专利名称：葡聚糖铁的制备方法
一种预防、治疗仔猪和牲畜缺铁性贫血的药品葡聚糖铁的制备方法。
众所周知，在家畜促长方面，葡聚糖铁对仔猪特别有效，因为仔猪一生下来普遍地严重缺铁，从母奶中获得的铁不能满足生长的需要，而缺铁会造成仔猪体弱多病、生长缓慢，因此国内外都对初生的仔猪进行补充铁质的注射。但是在目前所用于牲畜的葡聚糖铁由于平均分子量(10万～20万)，且含铁量低，注射容量大，造成多次注射和干扰群体，注射部位常有不良色斑;有的产品中重金属含量高，毒性大，据u.s4180567号专利介绍采用葡聚糖(dextran)为原料，经过降解、络合、精制、配制、包装、灭菌而成，但此法利用特微分子(分子量为4000～6000)的葡聚糖为原料，因而生产成本高，原料难得，且含铁量低，不到100mg/ml。英国1088829号专利提出了制备葡聚糖铁的方法，但该法需多次络合，分级沉淀，工艺复杂。英国虽生产出含铁量高达200mg/ml的产品，但重金属含量较高，且产品昂贵。因此，都迫切希望制备出一种含铁浓度高、粘度低，毒性小，生产成本低，效果好的产品，以满足社会的需要。
本发明者为了克服上述不足，经过反复认真研究，提出了把分子量在10000～15000的葡聚糖经过碱化、络合、精制、配制及灭菌便得到本发明所提出的葡聚糖铁。
根据本发明，所说的碱化就是把高分子量的葡聚糖进行降解至4000～6000的分子量。由于分子量过高或者过低都不能得到满意的络合物。本发明提出了在搅拌情况下，向装有蒸馏水的反应器中加入葡聚糖其加入量与蒸馏水之比为0.5～0.8∶1(以重量计，下同)升温到70～85℃，糊化半小时。碱化温度最好为55～65℃，搅拌0.5～1小时，再滴加碱性溶液。作为这类溶液有Na(OH)、Na2CO3、KOH、NH4(OH)、K2CO3等溶液。其使用浓度为30～40%，其加入量与葡聚糖之比为0.5～0.7∶1，加完碱液后，继续恒温半小时，再降至室温，用6N的盐酸中和，便得到PH为5左右的碱化葡聚糖液。
根据本发明所说的络合是把碱化葡聚糖液加入到反应器中与水溶性铁盐进行络合，作为这些铁盐有三氯化铁、硫酸铁、硝酸铁、高氯酸铁、三氯醋酸铁、醋酸铁、柠檬酸铁、柠檬酸铁铵、硝酸铁铵、甘油磷酸铁;其加入量以铁与葡聚糖之比为0.6～0.8∶1。由于三价铁是以氢氧化铁的形式与葡聚糖类进行络合的，形成的络合物为非离子型，溶于水形成胶体溶液，不是真溶液，只有在适当的条件下才能稳定。因此，本发明者提出了在向碱化葡聚糖液加入铁盐溶液的同时，还加入20%氢氧化钠溶液，使络合过程中的PH逐步提高，最终为7～8。同时用水浴控制络合温度，在70～100℃，最好为70～90℃，络合时间为4～8小时，最好为5～7小时，络合是在搅拌的情况下进行的，络合完毕后，再升温至水浴沸腾。保持半小时，再在半小时内降至50℃下，静置过夜后，便得到络合液。
根据本发明，所说的精制是指把络合反应后所得到络合液进一步去杂。由于络合反应除得到葡聚糖铁外，还有未反应完的葡聚糖、铁盐及生成的少量铁的氢氧化物沉淀。若不除去，就会使产品毒性增高。本发明者提出，将静置后的络合液过滤，然后用2～3倍(体积)滤液的酒精进行沉淀分离，再过滤并将沉淀物压干。压干物放入烧杯中再加入蒸馏水溶解。加入蒸馏水量至原络合液容量，待溶解完全后，再重复上述操作一次，所得沉淀物经在65～80℃左右温度下烘干，即为本发明，所提出的葡聚糖铁。
根据本发明所说的配制及灭菌是指葡聚糖铁经磨碎后装入容器中，加入一定量的苯酚、食盐和注射用水混合液，在一定温度下完全溶解后，配成含铁量为150mg/ml的葡聚糖铁注射液，再经过滤包装，于110～120℃(约1kg/cm2蒸汽压)下，蒸汽灭菌30分钟即为本发明所提出的产品。
根据本发明所提出的制备方法所制备出的产品具有含铁量高、重金属含量少、粘度低、毒性小、产品稳定。制备成本低，用于仔猪注射，可提高出栏率7%以上、增重率10～25%。
实施例1碱化在带有搅拌器和水浴加热的500ml三口烧瓶内，加入蒸馏水200ml，开动搅拌器，加入125g葡聚糖(分子量10000～15000，过80目)，升温到80℃，糊化30分钟，然后滴加50ml、40%的氢氧化钠溶液，加完碱液后，恒温碱化30分钟，即得到深棕色的溶液，再将温度降到室温，用6N盐酸中和至PH＝4.0，所得溶液即为碱化葡聚糖液。
络合于2000ml三口烧瓶中，加入碱化葡聚糖液，边搅拌，水浴升温75℃，同时滴加40%的三氯化铁溶液873.8ml，和20%的NaOH溶液807ml进行络合反应，滴加完毕后，再用20%NaOH溶液调PH＝7.5，然后升温至水沸腾，保持30分钟，再于半小时内将反应液降至50℃下，静置过夜。
精制将静置过夜的络合液，先用滤纸抽滤，再用3号垂熔玻璃漏斗抽滤，滤液计量后倒入烧杯中，并作出液面标记;再用2.5倍(体积)的酒精进行沉淀、布滤、压干得沉淀物倒入原烧杯中，加蒸馏水到原标记，使沉淀物完全溶解，重复上面过程再沉淀一次，所得沉淀经70℃烘干即为比较纯的葡聚糖铁。
配制及灭菌葡聚糖铁经磨碎，装入瓶中，加入1%的酚水357ml在85℃温度下完全溶解后，配成含铁量为150mg/ml的胶体葡聚糖注射液。再过滤，包装，于110～120℃下蒸煮灭菌30分钟即为样品1。
实施例2制备过程与例1同，但络合时水浴温度为80℃，加入的40%三氯化铁溶液为800ml，所得产品为样品2。
实施例3制备过程与例1同，但络合时水浴温度为85℃，加入的40%三氯化铁溶液为950ml，所得产品为样品3。
实施例4其它方法与1同，配制成含铁量为100mg/ml的制剂，即为样品4。
用化学法分析产品中络合铁、游离铁、氯化钠及杂质含量，测定PH值和粘度，其结果列于表Ⅰ，并与英国繁生公司产“血多素”和加拿大得士龙产“富来血铁针”进行对照。
表Ⅰ
由表Ⅰ可以看出，按本发明所提出的方法制备出的产品具有粘度适宜，符合注射用标准，铅、砷含量低、含铁量高等特征。
应用例1把出生2～3天后的仔猪，随机每窝仔猪分成两组。即一组作实验，一组对照，试验组每头注射样品1一毫升，对照组不注射，各组均于试验后20日采血测定其血液血红蛋白含量(g/dl)，各组仔猪均于试验时和45日龄离乳时分别称重，并统计其增重和存活情况。其结果列于表Ⅱ和表Ⅲ。
表Ⅱ仔猪注射样品1血液血红蛋白含量表
从表Ⅱ可看出注射本发明所提出的产品与对照组进行比较，血红蛋白增加77.47%。
从表Ⅲ和表Ⅳ可知，注射样品1后比对照组分别增重18.7%，存活率提高6.76%。
比较例实验方法与检测手段与应用例相同，用加拿大产“富来血铁针”作对照。其结果列于表Ⅵ、表Ⅷ。
表Ⅵ注射不同铁制剂仔猪血液血红蛋白含量表
从上表可以看出样品1比富来血、样品4的血红蛋白分别提高5.73%和2.85%。而样品4又比富来血提高7.45%。
表Ⅷ注射不同铁制剂仔猪增重表
接上表
从表Ⅶ可以看出，注射样品1后，仔猪的增重分别比样品4、富来血提高7.72%和3.65%，样品4比富来血提高3.09%。
表Ⅶ注射不同铁制剂仔猪存活表
从表Ⅶ中可以看出，注射样品1后，仔猪存活率分别比注射样品4、富来血提高3.17%和1.91%，而样品4又比富来血提高1.07%。
药理研究1>小鼠溶血性贫血的保护作用选用样品1与英国繁生公司(FISONS)生产的血多素和生理盐水进行对照。动物为昆明杂种小鼠30只，体重20～25g，均匀分为三组，按下表所示剂量iHqd×4，于未次给药后iH0.3ml，0.5%的盐酸苯肼溶液，隔天1次共2次，分别于投毒前、给药后、投毒后4天及8天，测定小鼠RBC及Hb。其结果列于下表
＊P＜0.05＊＊P＜0.012>对小鼠体重的影响取小鼠32只，体重15～18g，雌雄各半，均匀分为三组。盐水组12只，其余每组10只，共给药2次。实验期间每三天称体重一次，其结果列于下表
3>对小鼠肝、脾的影响取1投毒8天后小鼠脾脏称重、固定、常规制片、肝脏也按同法制片，其结果列于下表
从上述试验结果表明，样品1能增加正常小鼠RBC，对盐酸苯肼引起的RBC减少也有明显的对抗作用，对小鼠有明显的抗贫血及促进生长作用，与英国血多素相比无明显差别。
用小白鼠静脉肌肉注射样品1、2、3，采用Horn法测定小白鼠的LD50大于2400mg/kg体重，以急性毒性分级，属实际无毒级。
权利要求
1.一种制备葡聚糖铁的方法，其特征是用分子量为10000～15000的葡聚糖经过碱化、络合、精制、配制及灭菌后便得到含铁量为150mg/ml的葡聚糖铁注射液。
2.根据权利要求1所说的碱化其特征是在50～70℃最好为55～65℃，碱化时间为0.5～1小时，加入的碱溶液浓度为30～40%，碱溶液与葡聚糖之比为0.5～7∶1的条件下进行的。
3.根据权利要求1所说的络合，其特征是在铁与葡聚糖之比为0.6～0.8∶1，络合液最终PH值为7～8，络合温度为70～100℃，络合时间为4～8小时，最好为5～7小时的条件下进行的。
4.根据权利要求1所说的精制，其特征是在用2～3倍络合液的酒精，进行沉淀分离，过滤后将沉淀物压干，加入蒸馏水至络合液容量，溶解，再用2～3倍酒精沉淀分离的情况下进行的。
全文摘要
本发明是关于利用分子量为10000～15000的葡聚糖制备葡聚糖铁的方法，经过碱化、络合、精制、配制及灭菌后，便得到铁含量为150mg/ml的预防、治疗仔猪和牲畜缺铁性贫血的药品。经药理试验证明有明显的抗贫血及促进生长的作用。用于仔猪。可使仔猪增重10～25％，存活率提高7％以上。粘度适中。杂质含量少，制备方法简单，生产成本低。
文档编号A61K33/26GK1041762SQ8810721
公开日1990年5月2日 申请日期1988年10月14日 优先权日1988年10月14日
发明者刘荣动, 马振广, 张国强, 欧启川 申请人:广西化工研究所