专利名称:5-嘧啶甲酰胺类衍生物的制备方法
本发明涉及新的5-嘧啶甲酰胺类，及其药物学上可接受的加成盐类与核苷类。更具体地说，本发明涉及具有抗白学病活性的5-嘧啶甲酰胺衍生物，涉及含此类衍生物作为治疗有效组份的药物组合物，涉及用这类衍生物导致哺乳动物白血病缓解的方法。
本发明新的取代的5-嘧啶甲酰胺类具有以下通式
式中，R1为氢或含1-4个碳原子的烷氧基;
R2为氢或糖基;
R3和R4为氢，或当R1为氢时，R3或R4之一可为氟;及其药物学上可接受的加成盐类。
可用各种各样的药物学上可接受的有机与无机的成盐试剂形成的加成盐。实用的加成盐可由有机酸与一个当量的碱混合制成，碱例如有机胺，如三乙胺或N-甲基葡糖胺，和无机阳离子，如钠、钾等。本发明有机酸的加成盐一般是在极性和非极性溶剂中都较难溶解的晶态固体。这里所说的极性溶剂如水、甲醇、乙醇，非极性有机溶剂如乙醚、苯、甲苯等。上述加成盐在质子惰性溶剂如二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中稍溶。
另一方面，当R2为糖基时，它可为呋喃糖基(如呋喃核糖苷)、吡喃糖基(如阿糖吡喃糖基、吡喃葡萄糖基、吡喃半乳糖基)、它们的脱氧衍生物，或其脂肪族类似物(如在每个烷氧基与烷基中含2-12个碳原子的羟基烷氧基烷基或多羟基烷基，如2-羟基乙氧基甲基或2，3-二羟基丙基)。这里用的“糖基”一词，是指那些形成嘧啶核苷类或假核苷类的环状的与非环状的基团，例如上文规定的含环状与非环状基团的那些物质。
本发明的5-甲酰胺类既能以上述通式的形式存在也能以其任一互变异构形式而存在。为了便于理解，本发明的化合物在这里只以上述通式的形式加以说明，但这应理解为包含其互变异构体或互变异构体的混合物。
本发明5-嘧啶甲酰胺的一般制备方法是使4，6-二羟基嘧啶或适当的4，6-二羟基-2-烷氧基嘧啶与异氰酸苯酯或适当取代的异氰酸苯酯，在溶剂或分散介质存在下进行反应。这里用的溶剂或分散介质如二甲基亚砜、吡啶、二甲基甲酰胺、N-甲基-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、四氢噻吩砜、四氢噻吩氧化物、乙腈、或是叔胺，如三乙胺。嘧啶与异氰酸苯酯反应物的摩尔比约为2∶1到1∶2，最好是约1.1∶1到1∶1.1就能满足需要。反应可在温度范围约为0℃到200℃下进行，通常约为24℃到160℃。在多数情况下，反应在约80℃到100℃下进行得相当好。反应时间约在0.5到6小时之间，通常在约2-4小时内5-甲酰胺的生成能基本完全。
另一方面，可参考共同审查中的美国专利申请号699，776，1985年2月8日(5933K ON1A)中所描述的方法，用阮内镍还原相应的2-硫代-5-嘧啶甲酰胺来制备5-嘧啶甲酰胺。尤其是，氟代苯基取代的5-嘧啶甲酰胺可按此法从相应的N-(2-氟代苯基)-或N-(4-氟苯基)-取代的2-硫代-5-嘧啶甲酰胺而制得。
2-烷氧基-5-嘧啶甲酰胺类也可由氧-烷基假脲与适当的取代的2-芳酰基氨基丙二酸二酯(由丙二酸二酯与适当的取代或未取代的异氰酸芳酯反应而制得)反应来制备，例如，[(苯基氨基)羰基]丙二酸二乙酯，并分离与回收所得的产物。
本发明新的化合物属于细胞毒药剂，可导致血液恶性肿瘤，如白血病的缓解。这些化合物既可单独使用，也可与其它为此目的有效的化疗药合并使用。这里的“缓解”与“抑制”，是指与未经治疗的病程相比，能阻止或延缓恶性肿瘤或其它病症的发展。
业已发现，新的取代5-甲酰胺对小鼠的用药剂量约为10-200毫克/千克体重，最好是约25-100毫克/千克体重，对缓解白血病有效。Freireich，E.J.等在Cancer Chemotherapy，Reg，50，NO，4，219-244，1966年3月上描述了其它大小与种类的哺乳类动物的剂量的互相关系，抗癌药剂对小鼠、大鼠、仓鼠、狗、猴和人的毒性的定量比较。
为了达到最佳的治疗反应，剂量标准当然可加以调整。例如可将每日服用剂量分成几次服用，或根据治疗情况的变化，剂量可按比例减少。
活性化合物适合于非肠道给药、静脉注射或口服。活性化合物可制成水溶液或水分散液，与表面活性剂，如羟丙基纤维素混合比较合适。也可在甘油、液态聚乙二醇及其混合物和油类中制成分散液。在普通的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以制止微生物的生长。
适于注射用的药物形式包括无菌水溶液或无菌水分散液，和为临时制备无菌注射液或分散液用的无菌粉剂。这种应用形式须经灭菌，并须有足够的流动性以保持灌注性能。在制备与储存条件下应当稳定，对微生物，如细菌与真菌的污染应当能防护。
载体可为溶剂或分散介质，包括如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙烯醇和液态聚乙烯醇等)、及其适当的混合物和植物油。借助诸如卵磷脂之类的涂层，分散体所需的颗粒直径的保持，或借助表面活性剂可以保持合适的流动性。可用不同的抗细菌和抗真菌药剂，如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等来阻止微生物的作用。许多情况下最好包含剂量形式的等渗剂，如蔗糖或氯化钠等。使在注射配方中掺入延迟吸收剂，如单硬脂酸铝与明胶，可延长注射剂的吸收作用。
无菌注射液的制备方法是将活性化合物与适当的溶剂混合，混入上列其它各种组份，必要时再进行过滤灭菌。一般说来，分散液的制法是将灭菌的活性组份与含分散剂及其它必要组份的无菌载体混合。另一方面，当用无菌粉剂来制备无菌注射液时，则所需组份的无菌过滤的溶液须真空干燥或冷冻干燥后，得到含活性组份及其它必要组份的粉剂。
这里用的“药物学可接受的，实质上指无毒的载体或赋形剂”包括溶剂、分散剂、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂与吸收延缓剂等。上述介质与药剂是本行业熟知的。与活性组份不相容或有毒的载体或赋形剂除外，用于本发明治疗配方中的载体或赋形剂是经认真研究过的。在治疗用的组合物中也可加入补加的活性组份。
为了易于服用与剂量均一性，按本发明的组合物配制成单位剂量形式更为有利。这里所用的单位剂量形式是指物质上连续的单位，用作对所治疗的哺乳类动物的单位剂量。每一单位内含有预定量的活性物质(这一预定量是根据所需产生的治疗效果计算出来的)，与所需要药物适宜的载体结合。单位剂量形式的规格按下列因素直接取决于下列因素(a)活性物质的特性及预期达到的特定疗效，(b)为治疗在疾病条件下活体的病症而又无严重的细胞毒付反应，要配制这样一种活性物有其技术上雇有的局限性。
白血病的缓解可以达到如应用日剂量5-10天或更长时间，多种剂量或任何所需周期的剂量也可应用。这样给药的结果治疗活性组份在药量上对帮助缓解与抑制白血病的进一步发展是充分的，同时不致有严重的细胞毒性质的副作用。
5-甲酰胺类中最好的是3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶甲酰胺3，4-二氢-6-羟基-2-甲氧基-4-氧代-N-苯基-5-甲酰胺;N-(4-氟代苯基-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺;N-(2-氟代苯基)-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺。
实施例13，4-二氢-6-羟基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶甲酰胺于浓氢氧化铵水溶液(400毫升)和水(400毫升)中加入1，2，3，4-四氢-6-羟基-4-氧代-N-苯基-2-硫代-5-嘧啶甲酰胺(13.2克)此化合物是根据前述共同审查中的美国专利申请号699，766的实施例1中描述的方法制备的)。使嘧啶溶解，于此溶液中加入阮内镍水浆(50克)，悬浮液在搅拌下缓缓回流4小时。冷却，用稀盐酸处理由产物与无机物组成的固体，过滤，固体用二当量浓度的氢氧化钠溶液萃取所得的固体并过滤。然后用稀盐酸酸化滤液，所得沉淀再溶解于氢氧化铵水溶液中，用活性炭和硅藻土纯化，用稀酸使之再沉淀。收集固体，水洗并干燥。产量5.8克，熔点200～208℃。质谱231，计算值231;核磁共振谱(DMSO)，6.8-7.7δ(芳香族峰);8.28δ(2-H原子;11.8δ(可交换的质子)。
实施例23，4-二氢-6-羟基-2-甲氧基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶甲酰胺于4，6-二羟基-2-甲氧基-嘧啶(6克)的干燥二甲基亚砜溶液中加入三乙胺(5.9毫升)。溶液加热到60℃后加入异氰酸苯酯(5克);溶液在80-90℃下保持两小时。冷却后缓缓加入水使之发生沉淀。
得到米色的固体产物，熔点164～168℃，分析C H N O的计算值C，55.17%;H，4.21%;N，16.09%;
实测值C，54.84%;H，4.21%;N，5.85%;
质谱，计算值261，实测值261。核磁共振谱(DMSO)3.93δ(单峰，积分3);7.1-7.7δ(复杂单峰，积分6);14.2δ(单峰，积分1)。
实施例3N-(2-氟代苯基)-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺于浓氨水(200毫升)与水(200毫升)的混合物中加入7.2克的原料N-(2-氟代苯基)-1，2，3，4-四氢-6-羟基-4-氧代-2-硫代-5-嘧啶甲酰胺(此原料是根据前述共同审查中的美国专利申请号669，776的实施例1中描述的类似化合物同样的方法制备的)，于所得混合物中加入阮内镍(26克)。悬浮液缓缓加热(至80-90℃)6小时，然后冷却。加入浓盐酸直到反应混合物完全酸化，阮内镍开始溶解为止。当不再放出氢气时，收集固体，用水与乙醇洗涤滤饼，然后重新悬浮在乙醇(50毫升)中。悬浮液加热接近沸腾。收集固体，用少量乙醇和乙醚洗涤，然后干燥。产物为4.2克的灰色粉末，无明显熔点，在≥240℃时分解。核磁共振谱和质谱与预期的结果符合。
实施例4N-(4-氟代苯基)-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺于浓氨水(200毫升)与水(200毫升)的混合物中加入7.2克的原料N-(4-氟代苯基)-1，2，3，4-四氢-6-羟基-4-氧代-2-硫代-5-嘧啶甲酰胺(此原料是根据美国专利申请号669，776的实施例1中所描述的类似化合物同样的方法制备的)。在所得混合物中加入阮内镍(26克)。悬浮液缓缓加热(至80-70℃)6小时，然后冷却。加入浓盐酸直到反应混合物完全酸化，阮内镍开始溶解为止。当不再放出氢气时，收集固体，用水与乙醇在滤饼上洗涤，然后重新悬浮在乙醇(50毫升)中。悬浮液加热到接近沸腾。收集固体，用少量乙醇和乙醚洗涤，然后干燥。产物为4.2克的灰色粉末，无明显熔点，在≥240℃时分解。核磁共振谱和质谱与预期的结构符合。
实施例1-4的化合物的抗白血病活性与其它5-嘧啶-甲酰胺在缓解腹腔(i.p)内植入淋巴白血病L1210的作用比较。
在实施例1-4的试验化合物的样品与其它类似结构的取代的5-嘧啶甲酰胺类的试样，根据国家癌症研究所试验议定书3LE31(NCI议定书1.100，癌症化疗报告第3部分第3卷第二期，1972年9月)进行体内试验，以测定这些化合物对腹腔内植入的L1210白血病(J.Nat′l.Cancer Inst.13(5)1328，1953)的作用。每项试验包括向6只DBA/2小鼠植入白血病细胞，每次实验一种性别的动物，雄性小鼠体重最小为18克，雌性小鼠体重最小为17克，全部试验动物的体重变化范围在3克之内。试验化合物在肿瘤植入一天之后，在0.1毫升剂量的稀释的腹水液(每剂量105个细胞)中用腹腔注射法给药，每日给药连续9天。
在30天的试验期间，每天称重试验动物并记录残存者。治疗动物与对照动物生存时间的比值(T/C)以百分率的形式求出。
按每个试验化合物所得到的结果，以不同的剂量标准来进行上述试验。在3LE31试验系统中，业已统计地测出初始T/C值应至少等于125%，才能显示试验化合物的活性，重复的T/C等于或大于125%，有必要进一步加以研究。重复的T/C值达到150%或更高时，就看作有明显的活性。
试验结果概括在表Ⅰ中
用上述3LE31议定书试验另外的对照化合物3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶硫代甲酰胺(对照物T)，这一实施例1化合物的硫化类似物在体内试验没有活性。它显示以下活性剂量(毫克/千克) T/C%200 98100 9650 9225 96通过3 LE31试验系统，实施例1-4的全部化合物都表现出能重复的抗白血病活性，有必要加以进一步研究(T/C＞125%)，另一方面其对照化合物没有一个显示活性。
除了3 LE31试验之外，实施例3的化合物还根据国家癌症研究所3PS31议定书(腹膜内入P388白血病)和3MBG5(肾下包膜人类乳腺癌MX-1异种皮移植)进行试验如下实施例3的化合物对缓解腹腔内植入的P388白血病的抗白血病活性根据国际癌症研究所试验议定书3PS31(癌症化疗报告第三部分第3卷第二期，1972年9月)对实施例3的试验化合物进行体内试验以测定其对腹腔内植入的P388白血病(美国病理杂志33卷3期，603页，1957)的疗效。每项试验包括在6只DBA/2小鼠中植入白血病细胞，每次实验用一种性别的动物，雄性小鼠体重最小为18克，雌性小鼠体重最小为17克，全部试验动物体重的变化范围在3克内。试验化合物在肿瘤植入一天之后，在0.1毫升剂量的稀释腹水液(每剂量106个细胞)中用腹腔内注射法给药，每日给药连续5天。
在30天的试验期内，每天称重试验动物并记录残存者。治疗动物与对照动物存活时间的比值(T/C)以百分率的形式求出。
以不同的剂量标准来进行上述试验。在3PS31试验系统中，初始T/C值必须至少等于或大于120%，才能说明试验化合物有中等活性。重复的T/C达到175%或更高，就认为具有明显的活性。实施例3的化合物显示下列活性;
剂量(毫克/千克) T/C% T/C%(重复)400 - -200 188 171100 158 14450 124 13425 128 127可见实施例3的化合物，在剂量低达25毫克/千克时也显示出抗白血病的活性(T/C%＞120%)。
实施例3的化合物对缓解肾下包膜人类乳腺癌MX-1异种皮移植中的比较试验根据国家癌症研究所试验议定书3MBG5(癌症化疗报告第3部分第三卷第2期，1972年9月)，将实施例3的试验化合物进行体内试验以测定其对肾下包膜人类乳腺癌(在1974年将经化疗的29岁妇女的原发性乳腺肿瘤进行外科移植)的作用。每次试验均涉及在无胸腺瑞士鼠或无胸腺随意饲养的小鼠的肾包膜下植入肿瘤碎片。每个试验组有6只小鼠，每个对照组有12只小鼠，每次实验用一种性别的动物。雄性小鼠体重最小为18克，雄性小鼠体重最小为17克，全部试验动物体重变化范围在4克之内。试验化合物在肿瘤植入一天之后，以腹腔注射给药，每四天重复1次，共注射3次。
在11天的试验期内，每天称重试验动物并记录死亡数。治疗动物与对照动物的平均肿瘤重量变化的比值以百分率(T/C)的形式求出，上述试验所用剂量不同。
业已测出初始T/C值应至少小于或等于20%，才能说明化合物的中等活性。重复的T/C值要小于或等于10%，认为具有显著活性。实施例3的化合物显示出下列活性剂量(毫克/千克) T/C% T/C%(重复)800 - -400 - 58200 33 51100 55 67业已发现实施例3的化合物在3MBG5系统中没有活性。
综上所述，可以看到根据本发明提供的一类新型的取代的5-嘧啶甲酰胺，这些化合物能够缓解和/或抑制白血病的发展。很明显，可以对本发明的治疗上有活性的化合物的制备和应用的方法可以有多种变动。上面所包括的内容只应当作例证，而本发明的范围，则应根据所附权利要求
书来理解。
权利要求
1.具有以下通式的5-嘧啶甲酰胺及其药物学上可接受的加成盐类的制备方法，
式中，R1为氢或含1-4个碳原子的烷氧基；R2为氢或从呋喃糖基、吡喃糖基、吡喃葡萄糖基或吡喃半乳糖基中选定的糖基，其脱氧衍生物以及每个烷氧基与烷基中含2-12个碳原子的羟基烷氧基烷基和多羟基烷基；R3和R4为氢、或当R1为氢时，R3或R4之一可为氟；该制备方法包括使4，6-二羟基-嘧啶或适当的4，6-二羟基-2-烷氧基-嘧啶与异氰酸苯酯或适当取代的异氰酸苯酯在有适宜溶剂或分散剂存在下进行反应。
2.权利要求
1的方法，其中4，6-二羟基-嘧啶或适当的4，6-二羟基-2-烷氧基-嘧啶与异氰酸苯酯或适当取代的异氰酸苯酯的摩尔比从2∶1到1∶2，反应在0到200℃的温度范围内进行。
3.权利要求
1的方法，其中所述5-嘧啶甲酰胺的R3和R4都是氢。
4.权利要求
1中所述通式的5-嘧啶甲酰胺的制备方法包括用阮内镍还原相应的2-硫代-5-嘧啶甲酰胺。
5.权利要求
4中所述5-嘧啶甲酰胺的制备方法，其中R3或R4之一为氢时，另一为氟，该方法包括用阮内镍还原相应的N-(2-氟代苯基)或N-(4-氟代苯基)取代的2-硫代-5-嘧啶甲酰胺。
6.权利要求
1中所述通式的5-嘧啶甲酰胺的制备方法包括用阮内镍还原相应的N-(2-氟代苯基)或N-(4-氟代苯基)取代的2-硫代-5-嘧啶甲酰胺。
7.权利要求
1中所述通式的2-烷氧基-5-嘧啶甲酰胺的制备方法包括用氧-烷基假脲与适当取代的2-芳酰基氨基丙二酸二酯进行反应
8.上述权利要求
1-4制备3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶甲酰胺的制备方法。
9.上述权利要求
1-4制备3，4-二氢-6-羟基-2-甲氧基-4-氧代-N-苯基-5-嘧啶甲酰胺的方法。
10.上述权利要求
4-6制备N-(2-氟代苯基)-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺的方法。
11.上述权利要求
4-6制备N-(4-氟代苯基)-3，4-二氢-6-羟基-4-氧代-5-嘧啶甲酰胺的方法。
12.一种制备药物组合物的方法，该方法包括用上述任一项权利要求
制备的产物与药物学上可接受的实质上无毒的载体或赋形剂混合。
专利摘要
用于缓解或抑制白血病发展的新的5-嘧啶甲酰胺，化合物具有下列通式
文档编号C07DGK86102767SQ86102767
公开日1987年1月7日 申请日期1986年4月22日
发明者阿瑟·D·布里沃, 约翰·A·米纳蒂利 申请人:尤尼罗亚尔化学公司, 尤尼罗亚尔有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan