专利名称：人早期胚胎因子及其制取法和在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属医疗领域，涉及到人胚胎因子及其制取方法，以及人早期胚胎因子的抗癌治癌用途。
攻克癌症是当今生物科学和医学上的重大课题，近几十年来，细胞学、遗传学、组织培养学、生物化学、分子生物学等学科的建立和发展，为人类征服癌症提供了新的途径——生物疗法，如干扰素、转移因子、白介素-2，以及基因疗法均属此类。目前国内的医药研究，有人从胎儿脑中提取神经生长因子，也有人从胎盘中提取胎盘转移因子，还有用胎儿肝脾细胞制成胎儿细胞悬浮液的报导，但都不是从人的早期整体胚胎提取。无疑，从人的早期整体胚胎中提取高活性的因子和物质，在医药上将具有重大的意义。
本发明的目的就是试图从人的早期胚胎中提取一种具有直接逆抑癌细胞作用又能刺激、调节人体免疫细胞抗癌功能的活性因子，制取一种新的抗癌药品，应用于临床抗癌治疗。
本发明是这样实现的依据现代生物科学原理，人的早期胚胎组织是人体生命活力最强的组织，采用如下的方法，可以制成人早期胚胎因子生物制剂。
(一)原料收集的标准要求(1)制取人早期胚胎因子的组织材料，应由健康妇女提供，时期为2—3个月，胚胎组织在体内为活体，无病态异常。
(2)取出胚胎组织后，观察无异常，应迅速放置-20℃以下保存。
(3)对胚胎组织进行乙肝、丙肝等血液的病毒抗原抗体×检测，阴性方可选为正式原料。
(二)将收集到的符合标准要求的胚胎组织用无菌蒸馏水冲洗干净，然后置高速绞碎机内，加冷蒸馏水进行匀浆，转速10000—12000转/分，时间3—5分钟，将匀浆置-20℃以下冰冻，然后取出，在35—37℃水浴融化，融化后立即速冻，将匀浆混悬液调整PH值为4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小时，然后离心(转速3000转/分)以上，取出上清液。将上清液调为PH6.9—7.1，澄清过滤。将澄清液倒入超滤器内进行超滤。所得超滤液即为人早期胚胎因子制剂。对超滤所得制剂进行除菌，各类血液病毒抗原抗体检测，全部为阴性后进行分装成品。
采用上述方法，提取了人早期胚胎因子，并同时完成了人早期胚胎因子作为制备治癌症药的应用。
其药性检测符合国家生物制品标准要求1、外观液体制剂无色澄明。
2、PH值7.0±23、分子量2万4、紫外分析测定多肽为1000mg/ml以上，核糖体为100mg/ml以上。
5、蛋白质反应3%磺基水杨酸法(一)性。
6、热流反应(一)。
7、过敏反应(一)。
8、药物刺激试验皮下注射无红肿、硬变、坏死、症状、眼结膜滴入无红肿、充血现象。
实验证明，人早期胚胎因子，具有下列医学应用价值和用途(一)人早期胚胎因子对癌细胞有显著的直接抑杀作用经组织培养，反复实验，人早期胚胎因子对人癌细胞(如人宫颈癌细胞、人猴头癌细胞等)有显著的抑杀作用，人癌细胞加入人早期胚胎因子后，在35℃条件下，孵育120小时，90%以上的癌细胞崩解死亡，而同样条件下的对照组癌细胞却正常生长。具有重要意义的是人早期胚胎因子对人体正常细胞无毒副作用，加入人早期胚胎因子的人体正常细胞，(如人胎肺二倍体细胞等)与对照组一样，生长良好。
(二)动物实验，有明显的抑瘤作用①小鼠皮下实体瘤实验经对40只小鼠分批实验，注射人早期胚胎因子组与对照组相比，对实体瘤的抑瘤率达39.19%，P＜0.001，有显著差异。
②小鼠腹水癌实验经对30只小鼠实验，注射人早期胚胎因子组的小鼠平均腹围每只增加0.51厘米，P值＞0.050，而对照组平均每只增加0.98厘米，P值＜0.001，两者相差明显。
③动物病理切片检验经对小鼠皮下实体瘤病理切片检验，注射人早期胚胎因子的皮下实体瘤的癌细胞大量坏死，对照组癌细胞没有坏死现象，显示人早期胚胎因子对动物肿瘤生长有破坏和抑制作用。
(三)有类似白介素—2作用，能高效诱导Lak细胞产生很强的杀癌能力Lak细胞是人血中分离出来的一种特定淋巴细胞，它在白介素-2(一种淋巴细胞生长因子)的诱导下能成为一种识别性很高、杀癌性很强的专门细胞，将它回输给病人，可获得抗肿瘤的治疗效果，因此白介素-2是一种有重要医学临床应用价值的细胞因子。现经实验证明，人早期胚胎因子具有类似白介素-2的作用，也能高效诱导Lak细胞，并使之产生很强杀癌率。经生物化学检测证明，人早期胚胎因子与白介素-2是两种不同的物质，前者的成分中也不含有后者的物质。又经10次实验证明，人早期胚胎因子，在诱导Lak细胞形态上和数量上，与白介素-2的诱导结果是类似的，而且在杀癌率上也十分接近，白介素-2最佳杀癌率为93.2%，人早期胚胎因子最佳杀癌率为89.2%，而对照组仅为10.3%。(采用的实验方法细菌培养加MTT酶标仪测定法)。
(四)能高效激活NK细胞，提高NK细胞的杀癌力NK细胞是哺乳动物体内的自然杀癌细胞，它无需预先致敏，也不需要由抗体参加，即可对自身的各种肿瘤有迅速的溶解作用，因此，能否激活NK细胞是检验某种生物制剂有无抗癌作用的重要标志。经10次人血实验证明，人早期胚胎因子激活NK细胞，其激活杀癌率与白介素-2十分接近。实验结果人早期胚胎因子组杀癌率为88.2%(平均值)，白介素-2组杀癌率为91.1%(平均值)，而对照组仅为47.2%，显示人早期胚胎因子组明显高于对照组，P值＜0.001。
经对20只小白鼠实验证明，仅注射8针人早期胚胎因子，即可使小白鼠脾脏NK细胞杀癌活性上升11%，经统计学处理P＜0.001。
(五)能显著提高免疫功能经取40个人血实验，人早期胚胎因子可使人白细胞吞噬率比对照组上升88.06%，比猪胸腺组高23.53%；可使人白细胞吞噬指数比对照组上升161.4%，比猪胸腺素组高72.5%，通过α—醋酸萘酯酶实验，可使T淋巴细胞活性上升37.26%，比猪胸腺素组高7%。
经对15只大白鼠实验证明，用人早期胚胎因子后比用人早期胚胎因子前血白细胞吞噬率上升118.8%，吞噬指数上升207.7%，可使大鼠T淋巴细胞活性上升117.7%。
从以上可以看出，人早期胚胎因子对癌细胞有显著的抑杀作用，它类似白介素-2，能高效诱导Lak细胞，高效激活NK细胞，提高细胞的杀癌力，能显著提高免疫功能，对人体正常细胞无毒副作用。人早期胚胎因子原料为人工流产的废弃物，成本低，产品价格便宜，效价成本仅是白介素-2的1/7—1/10(白介素-2国内价格为每克60万元)。制造方法简单，一般的生物制品研究所均可制造，该药品及其制取方法，有广阔的医药应用前景。
权利要求
1.一种人早期胚胎因子及其制取法和在制药中的应用，其特征是所说的人早期胚胎因子的物理-化学参数是①外观液体制剂为无色澄明；②PH值7.0±2；③分子量2万；④紫外分析测定多肽为1000mg/ml以上，核糖体为100mg/ml以上；⑤蛋白质反应3%磺基水杨酸法(一)性；⑥热流反应(一)；⑦过敏反应(一)；⑧药物刺激试验皮下注射无红肿、硬变、坏死症状，眼结膜滴入无红肿、充血现象。
2.按照权利要求1所述的人早期胚胎因子及其制取法和在制药中的应用，其特征是所说的制取法是①收集原料的标准要求为a、制取人早期胚胎因子的组织材料，应由健康妇女提供，时期为2—3个月，胚胎组织在体内为活体，无病态异常；b、取出胚胎组织后应迅速放置-20℃以下保存；c、对胚胎组织进行乙肝、丙肝等血液的病毒抗原抗体×检测、阴性方可选为正式原料；②将收集到的符合标准要求的胚胎组织用无菌蒸馏水冲洗干净，然后置高速绞碎机内，加冷蒸馏水进行匀浆，转速10000—12000转/分，时间3—5分钟，将匀浆置-20℃以下冰冻，然后取出，在35—37℃水浴融化，融化后立即速冻，将匀浆混悬液调整PH值为4.6—4.8，在4—6℃下放置1—2小时，然后离心，转速3000转/分以上，取出上清液，将上清液调为PH6.9—7.1，澄清过滤，将澄清液倒入超滤器内进行超滤，所得超滤液即为人早期胚胎因子制剂，对超滤所得制剂进行除菌，各类血液病毒抗原抗体检测，全部为阴性后进行分装成品。
3.按照权利要求1、2所述的人早期胚胎因子及其制取法和在制药中的应用，其特征在于所说的在制药中的应用是人早期胚胎因子作为治癌症药的应用，它能直接抑杀癌细胞，诱导Lak细胞，激活NK细胞。
全文摘要
公开了人早期胚胎因子及其制取方法和在制药中的应用。它将人早期胚胎组织置高速绞碎机内匀浆，匀浆冰冻后取出，然后离心、过滤和超滤、除菌，进行血液病毒抗原抗体检测，所得人早期胚胎因子分子量为2万，多肽为1000mg/ml以上，核糖体为100mg/ml以上，能高效诱导Lak细胞，激活NK细胞，作为治癌药物，具有很强的杀癌力和免疫功能，无毒副作用。所用原料为人工流产废弃物，一般生物制品所均可制造，应用前景广阔。
文档编号A61K35/54GK1102097SQ93115199
公开日1995年5月3日 申请日期1993年10月29日 优先权日1993年10月29日
发明者李滨胜, 李荣杰, 孙安堂, 李星 申请人:泰安市中医医院, 泰安市卫生防疫站, 山东省生物制品研究所