉及一种表皮葡萄球菌h62-3代谢产物凝胶制剂及其制备方法与应用。

背景技术：

1、炎症性皮肤病是由于免疫系统失调导致皮肤组织破坏而引起的一组疾病，包括湿疹、特应性皮炎、痤疮、银屑病、慢性荨麻疹、白癜风、天疱疮、类天疱疮、红斑狼疮等。这些疾病由于临床表现迥异，在过去可能分属于不同种类。而现在人们意识到这些疾病有共同的特点——炎症，包括由t细胞所介导的和由抗原-抗体所介导的炎症。通过对上述几种疾病进行总结，可以得出以下共性特点：（1）是遗传与环境共同作用诱发的、免疫介导的慢性、复发性、炎症性、系统性疾病；（2）影响因素多、病因复杂、临床表现多样；（3）局限或广泛分布，无传染性；（4）治疗困难，常罹患终身；（5）病程长。

2、皮肤是人体最大的器官，作为四大菌库之一，皮肤表面定植着数以亿计的微生物，称为皮肤微生物群，其可调节宿主先天性和适应性免疫，帮助宿主抵御外部病原菌的入侵。随着下一代测序技术的进步，包括鸟枪法宏基因组测序和基于系统发育标记基因的扩增子研究（例如细菌16s或真菌内转录间隔区测序），人类微生物组研究发生了革命性的变化，以揭示人类微生物群与微生物之间可能的相互作用。皮肤微生物群在促进防御和免疫反应、抑制机会性或病原微生物的定植和感染以及促进组织修复和屏障功能方面发挥着重要作用。皮肤微生物群的所有这些功能都是通过它们的相互作用以及通过与哺乳动物宿主细胞的互惠或共生相互作用来实现的。皮肤微生物组的菌群失调与免疫反应的改变有关，促进皮肤疾病的发展，如特应性皮炎、银屑病、痤疮，甚至皮肤癌。

3、研究发现，银屑病患者存在严重的皮肤微生物群失调，银屑病相关菌群比健康皮肤细菌群落表现出更高的多样性和异质性。特定的微生物特征与银屑病病变皮肤、银屑病非病变皮肤和健康皮肤相关。金黄色葡萄球菌和变形杆菌在银屑病的非皮损和皮损皮肤中都更丰富，相比之下表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌在银屑病皮损中的发生率则低于健康皮肤。本发明基于皮肤微生物群与银屑病等炎症性皮肤病的密切相关性，研究皮肤微生物群及其代谢产物与银屑病等炎症性皮肤病的关系，筛选出具有疾病治疗潜力的代谢产物，制备成包括添加了特定代谢产物的凝胶、软膏或霜，以拮抗其他有害菌的生长，或与免疫系统相互作用，增强其修复皮损的能力，保持皮肤健康。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种表皮葡萄球菌h62-3代谢产物凝胶制剂及其制备方法与应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一方面，本发明提供一种含表皮葡萄球菌代谢产物的凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶制剂含有表皮葡萄球菌（ staphylococcus epidermidis）h62-3菌株代谢产物，所述表皮葡萄球菌h62-3菌株已于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）保藏，保藏日期为2023年02月21日，保藏号：cgmcc no. 26640。

4、在本发明的一些实施例中，所述的凝胶制剂，以质量百分含量计，所述凝胶制剂包括如下成分：表皮葡萄球菌h62-3代谢产物10-40%、卡波姆940 0.2-1.5%、三乙醇胺0.2-1.5%、低分子透明质酸钠0.05-0.5%、丙三醇5-20%、氮酮0.5-2.5%、余量为纯水。

5、在一个优选实施例中，以质量百分含量计，所述凝胶制剂包括如下成分：表皮葡萄球菌h62-3代谢产物20％、卡波姆940 0.79%、三乙醇胺0.87%、低分子透明质酸钠0.12%、丙三醇12%、氮酮1%、余量为纯水。

6、另一方面，本发明提供一种凝胶制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

7、（1）将低分子透明质酸钠与丙三醇充分混合，得到复配保湿剂；

8、（2）将表皮葡萄球菌h62-3代谢产物与适量的复配保湿剂、纯水充分混合，加入氮酮，再次混匀，得到药物溶液；

9、（3）将卡波姆940加入剩余的复配保湿剂中，再加入剩余的纯水，充分搅拌，使卡波姆940溶胀、分散，再搅拌均匀；

10、（4）将步骤（3）得到的溶液加入到步骤（2）得到的药物溶液中，搅拌均匀；再加入三乙醇胺，不断搅拌至凝胶状，即可得到所述的凝胶制剂。

11、在本发明的一些实施例中，所述表皮葡萄球菌h62-3代谢产物的制备方法：将活化后的表皮葡萄球菌菌株h62-3挑取单菌落接种于tsb液体培养基中，置于32-38℃摇床中，振荡培养14-18h，作为种子液；以体积分数为3%-5%的接种量将种子液接种至tsb液体培养基中，32-38℃摇床中振荡培养14-18h，得到发酵液；将发酵液离心，弃菌体沉淀；将发酵液上清通过旋转蒸发浓缩5倍体积，即为表皮葡萄球菌h62-3代谢产物。

12、在本发明的一些实施例中，步骤（3）中所述卡波姆940溶胀、分散的时间为30min。

13、再一方面，本发明提供所述的凝胶制剂在制备炎症性皮肤病药物方面的应用。

14、在本发明的一些实施例中，所述炎症性皮肤病为湿疹、特应性皮炎、痤疮、银屑病、慢性荨麻疹、白癜风、天疱疮、类天疱疮或红斑狼疮等。

15、在本发明的一些实施例中，所述银屑病为寻常型银屑病、红皮病型银屑病、关节型银屑病或脓疱型银屑病中的至少一种。

16、在本发明的一些实施例中，所述凝胶制剂用于改善银屑病小鼠模型的皮肤红斑、鳞屑的症状；所述凝胶制剂用于降低皮损厚度，降低银屑病小鼠模型皮损处炎症因子。

17、在本发明的一些实施例中，所述炎症因子为白细胞介素-17a的mrna表达水平、白细胞介素-17f的mrna表达水平、白细胞介素-23的mrna表达水平。

18、本发明的有益效果在于：

19、1、经过气相色谱（gc）和液相色谱（lc）串联质谱（ms）分析发现，表皮葡萄球菌h62-3代谢产物种类丰富，含有7000多种代谢产物，且与表皮葡萄球菌模式菌株cgmcc 1.4260代谢产物组成有一定差异。

20、2、经过试验证明，表皮葡萄球菌h62-3代谢产物凝胶制剂可以改善银屑病小鼠模型的皮肤红斑、鳞屑等症状，显著降低皮损厚度，并且能降低银屑病小鼠模型皮损处炎症因子如白细胞介素-17a、白细胞介素-17f、白细胞介素-23等mrna表达水平，具有开发成治疗炎症性皮肤病药物的前景。

21、3、经过试验证明，表皮葡萄球菌h62-3代谢产物凝胶制剂可以改善银屑病小鼠模型，提供了外用活菌代谢产物安全、有效地治疗炎症性皮肤疾病的新思路。

22、4、经过试验证明，表皮葡萄球菌h62-3在tsb液体培养基中生长迅速，在2h左右进入对数期，12h左右进入稳定期，便于后期大规模生产应用。

技术特征：

1.一种含表皮葡萄球菌代谢产物的凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶制剂含有表皮葡萄球菌（staphylococcus epidermidis）h62-3菌株代谢产物，所述表皮葡萄球菌h62-3菌株已于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）保藏，保藏日期为2023年02月21日，保藏号：cgmcc no. 26640。

2.如权利要求1所述的凝胶制剂，其特征在于，以质量百分含量计，所述凝胶制剂包括如下成分：表皮葡萄球菌h62-3代谢产物10-40%、卡波姆940 0.2-1.5%、三乙醇胺0.2-1.5%、低分子透明质酸钠0.05-0.5%、丙三醇5-20%、氮酮0.5-2.5%、余量为纯水。

3.一种凝胶制剂的制备方法，所述凝胶制剂为权利要求1或2中任一项所述的凝胶制剂，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表皮葡萄球菌h62-3代谢产物的制备方法包括以下步骤：将活化后的表皮葡萄球菌菌株h62-3挑取单菌落接种于tsb液体培养基中，置于32-38℃摇床中，振荡培养14-18h，作为种子液；以体积分数为3%-5%的接种量将种子液接种至tsb液体培养基中，32-38℃摇床中振荡培养14-18h，得到发酵液；将发酵液离心，弃菌体沉淀；将发酵液上清通过旋转蒸发浓缩5倍体积，即为表皮葡萄球菌h62-3代谢产物。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述卡波姆940溶胀、分散的时间为30min。

6.如权利要求1或2中任一项所述的凝胶制剂在制备炎症性皮肤病的药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述炎症性皮肤病为湿疹、特应性皮炎、痤疮、银屑病、慢性荨麻疹、白癜风、天疱疮、类天疱疮或红斑狼疮。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述银屑病为寻常型银屑病、红皮病型银屑病、关节型银屑病或脓疱型银屑病中的至少一种。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述凝胶制剂用于改善银屑病小鼠模型的皮肤红斑、鳞屑的症状；所述凝胶制剂用于降低皮损厚度，降低银屑病小鼠模型皮损处炎症因子。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述炎症因子为白细胞介素-17a的mrna表达水平、白细胞介素-17f的mrna表达水平、白细胞介素-23的mrna表达水平。

技术总结
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种表皮葡萄球菌H62‑3代谢产物凝胶制剂及其制备方法与应用。本发明表皮葡萄球菌H62‑3代谢产物凝胶制剂改善银屑病小鼠模型的皮肤红斑、鳞屑症状，显著降低皮损厚度，并且能降低银屑病小鼠模型皮损处炎症因子白细胞介素‑17A、白细胞介素‑17F、白细胞介素‑23的mRNA表达水平，具有开发成治疗炎症性皮肤病药物的前景。本发明表皮葡萄球菌H62‑3代谢产物凝胶制剂改善银屑病小鼠模型，提供了外用活菌代谢产物安全、有效地治疗炎症性皮肤疾病的新思路。

技术研发人员：陆前进,赵明,雷雨,刘倩梅,高长醒,张博,蒋文娟,詹伊婧
受保护的技术使用者：中国医学科学院皮肤病医院（中国医学科学院皮肤病研究所）
技术研发日：
技术公布日：2025/1/23