专利名称:异硫脲盐化合物的制备方法
本发明涉及异硫脲鎓盐，其制备方法，以及含有该盐的药用组合物。所说的异硫脲鎓盐的大部分均为新化合物。该化合物具有有用的抗肿瘤作用和抗兴奋作用，并可用于人类和兽类的治疗中。
通式Ⅰ化合物是已知的(法国专利No.788，429及Dos No.2，426，683)，
其中R1是甲基，乙基或苄基;R2代表H。但在这些出版物中，所说的化合物仅提到做为中间体，完全没有提到该化合物的任何生物活性或这些化合物在治疗方面的用途。
本发明的一个方面是提供通式Ⅰ化合物的盐和新化合物。
其中，R1是C1-6的烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C3-6环烷基，芳烷基或芳基，所说的基团可任意被一个或多个羟基，巯基和/或卤素取代;R2代表H，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基、或C3-6环烷基;
X代表一种有机或无机阴离子，但R2代表H时，R1不能是甲基、乙基或苄基。
“C1-6烷基”一词系指直键或支键饱和的脂肪族烃基(例如甲基，乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基等)。“C2-6烯基”一词包括直键或支键烯属未饱和基(例如乙烯基、烯丙基、甲代烯丙基等)。“C2-6炔基”一词系指直键或支键，至少含有一个叁键的脂肪族基团(例如炔丙基等)。“C3-6环烷基”一词系指环形饱和脂肪族烃基(例如，环丁基、环戊基、环己基等)。“芳基”一词包括单环或多环芳香族烃基(例如，苯基、萘基等)。“芳烷基”一词系指、至少由一个芳基取代的烷基(如苄基、β-苯基-乙基等)。“卤素”一词包括氟、氯、溴、碘原子。
所说的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和芳烷基可任意带有一个或多个羟基、巯基或卤素取代物。例如下列被取代基团2-氯-乙基、3-溴-丙基，2-羟基-乙基、3-氯-2羟基-丙基等。
较好的一组具有通式Ⅰ的化合物为R1是烯丙基的衍生物。
更好的一组具有通式Ⅰ的化合物为R2是2-卤代-乙基的衍生物。
R2最好为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、烯丙基或环己基。
X最好为卤化物的阴离子，特别是氯化物，溴化物或碘化物的阴离子。
特别优先的具有通式Ⅰ的化合物为可药用的下列衍生物的盐类N-氨基亚氨基甲基-S-甲基-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-丙基-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-(2-氯乙基)-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-(1-氯-2-羟基-丙基)-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-(3-氯-丙基)-异硫脲鎓;
N-氨基亚氨基甲基-S-(2-羟乙基)-异硫脲鎓盐;
N-氨基亚氨基甲基-S-缩水甘油基-异硫脲鎓盐;
更好的具有通式Ⅰ化合物是N-氨基亚氨基甲基-N′-烷基-S-烯丙基-异硫脲鎓盐，特别是具有N′-甲基，N′-乙基，N′-正丙基和N′-异丙基的相应的化合物。本发明更进一步提出了制备通式Ⅰ化合物及其盐类的方法，该方法包括a)将具有通式Ⅱ的化合物或其合适的盐类与能够引入R1基团的烷基化试剂反应
(其中R2如上述)，最好与具有通式R1-Y的烷基化试剂反应，其中R1如上述，Y代表剩余基，最好是卤素;或者b)将通式Ⅱ的化合物与通式为R1-SH的化合物反应
(其中，R1如上述)如果需要的话，将由此得到的产物与具有通式HX的酸(其中X是有机酸或无机酸的阴离子)进行反应，使其转变成 。
异硫脲鎓盐在所说的反应中形成。该反应一般伴有N-烷基化副产物的生成。
根据方法a)，较好的情况是，具有通式Ⅱ的原料不以游离硷的形式使用，而是以其合适的盐的形式使用，特别是碳酸盐。因此，当生成N-烷基化衍生物时要进行骤冷，这可能是由于放出的二氧化碳降低了强硷介质的pH值。
作为较好的烷基化试剂，可使用相应的卤代烷或二烷基硫酸盐，其它烷基化试剂也可以使用。
反应物可以是等克分子量，也可加入过量的烷基化试剂。对于反应介质，可以使用惰性有机溶剂，最好是醇，脂肪族酮，脂肪族腈或醚。
反应可以在大气压下，20～80℃温度下进行。
根据方法a)，较好的情况是，通式Ⅱ的原料与烷基化试剂进行反应的克分子比为1∶1至1∶1.8，有机溶剂为无水乙醇，乙腈，二甲基甲酰胺，丙酮或醚，温度为20℃及30℃。
根据方法b)，将通式Ⅲ的化合物与通式为R1-SH的硫醇反应可制备具有通式Ⅳ的化合物。
(上述通式是通式Ⅰ化合物的一个更窄的分支，R2是氢)反应物可以是等克分子量，也可使通式为R1-SH的硫醇过量。作为反应介质，最好用醇，特别是乙醇。如果需要的话，反应可在压力下进行。其压力最好为1至5巴，温度最好为20℃至100℃。
通式Ⅱ的原料是已知的，并可由人所共知的方法制备。将二氰基肼和硫化氢反应可容易地制备出N-氨基亚氨基甲基硫脲(Houben-Weyl Ⅶ，214)。将胍碱和相应的烷基异硫氰酸盐反应可制备具有通式Ⅱ的N-氨基亚氨基甲基-N′-烷基-硫脲衍生物(美国专利No.4，009，163)。
通式Ⅲ的原料可由已知方法制备。
由此得到的产物可用有机酸或无机酸将其转变成药用盐。生成盐时，最好用甲酸、乳酸、柠檬酸、马来酸或硫酸、盐酸、磷酸或氢溴酸。
通式Ⅰ化合物具有抗肿瘤，抗寄生虫的免疫激活的性质。化合物的活性的强度和方向以及毒性均取决于该化合物的取代物。
已经知道，结构上与通式Ⅰ化合物相关的gutimine在药理和临床检测中，如同引起微循环病症的物质〔Gematol.Transfusiol.(1984)，29(1)，49-52〕一样被做为抗缺氧剂来检测〔C-A-66 452，929(1972);patho phys-Exp.Ther，10，(6)〕。
已经发现，具有通式Ⅰ的化合物能够使已降低的机体自然免疫系统恢复到正常值，或者增至正常值以上。
动物和人类的有机体具有免疫系统(例如，消除肿瘤系统)。一旦该系统的活性降低或停止其功能，就会产生多种疾病和肿瘤，并且显示出来。通式Ⅰ的化合物活化了自然免疫系统，因此，在所有情况下，当需要提高已降低的免疫系统活性时，或进一步提高免疫系统的正常活性时，该化合物是有用的。
通式Ⅰ的化合物还表现出更有用的生物效应，例如，治疗微循环病症，结合对健康有害的基团，改善缺氧细胞生物功能并延长其寿命。
下列试验将显示通式Ⅰ化合物的生物活性。但是，这里没有示出高活性化合物的全部效应。
特殊效应实验免疫试验淋巴细胞，分别对健康的供血者及恶性淋巴瘤患者，转移性实体硬肿瘤患者所抽取的静脉血液进行淋巴细胞聚蔗糖-泛影葡胺梯度分离(Boyum 1968)。当所选的患者属于后一组时，对ADCC(依赖抗体杀伤细胞)和NK(天然杀伤细胞)活性减少的情况要加以考虑，舌噬细胞用铁粉和磁铁进行处理。
ADCC，用略加改变的白尔曼法和白尔曼(1970)法(Lang等人，1981)测定ADCC。鸡红细胞以10551Cr标记，和抗鸡红血球的细胞
血清，及淋巴细胞一起在37℃保温4小时，停止反应后，离心分离的细胞上清液的活性用伽马计数器来测定。铬的释放率以细胞毒素指数(CI%)表示。该值按我们过去所出版的文章(Lang等人，1980)中讲的方法来计算。(见表Ⅰ)NK天然杀伤细胞NK的活性用略加改变的蒋达尔-蒲鲁斯法(goudal-pross)(1975)(Lang等人1981)测定。K-562肿瘤细胞以51Cr标记，和效应细胞一起用TC 199液体营养培养基培养，培养液内含有10%去补体的小牛血清。反应停止后，离心分离细胞上清液的放射活性能(释放出铬)用伽马计数器测量。靶细胞的杀伤细胞毒素指数%)用试验释放量和自发释放量的差数来表示。
统计计算用单样试验方法计算。一般通式Ⅰ的几种化合物表现出非常良好的免疫激活效应。(例如按例11、12和16所制备的化合物)所说的这些化合物能够显著地增加正常细胞的活性和大大减少NK细胞和K细胞的活性，甚至还会超过正常的水平。所说的这种效应非常强烈以至可使细胞毒素性减少到原有数值的十分之一，有可恢复到原有水平(表Ⅱ)。
在人血浆浓度的剂量范围内，一般通式Ⅰ的化合物将分别按剂量的大小增加人类淋巴细胞的NK和K(杀伤细胞)的活性，并提高NCMC和ADCC的反应。从进一步的免疫学试验的初步结果来看该化合物将增加淋巴细胞(Bastos)的转化与迁移。
在作氮原子取代试验时和毒素有关的与克分子成比例的免疫激活效应一般均减少。
由于肿瘤患者的细胞毒素活性是和病期成比例而减少的，此外还由于阻止细胞生长的治疗，细胞毒素活性还会进一步的减少，十分重要的是，通式Ⅰ的化合物具有强的免疫激活效应，而没有抑制免疫的作用，对于恢复期来说可能更为重要。
白细胞的迁移对于白细胞自发(随机)的迁移是按稍加改变的MC Coy等人法(1977)用琼脂糖微滴进行测量的(Kalmar and Gergely 1982)。2毫升琼脂糖滴(0.2%)滴在移动平皿中(德意志联邦Greiner)再加入TC199营养培养基，平皿密封封闭，24小时后用解剖显微镜进行迁移范围测定，移动范围用mm2来表示。
白细胞的移动健康人体的多形核细胞的直接(随时)迁移可以用例11、12和14的化合物使之增加。使用剂量可达1.0μg(微克)/(毫升)ml使用大剂量时(10μg(微克)/ml(毫升))，其效应减少，(表Ⅲ)。
促进细胞分裂剂引起的淋巴细胞转化将淋巴细胞培养于TC199培养基，溶液中加有10%去补体的小牛血清，抗生素及25mH的HEPES(Serva)。将含有2×105个淋巴细胞的200微升(μl)细胞悬液涂在显微片上(大不列颠Sterilm制造);五个平行实验每个分别加入2和10微克(μg)/毫升(ml)的植物性血球凝集素(白血球凝集素，瑞典Pharmacie厂制造)以及25微克(μg)/毫升(ml)的Jacr刀豆蛋白A(Carbiochem)于培养液中，以上的数据是对最终浓度而言。在37℃，培养72小时。在培养期结束前的8小时将0.5μCi3H微居里的胸腺核苷(Chemapol捷克斯拉夫)加入样品中。冰冻培养液以终止掺入。溶化之后，样品在自动摇集器上进行过滤(Dynatech)样品的被射性用闪烁计数器(Scintillator进行计数。放射性能以C.P.m.表示之(表Ⅳ和表Ⅴ)。
统计分析试验结果的意义用单样2T2试验方法加以确定。例11所取获得的结果表示在表Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ中。
抗肿瘤和免疫激活效应的初步快速试验这是在我们的试验室内对大量的样品作快速试验的方法。于CELP雄性的老鼠(平均体重30克)腹膜腔内接种四百万个腹水淋巴瘤细胞。
在这个试验中所用的老鼠在第四天即明显看到肿瘤-即胶水-生成。每组试验最少使用10只老鼠，并且老鼠口服LD50半数致死量十分之一的剂量。
口服24小时之后在细胞分析基础上，用Giemsa染色腹水涂片来评价效果，对照组和治疗组的鼠数相同。
对肿瘤细胞的破坏作用，机体的活化作用以及最后有毒效应均做出评定。
在对抗肿瘤效应进行评定时，死亡率和完整肿瘤细胞百分率均考虑在内，其结果按以下比例来表示肿瘤细胞杀伤率 效果0-30% 无效果30-70% 中等效果70-100% 效果显著(有抑制作用)根据出现在腹水癌细胞和参与免疫系统的嗜中性粒细胞，淋巴细胞和巨噬细胞的数量和活性来评定机体免疫系统的增强。免疫系统的活性也可以上述细胞在腹水中和瘤细胞形成血浆-桥的比例来表示。按这种评定方法，如果这些细胞在数量和活性上没有什么差别的话，那么则对控制治疗将没有什么增强。
假如细胞数量或活性的增强超过对照组20%，则可观察到中等的疗效。假如免疫系统细胞数量和活性的增加超过对照组20%以上的话则为显效。(表Ⅶ)毒性是按嗜中性粒性细胞和淋巴细胞的形态变化，血浆的Vasquolization化，细胞核裂殖，多节和毒肉芽形成来确定的。毒性按下列形式来表示之
观察结果 毒性细胞中无以上变化 无毒性20%的变化 中等毒性变化超过20% 高毒性抗肿瘤效果试验1、体外试验培养的K-562人的红白血液细胞和老鼠P-388淋巴瘤细胞，用1-100微克(μg)/毫升(ml)的试验物质进行处理。
2、体内试验a)NK-Ly-腹水淋巴瘤将一百万个Németh-Kellner腹水淋巴瘤细胞移植入20只CFLP雄性鼠的腹腔内(平均体重30克);采用了一种新的鼠腹水瘤作为筛选的手段。肿瘤8，337(1961)，半数的动物作为对照组。另外一半用十分之一LD50数量的通式Ⅰ各种化合物分别在一天和连续五天，进行口服和腹腔注射给药。(假如十分之一的LD50剂量有效的话，则可减少剂量)。对于一次给药的试验组在24小时之后分别进行腹水涂片的细胞形态观察并测定损伤率和死亡率，对于五天给药组计算存活率。
b)L1210肿瘤105个L1210肿瘤细胞移植入20只BDF，雌鼠(体重20(g)克)腹腔。在肿瘤移植24小时后开始给药，并继续8天，每一组有五只雌鼠每日口服剂量为5，50和500毫克(mg)/公斤(kg)，对照组也是五只鼠;观察其存活率。
c)Lewis氏长肿瘤每一组用6只鼠，剂量为5和50毫克(mg)/公斤(Kg)。对照组是六只鼠，这个试验使用的是C57B2雌鼠/重20克(g)。
肿瘤作皮下移植入右腿内。10天之后作腿截肢，开始口服治疗并继续9天，杀死雌鼠，在解剖显微镜下计算肿瘤细胞转移数量。
d)不同品种的狗患有自发性乳腺肿瘤/导管CC.(dnctusCC.)/口服1-10毫克(mg)/公斤(kg)试验药剂治疗四周作试验切除手术，组织取样进行子宫病理检验分析。
例11，13，14，15，27，28，34，35，36，38的化合物有显著抗肿瘤效果。例11化合物4微克/ml即可抑制组织培养的K-562人红白血病细胞，而另一方面，这种化合物在浓度40微克(μg)/毫升(ml)时才能抑制P-388细胞增生。当浓度增加至400微克(μg)/毫升(ml)时活性并不增强。有效显著的化合物在浓度为0.5-5微克(μg)/毫升(ml)范围内存在效果和药剂量有关，而低效化合物和用药剂量无关。根据体内试验，这类化合物对于L1210瘤根本无效或者效果很小。
这种化合物能显著地减少Lewis氏长肿瘤肺转移数量。化合物11，13，14，15，22，27，28，45在低于十分之一的LD50剂量时是有效的。例14的化合物用5毫克(mg)/公斤(kg)的剂量可使肿瘤肺转移数减少50%。根据LD50＝2380毫克(mg)/公斤(kg)这一事实，这一结果是非常有意义的。
我们发现重复治疗比提高剂量更能增强疗效。
例11、13、14、20、22、27、45的化合物在浓度低于LD50剂量的十分之一时对NK-Ly-胶水肿瘤有效，后种化合物依剂量使用的情况而不同程度的增加存活率和延长生命。这些化合物小剂量使用时有免疫激活作用。当大剂量使用时表现其直接抗肿瘤效果，例11和22的化合物在剂量为25毫克(mg)/公斤(kg)和20毫克(mg)/公斤(kg)时分别显示出免疫激活作用。例11和12的化合物在服用量为250-500毫克(mg)/公斤(kg)和40-160毫克(mg)/公斤(kg)时分别有细胞毒。用S-烯丙基，S-1-氯-2-羟基-丙基-或S-1-溴-2-羟基-丙基-替换的通式Ⅰ的化合物对于狗的自发性乳腺瘤的抗瘤有效性是很高的。治疗3-4周后作活组织检验可在肿瘤中发现细胞浸润(导管CC.(ductas CC)其中包括淋巴细胞和嗜中性粒细胞巨噬细胞偶尔也有嗜伊红性粒细胞。在肿瘤细胞上可以观察到衰退变化和强烈的解体现象。
NK细胞和肿瘤细胞形成血浆桥连接。这就引起肿瘤细胞血浆空泡退化，以及在细胞核DNS丛处变稀疏。细胞核-血浆的关系发生变化细胞核高度膨胀，血浆的嗜碱性减低。
在上述四分之一的例子中，白血球对肿瘤的渗润可以忽略;另一方面肿瘤细胞膨胀并变透明衰退，在细胞与细胞之间有大量透明染色物质沉积。
对于例11的化合物每日口服30-120毫克(mg)/0.5-2毫克(mg)/公斤/6至12个月后，在人的乳腺肿瘤，卵巢肿瘤，胰腺肿瘤等的骨转移分别可以见到明显的改进或恢复。
合并用药治疗抗肿瘤试验1、与已知细胞生长抑制剂合并治疗将各种有生物烷基化作用的细胞生长抑制剂与通式Ⅰ化合物合并，对于NK-Ly-腹水肿瘤的CFLP鼠进行治疗。细胞生长抑制剂按1/5或1/10半数致死量或前述最佳有效量口服，腹腔注射或静脉内注射。服用细胞生长抑制剂48小时后口服通式Ⅰ化合物，其剂量为十分之一或二十分之一的LD50量，服用一次或数次。合并使用药中一方面是环磷酰胺，氨基酸芥(Carnomustine)肉芽清除剂(Degranol)二溴卫矛醇(Dibromo dulcitol)和二溴甘露醇(Dibromo mannitol)，另一方面是例11、13化合物及14、15、16、27、28、45。当和只服用已知的细胞生长抑制剂的对照治疗组作一下比较的话，抗肿瘤效应增强，及免疫抑制降低。
2)和已知的维生素合并用药试验通式Ⅰ的异硫脲鎓盐可以有效的和中等剂量的维生素A和D3合并使用，或与大剂量的维生素C联用。在药理试验和临床病例中均可获得好效果。
3)和已知的激素合并用药试验在治疗和激素有关的肿瘤时合并使用的结果证明在药理试验和临床病例都有成效。
4)外科应用通式Ⅰ的化合物曾成功的应用于实体瘤/NK-Ly硬性，Yosida/外科手术的术前术后治疗中的药理试验。根据药理试验的结果表明通式Ⅰ的化合物可能也适用于病人外科手术术前术后的治疗。
抗寄生虫效果试验给八角蝨感染ixodes Ricinus(蓖麻豆蝨)的狗服通式Ⅰ的化合物三日，对N-氨基亚胺基甲基-S-烯丙基-异硫脲氯酸盐的服用方法是口服剂量1-2毫克(mg)/公斤(kg)，并记录八角蝨的杀死率。在服用通式Ⅰ的活性有效剂量之后的六至八小时，所有狗体内的八角蝨均被杀死。
与自由基的结合例9、10、11、16、23和29的化合物能非常显著的减低过氧化氢，有机过氧化物，及生物烷基形成物(自由基形成)等化物的毒性(LD50)。按照它们最适的毒性资料通式Ⅰ的化合物更适合于和自由基结合，比已知的由相应的硫脲所获得的异硫尿的衍生物更有效防御辐射作用。这样则例23比β-氨基乙基-异硫尿盐酸盐的治疗效果更好。
对心脏刺激剂(引起)坏死的心脏保护作用对异丙基肾上腺素坏死的心脏保护作用按5毫克(mg)/公斤(kg)的剂量，将心脏刺激剂(isop-roterenol)对雄家鼠CFY(重250-300克)腹腔注射，每组使用十只老鼠，一组老鼠作为对照组，另一组用1-5毫克(mg)/公斤(kg)的14号化合物腹腔注射给药，或口服10-50毫克(mg)/公斤(kg)的14号化合物。两周之后心脏作心室收缩期的检查评定。测定出心脏坏死和完整区的比例，我们发现所有按通式Ⅰ的N-氨基亚胺基甲基-S-烯丙基-异硫尿盐酸盐治疗的都能大大的减少坏死。
在损伤的区域里试验的化合物可能是通过结合嗜中性粒细胞所产生的过氧化氢而显示其效果的。按这个模式来说，其它自由基的结合以及抗氧剂分子等将产生同样的效果。
对循环和呼吸方面的作用在静脉给药10mg/kg时，例11的化合物对胸腔切开和缝合的猫，血流动水学参数及呼吸功能上无显著效果。曾作了以下参数试验心室及其周围的压力，心率/功能/心电图，循环容量/分钟，收缩，呼吸量，呼吸率及其阻力等。静脉注射剂量超过10毫克/公斤时，左心房的压力及频率减退。剂量为50毫克/公斤时，这种作用显著且持续长久。对静脉注射剂量为100毫克/公斤时，可观察到血流动力学方面的明显变动，但猫不致死亡。N-(氨基亚氨基甲基)-S-烯丙基-异硫脲鎓盐类(卤化物)的作用。(化合物A)表Ⅰ对ADDC依赖抗体杀伤细胞的作用，细胞毒性指数(%)效应细胞率靶细胞＝5∶1。保温4小时。
平均±S.E
X有效(P＜0.05)表Ⅱ对NK(天然杀伤细胞)活性的作用效应细胞靶细胞＝50∶1。保温4小时。
细胞毒性指数(%)。平均值±S.E
X有效 (P＜0.05)
表Ⅲ人类多形核白细胞体外直接(随机)迁移的作用。
迁移面积(mm2)。七个健康对照的平均值为±S.E.M.
表Ⅳ由PHA和ConA激发的人类淋巴细胞体外淋巴细胞转化作用，正常活性的健康对照，n＝6。平均C.P.m.±S.E.m.
表Ⅴ由PHA和ConA激发的人类淋巴细胞体外淋巴细胞转化的作用。反应降低的患者(肿瘤和SLE);
n＝6 平均C.P.m.±S.E.m.
表Ⅵ通式Ⅰ化合物的24小时的急性毒性例号 R2R1LD50毫克/公斤 P.O9 H 甲基 2320±22023 H 乙基 3080±29010 H 丙基 2800±26025 H 丁基 2700±31024 H i-丙基 2260±21026 H i-戊基 2260±24113 H 2-氯乙基 1120±14027 H 2-溴乙基 1050±28014 H 1-氯-2- 1240±160OH-丙基15 H 3-氯丙基 1210±18028 H 3-溴丙基 980±64016 H 2-羟基-乙基 3280±4601680±210(i.P.)
29 H 1-氧-丙基 2860±18011 H 烯丙基 2380±320320±30(i.P.)44 H 甲代烯丙基 1640±21018 H 苄基 2420±26017 H 炔丙基 90±7.6表Ⅵ例号 R2R1LD50毫克/公斤P.O. i.p.
20 甲基 烯丙基 600±54 75±6.334 乙基 烯丙基 780±62 84±7.622 环己基 烯丙基 450±51 65±5.121 异丙基 烯丙基 280±26 32±445 烯丙基 烯丙基 380±41 36±422 环己基 烯丙基 400±38 40±6表Ⅶ试验化合物 抗肿瘤 免疫激活 毒性效应例号 效应 效应9 中 中 中
23 中 强 010 中 中 025 中 中 024 中 中 026 中 中 013 强 弱 027 强 弱 0表Ⅶ试验化合物 抗肿瘤 免疫兴奋 毒性例号 效应 效应 效应14 强 弱 015 强 弱 028 强 弱 016 中 强 029 中 中 011 强 强 0
44 中 中 018 增加 0 017 弱 弱 中20 强 弱 034 中 中 022 强 弱 021 强 弱 045 强 弱 022 弱 弱 0
本发明的另一特征是提供至少含有一种具有通式Ⅰ化合物(做为活性组分)的药用组合物。其中R1是C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C3-6环烷基，芳烷基或芳基，这些基团可以任意被一个或多个羟基，巯基和/或卤素替换;
R2表示H，C1-6烷基，C2-3烯基，C2-6炔基或C3-6环烷基;
X表示一种有机或无机阴离子。
本发明的药用组合物可由医药工业人所共知的方法制备。具有通式Ⅰ的活性组份最好与一般常用的辅助剂(如滑剂)混合，制成胶囊;该胶囊可由自动包胶囊机器制做。该药用组合物也可以制成用于注射和输液的肠外粉末安瓿，这些组合物也可由人所共知的方法制备。可以使用溶剂，如蒸馏水或生理盐水溶液。
具有通式Ⅰ的活性组分也可以制成软膏的形式，特别是亲液软膏。气味较强的具有通式Ⅰ的活性组分最好制成微胶囊，即形成包有环状糊精的复合物。
本发明的药用组合物，除含有通式Ⅰ的化合物外，也可含有一种或多种已知的生物活性物质作为活性组分。
本发明的药用组合物可用于人类和兽类的治疗。将其作为免疫激活剂使用时，口服或直肠剂量最好约为0.5～25毫克/公斤。对于局部治疗，最好使用较大的剂量。
工业实用性本发明涉及许多具有抗肿瘤和免疫激活效应的新化合物。
实施本发明的方式实施例中将进一步详述本发明，但本发明的保护范围并不限定在实例上。
原料实例1N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐将84.0克(1.0摩尔)二氰肼和300毫升水装入高压灭菌器。再将34.0克(1摩尔)气体硫化氢按下述方式加入密封的高压灭菌器中在20℃温度下加入硫化氢气体，使得高压灭菌器的压力达到1.5巴。停止供气后，将高压灭菌器缓缓加热至80℃。在此期间加入气态硫化氢的速度应使高压灭菌器的压力维持在1.5巴。硫化氢气体全部加入后，保持高压灭菌器的温度为80℃，直至压力降到0.3～0.4巴。将反应混合物冷却到20℃，用氮气冲洗，然后过滤。将清滤出液冷却到0℃，通入二氧化碳气体。滤出沉淀的白色结晶N-(氨基亚氨基甲基)-硫尿碳酸盐，用冷水洗涤，并在60℃～80℃下干燥。由此得到100克所需化合物，产率67%，熔点(mp)127～129℃。
将所得产品的IR(红外)光谱与该化合物的标准样品的IR光谱进行比较。
实例2N-氨基亚氨基甲基-N′-甲基-硫尿碳酸盐将在10毫升丙酮中含有7.3克(0.1摩尔)的甲基异硫氰酸盐溶液加入到含有30毫升丙酮和5.9克(0.1摩尔)胍碱的溶液中。将该异硫氰酸盐加入到胍溶液中的 速度应使该混合物的温度不超过40℃，反应混合物在40℃下静置4小时，然后在真空下移出溶剂。残余的浅黄色油悬浮在水中，产生一种乳白色溶液。将二氧化碳气体通入由此得到的溶液中，所需的化合物则以白色晶体形式沉淀出来。产率12.0克(73.5%)，熔点(mp)132～134℃。
实例3-8按照例2的方式，制备下列化合物3、N-氨基亚氨基甲基-N′-乙基-硫尿-碳酸盐4、N-氨基亚氨基甲基-N′-正丙基-硫尿-碳酸盐5、N-氨基亚氨基甲基-N′-异丙基-硫尿-碳酸盐6、N-氨基亚氨基甲基-N′-正丁基-硫尿-碳酸盐7、N-氨基亚氨基甲基-N′-烯丙基-硫尿-碳酸盐8、N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-硫尿-碳酸盐下面的例子将说明通式Ⅰ的最终产品的制备。
实例9N-氨基亚氨基甲基-S-甲基-异硫尿碘酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐悬浮于50毫升无水乙醇中，再向其中加入17.0克(0.12摩尔)的碘代甲烷。将反应混合物缓慢加热至沸腾，此时二氧化碳逸出。反应混合物被加热至沸腾30分钟后，将其冷却到室温，过滤，以便移出最后的结晶沉淀物。清滤液在真空下蒸发，残余的油从醋酸乙酯中再次结晶。滤出黄色晶体，并在40℃～50℃下干燥。由此得到22.1克所需的化合物，产率为85%，熔点(mp)为124～125℃。
实例10N-氨基亚氨基甲基-S-n-丙基-异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐悬浮于50毫升无水乙醇中，向该悬浮液加入14.8克(0.12摩尔)溴代正丙烷。在搅拌下缓慢加热混合物至沸腾，此时二氧化碳逸出。反应混合物被加热至沸腾45分钟后，被冷却到室温。然后过滤该混合物，移出最终的沉淀物。将清滤出液在真空下蒸发，并使油状残液在醋酸乙酯中结晶。再将得到的白色结晶过滤，并于40～50℃温度下干燥。由此得到19.5克所需的化合物，产率81%，熔点122～124℃。
实例11N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液中加入14.5克(0.12摩尔)溴代烯丙烷。在强烈搅拌下，将反应混合物缓慢加热至沸腾。将反应混合物回流30分钟后冷却至室温。然后过滤该混合物，以便移出最终的沉淀物。滤出液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶。过滤沉淀的结晶物，并在40～50℃下干燥。由此得到19.6克所需化合物，产率52%，熔点123～125℃。
实例12N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫尿氯酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入9.18克(0.12摩尔)氯代烯丙烷。在强烈搅拌下缓缓加热反应至沸腾，反应混合物回流1小时后冷却到室温。将该混合物过滤，以便移出最终的沉淀物。滤出液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶。过滤沉淀出的结晶，将其在40℃～50℃下干燥，由此得到15.7克所需的化合物，产率81%，熔点(mp)，125～127℃。
实例13N-氨基亚氨基甲基-S-(2-氯乙基)异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入17.2克(0.12摩尔)1-溴-2-氯乙烷。将反应混合物在强烈搅拌下加热至沸腾。反应混合物回流90分钟后冷却至室温。过滤该混合物，以便移出最终沉淀物。清滤出液在真空下蒸发，油状残液在醋酸乙酯中结晶。过滤沉淀的白色结晶，并在40℃～50℃下干燥，由此得到17.2克所需的化合物，产率为66%，熔点(mp)为142～143℃实例14N-氨基亚氨基甲基-S-(1-氯-2-羟基-丙基)异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入20.8克(0.12摩尔)1-溴-2-羟基-3-氯丙烷。在强烈搅拌下将反应混合物缓慢加热至沸腾。该反应混合物回流90分钟后，冷却至室温。然后将混合物过滤，以便移出最终沉淀物。清滤液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶。过滤出沉淀的淡奶油色结晶物，将其在40～50℃下干燥。由此得到17.8克所需的化合物，产率为61%，熔点为118～119℃。
实例15N-氨基亚氨基甲基-S-(3-氯丙基)异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到80毫升乙腈中，并向生成的悬浮液加入18.9克(0.12摩尔)1-溴-3-氯丙烷。在强烈搅拌下缓慢加热该反应混合物到沸腾。反应混合物回流90分钟，将热反应混合物过滤，移出固体物质，滤出液冷却至室温。过滤沉淀的白色结晶，并在40～50℃下干燥。由此得到的17.3克所需的化合物，产率为65%，熔点为129～131℃。
实例16N-氨基亚氨基甲基-S-(2-羟乙基)-异硫尿氯酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入9.7克(0.12摩尔)2-氯乙醇。在强烈搅拌下，将反应混合物缓慢加热到沸腾，反应混合物回流90分钟后被冷却到室温。过滤该混合物，以便移出最终的沉淀物。清滤出液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶，过滤该结晶物，并在40℃至50℃下干燥。由此得到13.5克所需的化合物。产率为68%，熔点为134～136℃。
实例17N-氨基亚氨基甲基-S-缩水甘油基-异硫尿溴酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到80毫升乙腈中，并向生成的悬浮液加入16.5克(0.12摩尔)表溴hydrine。在强烈搅拌下将反应混合物缓慢加热至沸腾。反应混合物回流2小时后，在热的情况下过滤，清滤出液被冷却到室温。过滤沉淀的白色结晶，并在40℃～50℃下干燥。由此得到13.5克所需的化合物。产率为53%，熔点为138～139℃。
实例18N-氨基亚氨基甲基-S-苄基-异硫尿氯酸盐将14.9克(0.05摩尔)N-氨基亚氨基甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入15.2克(0.12摩尔)苄基氯。在强烈搅拌下，将反应混合物加热到沸腾。反应混合物回流1小时后，冷却至室温。过滤该混合物，以便移出最终沉淀物，清滤液在真空下蒸发，油状残物于醋酸乙酯中结晶。过滤沉淀的白色晶体，并将其在40～50℃下干燥。由此得到19.1克所需的化合物，产率为78%，熔点为159～161℃。
实例19如果需要，按例9～18制备的异硫脲鎓盐可以按下列方法再次结晶。该过程使用N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫尿氯酸盐。
将10克N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫尿氯酸盐加入到60毫升乙醇与甲醇之比为5∶1混合物中。过滤热混合物，移出少量未溶解的结晶物。需要的话用活性炭澄清滤出液。将清滤液冷却至室温，此时白色结晶沉淀出来。再将该混合物冷却到0～5℃，并在此温度下放置1小时后过滤。用冰冻的乙醇洗涤晶体，并将其在40℃～50℃下干燥。由此得到8.1克所需的化合物，产率为81%。
实例20N-氨基亚氨基甲基-N′-甲基-S-烯丙基-异硫尿氯酸盐将16.3克(0.05摩尔)按例2制备的N-氨基亚氨基甲基-N′-甲基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入9.18克(0.12摩尔)氯代烯丙烷。在强烈搅拌下将反应混合物加热到沸腾。反应混合物回流1小时后，冷却到室温，过滤该混合物，以便称出最终的沉淀物。在真空下蒸发清滤出液，油状残物在醋酸乙酯中结晶，过滤得到的白色结晶，并将其在40～50℃下干燥，由此得到13.6克所需的化合物。产率为61%，熔点为137～139℃。
实例21N-氨基亚氨基甲基-N′-异丙基-S-烯丙基异硫尿氯酸盐将19.1克(0.05摩尔)按例5制备的N-氨基亚氨基甲基-N′-异丙基-硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液加入9.18克(0.12摩尔)氯代烯丙烷。在强烈搅拌下将反应混合物加热到沸腾，反应混合物回流1小时后冷却到室温。过滤该混合物，以便移出最终沉淀物。清滤出液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶。过滤沉淀的白色结晶，并将其在40～50℃下干燥。由此得到13.3克所需的化合物。产率为56%，熔点为134～135℃。
实例22N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-S-烯丙基-异硫尿氯酸盐将23.1克(0.05摩尔)按例8制备的N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基硫尿碳酸盐加入到50毫升无水乙醇中，并向生成的悬浮液中加入9.18克(0.12摩尔)氯代烯丙烷。在强烈搅拌下，将反应混合物加热到沸腾，反应混合物回流1小时后，被冷却到室温。过滤该混合物，以便移出最终的沉淀物。清滤出液在真空下蒸发，油状残物在醋酸乙酯中结晶，过滤沉淀的白色结晶，并将其在40℃～50℃下干燥。由此得到20.85克所需的化合物。产率为85%，熔点为128～130℃。
实例23-31按照例12的类似方法，制备下列通式Ⅰ的异硫脲鎓盐化合物23、N-氨基亚氨基甲基-S-乙基-异硫脲溴酸盐熔点123～124℃;
24、N-氨基亚氨基甲基-S-异丙基-异硫脲溴酸盐，熔点120～122℃;
25、N-氨基亚氨基甲基-S-正丁基-异硫脲溴酸盐，熔点116～118℃;
26、N-氨基亚氨基甲基-S-异戊基-异硫脲溴酸盐，熔点111～113℃;
27、N-氨基亚氨基甲基-S-(2-溴-乙基)-异硫脲溴酸盐熔点129～131℃;
28、N-氨基亚氨基甲基-S-(3-溴-丙基)-异硫脲溴酸盐熔点127～129℃;
29、N-氨基亚氨基甲基-S-(3-羟基-丙基)-异硫脲溴酸盐熔点132～135℃;
30、N-氨基亚氨基甲基-S-(3-巯基-丙基)-异硫脲溴酸盐熔点141～142℃;
31、N-氨基亚氨基甲基-S-炔丙基-异硫脲溴酸盐，熔点131～133℃。
实例32-40按照例20的类似方法，制备下列化合物32、N-氨基亚氨基甲基-N′-甲基-S-(2-羟乙基)-异硫脲溴酸盐，熔点147～148℃;
33、N-氨基亚氨基甲基-N′-乙基-S-(2-氯乙基)-异硫脲溴酸盐，熔点143～144℃;
34、N-氨基亚氨基甲基-N′-乙基-S-烯丙基-异硫脲氯酸盐熔点138～139℃;
35、N-氨基亚氨基甲基-N′-异丙基-S-(3-氯丙基)-异硫脲氯酸盐，熔点140～142℃;
36、N-氨基亚氨基甲基-N′-异丙基-S-甲代烯丙基-异硫脲氯酸盐，熔点138～139℃;
37、N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-S-正丙基-异硫脲溴酸盐，熔点133～135℃;
38、N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-S-甲代烯丙基-异硫脲氯酸盐，熔点130～132℃;
39、N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-S-缩水甘油基-异硫脲溴酸盐，熔点143～145℃;
40、N-氨基亚氨基甲基-N′-环己基-S-苄基-异硫脲氯酸盐，熔点147～149℃。
通式Ⅰ的化合物的熔点和红外(IR)光谱总结在下列表Ⅷ中。
表ⅧR2R1X mp(℃) 红外光谱特征峰H 甲基 丁 124～125 3300，3120，1685，1570H 正丙基 Br 122～124 3300，3120，2925，2850，1685，1570，730
H 烯丙基 Br或 123～125 3290，3260，Cl 3160，3105，1640，1605，1550，1375，1090，980，910，705，650H 2-氯 Br 142～143 3300，3110，乙基 2925，1640，1920，720H 1-氯- Br 118～119 3300，3110，2-羟基-丙基 3000，2850，1685，1610，720H 3-氯 Br 129～131 3300，3275，丙基 3165，3105，2900，2825，1680，695
H 2-羟基- Cl 143～136 3310，3280，乙基 3110，3000，2990，1675，1610H 缩水甘 Br 138～139 3300，3275，油基 3110，3000，1690，1600，865表ⅧR2R1X mp(℃) 红外光谱特征峰H 苄基 Cl 159～161 3290，3285，3115，3005，1680，1590，1485，755H 乙基 Br 123～124 3300，3120，1685，1570H 异丙基 Br 120～122 3300，31201680，1380，1365
H 正丁基 Br 116～118 3315，3300，3210，3180，2850，1690，1450H 异戊基 Br 111～113 3305，3300，3205，3175，2960，2845，1695，1470H 2-溴- Br 129～131 3300，3205，乙基 2910，1670，1090，715H 3-溴- Br 127～129 3305，3215，丙基 2920，1665H 3-羟基- Br 132～135 3590，3300丙基 3220，2925，1680H 3-巯基- Br 141～142 3320，3305，丙基 3210，3180，2920，2570，1690
H 炔丙基 Br 131～133 3310，3300，3200，2180，1680甲基 烯丙基 Cl 137～139 3305，3290，2960，2690，1640甲基 2-羟基- Br 147～148 3585，3300，乙基 3285，1680，1375，1360乙基 2-氯- Br 143～144 3305，3285，乙基 2965，1660，765乙基 烯丙基 Cl 138～139 3310，3300，3210，3180，1650，990，905异丙基 烯丙基 Cl 134～135 3305，3295，3200，3170，1655，985，895
异丙基 甲代烯 Cl 138～139 3305，3295，丙基 3200，3175;
1650，890异丙基 3-氯- Br 140～142 3320，3300，丙基 3195，3160，1690，775环己基 烯丙基 Cl 129～130 3315，3305，3200，3170，2830，1695，985，900环己基 正丙基 Br 133～135 3320，3300，3210，3175，2925环己基 甲代烯 Cl 130～132 3315，3300，丙基 3215，3180885环己基 缩水甘 Br 143～145 3325，3315，油基 3210，3190，1690，870
环己基 苄基 Cl 147～149 3300，3275，3120，3000，1675，1590，750实例41片剂和糖衣药丸的制备。
片剂和糖衣药丸用带有自动加料器的压片机制备。通过干或湿法，预先将活性组分与适当的助剂粒化。如果制出湿药剂粒，最好将其在真空中干燥。
将制备药片和糖衣药丸核心的颗粒挤压通过一个合适的不含金属的筛。为了制备这种颗粒，最好采用药典规定的单组分配方，或采用其它合适的配方。制备含30毫克活性组分的药片核心和糖衣药丸核心，加入70毫克赋形剂(例如单粒剂)(granulatum simplex)。
实例42制备胶囊最好使用自动填充机。将活性组分与合适的助剂(例如单粒剂)或任何其它惰性添加剂一起粒化，制备适当大小的颗粒。然后过筛，装入胶囊。胶囊中的活性组分含量达30毫克。
实例43制备粉末安瓿制备粉末安瓿时，不再加入助剂，粉末安瓿中活性组份的含量要分别达到10和20毫克。溶剂安瓿含有1或2毫升蒸馏水或生理盐水溶液。最好用至少100毫升的浸剂稀释，并且在溶解之后，直接使用安瓿中之物。
实例44N-(氨基亚氨基甲基)-S-甲代烯丙基-异硫脲溴酸盐将14.9克N-(氨基亚氨基甲基)-硫脲碳酸盐悬浮在50毫升无水乙醇中，并加入16.1克溴代甲代烯丙烷。将反应混合物回流30分钟。过滤后，在真空下蒸样溶剂。得到21克象蜂蜜一样的产品，放置时则析出结晶。
实例45N-(氨基亚氨基甲基)-N′-烯丙基-S-烯丙基-异硫脲溴酸盐将17.6克N-(氨基亚氨基甲基)-N′-烯丙基-异硫脲碳酸盐悬浮于50毫升无水乙醇中，并加入14.5克溴代烯丙烷。在强烈搅拌下，反应混合物回流1小时，而后过滤该混合物，在真空下蒸出溶剂。得到23克油状粘性产品。
实例46N-氨基亚氨基甲基-S-烯丙基-异硫脲氯酸盐将含有4.2克二氰基肼，20毫升用盐酸饱和的乙醇以为3.7克烯丙基硫醇的混合物在强烈搅拌下缓缓加热到沸腾。反应混合物回流3个小时后冷却到0℃。过滤出沉淀的结晶，再用乙醇洗涤。由此得到7克所需的化合物，熔点为125～127℃。
权利要求
1.制备具有通式Ⅰ的盐和化合物的方法，
(其中R1是C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C3-6环烷基，芳烷基或芳基，这些基团可任意被一个或多个羟基，巯基和/或卤素取代，R2表示氢，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基或C3-6环烷基；X表示一种有机或无机阴离子。)该方法包括a)将通式Ⅱ的化合物或其合适的盐与能够引入R1基团的烷基化试剂的反应，最好与通式为R1-Y的化合物反应(其中R1如上述定，Y表示残留基团，最好是卤素)；或者，
(其中R2如上述定义)b)将通式Ⅲ化合物与通式为R1-SH的硫醇反应(其中R1如上述定义)，并且如果需要的话，将由此得到的具有通式Ⅰ的化合物与通式为HX(其中X如上述定义)的酸进行反应，转变为该化合物的盐。
2.根据权项1所述方法，其中所用原料为通式Ⅱ化合物的盐，最好是碳酸盐。
3.根据权项1或2所述方法，其中使用卤代烷或二烷基硫酸盐作为烷基化试剂。
4.根据权项1、2或3所述方法，其中该反应在有机溶剂的存在下进行，最好是在醇，脂肪族酮，腈和/或醚的存在下进行。
5.根据权项1所述方法制备通式Ⅳ的化合物，其中的反应物为等克分子，或过量使用通式为R1-SH的硫醇。
(其中R1如权项1中的定义)
6.根据权项1至5中任一项的方法制备的通式Ⅰ化合物。
7.这里主要揭示的方法，特别参考实例。
8.制备药用组合物的方法，该方法包括将至少一种通式Ⅰ的化合物或其盐以其一种可药用的盐的游离碱的形式与适当的惰性药用载体和/或赋形剂进行混合，通式Ⅰ中，R1，R2，X如权项1所述。
专利摘要
通式(Ⅰ)异硫脲盐的制备方法，该盐由通式(Ⅱ)化合物与能够引入R
文档编号A61P9/00GK85103160SQ85103160
公开日1986年9月17日 申请日期1985年4月24日
发明者萨伯·佛特斯, 阿帝拉·莫尔纳, 拉朱斯·古朱奇 申请人:波兰马托尼·维吉柏力·维拉拉特导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan