专利名称：选择性腺苷受体剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一组是黄嘌呤衍生物并选择性地作用于腺苷受体的化合物。
有关腺苷的显著降血压、镇静、解痉及血管舒张作用早在50年前就首先被认识到了。其后，提出的有关腺苷的生物学作用明显地增加。在许多细胞中，腺苷受体似乎是与腺苷酸环化酶连接的。近年已来，为了研究这些受体功能，已介绍了多种腺苷类似物。烷基腺苷，如咖啡碱和茶碱是为人们熟知的腺苷受体拮抗剂。
腺苷可能代表一种一般性的调节物质，因为看来没有一种特定类型的细胞或组织专一地对其生成负责。就这一点来说，腺苷同各种内分泌激素不一样。没有任何证据说明神经或其他细胞能储存并释放腺苷。因此，腺苷不同于各种神经递质物质。
腺苷可能是与前列腺素差不多的生理调节剂。在两种情况下，参予代谢物生成的酶是普遍存在的，而且似乎是对细胞之生理状态的改变具有反应性。同前列腺素受体一样，腺苷受体也受证明是分布很广泛的。最后，前列腺素和腺苷两者似乎都与涉及钙离子之功能的调节作用有关。当然，前列腺素是由膜前体衍生的，而腺苷则是由细胞溶质前体衍生的。
虽然腺苷能够影响多种生理功能，但近年来已对其可能导致临床应用的作用给予了特殊的关注。突出的是腺苷对心血管的影响，其可导致血管舒张和血压降低，但也可导致心肌抑制。腺苷的抗脂解、抗血栓形成和解痉作用也已受到一定的注意。腺苷可刺激肾上腺细胞内的类固醇生成作用，并可能通过激活腺苷酸环化酶而发挥其功能。腺苷对中枢神经元的神经传递和自发活性具有抑制效应。最后，腺苷酸的支气管收缩剂作用和黄嘌呤对其产生的拮抗作用代表了一个重要的研究领域。
现已了解到，有不止一类而是至少有两类参予腺苷之作用的细胞外受体。其中一类对腺苷具有高度亲和力，而且至少在某些细胞内以抑制方式与腺苷酸环化酶相偶联。有些人已将其称为A-1受体。另一类受体对腺苷具有较低的亲和力，并且在许多类型细胞中以刺激方式与腺苷酸环化酶偶联。这些受体被称为A-2受体。
现已有可能以多种结构类似物来鉴定腺苷受体的性质。已能够得到对代谢和摄入机制有抗性的腺苷类似物。这些是特别有价值的，因为它们表现能力将不太容易受到由效应系统中代谢除去的影响。腺苷类似物在A-1和A-2腺苷受体上表现出不同级次的效力，因而为就腺苷受体的性质来说对区分生理学反应提供了一种简单方法。封闭腺苷受体(拮抗作用)则为在涉及腺苷受体方面区分某一反应提供了另一种方法。应提到的是，开发对A-1或A-2腺苷受体特异的拮抗剂，将代表本研究领域内和制备对动物具有特异性生理效应之腺苷受体选择性药剂方面的一项重要科研课题。
本发明涉及具有下列结构通式的化合物
包括其(R)和(S)对映体及外消旋混合物，以及其医药上可接受的盐，其中R1和R2各自是(C1-C4)低级烷基或(C2-C4)低级链烯基，Z是
R3是(C1-C3)低级烷基、硝基、氨基、羟基、氟、溴或氯，m是0或1至4的整数，n是1至4的整数，且X是H或OH。
本申请中使用的术语(C1-C3)低级烷基是指甲基、乙基、正丙基或异丙基。另外，本申请使用的术语(C1-C4)低级烷基是指甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。
本申请使用的术语(C2-C4)低级链烯基是指乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基等。
本申请所说的由R3代表的取代基可在苯基环2-6位的任何位置。环上可以有多达3个这样的独立取代，且其中取代基是氢以外的基团。
总地说来，本发明的化合物可以按下列反应流程Ⅰ和Ⅱ中详述的程序制得。
反应流程Ⅰ
所选择的其中R1和R2定义同前的适当烷基取代的起始化合物1，即6-氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，应是该R1和R2的定义与在终产物中所期望的一样。
将6-氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮悬浮于含20%乙酸的水中。分次加入溶于水中的亚硝酸钠(1.5当量)，同时用浓盐酸使溶液保持在中度酸性。将悬液搅拌几小时。然后过滤、用水漂洗并真空干燥后得到呈红紫色的、烷基取代的6-氨基-5-亚硝基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(2)。
然后将该烷基取代的6-氨基-5-亚硝基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮悬浮于水中，用50%氢氧化铵(pH≈11)制成碱性，并用过量连二亚硫酸钠处理，直到红紫色逐渐消退。然后用氯仿提取反应混合物。合并有机提取物并通过无水硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。用闪蒸层析法(溶于氯仿的5-10%甲醇)纯化残留物。然后由10%异丙醇/己烷中重结晶，得到烷基取代的5，6-二氨基-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮(3)(参见J.W.Daly，J.Med.Chem.，28，487，1985，该文已列为本文参考文献)。
然后按下列流程Ⅱ处理反应流程Ⅰ得到的化合物3。
反应流程Ⅱ
然后用2-烷基取代的链烷酸(4)-其中m、n、X和R3定义同上-处理烷基取代的5，6-二氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(3)。所选择的酸应是使其中m和n的定义与终产物中所预期者相同。应注意的是，由-CH-指定的碳原子呈现手性，并且所选的酸手性应与预期之终产物的手性相同。这样的酸的例子包括S-(+)-2-苯基丙酸R-(-)-2-苯基丙酸此外，可依下述方法制备其他的这类酸HOOC-(CH2)m-CH3+芐基氯＝HOOC-CHX-(CH2)n-CH3其中m是1至4的整数，n是m-1，X是有下列结构式的芐基基团
将酸溶解于四氢呋喃中并于室温下用2当量二异丙基氨基化锂处理。将反应混合物于40℃加热30分钟。然后用1当量芐基氯处理并于40℃下继续加热数小时。然后冷却至室温，倾入水中并用二乙醚提取。然后用1M盐酸酸化水相并用乙醚提取。通过无水硫酸镁干燥合并的有机提取物、过滤并浓缩之。用径向层析法纯化残留物(己烷中的40-50%乙酸乙酯，2mm板)以得到2-烷基取代的-3-苯基丙酸(4)。
能与苄基氯反应产生2-烷基取代的-3-苯基丙酸的酸的例子是正丁酸，正戊酸此外，可按反应流程Ⅲ制备其他这样的酸。
反应流程Ⅲ
选择适当烷基取代的丙二酸二乙酯(A)(其n的定义同上)，使其中的n具有如终产物中所期望的同样定义。于0℃下向四氢呋喃中的1当量氢化钠悬液中逐渐加入丙二酸。搅拌约30分钟后，加入1当量苄基氯，将反应物加热回流约3小时。然后冷却反应混合物，倾入水中并用乙酸乙酯提取。通过无水硫酸镁干燥合并的有机提取物、过滤并于空真下浓缩，得到烷基取代的苄基丙二酸二乙酯(B)。
然后用乙醇中的氢氧化钾水溶液处理烷基取代的苄基丙二酸二乙酯(B)并加热回流14小时。冷却后，用二乙醚提取反应混合物。然后用浓盐酸酸化水相并用二乙醚提取之。在无水硫酸镁上干燥合并的有机提取物、过滤并真空浓缩，以产生烷基取代的苄基丙二酸(C)。
然后将烷基取代的苄基丙二酸(C)溶解于乙腈中并用催化量的氧化亚酮处理之(参见M.Maumy，etal.，Synthesis，1029，1986)。然后将其加热回流5小时。再于真空下除去溶剂。将残留物溶解于二乙醚中并用10%盐酸洗涤然后再用饱和氯化钠溶液洗涤。在无水硫酸镁上干燥有机提取物、过滤并真空浓缩之。用闪蒸层析法(氯仿中的5-10%甲醇)纯化残留物，以得到2-烷基取代的-3-苯基丙酸(4)(参见反应流程Ⅱ)。
然后将2-烷基取代的-3-苯基丙酸(4)溶解在四氢呋喃中，用1当量N-甲基吗啉(NMM)处理并冷却到-20℃。加入1当量氯甲酸异丁酯并将反应混合物搅拌约30分钟。加入溶于二甲基甲酰胺的烷基取代的5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶(3)并于-20℃下将反应混合物搅拌4小时。加温至室温后，真空下除去溶剂。将残留物重新溶解于氯仿中并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤然后再用饱和氯化钠溶液淋洗。在无水硫酸镁上干燥有机提取物、过滤并真空浓缩之。用径向层析法(在氯仿中的3%至5%至10%甲醇)(在己烷中的10%至15%异丙醇)纯化残留物以得到酰胺(5)。
然后将酰胺(5)溶解于无水苯中并用6.5当量三乙基氧鎓四氟硼酸盐(在二氯甲烷中1M)处理之。将反应混合物于50℃加热约2小时。冷却后，将反应混合物例入磷酸盐缓冲液中并用二乙醚提取。用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，通过无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩之。用经向层析法(在氯仿中的3%至6%甲醇)纯化残留物得到亚氨醚(6)。
然后将亚氨醚溶于无水苯中并于氮气环境下加热回流约2小时。真空除去溶剂并用径向层析法(在己烷中的50%乙酸乙酯)纯化残留物，得到1，3-二烷基-8-取代的黄嘌呤(7)。
反应流程Ⅳ
可按上面的反应流程Ⅳ制备另一种2-取代的链烷酸。
将β-丙醇酸内酯(A)溶解于甲醇中并用1当量三乙胺处理以产生3-羟基丙酸甲酯(B)。用2当量二异丙基酰胺锂使化合物(B)转化成二价阴离子并用1当量苄基溴使之烷基化，以产生2-苄基-3-羟基丙酸甲酯(C)。作为叔丁基二甲基甲硅烷基醚(D)保护化合物(C)。用氢氧化钾使化合物(D)皂化并小心酸化以产生酸(E)。然后将酸(E)溶解于四氢呋喃中，用1当量N-甲基吗啉处理并冷却到-20℃。加入1当量氯甲酸异丁酯，然后再加入溶于二甲基甲酰胺中的1当量5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶，以产生酰胺。然后于70℃下用氢氧化钾水溶液处理该酰胺以得到环化并去保护的3，7-二氢-8-〔1-(羟甲基)-2-苯基乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
反应流程Ⅴ
可按上面的反应流程Ⅴ制备另一种羧酸，以用来制备如反应流程Ⅱ中所示的目的化合物。
在回流条件下用二乙基丙二酸盐的阴离子处理2，2-二溴-二甲苯(A)以产生二酯(B)。然后用氢氧化钾水溶液皂化化合物B以产生化合物(C)，于200℃下加热使之脱去羧基以产生1，2-二氢化茚-2-羧酸(D)(参见J.Med.Chem.，32，1989(1989))。然后将酸(C)溶解于四氢呋喃中，用1当量N-甲基吗啉处理并冷却到-20℃。加入1当量氯甲酸异丁酯，再加入1当量在二甲基甲酰胺中的5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶，以产生酰胺。用氢氧化钾水溶液处理该酰胺并加热回流以产生环化的目的产物3，7-二氢-8-〔2-(2，3-二氢化茚基)〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
以下列出作为举例说明的本发明的化合物3，7-二氢-8-〔(1R)-甲基-2-苯基乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔(1S)-甲基-2-苯基乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔(1R)-苯基乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔(1S)-苯基乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔1-(苯基甲基)丁基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-(1-苯基乙基)-1，3-二-2-丙烯基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-(1-苯乙基-2-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔2-(2，3-二氢化茚基)〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-(羟甲基-2-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮3，7-二氢-8-〔(±)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮腺苷受体选择剂的治疗实用性下列具体地显示了根据本发明之腺苷受体选择剂的潜在治疗应用作用部位 效应 受体相关性心血管 强心 A-1拮抗作用心血管 控制心动过速 A-1激动作用心血管 增加冠血管流量 A-2激动作用心血管 舒张血管 A-2(异型的)激动作用肺舒张支气管 A1-拮抗作用肺 介质肥大细胞、嗜碱 细胞表面上新的细胞的内分泌物释放 腺苷受体相互作用肺 刺激呼吸，处理异常 Ado拮抗剂换气反应(婴儿)肾 抑制肾素释放 A-1激动作用中枢神经系统 帮助戒除麻醉剂 Ado激动作用中枢神经系统 止痛 A-1激动作用中枢神经系统 抗惊厥 A-1激动作用中枢神经系统 抗抑郁 A-1激动作用中枢神经系统 抗精神病 Ado激动作用中枢神经系统 除解焦虑 激动作用中枢神经系统 抑制自身残毁行为 Ado激动作用(Lesch-Nyhan综合症)中枢神经系统 镇静 A-2激动作用对于心血管、肺和肾等靶系统，可用能直接指示人体生理反应的体内功能试验来估价这些通过受体结合研究所鉴定的化合物。M.Williams已对嘌呤受体的药理学和功能重要性作了很好的描述(参见Ann.Rer.Pharmacol.Toxicol.，27，31(1987)，此文献已列为本文参考文献)。在其中题目为“腺苷受体调节剂的治疗靶标”部分提到“腺苷激动剂作为抗高血压剂、用于帮助戒除鸦片瘾、作为免疫感受性和肾素释放的调节剂，抗精神病剂及催眠剂是有效的。反之，拮抗剂则可用作中枢刺激剂、肌肉收缩增进剂、强心剂、抗紧张剂、抗哮喘剂以及用于处理其他呼吸道疾病”。腺苷受体剂所展示的这许多活性，有力地说明了它们在治疗方面潜在实用性，以及对此类特殊药剂的需求。
腺苷通过对细胞表面受体的作用，可发挥其多方面的生物学效应。这些腺苷受体即A-1和A-2这两种类型的。就实际工作情况来说，A-1受体被限定为这样一些受体、即R-苯基异丙基腺苷(R-PIA)和环腺苷(CHA)等几种N6-取代的腺苷类似物在其上的效能与2-氯腺苷和N-5′-乙基羧酰氨基腺苷(NECA)更强。相反，在A-2受体上之效力的次序则是NECA＞2-氯腺苷＞R-PIA＞CHA。
如上表所示，腺苷受体可控制多种生理学功能。已定义了两大类的腺苷受体，即对腺苷酸环化酶有抑制作用的A-1腺苷受体，和对腺苷酸环化酶有刺激作用的A-2腺苷受体。A-1受体对腺苷和腺苷类似物比A-2受体有更高的亲和力。腺苷和腺苷类似物的生理学效应因下述事实而复杂化了，即非选择性的腺苷受体剂首先结合相当普遍存在的低亲合力A-2受体，然后随着剂量增加，结合高亲合力A-2受体，最后在更高剂量时才结合有很高亲合力的A-1腺苷受体(参见J.W.Daly，et al.，Subclasses of Adenosine Recptors in the Central Nervous SystemInteraction with Caffeine and Related Methylxanthines，Cellular and Molecular Neurobioloqy，3(1)，69-80(1983)，已列为本文参考文献)。
一般说来，腺苷的生理学效应是由腺苷酸环化酶的抑制作用或刺激作用介导的。激活腺苷酸环化酶可增加细胞内环化AMP的浓度，后者则一般被看作是细胞内第二信使。因此，可通过检测增加培养的细胞系中环AMP的能力，或拮抗这种增加的能力来确定腺苷类似物的效能。这方面两个重要的细胞系是VA13(WI-38VAB2RA)、SV-40转化的WI38人胎儿肺纤维母细胞，已知其携带A-2亚型腺苷受体，以及脂肪细胞，已知其携带A-2亚型腺苷受体(参见R.F.Rruns，Adenosine Antagonism by Purines，Pteridines and Benzopteridines in Human Fibroblasts，Chemical Pharmacology，30 325-33，(1981)，该文献已被列为本文参考文献)。
由体外研究清楚地知道，8-苯基-1，3-二丙基-黄嘌呤的羧酸同种物(XCC)是腺苷受体非选择性的，脑膜中A-1受体的Ki为58±3nM，且在脑切片的A-2受体检测时Ki为34±13nM。另一方面，8-苯基-1，3-二丙基-黄嘌呤的氨基同种物(XAC)对A-1腺苷受体的亲合力高40倍，Ki为1.2±0.5nM，而相比之下在脑切片的A-2受体检测时，Ki为49±17nM。另外，在拮抗腺苷类似物的效能上，XAC对心率比对血压的影响更大。因为一般都知道，腺苷诱导的对心脏的作用可能是通过A-1受体介导的，而对血压的作用是通过A-2受体介导的，在体内条件下XAC的选择性便提示腺苷受体的体外活性与腺苷受体的体内活性有关，而且作为这种选择性的结果，可以区分出特异的生理学效应(参见B.B.Fredholm，K.A.Jacobsen，B.Jonzon，K.L.Kirk，y.O.Li，and J.W.Daly Evidence That a Novel 8-Phenyl-Substituted Xantline Derivative is a Cardioselective Adenosine Receptor Antagonist In Vivo，Journalof Cardiovascular Pharmacology，9，396-400，(1987)，已列为本文参考文献;K.A.Jacobsen K，L.Kirk，J.W.Daly，B.Jonzon，Y.O.Li，and B.B.Fredholm，Novel 8-Phenyl-Substituted Xanthine Derivative Is Selective Antagonist At Adenosine Receptors In Vivo，Acta Physiol.Scand.，341-42，(1985)，该文献也已列为本文参考文献)。
也已知道，腺苷可明显地降低血压。这种降血压作用可能依赖于A-2受体介导的对外周阻力的降低。腺苷类似物也能降低心率。这种效应可能是通过A-1亚型腺苷受体介导的。
因此可很容易看出，作为医药使用本文所述的腺苷受体选择性腺苷类似物，将导致选择性地结合A-2或A-1受体，反过来又会选择性地降低血压或降低心率，从而解除这些体内生理效应间的联系。可按下文详述的方法来确定对这些腺苷受体选择剂的选择。
对脑腺苷A-2受体亲合力试验下述试验用于确定试验化合物与配基〔3H〕5′-N-乙基-羧酰氨基腺苷(NECA)竞争由动物脑膜制备之腺苷A-2受体的能力(参见R.R.Bruns，G.H.Lu，and T.A.Pugsley，Characteri-Zation of the A-2 Adenosine Receptor Labeled by〔3H〕NECA in Rat Striatal Membranes，Mol.Pharmacol.，29，331-346，(1986)，其已列为本文参考文献)。断颈杀死得自Charles River处的青年雄性大鼠(C-D品系)并除去脑。由大鼠脑纹状体中分离用于配体结合的膜。使用Polytron匀聚器，在20体积冰冷的50mMTris-HCI缓冲液(pH7.7)中将组织制成匀浆(接通6至20秒)。于4℃下以50，000×g将匀浆离心10分钟。沉淀团块再次在含20体积缓冲液的Polytron中匀浆，并按前述条件离心。最后再将沉淀团块悬浮于占每克原湿组织重40倍体积的50mM Tris-HCl(pH7.7)中。
在各重复三只的保温试验内，分别加入100ul〔3H〕NECA(检测体系中占94nM)、100ul 1uM环己基腺苷(CHA)、100ul 100mMMgCl2、100ul 1IU/ml腺苷脱氨酶、100ul已用检测缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.7)稀释到10-10M至10-4M之一系列不同浓度的试验化合物，以及0.2ul膜悬浮液(湿重5mg)，加入50mM Tris-HCl(pH7.7)至终体积1ml。于25℃下保温60分钟。于真空下通过GF/B玻璃纤维滤膜过滤各管内容物。用5ml冰冷缓冲液淋洗滤膜两次。将滤膜上的膜材料转移到液闪管中，向其中加入8ml含5%Protosol的Omnifluor。用液体闪烁光度仪计数滤膜上的放射活性。
在100uM2-氯代腺苷存在下，根据超过空白的量检测〔3H〕NECA的特异结合。膜结合的总放射活性约占加入试管中之放射活性的2.5%。因为这一条件限制总结合量达到少于10%放射活性，所以在结合试验期间游离配基的浓度并没有明显改变。与膜的特异结合约为总结合量的50%。用O.H.Lowry等人的方法(Protein Measurements With folin Rhenol Reagent，J.Biol.Chem.，193，265-295，(1951)已列为本文参考文献)检测膜悬浮液中的蛋白质含量。
试验化合物置换15%或更多的〔3H〕NECA结合即表明其对腺苷A-2位点的亲和力。IC50是对配基结合产生50%抑制的化合物之摩尔浓度。如数值在100-1000nM范围内即可说明化合物是有很高效能的。
对脑腺苷A-1受体结合位点的亲合力试验下述试验用于确定试验化合物与配基〔3H〕环腺苷竞争由大鼠脑膜制备之腺苷A-1受体的能力。断颈杀死雄性Sprague-Dawley大鼠，并由全动物脑中分离膜材料(参见G.Goodman，M.Cooper，M.Gaviish，and S，Synder，Guanine Nucleotide and Cation Regulation of the Binding of〔3H〕Diethylphenylxanthine to Adenosine A-1 Receptorsin Brain Membrane，Molecular Pharmacoloqy，21，329-335，(1982)，其被列入本文参考文献)。在25体积冰冷的50mM Tris-HCI缓冲液(pH7.7)中将膜制成匀浆(使用Polytron，接通7次各10秒钟)。于4℃下将匀浆液以19，000rpm离心10分钟。经重新悬浮于每毫升含2IU腺苷脱氨酶的25体积缓冲液中洗涤沉淀团块，并于37℃保温30分钟。再次离心匀浆液。将最后的沉淀团块重新悬浮于25体积冰冷缓冲液中。
在每份样品各重复三份的保温试管内，各加入100ul〔3H〕环己基腺苷(0.8nM)、200ul已用50nM Tris-HCl缓冲液(pH7.7)稀释到10-10M至10-6M之各不同浓度的试验化合物、0.2ml膜悬液(湿重8mg)并加Tris缓冲液至终体积为2ml。于25℃保温2小时并通过有真空抽吸的GF/B玻璃纤维滤膜过滤以各于10秒钟之内终止保温。将滤膜上的膜材料转移到闪烁计数管内。在含有5%Protosol的8ml Omniflour中用液体闪烁计数仪计数滤膜上的放射活性。
在10-5M2-氯代腺苷存在下，根据超过所用空白的数值测定〔3H〕环己基腺苷的特异性结合。膜结合的总放射活性约为加到试管中之放射活性的5%。与膜的特异结合约为总结合量的90%。用Loury等人的方法(文献出处同上)测定膜悬液中的蛋白质含量。
试验化合物可置换15%或更多的〔3H〕环己基腺苷结合即是该化合物对腺苷结合位点之亲合力的指征。
使用上述试验得到的腺苷受体结合亲和力数值下表显示几种化合物的腺苷受体结合亲和力。
腺苷受体结合亲和力AlKi A2Ki A2/Al3，7-二氢-8-〔(S)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 60.7nM 848nm 143，7-二氢-8-〔(±)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮32.6nm 644nm 203，7-二氢-8-〔(R)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤
-2，6-二酮 6.9nm 157nm 233，7-二氢-8-(1-苯乙基-2-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 71nm 2，600nm 373，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二-2-丙烯基-1H-嘌呤-2，6-二酮 20nm 2，400nm 1193，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 11nm 1，600nm 1503，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 13.9000nm 71，700nm 53，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丁基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6 73nm 608nm 8-二酮
3，7-二氢-8-〔2-(2，3-二氢化茚基)〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 61.8nm 7，100nm 1153，7-二氢-8-(羟甲基-2-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 556nm 3，900nm 73，7-二氢-8-〔(±)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 5.1nm 1，100nm 2163，7-二氢-8-〔(R)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 1.6nm 647nm 4043，7-二氢-8-〔(S)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮 52nm 1558nm 30已显示三磷酸鸟苷酸(GTP)可以对激动剂和拮抗剂与各种神经递质受体的结合有不同的影响。一般说来，鸟嘌呤核苷酸可降低激动剂对受体的亲合力，而不伴有拮抗剂之亲和力的降低。因此，已表明GTP可降低激动剂而不是拮抗剂(作为抑制物)结合腺苷拮抗剂〔3H〕3-二乙基-8-苯基黄嘌呤的能力。总之，GTP可显著降低嘌呤激动剂的效力，但不降低作为〔3H〕-苯基异丙基腺苷结合抑制剂之拮抗剂的效力，因此它是区分激动剂和拮抗剂的一种有效试剂(参见L.P.Davies，S.C.Chow，J.H.SKerritt D.J.Broun and G.A.R.Johnston，Pyrazolo〔3，4-d〕Pyrimiclines as Adenosine Antagonists，Life Sciences，34，2117-28，(1984)其被列为本文参照文献)。
腺苷受体剂的药物制剂优选的给药途径是口服给药。为此可将化合物配制成固体或液体制剂，如胶囊、粉剂、片剂、锭剂、熔融物、丸剂、溶液剂、悬浮剂或乳剂。固体量单位形式可以是有常用硬或软明胶型衣壳的胶囊，例如其中可含有表面活性剂、润滑剂及乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉等充填剂。另一种方案是可将本发明的化合物与乳糖、蔗糖、玉米淀粉等常规片剂基质，并结合阿拉伯胶、玉米淀粉或白明胶等粘结剂，马铃薯淀粉、藻酸、玉米淀粉和瓜耳胶等崩解剂(以帮助在服用后使药片破碎并溶解)，滑石，硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌等润滑剂(用以改善药片颗粒的流动性及防止药片材料与药片铸模和冲头表面的粘附)，染料，着色剂及香味剂(用以提高药片的感官性质并使病人更易于接受)制成片剂。用于口服液体制剂形式的赋形剂包括水和醇等稀释剂，如乙醇、苯甲醇及聚乙烯醇，它们均可加入或不加医药上可接受的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。
本发明的化合物可以经胃肠道外途径给药，即经皮下、静脉内、肌肉内或腹腔内给药，可将化合物加在含药用载体的医药上可接受之稀释剂中制成可注射的剂型，其中药用载体可以是无菌液体或液体混合物，如水、盐水、含水葡萄糖及相关的糖溶液，醇如乙醇、异丙醇或十六烷基醇，二元醇如丙二醇、聚乙二醇，三元醇缩酮如2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇，醚如聚(1，2-亚乙基二醇)400，油、脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙酰化的脂肪酸甘油酯，某中加入或不加医药上可接受的表面活性剂如皂类或去污剂，悬浮剂如果胶、空气碳酸(Carbomers)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素，或乳化剂及其他药用佐剂。可用于本发明之胃肠道外给药制剂中的油可以是石油(矿物油)、动物油、植物油或合成来源的油，如花生油、大豆油、脂麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、石油及矿物油。适用的脂肪酸酯如可以是油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙醇。适用的皂包括脂族碱金属、铵及三乙胺盐，且适用的去污剂包括阳离子去污剂，如二甲基二烷基卤化铵、以及烷基吡啶鎓卤化物，阴离子去污剂如烷基、芳基和烯烃磺酸酯，硫酸烷基、烯烃、醚和一甘油酯，以及硫代琥珀酸酯，非离子去污剂如脂族胺氧化物、脂肪酸链烷醇酰胺，以及聚氧乙烯聚丙烯共聚物，两性去污剂如β-氨基丙酸烷基酯和2-烷基咪唑啉季铵盐，及其混合物。另外，本发明的化合物也可以与适当载体配成气雾剂直接给鼻腔给药，或者将本发明的化合物与适当溶剂制成溶液，直接滴入鼻腔内。
一般本发明的胃肠道外给药组合物含有大约0.5至25%重量的溶液形式的活性成分。必要时也可使用防腐剂和缓冲剂。为了减小或消除对注射部位的刺激作用，这种组合物可含有亲水性亲油性比率(HLB)约12至17的非离子表面活性剂。在这种制剂中表面活性剂的量为大约5%至15%(重量)。表面活性剂可以是有上述HLB值的单一化合物，或者是有预期HLB值的两种或多种成分的混合物。用于胃肠道外给药配方中的表面活性剂的例子有聚乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，如脱水山梨醇一油酸酯，以及由氧化丙烯与丙二醇缩合生成的氧化乙烯与疏水碱的高分子量加合物。
所使用的一种或多种化合物准确量，即足以提供预期效果所需的主题化合物的量，将取决于多种因素，如所用的化合物、给药剂型、动物的大小、年龄和种、给药途径、时间和次数，以及所期望的生理学效应等。在特殊情况下，可通过常规的用量范围寻找技术来确定给药量。
这些化合物最好以组合物的形式使用，该组合物包含与医药上可接受的载体混合物的化合物，所说的载体应对活性化合物呈现化学惰性的，并且在使用条件下没有有害的付作用或毒性。这样的组合物每毫升载体可含有大约0.1ug(或更少)至500mg的活性化合物，以致达到99%(重量)与药用载合用的活性化合物。
这些化合物也可以掺入任何惰性载体中，以便可将其用于常规血清检测，如按照本发明领域内已知的技术检测其血液含量、尿液含量等。
组合物可以是固体形式的，如药片、胶囊、制成颗粒的、饲料混合物、饲料添加剂以及浓缩物、粉末、颗粒等;也可以是液体形式的，如可注射的无菌悬浮液、口服给药的悬浮液或溶液。药用载体可包括表面活性分散剂、悬浮剂、制片粘结剂、润滑剂、香料及着色剂等辅助成分。现在技术文献已公开了适用的赋形剂，如可参见Remingtons Pharmaceutical Manufacturing，13 Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania(1965)。
下列实施例旨在举例说明本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1将1，3-二正丙基-6-氨基尿嘧啶(30g)悬浮于1升含40ml之20%乙酸的水中并在上方搅拌。分次加入溶于41ml水的亚硝酸钠(9.03g)，用12ml浓盐酸使溶液保持酸性。生成一种红紫色沉淀物。在10分钟内加完并将悬浮液搅拌2小时。然后过滤溶液，并用水漂洗滤液并于真空下干燥，得到46g1，3-二正丙基-5-亚硝基-6-氨基尿嘧啶。
将1，3-二正丙基-5-亚硝基-6-氨基尿嘧啶(61.6g)悬浮在1升水中，用50%氢氧化铵将悬液碱化到pH11并用100g连二亚硫酸钠分次处理，直到红紫色逐渐消退。用氯仿(8×200ml)提取该含水混合物，通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩之。用急速层析法(5/10%甲醇/氯仿)纯化残留物，由10%己烷中的10%异丙醇再用10%异丙醇重结晶，得到37.29g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶，m.p.127-128℃。
用100ml四氢呋喃漂洗氢化钠(在矿物油中的50%悬浮液，12.2g)并悬浮于300ml四氢呋喃中，冷却到0℃并经45分钟逐滴加入溶解于75ml四氢呋喃中的50g甲基丙二酸二乙酯。继续搅拌30分钟后，加入36.8ml苄基氯。再加入24ml四氢呋喃。然后将反应混合物缓缓加热回流3小时，冷却，例入400ml水中并用乙酸乙酯提取(3×500ml)。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物并浓缩，得到75g苄甲基丙二酸二乙酯。
将苄甲基丙二酸二乙酯(75g)与300ml乙醇和100g氢氧化钾在300ml水中的溶液合并並缓缓回流3小时。冷却后，用二乙醚(2×300ml)提取该混合物。然后用120ml浓盐酸酸化水相，并用二乙醚(3×300ml)提取之。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩，得到49.2g苄甲基丙二酸黄色固体物(产率83%)。
将苄甲基丙二酸(49.2g)溶解于含1.69g氧化亚铜的400ml乙腈中并加热回流5小时。真空下除去溶剂。将残留物重新溶解于400ml二乙醚中并用10%盐酸(2×300ml)、300ml饱和氯化钠漂洗，通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩。用急速层析法(在氯仿中的5%至10%甲醇)纯化残留物，得到38.3g2-苄基丙酸(产率99%)。
将2-苄基丙酸(38.3g)与400ml50%含水乙醇、83.66g奎宁·2H2O合并并在蒸汽浴上加热20分钟得到澄清的溶液。静止过滤后，收集已形成的结晶物，得到97.37g奎宁盐。再由50%含水乙醇中六次重结晶后，留下18.8g奎宁盐。
用100ml的1M硫酸处理奎宁盐(0.34g)并用氯仿(2×100ml)提取之。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物、过滤并浓缩之。用急速层析法(在氯仿中的5%至10%甲醇2mm板)纯化残留物得到89mg(S)-2-甲基-3-苯基丙酸。
1g(S)-2-甲基-3-苯基丙酸与0.67mlN-甲基吗啉合并，冷却到-20℃并用0.79ml氯甲酸异丁酯处理。15分钟后，加入溶于2ml二甲基甲酰胺中的1.38g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶。经2小时使反应混合物升温至室温。然后将反应混合物倾入300ml氯仿中，用200ml饱和碳酸氢钠、200ml饱和氯化钠漂洗，通过硫酸镁干燥、过滤并浓缩。经径向层析(在氯仿中的3%至5%甲醇，2mm板)(己烷中的10%至15%异丙醇，2mm板)纯化残留物，得到1.6g酰胺。再用急速层析法(氯仿中的3%至5%至10%甲醇)(己烷中的5%至10%异丙醇)纯化，得到1.05g酰胺。纯化产物再次用径向层析法(己烷中的5%异丙醇，2mm板)纯化，得到0.44g酰胺。
将酰胺(430mg)溶解于40ml无水苯中并加入三乙基氧鎓四氟硼酸盐(1M在二氯甲烷中)。将反应混合物加热回流5小时。然后倾入磷酸盐缓冲液中，用300ml甲苯提取，经硫酸镁干燥并浓缩之。经径向层析(氯仿中的3%至6%甲醇，2mm板)纯化残留物得到209mg亚氨醚和122mg起始材料。按上述方法再次纯化亚氨醚得到121mg纯的手性亚氨醚。
将121mg手性亚氨醚溶解于14ml苯中并加热回流4小时。以薄层层析指示反应是否完成。真空下除去溶剂并以径向层析法(己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物得到87mg产物，由己烷中的20%二乙醚中重结晶后于真空下60℃干燥2小时，得到76mg3，7-二氢-8-〔(1S)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮白色固体物，m.p141-142℃。
实施例2合并S-(+)-2-苯基丙酸(0.69g)、0.46mgN-甲基吗啉和10ml四氢呋喃，并冷却到-20℃。加入0.46ml氯甲酸异丁酯并将反应混合物搅拌25分钟。加入在50ml二甲基甲酰胺中的0.84g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶并于-20℃下将反应混合物搅拌4小时。然后过夜溶液升温至室温。高度真空下除去溶剂并将残留物重新溶解于300ml氯仿中。用200ml饱和碳酸氢钠、200ml饱和氯化钠漂洗有机层，经硫酸镁干燥、过滤并浓缩之。用急速层析法(在己烷中的5%至10%至15%异丙醇)纯化残留物，得到0.94g酰胺泡沫体(产率69%)。
将上述酰胺溶解于50ml水苯中，用16.3ml三基氧鎓四氟硼酸盐(在二氯甲烷中制成1M溶液)处理并加热至50℃回流15分钟。然后将溶液倒入300ml磷酸盐缓冲液中并用400ml二乙醚提取。用300ml饱和氯化钠漂洗，经硫酸镁干燥、过滤并浓缩之。用径向层析法(在氯仿中的3%至5%至10%甲醇，2mm板)纯化残留物，得到0.70g亚氨醚(产率72%)。
将上述亚氨醚溶解于50ml无水苯并在氮气环境下加热回流4小时。于高真空下除去溶剂并以径向层析法(在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，重结晶后得到0.415g产物。在高真空下通过P2O5干燥之，得到0.413g产物(m.p.134.5-136℃)。再次由溶于己烷的20%二乙醚中重结晶得到255mg产物，使该产物在干燥枪(arying Pistol)中高真空下39℃干燥20小时，得到252mg3，7-二氢-8-〔(1S)-1-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
实施例3将N-戊酸(1g)溶解于75ml四氢呋喃中并于室温下用2当量二异丙基酰胺锂处理。然后将反应混合物30℃加热30分钟，再加入1。1ml苄基氯。40℃反应1.5小时后，将反应混合物冷却至室温，倒入300ml水中并用二乙醚(2×200ml)提取。然后用1M盐酸酸化该水溶液并用二乙醚(2×300ml)提取之。经硫酸镁干燥合并的有机相、过滤并浓缩。用径向层析法(在己烷中的40-50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，得到1.63g2-苄基戊酸(产率87%)。
将2-苄基戊酸(0.88g)溶解于含0.46mlN-甲基吗啉的15ml四氢呋喃中。将溶液冷却到-20℃并加入0。60ml氯甲酸异丁酯30分钟后，于-20℃搅拌下加入溶于5ml二甲基甲酰胺的0.84g1，3-二正丙基-5，6-二甲基尿嘧啶。3小时后，使反应混合物升温到室温并于高度真空下除去溶剂。用急速层析法(在己烷中的5-10%异丙醇)纯化残留物，得到0.55g泡沫体酰胺。
将酰胺(0.55g)与20ml30%氢氧化钾和5ml乙醇合并加热至80℃搅拌5小时。然后冷却该溶液，用浓盐酸酸化，用氯仿(3×200ml)提取、合并有机提取物并通过硫酸镁干燥。过滤该混合物并于真空下浓缩所得滤液。用径向层析法(在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物。用己烷中的20%二乙醚研制所得产物并于高真空下36℃干燥16小时，得到217mg3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丁基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.158-160℃。
实施例4在有上方搅拌的1升园底烧瓶内，将1，3-二烯丙基-6-氨基尿嘧啶(5g)悬浮于400ml水中。加入乙酸(6.7mli 20%溶液)，之后间断加入2ml浓盐酸和亚硝酸钠溶液(1.54g在7ml水中)。4小时后，过滤该溶液，用水洗，收集并于80℃在真空烘箱内干燥20小时，得到4.54g1，3-二烯丙基-5-亚硝基-6-氨基尿嘧啶红紫色固体物，m.p.170-180℃(产率87%)。
将1，3-二烯丙基-5-亚硝基-6-氨基尿嘧啶(4.5g)悬浮于150ml乙酸乙酯中并用加于64ml水中的23.6g连二亚硫酸钠处理。1小时后，分离各层并用乙酸乙酯(4×100ml)提取水相。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩之，然后用急速层析法(在氯仿中的10%甲醇)纯化残留物，得到4.41g1，3-二丙烯基-5，6-二氨基尿嘧啶。
然后，将2-苯基丙酸(1.0g)于-20℃溶解于含0.73mlN-甲基吗啉的10ml乙腈中。加入氯甲酸异丁酯(0.86ml)。15分钟后，加入溶于3ml二甲基甲酰胺的1。48g1，3-二丙烯基-5，6-二氨基尿嘧啶。4小时后，使反应升温至室温并于真空下除去溶剂。用急速层析法(加在氯仿中的3-5%甲醇)将残留物纯化两次，得到0.50g酰胺。
将该酰胺(0。50g)溶解于30ml无水苯中，用9.2ml三乙基氧鎓四氟硼酸盐(在二氯甲烷中的1M溶液)处理并加热至50℃保持5小时。冷却后，将反应混合物倒入磷酸盐缓冲液(200ml)中并用甲苯(3×200ml)提取。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩。将残留物溶解于100ml甲苯中中并加热至100℃保持4小时。冷却后，于真空下除去溶剂并用径向层析法(加在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，得到0.45g白色固体物，m.p.142-143℃。由加在己烷中的30%二乙醚中重结晶该固体物，得到280mg3，7-二氢-8-(1苯乙基)-1，3-二-2-丙烯基-1H-嘧啶-2，6-二酮。
实施例5将二异丙胺(3.2ml)溶于20ml四氢呋喃，冷却至0℃并用14.2ml之1.6M正丁基锂处理。30分钟后，将二异丙基酰胺锂于-78℃加到溶于75ml四氢呋喃的1g正丁酸中。10分钟后反应混合物升温至-20℃。再过10分钟，反应混合物慢慢升温至室温。然后将反应加热到35℃保持30分钟，再冷却到室温并加入1.3ml苄基氯。1.5小时后将反应混合物加热到35℃保持2.5小时。然后冷却该溶液，用300ml水稀释，用二乙醚(2×200ml)漂洗，用1M盐酸酸化水相并用二乙醚(3×200ml)提取之。通过硫酸镁干燥合并的有机提取物、过滤并浓缩。用径向层析法(加在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，以得到1.56g2-苄基丁酸(产率77%)。
将2-苄基丁酸(0.82g)溶解在10ml四氢呋喃，冷却到-20℃并用0.46mlN-甲基吗啉和0.60ml氯甲酸异丁酯处理之。30分钟后，加入0.84g溶于5ml二甲基甲酰胺的1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶，并于-20℃将反应混合物搅拌4小时。使溶液放置过夜升温至室温。然后用200ml二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠(100ml)洗该溶液。在硫酸镁上干燥有机相、过滤并于高真空浓缩之。经急速层析(加在己烷中的5%至10%至15%至20%异丙醇)纯化残留物，得到1.04g酰胺(产率71%)。
将此酰胺(1.04g)溶解于10ml乙醇中;然后加入40ml30%氢氧化钾并加热到90℃保持1.5小时。将该溶液冷却至室温过夜、并用浓盐酸酸化。用200ml水稀释反应混合物，用氯仿(3×200ml)提取，在硫酸镁上方干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩。用径向层析法(加在己烷中的40-50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，得到0.49g产物。用加在己烷中的20%二乙醚研制该产物，收集白色沉淀物并于39℃高真空下干燥以得到418mg3，9-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.180℃。
于39℃高真空下再次干燥上述产物6小时，得到407mg3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌啶-2，6-二酮，m.p.186-187℃。于39℃高真空下将其置于无水磷酸上干燥24小时，以产生342mg终产物3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.186-188℃。
实施例6将(R)-(-)-2-苯基丙酸(0.69g)与15ml四氢呋喃0.46mlN-甲基吗啉合并，冷却到-20℃并用0.6ml氯甲酸异丁酯处理。30分钟后，向反应混合物中加入溶于5ml二甲基甲酰胺中的0.84g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶，并于-30℃下搅拌4小时。然后经15小时使该溶液升至室温并于高真空下除去溶剂。将残留物重新溶解在300ml氯仿中，并用200ml饱和碳酸氢钠漂洗有机相，在硫酸镁上干燥，过滤并浓缩。经急速层析(加在己烷中的5%至10%至15%至20%异丙醇)纯化残留物，以得到1.21g所需的酰胺(产率89%)。
将该酰胺(1。1g)溶解于50ml苯中，用19.9ml三乙基氧鎓四氟硼酸盐(在二氯甲烷中的1M溶液)处理并于50℃加热15小时。然后冷却该混合物，倾入300ml二乙醚中并用200ml磷酸盐缓冲液，和200ml水、200ml饱和氯化钠洗涤。在硫酸镁上干燥有机相、过滤并浓缩。以径向层析(加在氯仿中的2%至5%甲醇，2mm板)纯化残留物得到0.65所需的亚氨醚。
将该亚氨醚(0.65g)溶解在60ml无水苯中并加热回流4小时。冷却后，真空下除去溶剂并以径向层析法(加在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，得到0.56g3，7-二-8-〔(1R)-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.136-137℃。
实施例7将2-苯基丙酸(0.69g)溶解在15ml四氢呋喃中，用0.46mlN-甲基吗啉处理，冷却到-20℃并加入0.6ml氯甲酸异丁酯。30分钟后，加入在5ml二甲基甲酰胺中的0.84g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶。将反应混合物于-20℃搅拌4小时然后升温至室温。于高真空下除去溶剂并以急速层析法(溶在己烷中的5-10%至15-20%异丙醇)纯化残留物，得到0.96所需要的酰胺(产率70%)。
此酰胺(0.95g)与10ml乙醇及40ml30%氢氧化钾水溶液合并，并加热至90℃保持1.5小时。然后在冰浴上冷却该溶液并用浓盐酸小心酸化之。用100ml水稀释反应混合物并用氯仿(3×200ml)提取含水层。在硫酸镁上干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩得到0.91g产物。以径向层析(加在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化该产物得到0.78g纯化物，由加在己烷中的20%乙酸乙酯重结晶后得到0.591g3，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.148-150℃。
实施例8用100ml四氢呋喃漂洗氢化钠(15.2g，50%溶液)。然后将其悬浮在300ml四氢呋喃中，冷却至0℃并经45分钟逐滴加入溶于75ml四氢呋喃的50g甲基丙二酸二乙酯。继续搅拌30分钟，加入36.8ml苄基氯，再加入25ml四氢呋喃。然后将此反应混合物缓缓加热回流3小时，冷却后倒入500ml水中并用乙酸乙酯(3×500ml)提取。在硫酸镁上干燥合并的有机相，过滤并浓缩后得到75g苄甲基丙二酸二乙酯。
将此苄甲基丙二酸二乙酯(75g)与300ml乙醇和100g氢氧化钾在300ml水中制成的溶液合并，小心加热回流3小时。冷却后用二乙醚(2×300ml)提取该混合物。然后用120ml浓盐酸酸化水相并用二乙醚(3×300ml)提取。在硫酸镁上方干燥合并的有机提取物。过滤并浓缩得到49.2g苄甲基丙二酸的黄色固体物(产率83%)。
将此苄甲基丙二酸(49.2g)溶解在400ml乙腈中，用1.69g氧化亚铜提取并加热回流5小时。真空下除去溶剂，将残留留物重新溶解于400ml二乙醚并用10%盐酸(2×300ml)饱和氯化钠(300ml)漂洗，在硫酸镁上干燥、过滤并浓缩。经急速层析(在氯仿中的5-10%甲醇)纯化残留物，得到38.37g2-苄基丙酸(产率99%)。
将该2-苄基丙酸(38.3g)与400ml50%含水乙醇、83.88g奎宁。2H2O合并，并在蒸汽浴上加热20分钟，得到一种澄清溶液。放置过夜后，收集所形成的结晶，得到97.37g奎宁盐。由50%含水乙醇中再重结晶6次后留下18.8g奎宁盐。
酸化并提取经上述重结晶后得到的母液，得到24.86g回收的2-苄基丙酸。将该酸与加在160ml乙酸乙酯中的18.4gd-(+)-α-甲基苄胺合并，在蒸汽浴上加热溶解，冷却并收集沉淀物，得到35g胺盐。由乙酸乙酯中三次重结晶后，用100ml1M硫酸处理该胺盐(0.4g)。用氯仿(2×100ml)提取含水层并在硫酸镁上干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩之。以径向层析法(加在氯仿中的5%甲醇，2mm板)纯化残留物，得到186mg(R)-苄基丙酸。
将此(R)-2-苄基丙酸(0.69g)溶解于15ml四氢呋喃，将所得溶液冷却到-20℃，然后用0.46mlN-甲基吗啉、0.60ml氯甲酸异丁酯处理并搅拌30分钟。加入溶于5ml二甲基甲酰胺的0.84g1，3-二正丙基-5，6-二甲基尿嘧啶并于-20℃下继续搅拌该反应混合物4小时。使此溶液升温至室温过夜。于高真空下除去溶剂并以急速层析法(加在己烷中的5%至10%至15%至20%异丙醇)纯化红紫色残留物，得到0.87g所需要的酰胺(产率64%)。
将此酰胺溶解于100ml干苯中，用14.8ml三乙基氧鎓四氟硼酸盐(加在二氯甲烷中制成1M溶液)处理并将此溶液加热到50%保持15小时。然后冷却并将溶液倾入500ml二乙醚中，用300ml磷酸盐缓冲液、200ml饱和氯化钠漂洗，在硫酰镁上干燥，过滤并浓缩。以径向层析(加在氯仿中的2%至5%甲醇，2mm板)纯化残留物，得到0.36g所需的亚氨醚。
将此亚氨醚(0.36g)溶解于100ml干苯中并加热回流3小时。于真空下除去溶剂并用径向层析法(加在己烷中的50%乙酸乙酯，2mm板)纯化残留物，得到0.23g3，7-二氢-8-〔(1R)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。由加在己烷中的20%二乙醚中重结晶该固体物，39℃高真空下干燥后得到187mg3，7-二氢-8-〔(1R)-1-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.141-142℃。
实施例9将β-丙醇酸内酯(5.5g)溶于100ml甲醇并于室温下搅拌下用10.8ml三乙胺处理。3天后，于真空下除去溶剂并用急速层析法(加在己烷中的10%至20%异丙醇)纯化残留物，得到3.30g3-羟甲基丙酸酯。
将该3-羟甲基丙酸酯(3.23g)溶解于100ml四氢呋喃中，冷却到-50℃并用加在100ml四氢呋喃中的二异丙基酰胺锂(2.1当量)处理。20分钟后，于-50℃向此二份阴离子向加入3.68ml苄基溴。终1小时使温度升到-20℃。然后用500ml饱和氯化铵稀释反应混合物并用二乙醚(2×500ml)提取所形成的含水层。在无水硫酸镁上干燥合并的有机提取物，过滤并浓缩之。用急速层析法(在己烷中的10%至20%异丙醇)纯化粗残留物，得到2.65g2-苄基-3-羟甲基-丙酸酯。
将此2-苄基-3-羟甲基丙酸酯(2.6g)于氮气环境下溶解于75ml无水二甲基甲酰胺中。搅拌下加入叔丁基二甲甲硅烷基氯(2.2g)，再加入2.0g咪唑。1.5小时后用500ml二乙醚稀释该反应混合物。用50%氯化钠水溶液(2×200ml)饱和氯化钠(300ml)洗有机相，在无水硫酸镁上干燥、过滤和在真空下浓缩。经急速层析(加在己烷中的5%至10%异丙醇)纯化残留物，得到3.49g2-苄基-3-(叔丁基二甲甲硅烷氧基)丙酸甲酯。
将此2-苄基-3-(叔丁基二甲甲硅烷氧基)丙酸甲酯(3.3g)溶解于100ml甲醇中，冷却至0℃并在强烈搅拌下用50ml30%氢氧化钾处理之。然后经5小时使反应混合物升温至室温。用200ml水稀释并用二乙醚漂洗后，将此含水溶液冷却到0℃。加入二氯甲烷(100ml)，然后在搅拌下缓缓加入260ml1M盐酸。分离各层并用二氯甲烷(3×200ml)提取含水层。在无水硫酸镁上干燥合并的有机提取物，过滤并于真空下浓缩。以径向层析(加在氯仿中的2%至4%甲醇，4mm板)纯化残留物，得到2.74g2-苄基-3-(叔丁基二甲甲硅烷氧基)丙酸。
将此2-苄基-3-(叔丁基二甲甲硅烷氧基)丙酸(2.1g)溶解在20ml四氢呋喃中，冷却到-20℃并用0.71mlN-甲基吗啉处理。然后加入氯甲酸异丁酯(0.92ml)并将反应混合物于-20℃下搅拌20分钟。加入在10ml二甲基甲酰胺中的1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶(1.62g)并将反应混合物于-20℃搅拌3小时。使之升温至室温，用400ml氯仿稀释并用50%氯化钠水溶液(2×200ml)、饱和碳酸氢钠(200ml)洗有机相，在无水硫酸镁上干燥、过滤并于真空下干燥。经径向层析(加在氯仿中的5%至10%甲醇，4mm板)纯化残留物，以得到4.25g酰胺。
然后将该酰胺(3.1g)溶于50ml乙醇并用100ml30%氢氧化钾处理。将其加热回流1.5小时。冷却到0℃后，用42ml浓盐酸酸化该反应混合物。用氯仿(2×200ml)提取含水层。在无水硫酸镁上干燥合并有机提取物，过滤并于真空下浓缩。用径向层析法(加在己烷中的5%至10%甲醇，4mm板和加在己烷中的5%至10%至20%异丙醇，4mm板)纯化残留物，得到1.1g粗材料。用加在己烷中的25%二乙醚研制该材料，39℃真空下干燥5小时后，得到0.82g3，7-二氢-8-〔1-(羟甲基)-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮白色固体物，m.p.145-146℃。
实施例10将钠(3.7g)溶解于80%乙醇中，加入150ml二乙醚。于上方搅拌的同时加入丙二酸二乙酯(12.5ml)，再加入溶于150ml二乙醚的20gα，α′-二溴-邻二甲苯。将反应混合物加热回流5小时。然后冷却、过滤并于真空下除去溶剂。用氢氧化钾溶液(20g溶于125ml水中)处理残留物并加热回流1.5小时。然后冷却反应混合物并用200ml二乙醚洗涤。用30%盐酸酸化含水相。收集沉淀物并用Drieruite燥干箱真空干燥5小时;以得到8.86g2，3-二氢化茚-2，2-二羧酸。
将该2，3-二氢化茚-2，2-二羧酸(8.86g)倒入500ml园底烧瓶中并在搅拌下经15分钟加热至200℃。然后冷却到室温并从加在己烷中的10%异丙醇中重结晶，以产生1.77g2，3-二氢化茚-2-羧酸(参见J.Med.Chem.，23，1955，1989)。
将该2，3-二氢化茚-2-羧酸(1.0g)溶于15ml四氢呋喃，用0。62mlN-甲基吗啉处理，并冷却到-20℃。加入氯甲酸异丁酯(0.80ml)并将反应物于-20℃搅拌30分钟。然后加入溶于5ml二甲基甲酰胺的1.2g1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶将反应混合物于-20℃搅拌4小时。加温至室温后，将其倾入300ml氯仿中并用50%氯化钠水溶液(2×100ml)、饱和碳酸氢钠(2×100ml)漂洗，在无水硫酸镁上干燥、过滤并于真空下浓缩。经径向层析(加在氯仿中的5%至10%甲醇，4mm板和加在己烷中的10%至20%至30%异丙醇，4mm板)纯化残留物以得到2.19g酰胺。
用100ml30%氢氧化钾、40ml乙醇处理上述酰胺(2.19g)并加热回流2小时。然后将反应冷却到0℃并用42ml浓盐酸酸化之。收集沉淀物并溶解于300ml氯仿中。用200ml饱和碳酸氢钠漂洗有机相，在无水硫酸镁上干燥，过滤并于真空下浓缩。用己烷中的80%二乙醚研制残留物，60℃真空下干燥后得到1.10g3，7-二氢-8-〔2-(2，3-二氢化茚基)〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，5-二酮，m.p.223-224℃。
实施例11用5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶处理2-苯基丁酸(1.1g)得到酰胺，按实施例7所示程序使之环化，得到454mg3，7-二氢-8-〔(±)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.137-138℃。
实施例12用5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶处理(S)-(+)-2-苯基丁酸(0.93g)得到酰胺(参见实施例6所示方法)。将该酰胺转化成亚氨醚，然后按实施例6所述程序使之热环化，得到547mg3，7-二氢-8-〔(S)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，5-二酮，m.p.128-131℃。
实施例13按实施例6所述程序，用5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶处理(R)-(-)-2-苯基丁酸(0.98g)得到酰胺。将该酰胺转化成亚氨醚，再按实施例6所述方法使之热环化，得到190mg3，7-二氢-8-〔(R)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.128-130℃。
实施例14搅拌下用溶于60ml水中的0.65g氢氧化钾处理1.9g2-苄基丙酸。向该溶液内加入2.0g5，6-二氨基-1，3-二甲基尿嘧啶水合物，然后加入2.3g1-乙基-3-〔3-(二甲氨基)丙基〕碳化二亚胺盐酸化物。2小时后，除去溶剂并用径向层析法(加在己烷中的40%异丙醇，4mm板)纯化残留物，得到1.85g材料，再用醚研制后即产生0.40g酰胺(白色固体物)。
用10ml30%氢氧化钾水溶液和2ml乙醇处理上述酰胺(0.33g)并加热到70℃保持1.5小时。冷却后用55ml1M盐酸酸化反应混合物并用300ml乙醚提取。用200ml水、200ml饱和氯化钠洗有机相，在无水硫酸镁上干燥、过滤并浓缩。用己烷研制残留物，在P2O5上真空干燥后得到142mg3，7-二氢-8-〔(±)-(甲基-2-苯乙基)〕-1，3-二甲基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.198-199℃。
实施例15按实施例8所述方法用甲基丙二酸二乙酯处理22g4-苄氧基苄基氯。皂化己烷基化的甲基丙二酸酯并按同样程序脱羧，得到18.06g2-(4-苄氧基苄基)丙酸，m.p.93-95℃。用5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶处理3.6g上述酸，得到酰胺，按实施例7所述程序将其环化后得到1.46g材料，由加在己烷中的5%乙醚重结晶后得到0.72g3，7-二氢-8-〔甲基-2-(4-苄氧基苯基)乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.124-126℃。将260mg3，7-二氢-S-〔甲基-2-(4-苄氧基苯基)乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮溶解于20ml甲醇中并在活性碳上用催化量的5%钯处理。于氢气环境下将其放置并搅拌2小时。然后通过硅藻土(Celite)过滤并于真空下浓缩滤液。用径向层析法(加在己烷中的50%乙酸乙酯，4mm板)纯化残留物，得到182mg材料、将所得材料用己烷中的5%乙醚研制并于39℃高真空下干燥3小时后，得到162mg3，7-二氢-8-〔甲基-2-(4-羟苯基)乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮，m.p.218-220℃。
权利要求
1.制备根据下列结构之化合物的方法
所说的化合物包括其(R)和(S)对映体及外消旋混合物，以及其医药上可接受的盐，其中R1和R2各自是(C1-C4)低级烷基或(C2-C4)低级链烯基，Z是
R3是(C1-C3)低级烷基、硝基、氨基、羟基、氟、溴或氯，m是0或1至4的整数，n是1至4的整数，且X是H或OH，该方法包括下面反应流程I中所示的步骤反应流程Ⅰ
(a)步骤A中，在由结构式Ⅰ所述的烷基适当取代的嘧啶二酮，其中R1和R2定义同上，与亚硝酸钠之间完成亚硝基化反应，形成结构式2所述的亚硝基取代的嘧啶二酮；(b)步骤B中，经用过量连二亚硫酸钠处理结构式所述的硝苯取代的嘧啶二酮，使之还原成相当的二氨基嘧啶二酮，以形成结构式3所述的化合物；(c)步骤C中，经在四氢呋喃中溶解根据结构式4的化合物，用1当量N-甲基吗啉和1当量氯甲酸异丁酯处理之，然后加入已溶解于二甲基甲酰胺的结构式3所述的二氨基嘧啶二酮，而使结构式3所述的二氨基嘧啶二酮与根据结构式4的化合物--其中m、n、x和R3定义同上一反应，以形成结构式3所述的酰胺；(d)步骤D中，将结构式5所述的酰胺溶解于干苯中并用6.5当量的三乙基氧鎓四氟硼酸盐处理，以产生结构式6所述的亚氨醚；(e)步骤E中，将结构式6所述的亚氨醚溶解于干苯中并于氮气环境下加热回流，真空下除去溶剂并纯化残留物后即得到由式Ⅰ表示的、结构式7所述的化合物。
2.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(1R)-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
3.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(1S)-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
4.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(1R)-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
5.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(1R)-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
6.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(1S)-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
7.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丁基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
8.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二-2-丙烯基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
9.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔1-(苯甲基)丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
10.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-(1-苯乙基)-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
11.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔1-(羟甲基)-2-苯乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
12.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔2-(2，3-二氢化茚基)〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
13.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(±)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
14.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(R)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
15.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(S)-苯丙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
16.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔(±)-甲基-2-苯乙基〕-1，3-二甲基-1H-嘌呤-2，6-二酮。
17.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物为3，7-二氢-8-〔甲基-2-(4-羟苯基)乙基〕-1，3-二丙基-1H-嘌呤-二酮。
18.包括与惰性载体混合的权利要求1之化合物的组合物。
19.包括与药用载体混合的权利要求1之化合物的组合物。
全文摘要
公开了选择性地作用于腺苷受体并一般可作为腺苷拮抗剂的黄嘌呤衍生物。根据体外研究可知，作为这种选择性的结果，可以区分特异性生理学效应，而且此腺苷受体体外活性与腺苷受体体内活性相互关联。可基于本文公开之化合物的选择性结合活性制备该主题化合物的医药制剂，其可提高某些生理学效应同时最大减小其他的效应，如降低血压而不降低心率。
文档编号A61P9/12GK1055181SQ9110189
公开日1991年10月9日 申请日期1991年3月25日 优先权日1990年3月26日
发明者诺顿·P·皮特, 尼尔斯·L·林茨 申请人:默里尔多药物公司