专利名称:促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂的制备及其生产方法和应用的制作方法
由细胞培养试验已知，Ca2+-离子对细胞分裂有影响，(国家科学院学报，70，675-679页)。此外通过提高细胞外的k+-浓度可以达到膜电位的去报化作用也是已知的。但这些效应对伤口肉芽生长和上皮形成的影响至今没有为公众所知。但大量的试验已经表明，在细胞的培植中，找到的最佳Ca2+-浓度和较高的Ca2+-浓度对伤口治疗既没有促进影响也没有阻止影响。
既使同时作到保持一种细胞外的最佳的Ca2+-浓度，在细胞外围额外增加的生理钾数量，对伤口治疗也没有促进的效果。
现在出乎意料的发现，Ca2+和k+离子一起，以完全一定的浓度比例对伤口肉芽生长和上皮形成有一预料不到的好作用，在理想克分子的情况下并且作用很强烈，因此以结合形式使用是一种有价值的促进伤口治愈的制剂。
若对伤口表面直接用一含水的电解液包扎，该电解液含有，以这种电解液含有的水为基准，20至100mM Ca2+-离子和25至60mM k+-离子，则可以得到本发明的浓度比例。
电解液本身可以由伤口分泌物和/或由一种附加在伤口上的含水药剂构成。
在第一种情况，使生理上相容的可离子化的Ca-盐和k-盐与一固体载体一起，按克分子比1∶3至4∶1，以这样的数量敷在伤口上，在伤口分泌物的溶液中使Ca-盐和k-盐形成上面所指定的浓度范围。但因为谈到的伤口分泌物的数量可以有很大波动，并不能准确估计到，因此用干凝胶，药粉，离子交换剂，羊毛浸渍过的绷带材料，聚糖类，或类似的干燥药剂不是总能确保达到本发明的浓度范围，并能维持一段较长的时间的。
因此这样一些药剂还是比较适宜的，这些药剂虽然是以干燥形式生产出来的，并且部分地也以这种形式在商业上销售，因之也决定了，在服用前要掺入相当准确的定量的水。在这种药剂吸收了掺入的水量，并且使Ca2+-盐和k+-盐分离以后，再将它置于伤口上。属于这种情况的例子，如干凝胶根据西德公开说明书28 49 570。
也有混合形式的，在这种形式中，干的载体一开始就用水润湿，水中含有按所要求的比例溶解的Ca2+-离子和k+-离子。属于这种形式的例子有离子交换剂，适用于凝胶色谱的凝胶(分子筛)，或者简单的固体的，例如被润湿的，并密封消过毒的纺织品的伤口复盖物。
最后提到的药剂本身是典型的含水药剂。对比可以理解为这样一些制剂，特别是以水作为载体起作用的制剂和有时含有除了其他的辅助物和或有效物以外浓度为20至100mM或25至60mM的Ca2+-离子以及k+-离子的制剂。优先选用的范围在这里是25至35mMCa2+-离子和35至45mM k+-离子。特别选用的比例定30mM Ca2+-离子和40mM k+-离子。
作为含水药剂考虑所有含有水份的，可以调整发明克分子离子浓度的药物制剂。除了简单的水溶液、洗液或油在水中的乳化液以外，粘稠溶液，分散系统和泡沫也属于这一类。
上面所述及的凝胶类药剂，例如像聚丙烯酰胺/琼脂-凝胶是特别适合伤口的，因此是优先选用的。
对于上面谈到的制剂，优先选用了一种制造方法，该方法的特微是以已知方法，向一含水的药物载体中，除了其他的辅助物和或有效物外，以所含水为基准，作为有效物加入浓度直至20至100mM的Ca2+-离子和25至60mM的k+-离子，Ca2+和k+离子生成在药理上相容的盐，并且这些离子均匀的分布在水相中。
作为药理上相容的盐类主要是考虑氯化物和磷酸盐，但也可以使用其他的无机的和有机的盐，例如像柠檬酸盐，马来酸盐，琥珀酸盐或类似的盐类，只要是它们与细胞组织是相容的可分解的。
在含水液的药剂情况下，将水相调至等渗压是适合的。为了避免外界离子，可以选用葡萄糖来进行。阳离子的电解质的效果，除了添加的Ca2+和k+外，还没有研究过。在许多情况下，向水相中为提高电解质对皮肤的渗透性添加表面活化剂，也是适宜的。
因为上面提到的制剂作用仅仅要求以Ca2+和k+-离子在细胞外空间中的离子比例为基础，所以不言而喻的，这样一些凡含有提到的离子作为唯一的有效物质的制剂也是完全有效的。但在有些情况下，添加一些其他的有效物也是受欢迎的，例如像抗生的或抑制真菌有效的制剂或表面麻醉剂。
在所叙的制剂机理试验中进一步发现，不只是在Ca2+和k+-离子存在时，有促进伤口肉芽生长和上皮形成的积极作用，而且往往是在提高了血浆膜的钙渗透性，并因此能使Ca2+-离子流入细胞以后，才有这种促进的积极作用的。这不但能够作到，如上所述，在一种药理上相容的载体上，有时除了其他的有效物质和/或辅助物质外，均匀分布0.2至10重量百分数的一种有效物的混合物，该混合物是由在药理上相容的可离子化的Ca2+和k+盐，Ca2+∶k+克分子比为1∶3至4∶1所组成，并借此用k-离子打开所提到的血浆膜中的钙的通道，而且也可以作到，不用所叙述的有效物的混合物，或者使一种浓度为3×10-8至3×10-6M的Ca2+-离子载体与浓度为0.1-50mM的钙盐结合一起，或者使浓度为10-5至10-9M的一种钙-兴奋剂，在浓度为5×10-3至2×10-2M的k+-离子和浓度为10-3M至3×10-2M Ca2+的存在情况下，均匀的分布在一药理上相容的载体上，得到的制剂用作伤口治疗剂。
Ca2+-离子载体是一些化合物，这些化合物渗透过血浆膜对钙是有选择性的。
例如这样一种离子载体是开始以A23 187表明的已知的抗生素6S〔6α(2S＊，3S＊)，8β(R)＊，9β11α〕-5-甲基氨基-2-〔3，9，11-三甲基-8-〔1-甲基-2-氧代-2-(1H-吡咯-2-基)-乙基丁-1、7-二氧杂螺旋〔S，S〕+一-2-基〕甲基〕-4-苯并噁唑-羧酸。〔赫希斯特，文档号8154-1082〕按照发明，A 23 187与钙一起，在浓度为3×10-8至3×10-6M时起作用，在这当中，为了保证足够的Ca2+-流入细胞中，在细胞外的钙盐，必须处于浓度为0.1至50mM。
因为原则上是通过血浆膜供给细胞以钙，所以本发明的较迅速的治愈伤口的效果，同样可以通过所有其他的Ca2+-离子载体达到。
因为Ca-兴奋剂也提高血浆膜的钙渗透性，所以它的作用也定如此。在有钾存在的情况下，通过Ca-兴奋剂打开了钙的通道。但在按照发明使用Ca-兴奋剂时，只需要使用很少的钾，所以，尤其在大面积烧伤时，不致破坏钾的平衡。对于使用纯的Ca++和k+离子来说，如上面对它所描叙的那样，这是一种改善。
钙-兴奋剂的最有效的浓度范围是10-5至10-9M。所需钾的浓度处在5×10-3至2×10-2M范围内，钙-浓度应处在10-3M和3×10-2M之间。
一种这样的钙-兴奋剂，例如是物质拜克(Bag k)8644，关于这种物质早已公知，它刺激钙-流入细胞中〔参阅例子，药剂研究/药物研究，33(11)9号(1983)以及生物化学和生物物理研究通讯，(1984)118、3号，842-847页〕。
使人最出乎意料的是，在细胞内部钙是伤口肉芽生长的一个重要因素。在细胞外的空间中钙的浓度，没有本发明制剂提高渗透性，也决没有治愈伤口的作用。通过加入一种钙的螯合物如乙二醇-双(β-氨基-乙基)-N，N，N，N-四乙酸(EGTA)取走钙，在细胞外部空间提高钙的浓度大约为生理浓度的二十倍，都不能导致伤口肉芽生长的改变。因此专业技术人员可以得出结论，钙对伤口肉芽生长没有重要的关系。
因此本发明的主题是促进伤口肉芽生长和上皮形成的一种局部的医疗制剂，含有一种在药理上相容的载体和一种有效物，该制剂通过特微表明，有效物提高了血浆膜的钙渗透性，并且或者a)以载体为基准，由0.2至10重量百分数的可离子化的在药理上相容的Ca2+和k+盐类所组成，Ca2+∶k+克分子比1∶3至4∶1或者b)由一浓度为3×10-8至3×10-6M的Ca2+-离子载体与一浓度为0.1至50mM的钙盐结合一起所组成，或者c)在浓度为5×10-3至2×10-2M的k+-离子和浓度为10-3M至3×10-2M的Ca2+-离子存在情况下，由一浓度为10-5至
10-9M的钙-兴奋剂所组成。
本发明的另一主题是促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药剂的一种制造方法，该方法的特微在于，有时除了其他的有效物和/或辅助物外，将一种有效物a)，b)或c)均匀分布在一种在药理上相容的载体上，以及使用这种所表明的药物制剂促进伤口肉芽生长和上皮形成。
图形可以进一步说明发明的主题由图1可以看出，伤口肉芽组织的形成基本上与细胞外的钙浓度无关。
由图2表明，提高渗透性的有效物质A23187，在细胞外围空间中存在钙离子，浓度在10-7和3×10-6M之间时，特别是在浓度为3×10M时与比较试样相比，伤口肉芽生长有明显提高。若在细胞外的空间利用EGTA去掉Ca2+减少细胞中的Ca2+-浓度，并且少用作为提高渗透性药剂的A23187时，则伤口肉芽生长明显降低。这个试验表明，肉芽组织的形成，伤口治愈的前提条件，与细胞的Ca2+-含量有很强的依赖关系，若使用本发明的提高渗透性的药剂提高细胞的Ca2+-含量，则伤口肉芽生长可以显著的提高。
作为图1和2基础的试验，是以下列方式进行的。
割断豚鼠的脊部皮肤直至结缔组织膜，在伤口中缝入一直径为21mm的聚四氟乙烯环。由此可以阻止伤口的上皮愈合。在背部肌肉的结蒂组织膜上，该结蒂组织直至手术时没有肉芽组织，连续三天敷上一含水的含有规定浓度的有效物的聚丙烯酰胺-琼脂凝胶。三天以后，当肉芽生长到最佳状态的时候，用一锋利的小勺摘除全部肉芽组织，称重和进行组织发生学处理。
在使用一浓度为30mM Ca2+离子和40mMk+离子的方法a)中，在这当中，由于等渗压的原因，向凝胶中掺入了0.9重量-%的NacL，可以得到明显的肉芽组织生长数量的增高，直至大约180%。组织发生学的对比试验表明了一种真正的细胞增殖，不只是细胞的体积增加。
下边的例子用来进一步说明发明例1等渗压的溶液在100毫升量瓶中放入80毫升的净水，然后在电磁搅拌器搅拌情况下，加入20毫克苯亚甲基毒芹氯化物，并溶解，接着先后加入0.3克氯化钾，0.44克氯化钙(两种盐一起PH、Eur、Ⅰ)和2.62克葡萄糖-水合物(PH.EurⅡ)。将烧瓶在水浴中加热至20℃，接着注入纯的同样为20℃的温水至刻度记号处。然后将溶液经一孔径为0.2mm内径的薄膜过滤器无菌过滤，并且无菌灌入容器。
〔0.29822克kcL～40mMCL k+0.44106克CacL2～30mMcL Ca2+〕
例2油在水中的乳化液在第一个配方中，用7克由饱和脂肪酸，脂肪醇，羊毛腊，石油和非离子的乳化剂所组成的混合物与2.5克聚乙二醇甘油脂肪酸脂，3克硬脂酸的和棕榈酸的单酸单油脂，0.3克十六烷基醇和3克异丙基棕榈酸盐，通过在水浴中加温至70℃使均匀熔化。
在第二个配方中，在搅拌情况下，将80克的净水与3克丙二醇混合，并加温至70℃。然后将这样得到的混合物掺入0.3克氯化钾，0.44克氯化钙和0.2克防腐剂。得到的透明溶液，在70℃在搅拌下，加入到第一配方中进行乳化。这样得到的乳化液冷却至40℃，补足由于蒸发损失的水分。然后将冷却至30℃的乳化液灌入容器。
例3透明的液体绷带材料(凝胶片)配方A3.5克丙烯酰胺和0.091克双丙烯酰胺溶于100毫升的净水中。然后将溶液升温至60℃。
配方B0.3克氯化钾和0.44克氯化钙，溶于100毫升的净水中，并掺入0.2克防腐剂。加入2克琼脂(OEAB9)以后，在电磁搅拌器搅拌情况下，将溶液煮沸，然后冷却至60℃。
接着在60℃在搅拌情况下，将配方A和B混合。然后加入0.045克氨过氧化物二亚硫酸盐和0.045克(60ML)四甲撑二胺。经短时间的积极搅拌以后，将其倒入特里培养皿中，该培养皿事先已在温箱中加热至60℃。然后将特里培养皿贮存于56℃的温箱中30分钟。接着将其冷却至室温，并将培养皿与得到的透明硬化片放在-4℃温度下的箱中24小时进行熟化。这样得到的片可以直接敷盖在伤口上。
例4可涂敷的凝胶将94克净水加热至70℃，并掺入0.3克氯化钾和0.44克氯化钙。在加入0.2克防腐剂以后，使5克甲基羟乙基纤维素分散在所得的溶液中，然后在搅拌下冷却。在冷却以后，得到一具有粘度为90秒的高粘度的充满空气泡的凝胶，该凝胶可以直接用于伤口处理。
例5纺织品的伤口敷盖物将4×4cm大小和5mm原无菌漂白薄纱布片，按照例1浸入无菌的渗透溶剂中，接着将溶液挤出，使布片不再滴液为止。然后将这样得到的布片在无菌的条件下与聚乙烯薄膜焊接在一起。
例6带有A23 187的可涂敷的凝胶将1000克净水加热至70℃，掺入1.6mg A23 187和560mg氯化钙。在加入2克防腐剂以后，将50克甲基羟乙基纤维素分散到制得的溶液中。然后在搅拌下进行冷却。冷却后得到一具有粘度为90
、钞充满空气泡的高粘度的凝胶，该凝胶可以直接用于伤口处理。
例7带有拜克(Bag、k)8644的可涂敷的凝胶1000克净水加热至70℃，掺入1.49克kcL，3.3克CacL2和3.56mg拜克(Bag k)8644。在加入2克防腐剂以后，将50克甲基羟乙基纤维素分散于所得到的溶液中，并如例1所述的进行加工。
权利要求
1.含有一种在药理学上相容的载体和一种有效物质，促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂，其特微在于，有效物质提高了血浆膜的钙渗透性，或者a)以载体为基准，由0.2至10重量百分数可离子化的在药理学上相容的Ca2+和K+盐，以Ca2+K+分子比为1∶3至4∶1的混合物所组成，或者b)由浓度为3×10-8至3×10-6M的一种Ca2+-离子载体与浓度为0.1至50mM的钙盐结合所组成，或者c)在浓度为5×10-3至2×10-2M的K-离子存在情况下，由一浓度为10-5至10-9的钙兴奋剂与浓度为10-3M至3×10-2M的Ca2+所组成。
2.按照权利要求
1的药物制剂，其特微在于，该载体主要是由水所组成。
3.按照权利要求
1和2的药物制剂，其特微在于，该载体以一种含水的凝胶形式存在。
4.按照权利要求
1的制剂，其特微在于，于凝胶用作载体。
5.按照权利要求
1a)的制剂，其特微在于，制剂，以所含水为基准，含有20至100mMCa2+-离子和25至60mM k+-离子。
6.按照权利要求
5的药物制剂，其特微在于，制剂含有约30mM Ca2+-离子和约40mM k+-离子。
7.促进伤口肉芽生长和上皮形成的局部药物制剂的生产方法，其特微在于，有时除了其他的有效物质和/或辅助物质以外，将按照权利要求
1，5或6之一的一种有效物质a)，b)或c)均匀的分布在一在药理上相容的载体中。
8.按照权利要求
7的方法，其特微在于，载体主要由水所组成，并且除了其他的辅助物/或有效物以外，有时向载体中，以所含水为基准，添加直至浓度为20至100mM的Ca2+-离子和25至60mM k+-离子，并且使这些离子均匀的分布于水的药物基质中。
9.按照权利要求
1至6之一的制剂的应用，促进伤口肉芽生长和上皮形成。
专利摘要
该药剂含有一种在药理上相容的载体和一种有效物质，特征在于，有效物质提高了血浆膜的钙渗透性，并且或者
文档编号A61K47/00GK85103399SQ85103399
公开日1986年12月10日 申请日期1985年5月14日
发明者罗兰得·尼德纳, 迪特尔·玛尔梅, 埃尔温·舍普夫 申请人:歌德克股份公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan