专利名称：二氟五肽衍生物消炎剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用作消炎剂的新的肽衍生物。
一些具有各种生物活性的多肽衍生物是已知的。以下的参考文献公开了这类多肽衍生物1980年12月30日颁布的Claeson、Simonsson和Arielly的美国专利第4242329号;1982年2月23日颁布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美国专利第4316889号;1983年8月16日颁布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美国专利第4399065号;1983年8月30日颂布的Umezawa、Takeuchi、Aoyagi、Ishii、Saino和Someno的美国专利第4401594号;1984年10月23日颁布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美国专利第4478745号;1985年7月9日颁布的Kasafirek、Fric、Slaby和Robalova的美国专利第4528133号;1986年6月24日颁布的Dutta、Stein、Trainor和Wildonger的美国专利第4596789号;1986年11月18日颂布的Hassall、Johnson和Roberts的美国专利第4623639号;1987年10月27日颁布的Bajusz、Hasenohrl、Bagdy、Barabas、Dioszegi、Fittler、Jozsa、Horvath和Jozst的美国专利第4703036号;1989年11月14日颁布的Trainor和Stein的美国专利第4880780号;1989年11月28日颁布的Abe、Yaginuma、Nagasawa和Kuroiwa的美国专利第4883863号;1990年2月20日颁布的Mizoue、Okazaki、Hanada、Omura和Amamoto的美国专利第4902781号;1990年5月8日颁布的Trainor和Stein的美国专利第4923890号;1991年11月19日颂布的Abeles和Gelb的美国专利第5066643号;1984年2月2日公开的Galpin和Wilby的PCT专利申请第84/00365号;1987的5月7日公开的Hoover的PCT专利申请第87/02675号;1972年11月9日公开的Toray Inds.Inc.的日本特许申请昭47-30618号;1974年7月19日公开的Mitsubishi Chem.Ind.KK的日本特许申请昭57-145846号;1982年3月25日公开的Daiichi Kagaku Yaku的日本特许申请昭58-164563号;1988年7月20日公开的Merrell Dow Pharmaceuticals，Inc.的欧洲专利申请第0275101号;Aoyagi、Miyata、Nanbo、Kojima、Matsuzaki、Ishizuka、Takeuchi和Umezawa的“亮肽素的生物活性”，The Journal of Antibiotics，Vol.XXII，No.11(Nov.1969)，pp.558～568;Bajusz、Barabas、Tolnay、Szell和Bagdy的“三肽醛对凝血酶和胰蛋白酶的抑制作用”，Int.J.Peptide Protein Res.，Vol.12(1978)，pp.217～221;Gaal、Bacsy和Rappay的“用蛋白酶抑制剂BOC-DPhe-Phe-Lys-H处理过的已培养的前垂体细胞对阳离子铁蛋白的吸收”Histochemistry，Vol.88(1988)，PP.401～406;Makara、Rappay、Garamvolgyi、Nagy、Danko和Bajusz的“三肽醛Boc-DPhe-Phe-Lysinal，一种新的垂体细胞中的Ca2+通道抑制剂”European Journal of Pharmacology，Vol.151(1988)，pp.147～149;Nagy、Makara、Horvath、Rappay、Kurcz和Bajusz的“三肽醛蛋白酶抑制剂在试管内可以抑制催乳激素和生长激素的释放”，Endocrinology，Vol.116，No.4(1985)，pp.1426～1432;Rappay、Makara、Bajusz和Nagy的“各种蛋白酶利用前垂体细胞抑制剂减少催乳激素和生长激素的释放”Life Sciences，Vol.36(1985)，pp.549～555。
本发明的目的是提供用作消炎剂的新的二氟五肽衍生物。
本发明的另一个目的是提供能减少与类风湿关节炎有关的骨吸收作用和/或异位骨形成作用的新的二氟五肽衍生物。
本发明还有一个目的是提供包含某些二氟五肽衍生物的新的药物组合物。
本发明再一个目的是提供使用本发明化合物治疗以炎症为特性的疾病的方法。
本发明涉及具有以下结构的消炎化合物
式中(a)-X选自含有4至约15个碳原子的环烷基;含有6至约15个碳原子的、至少有二个支链的支化烷基;及含有6至约15个碳原子的芳烷基;
(b)n为0至约2的整数;
(c)-V-选自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-和-P(O)(OH)-;
(d)-Q为氢;或直链或支链烷基，它是饱和的或带有1或2个双键的不饱和的，含有1至约6个碳原子;或者-Q和-X被共价键连结，形成一包括已键合有-Q的氮原子和从约5至约20个碳原子的环状部份;
(e)Z是-O-或-NH-;当V是-OC(O)-时，-Z-是-NH-;
(f)-R1选自直链或支化的烷基、它是饱和的或含有1或2个双键的，含1至约6个碳原子;含3至约10个碳原子的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和环烷基;其脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基;而键合到-R1的碳原子既可处于D构型也可处于L构型;
(g)-R2选自直链的或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有1至约6个碳原子的烷基;含3至约10个碳原子的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的环烷基;其脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基;而键合到-R2的碳原子是处于L构型;
(h)-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m为一个从1至约6的整数，-A-是一共价键或对-苯基或对-环己基，-B-是一共价键或-NH-;而键合到-R3的碳原子是处于L构型;
(i)-R4选自直链或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有1至约6个碳原子的烷基;含有3至约10个碳原子的，饱和的或带有1或2个双键的不饱和的环烷基;其脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基;而键合到-R4的碳原子是处于L构型;
(j)-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是一个从0至约6的整数，-A-是一共价键或对-苯基或对-环己基，-B-是一共价键或-NH-;而键合到-R5的碳原子是处于L构型;和(k)-Y是氢原子或甲基。
本发明还涉及包含以上化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物和组合物来治疗炎症或疼痛的方法。
此处所用的术语“烷基”，除另有说明外，是指含碳链，它既可以是直链的、支化的，也可以是环状的;它既可以是饱和的也可以是不饱和的;它既可以是未取代的也可以是已取代的。这里所用的“环烷基”可含有烷基和环状环本身所示碳原子总数的全部或一部分。环烷基包括单环烷基、双环烷基和/或三环烷基。
优选的烷基是此段中所指出的那些，特殊情况除外。优选的烷基是饱和的。优选的烷基是未取代的。优选的烷基取代基选自卤素、氨基、羟基、烷氧基、氰基、硝基、芳基和三氟甲基。这里所用的“烷氧基”是-O-烷基。优选的取代烷基是单一、二-或三取代的烷基，特别是单基取代的烷基。
此处所用的术语“芳基”，除非另有说明，均指未取代的或已取代的芳环。除非在特殊情况另有指出外，优选的芳基是本段中所指出的芳基。优选的芳基是苯基和萘基，特别是苯基。优选的芳基是单-、二-、三-或未取代的;更优选的芳基是单基取代的或未取代的，特别是未取代的。优选的芳基取代基包括烷基、卤素、氨基、羟基、烷氧基、氰基、硝基和三氟甲基。
此处所用的术语“芳烷基”指用芳基取代的烷基。优选的芳烷基是芳甲基。
此处所用的术语“脂族的”意指芳烷基的开链含碳部分。
这里使用下列缩略词。用于氨基酸的缩略词既可以指氨基酸本身，或更经常是指作为肽或肽衍生物结构的一部分的氨基酸部分。
Arg 精氨酰基Orn 鸟氨酰基Leu 亮氨酰基Gly 甘氨酰基t-Bug 叔丁甘氨酰基Phe 苯丙氨酰基Adoc 金刚基氧羰基Z 苄氧羰基Boc 叔丁氧羰基DECP 二乙基氰基膦酸根Me 甲基Et 乙基TEA 三乙胺DMF 二甲基甲酰胺TFA 三氟乙酸根
ipa 异丙醇Bn 苄基Lys 赖氨酰基Ac 乙酰基TLC 薄层色谱TSA 甲苯磺酸THF 四氢呋喃HOBt 羟基苯并三唑DCC 二环己基碳化二亚胺DIPEA N，N-二异丙基乙胺Chg 环己基甘氨酰基Cha 环己基丙氨酰基Nal 萘丙氨酰基Trp 色氨酰基Adg 金刚基甘氨酰基pGphe 对-胍基苯丙氨酰基3，5-Dmadoc 3，5-二甲基金刚基氧羰基eBroc 内-冰片基氧羰基Noc 萘基氧羰基Moc 甲基氧羰基Ad 金刚酰基Fmoc 芴基甲氧羰基Ada 金刚烷乙酰基Adac 金刚基氨基羰基
Mnoc 吗啉基Norad 降金刚酰基Hadoc 高金刚基氧羰基Foc 葑氧羰基Imoc 异
氧羰基Ipoc 异松莰基氧羰基AC 乙酰基DMF 二甲基甲酰胺HPLC 高压液相色谱本发明的新的消炎化合物是具有以下化学结构式的那些
在结构式(Ⅰ)中，n是从0至约2的整数;优选的n是0或1。
在结构式(Ⅰ)中，-R1选自直链或支化的、饱和的或带有1或2个双链的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基;饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10碳原子的环烷基;其脂族部分是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基。优选的-R1是饱和的烷基。优选的烷基是未取代的烷基或是芳烷基，特别是苄基和萘亚甲基。优选的环烷基是环状的C3～C8(更优选是C5～C6)甲基或金刚基甲基。优选的-R1是疏水的，最好其疏水性紧靠-R1所键合的碳原子。优选的-R1的具体例子包括叔丁基，1，1-二甲基丙基，异丙基，异丁基，仲丁基，新戊基，环己基，环己基甲基，金刚基，金刚基甲基，苄基，萘亚甲基;最优选的-R1是叔丁基。
在结构式(Ⅰ)中，与-R1键合的碳既可是处于D构型也可是处于L构型，优选为D构型。当-Z-是-NH时，结构-Z-CH(R1)-C(O)-是一氨基酸部分(在下文中以-AA1-表示);对于-AA1-，优选的氨基酸部分包括t-Bug、Val、Ile、Leu、Chg、Cha、Phe、Nal、Trp和Adg;更优选的是t-Bug、Val和Ile;最优选的-AA1-是t-Bug。
在结构式(Ⅰ)中，-R2选自直链或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基;饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10个碳原子的环烷基;其脂族部分是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基。优选的支化或环状烷基是饱和的。优选的支化或环状烷基是未取代的。优选的支化烷基含有从3至5个碳原子;最优选的支化烷基是异丁基。优选的环烷基含有C3～C7的(更优选是含有C5～C6的)被键合到亚甲基、亚乙基或正亚丙基(优选为亚甲基或亚乙基，更优选为亚甲基)的环，而亚甲基、亚乙基或正亚丙基被键合到结构式(Ⅰ)中的与-R2键合的碳原子上。优选的芳烷基是苄基、对羟苄基和萘亚甲基。更优选的-R2选自异丙基、异丁基、仲丁基、环己基甲基、苄基和萘亚甲基;最优选的是苄基。
在结构式(Ⅰ)中，与-R2键合的碳原子是处于D或L构型。结构-NH-CH(R2)-C(O)-是-氨基酸部分(以下称为-AA2-);对于-AA2-，优选的氨基酸部分包括Phe、Nal、Cha、Leu和Ile;最优选的-AA2-是Phe。
在结构式(Ⅰ)中，-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是一个从1至约6的整数，-A-是一共价键、对-苯基或对-环己基，而-B-是一共价键或-NH-。当-A-是一共价键时，m优选为2～5、更优选为2～4、特别优选为3或4。当-A-是对-苯基或对-环己基时，m优选为1～4、更优选为1～3、特别优选为1。-A-优选为共价键。-B-最好是-NH-。更优选的-R3是3-胍基-正-丙基或4-氨基-正-丁基。
在结构式(Ⅰ)中，与-R3键合的碳原子是处于D构型或L构型，优选为L构型。结构-NH-CH(R3)-C(O)-是一氨基酸部分(以下称为-AA3-);对于-AA3-，优选的氨基酸部分包括Arg、Lys、高-Arg、对氨基-Phe、对脒基-phe和对-Gphe;最优选的-AA3-是Lys。
在结构式(Ⅰ)中，-R4选自直链或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基;饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10个碳原子的环烷基;其脂族部分是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基。优选的支化或环状烷基是饱和的和未取代的。优选的支化烷基含有从3至5个的碳原子;最优选的支化烷基是异丁基。优选的环烷基含有一个C3～C7、更优选为C5～C6的环，该环被键合到亚甲基、亚乙基或正亚丙基(优选为亚甲基或亚乙基，而更优选为亚甲基)上，而亚甲基、亚乙基或正亚丙基被键合到结构式(Ⅰ)中的与-R4键合的碳原子上。优选的芳烷基是苄基、对羟苄基和萘亚甲基。更优选的-R4选自异丙基、异丁基、仲丁基、环己基甲基、苄基和萘亚甲基;最优选的是苄基。
在结构式(Ⅰ)中，与-R4键合的碳原子是处于D或L构型。结构-NH-CH(R4)-C(O)-是一氨基酸部分(以下称为-AA4-);对于-AA4-，优选的氨基酸部分包括Phe、Nal、Cha、Leu和Ile;最优选的-AA4-是Leu。
在结构式(Ⅰ)中，-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是从1至约6的一个整数，-A-是一共价键、对-苯基或对-环己基，而-B-是一共价键或-NH-。当-A-是一共价键时，m优选为2～5、更优选为2～4、特别优选为3或4。当-A-是对-苯基或对-环己基时，m优选为1～4、更优选为1～3、特别优选为1。-A-最好是一共价键。-B-最好是-NH-。更优选的-R5是3-胍基-正丙基或4-氨基-正丁基。
在结构式(Ⅰ)中，与-R5键合的碳原子处于D或L构型，优选为L构型。结构-NH-CH(R5)-C(O)-是一氨基酸部分(以下称为-AA5);对于-AA5，优选的氨基酸部分包括Arg、高-Arg、Lys、对脒基-Phe、对氨基-Phe。和对-GPhe;最优选的-AA5-是Arg。
在结构式(Ⅰ)中，-Y是氢或甲基。
在结构式(Ⅰ)中，-Z-是-O-或-NH-。优选的-Z-是-NH-。
在结构式(Ⅰ)中，-V-选自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-和-P(O)(OH)-。优选的-V-选自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-。更优选的-V-是-OC(O)-或-N(Q)C(O)-。最优选的-V-是OC(O)-。当-V-是-OC(O)-时，-Z-是-NH-。
在结构式(Ⅰ)中，-X选自含有从4至约15个碳原子的环烷基;含有从6至约15个碳原子和至少2个分枝的支化烷基;含有从6至约15个碳原子的芳基。优选的-X含有从6至12个碳原子;更优选的-X含有从8至10个碳原子。-X的优选烷基部分是饱和的。优选的-X是未取代的、或是已被未取代的烷基或芳基取代的。优选的环烷基是单环烷基、双环烷基、三环烷基，更优选的是双环烷基和三环烷基，特别是三环烷基。优选的环烷基在每个环中含有5或6个碳原子、更优选为含有6个碳原子。很优选的-X是金刚基。优选的芳基-X是未取代的或用烷基取代的芴基、萘基和苯基。特别优选的芳基-X包括萘基和芴基。当-X是芳基或环烷基时，n优选为1。
在结构式(Ⅰ)中，当-V-是-N(Q)C(O)-或-N(Q)C(S)-时，-Q选自氢;直链或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基;或者-Q和-X以共价键相连，形成一环状部分，该环状部分包括与-Q结合的氮和从约5至约20个碳原子。优选的-Q-X-含有从6至15个碳原子;更优选的-Q-X-含有从8至12个碳原子。优选的-Q-X-是未取代的，或被未取代烷基或芳基所取代的。优选的环状
是单环的、双环的或三环的;更优选的是单环的。最优选的-Q是氢。
在结构式(Ⅰ)中，优选的X-(CH2)n-V-(以下称作X′-)包括Adoc、Ad、Fmoc、Ada、Adac、Mnoc、Norad、Hadoc、Foc、Imoc、Ipoc、3，5-Dmadoc、eBroc、Noc和Moc;更优选的-X′是Adoc、Ipoc和eBroc;最优选的-X′是Adoc。
本发明的优选的消炎化合物包括以上化合物的药物上可接受的盐。特别优选的盐包括由强酸和上述化合物加成形成的盐。特别优选的是-R3或-R5或它们两者被质子化这种加成盐，在-R3和R5部分上形成正电荷。本发明的优选化合物通常以水合物形式与一个或多个的水分子相缔合。
本发明的优选消炎化合物包括下列化合物Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-D-Phe-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-D-Arg-OMeMnoc-D-Phe-Phe-Arg-C(O)-CF2C(O)-Leu-Lys-OMeeBroc-D-t-Bug-Phe-pGphe-C(O)CF2C(O)-Ala-Arg-OMeIpoc-D-Nal-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMeAdoc-D-Phe-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OHNoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Ala-Lys-OMe药物组合物本发明的药物组合物是包含一种安全和有效量的上文所定义的二氟五肽衍生物和一种药物上可接受的载体。这类组合物典型地包含从约0.1%至95%重量的二氟五肽衍生物，优选为从约1%至约90%，而更优选为从约5%至约75%。
此处所用的术语“药物上可接受的载体”意指一种或多种配伍的固态或液态填料稀释剂或包封物，它们适于向人或低等动物施药。此处所用的术语“配伍的”意指药物组合物的各组分能与本发明的二氟五肽衍生物以在通常的使用条件下不发生明显降低组合物药效的相互作用的方式相杂混及它们之间的彼此杂混。当然，药物上可接受的载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性，使它们适于施给被治疗的人或低等动物。
能用作药物上可接受的载体的某些例子是糖类，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉类，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉;纤维素及其衍生物类，诸如羧甲基纤维素、乙基纤维素和乙酸纤维素;粉状黄蓍胶;麦芽;明胶类;滑石;硬脂酸;硬脂酸镁;硫酸钙;植物油，诸如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油;多无醇，诸如丙二醇、甘油、山梨(糖)醇、甘露糖醇和聚乙二醇;藻酸;无致热质的水;等渗盐水;磷酸盐缓冲溶液类;可可脂(栓剂基料);乳化剂类，诸如Tweens ;润湿剂类和润滑剂类，诸如十二烷基硫酸钠;着色剂类;调味剂类;稳定剂类;抗氧剂类;防腐剂类;以及用于药物配方中的其他非毒性配伍物。其他配伍的药物添加剂和活性物质可被包含在用于本发明组合物中的药物上可接受的载体中。
连同本发明的二氟五肽衍生物一起使用的药物上可接受的载体的使用浓度足以形成实用的大小与剂量的关系。总的说，药物上可接受的载体总量一般占本发明药物组合物重量的约5%至约99.9%、优选为从约10%至约99%、而更优选为从约25%至约95%。
在药物组合物中，本发明的二氟五肽衍生物的总的单剂量一般为从约1mg至约1000mg、优选为从约50mg至约800mg、更优选为从约100mg至约500mg。
对与本发明的二氟五肽衍生物一起使用的药物上可接受的载体的选择是根据施予治疗物质的方式确定的。优选的施予本发明活性物质的方式是注射、吞服、吸入以及局部施予。
制造可注射剂的方法和材料可见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版.，1985，第85章，p.1518，其整个公开内容在这里被收入作参考。一般说来，三种可注射剂量形式是优选的(1)水溶液，(2)非水溶液;以及(3)乳液。可注射剂量形式典型地含有从约0.001mg/ml至约10mg/ml、优选为从约0.4mg/ml至约0.6mg/ml的本发明化合物。本发明的优选的可注射剂量组合物包括pH为从约3至约8(更优选的pH为从约4至约6)的灭菌水溶液或乳液。
在其中可吞服而施予本发明的二氟五肽衍生物的优选药物载体是公开在以下专利中的类蛋白微胶囊1990年1月23日颁发的Kantor、Steiner和Pack的美国专利第4895725号;1990年5月15日颁发的Steiner和Rosen的美国专利第4925673号;1990年12月11日颁发的Steiner的美国专利第4976968号;1991年1月8日颁发的Steiner的美国专利第4983402号;所有四份专利均全文被引入本文作参考。
产生抗炎性和镇痛性的方法本发明还包括通过给需要这样治疗的人或低等动物施以安全和有效量的本发明的二氟五肽衍生物的方法在人或低等动物产生抗炎性和/或镇痛性的方法。在整个治疗期间可以以单剂或复合剂形式重复施予这一数量。虽然剂量高于本文中所介绍的剂量时对减轻炎症和产生镇痛作用是有效的，但是对个别的治疗对象必须小心以防止不良的副作用。本发明的二氟五肽衍生物和组合物能被用来减轻由疾病和创伤引起的深层组织、肌肉、腱、囊和关节的各种疾病的炎症，并被用来治疗的防止疼痛。
施予本发明的二氟五肽衍生物的优选方式是通过注射、吞服、吸入和局部施予。具体的施予方式包括但并不限于口服;注射，如肌肉、静脉、腹膜、皮内和皮下注射;吸入;以及局部施予，如经皮肤的、口的、粘膜的和舌下的施予。
这里所用的术语“安全与有效量”意指在正确的医学判断范围内，二氟五肽衍生物或组合物的量足够高，以明显地改善所治的病况，但又足够低以避免严重的副作用(处于合理的效益/危险比)。二氟五肽衍生物或组合物的安全与有效量是随所治疗的具体病情、被治疗病人的年龄与体质、病的严重性、治疗的持续时间、协同疗法的性质、所用的具体作用物、所用的特定的药物上可接受的载体、以及在主治医生的知识与经验之内的喜爱因素而变化的。
本发明的二氟五肽衍生物的每日剂量范围为从每公斤体重约0.1毫克至约50毫克，更优选的为每公斤体重约1毫克至约100毫克、还要优选的是从每公斤体重约2毫克至约50毫克。每日可以施予1至约4服单剂量、优选为每日约2至约3服单剂量。通过注射施予的二氟五肽衍生物的优选量为从约0.1毫克/公斤/日至约50毫克/公斤/日，更优选为从约1毫克/公斤/日至约10毫克/公斤/日。通过口服施予的二氟五肽衍生物的优选量为从约1毫克/公斤/日至约500毫克/公斤/日，更优选为从约5毫克/公斤/日至约100毫克/公斤/日。通过吸入法施予的二氟五肽衍生物的优选量为从约0.1毫克/公斤/日至约500毫克/公斤/日，更优选为从约5毫克/公斤/日至约100毫克/公斤/日。局部施予的二氟五肽衍生物的优选量为从约1毫克/公斤/日至约500毫克/公斤/日，更优选为从约50毫克/公斤/日至约250毫克/公斤/日。
合成本发明化合物的方法下列非限制性方案和例子说明合了成本发明的二氟五肽衍生物的方法。
Ⅰ.Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)-CF2-C(O)-Leu-Arg-OMe的合成Adoc-D-t-Bug-OH向处于0℃的48.8g(0.370M)的D-叔丁基甘氨酸在371ml的1N NaOH和159ml的二噁烷中的溶液，加入33.9g(0.40M)的NaHCO3，接着在3小时内滴加80.0g(0.40M)的氟甲酸金刚酯在371ml的二噁烷中的溶液。在该温度下搅拌混合物0.5小时并移开冷却浴。将溶液搅拌3小时并用1N NaOH调整pH至10。用EtOAc提取此溶液并将残留的水相酸化至pH＝3。用EtOAc提取此酸性溶液，干燥，并除去溶剂，得到118g产物。TLC(94/5/1-CH2Cl2/ipa/AcOH)，说明它是均匀的，Rf＝0.90。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn向115g(0.37M)的Adoc-D-t-Bug-OH和L-Phe-OBn.pTSA(0.36M)在1LCH2Cl2中的溶液中加入74.6g(0.74M)的TEA，接着添加60.8g(0.37M)的DECP，并将所生成的溶液搅拌过夜。除去溶剂并将产物再溶在EtOAc中，接着依次用盐水、0.4N HCl、以及饱和的NaHCO3液进行洗涤。将溶液干燥并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离，得到186g产物。TLC(85/15，己烷/EtOAc)，Rf＝0.40。
Adoc-D-tBug-Phe-OH(1)在氮气氛中向一干烧瓶中添加34.0g载在碳上的5%Pd。将烧瓶冷却到-78℃并添加200ml无水脱气甲醇。向此淤浆添加8.8ml甲酸(88%)，随后添加36.0g Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn(0.066M)在100ml甲醇和4.4ml甲酸中的混合物。撤去冷却浴并将淤浆搅拌2小时。此时添加另外200ml溶在甲醇中的4.4%甲酸，并将淤浆搅拌过夜。在氮气氛中通过玻璃纤维滤纸过滤此混合物。将滤液穿过硅藻土床进行再过滤以除去全部痕量的催化剂。除去溶剂，生成17.3g产物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)OEt(3)向79.2g(1.21M)活性锌在0.600L的THF中的溶液添加2.36g溴二氟乙酸乙酯并将此溶液进行回流。一旦开始回流就滴加236g(1.16M)溴二氟乙酸乙酯和176g(0.485M)(2)在1.80L THF中的混合物。就(2)的合成而言，见Burkhart，J.，N.Peet和P.Bey的“制备肽基α-酮酯的新方法”一文，Tetrahedron Letters，Vol.31，No.10，pp.1385～1388(1990)。将溶液回流1小时，冷却并用饱和的KHSO4进行骤冷。骤冷后的产物用EtOAc稀释并依次用饱和的KHSO4、饱和的NaHCO3和盐水洗涤。此过程之后是用MgSO4干燥和除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离，生成68.0g纯产物。Rf＝0.20，75/25己烷/EtOAc。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)ONa(4)向1.00g(0.002M)的(3)在10ml甲醇中的溶液添加2ml的1N NaOH，并将此溶液在室温下搅拌5小时和除去溶剂。将残余物溶解在少量水中并用乙醚提取此牛奶状溶液。把水从含水相中除去并通过将残余物置于真空室中24小时使其充分干燥。回收到0.069g的产物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(5)向0.500g(1.03mmol)的(4)和0.470g(1.26mmol)的Leu-Arg(NO2)OMe·HCl在30ml DMF中的溶液，一次加入0.019g(1.26mmol)HOBt。随后滴加入在3ml DMF中的0.260g(1.26mmol)DCC。最后，添加0.003ml DIPEA并对此溶液搅拌48小时。在真空下去掉DMF并将残余物溶解在EtOAc中。将溶液转移到分液漏斗并用0.1N HCl、饱和的NaHCO3液、以及盐水洗涤。用MgSO4干燥此乙酸乙酯层，过滤并除去溶剂。对残余物在硅胶上进行色层分离而得到0.420g产物。Rf＝0.68(90/10CH2Cl2/MeOH)。
ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl向在200ml二噁烷中的(5)(17.3g，0.022M)溶液添加66.8ml(0.220m)的在二噁烷中的3.3M HCl，并将此混合物搅拌1小时。此时添加另外5ml的在二噁烷中的3.3M HCl，并将此溶液搅拌另外的0.25小时。除去溶剂并将残余物置于真空下。在氮气氛下用乙醚研磨此固体残余物并过滤之。回收到16.0g白色固体。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg-(NO2)-OMe(6)向16.0g先前反应的残余物(0.022M)和11.1g的(1)(0.024M)在300ml CH2Cl2中的溶液中，滴加入6.69ml(0.048M)的TEA，接着滴加3.64ml(0.024M)的DECP。将此溶液搅拌过夜并除去溶剂。残余物被溶解在EtOAc中并依次用0.1N HCl、饱和的NaHCO3液、以及盐水洗涤。将溶液干燥并除去溶剂，得26.6g产物，在硅胶上进行色层分离该产物，得到12.7g纯产物。其Rf＝0.85，90/10-CH2Cl2/MeOH。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe向14.3g(0.034M)Dess-Martin Periodinane在1.15L CH2Cl2中的淤浆，添加入0.910ml的无水吡啶，接着滴加在2.3L CH2Cl2中的12.7g(0.011M)的(6)。就制备Dess-Martin Periodinane而言，可参见Dess.D.和J.Martin的文章，Journal of Organic Chemistry，Vol.48，pp.4155～4156(1983)。将淤浆搅拌2小时并添加在饱和的NaHCO3液中的58.7g(0.24M)Na2S2O4，并将生成的溶液搅拌0.5小时。把各相分开并用乙酸乙酯提取水相。将合并的有机相干燥并除去溶剂，得到13.9g产物，它未经纯化而用于下一步的反应。(Rf＝0.30，95/5 CH2Cl2/MeOH)。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe(7)向在200ml无水DMF中的13.4g(0.012M)前述反应残余物的溶液添加6g钯黑，并对生成的淤浆进行0.5小时的脱气。向此淤浆添加8ml在二噁烷中的3.3M HCl。反应物被置于Paar摇动器上并进行6小时的氢化。将此淤浆滤过硅藻土，除去溶剂。对残余物进行反相高效液体色谱分离(CH3CN/H2O)，得到6.5g产物。
Ⅱ.Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg-OMe的合成在0℃和3小时内，向在371ml的1N NaOH和159ml二噁烷中的48.8g(0.370M)D-叔丁基甘氨酸，添加在371ml二噁烷中的33.9g(0.40M)氟甲酸金刚酯。在此温下将混合物搅拌0.5小时，撤去冷却浴。将溶液搅拌3小时并用1N NaOH将pH调整至10。用EtOAc提取此溶液并将剩下的水相酸化至pH＝3。此酸性溶液用EtOAc提取，干燥并除去溶剂，得到118g产品，TLC(94/5/1-CH2Cl2/i-pa/AcOH)，Rf＝0.90表明它是均匀的。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn向115g(0.37M)的Adoc-D-t-But-OH和L-Phe-OBn.pTSA(0.36M)在1L CH2Cl2中的溶液添加74.6g(0.74M)TEA，接着添加60.8g(0.37M)DECP，并将生成的溶液搅拌过夜。除去溶剂并将产物再溶解在EtOAc中，再依次用盐水、0.4N HCl、以及饱和的NaHCO3液洗涤。将溶液干燥并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离，得到186g产物。TLC(85/15-己烷/乙酸乙酯)，Rf＝0.40。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OH (1)向氮气氛下的干燥烧瓶中添加34.0g载在碳上的5%Pd。将烧瓶冷却至-78℃并添加200ml无水脱气甲醇。向此淤浆添加8.8ml甲酸(88%)，随后添加36.0g Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn(0.066M)在100ml甲醇和4.4ml甲酸中的混合物。撤去冷却浴并对淤浆搅拌2小时。此时添加另外的200ml在甲醇中的4.4%甲酸，并将淤浆搅拌过夜。在氮气氛下通过玻璃纤维滤纸过滤此混合物。将滤液通过硅藻土床再过滤以除去所有痕量的催化剂。除去溶剂后得到17.3g产物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)OEt(3)向79.2g(1.21M)活性锌在0.600L THF中的溶液添加2.36g溴二氟乙酸乙酯，将此溶液进行回流。一旦开始回流马上将在1.80L THF中的236g(1.16M)溴二氟乙酸乙酯和176g(0.485M)的(2)的混合物滴加入。把溶液回流加热1小时后将其冷却，并用饱和的KHSO4骤冷。骤冷的产物以EtoAC稀释并依次用饱和的KHSO4、饱和的NaHCO3和盐水洗涤。经以上过程后接着用MgSO4干燥并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离得到68.0g纯产物。Rf＝0.20，75/25-己烷/乙酸乙酯。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)ONa(4)向1.00g(0.002M)的(3)在10ml甲醇中的溶液添加入2ml的1N NaOH，在室温下搅拌此溶液5小时并除去溶剂。将残余物溶在少量水中并用乙醚提取此牛奶状溶液。从含水相中除去水并且通过将残余物置于真空下24小时使其被彻底干燥。0.069g产物被回收。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CH2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(5)向0.500g(1.03mmol)的(4)和0.470g(1.26mmol)的Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl在30ml的DMF中的溶液中一次添加0.019g(1.26mmol)的HOBt。之后接着滴加在3mlDMF中的0.260g(1.26mmol)DCC，最后，加入0.003ml DIPEA并将溶液搅拌48小时。真空除去DMF并将残余物溶于EtOAc中。将此溶液转移到分液漏斗并用0.1N HCl、饱和的NaHCO3、以及盐水进行洗涤。用MgSO4干燥此乙酸乙酯层，过滤并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离，得到0.420g产物。Rf＝0.68，90/10 CH2Cl2/MeOH。
ε-Z-Lys-C(OH)-CH2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl向在200ml二噁烷中的(5)(17.3g，0.022M)的溶液内添加66.8ml(0.220m)在二噁烷中的3.3M HCl。将此混合物搅拌1小时。此时添加另外的在二噁烷中的3.3M HCl 5ml，并对溶液搅拌另外的0.25小时。除去溶剂并将残余物置于真空中。在氮气氛下用乙醚研磨此固体残余物。回收到16.0g的白色固体。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CH2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(6)向16.0g(0.022M)先前反应的粗产物和11.1g(1)(0.024M)在300ml CH2Cl2中的溶液，滴加入6.69ml(0.048M)的TEA，接着滴加3.64ml(0.024M)DECP。溶液被搅拌过夜并除去溶剂。剩余物被溶在EtOAc中并依次用0.1N HCl、饱和的NaHCO3液、以及盐水洗涤。干燥此溶液并除去溶剂，得到26.6g粗产物，在硅胶上进行色层分离得到12.7g的纯产物。Rf＝0.85，90/10-CH2Cl2/MeOH。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe
向14.3g(0.034M)Dess-Martin Periodinane在1.15L CH2Cl2中的淤浆中添加0.910ml的无水吡啶，接着滴加入在2.3L CH2Cl2中的12.7g(0.011M)的前述反应产物。将此淤浆搅拌2小时并添加在饱和的NaHCO3中的58.7g(0.24M)Na2S2O4。将所生成的溶液搅拌0.5小时。分开各个相并用乙酸乙酯提取水相。将合并的有机相干燥并除去溶剂，得到13.9g产物，它无需纯化而被用于下一步反应(Rf＝0.30，95/5 CH2Cl2/MeOH)。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe·TFA(7)向13.4g(0.012M)前述反应的粗产物在200ml无水DMF中的溶液中添加6g钯黑，将生成的淤浆脱气0.5小时。向此淤浆添加8ml的在二噁烷中的3.3M HCl。反应物被置于Paar摇动器上并氢化6小时。穿过硅藻土过滤此淤浆并除去溶剂。剩余物经反相HPLC进行色层分离(CH3CN/H2O/TFA)，得到6.5g产物。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)OEt(9)向在无水THF中的5.67g(0.087M)活性锌溶液中添加1.0g溴二氟乙酸乙酯，并将温度升高以进行回流。此时，加入在THF中的15.2g(0.037M)的-Bn，-Z-Boc-鸟氨醛(8)和16.9g(0.083M)的溴二氟乙酸乙酯，接着使淤浆回流0.5小时。将溶液冷却并用饱和的KHSO4进行骤冷。用EtOAc稀释此溶液并用饱和的KHSO4、饱和的NaHCO3和盐水进行洗涤。将溶液干燥并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离得到6.58g产物。Rf＝0.22，99/1-CH2Cl2/ipa。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)ONa将酯(9)(0.965g，1.71mmol)溶于15ml甲醇中并添加1N NaOH 1.71ml。将溶液搅拌3小时并除去溶剂。将残余物置于真空中过夜并用于下一步的反应中其量为0.870g。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(10)向在80ml无水DMF中的0.870g(1.56mmol)先前反应的粗产物和0.579g(1.90mmol)Ala-Arg(NO2)-OMe·HCl的溶液中添加0.283g(2.09mmol)的HOBt，接着依次添加在20ml DMF中的0.392g(1.90mmol)DCC和0.068ml(0.39mmol)的DIPEA。在室温下搅拌此混合物18小时并除去溶剂。将残余物溶于EtOAc中并用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和盐水洗涤。溶液被干燥并除去溶剂。在硅胶上进行色层分离，产生0.520g产物(Rf＝0.20和0.22)。
α-Boc-Orn-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe将三肽(10)(0.338g，0.43mmol)溶于10ml的DMF中并添加0.15g钯黑。对此淤浆进行脱气并加入0.20ml在二噁烷中的4.0M HCl。混合物在Paar装置上被氢化过夜并通过硅藻土进行过滤。将残余物再溶解在甲醇中并添加0.20g的Pd(OH)2。将此淤浆在50psi在Paar装置上氢化24小时。通过硅藻土过滤此淤浆并除去溶剂。残余物无需提纯而被用于下一步的反应中。
α-Boc-Arg(Z)2-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(11)将粗胺(0.220g，0.39mmol)溶于THF中并添加0.325g(0.91mmol)的N，N-Bis-Z-S-甲基-异硫脲。向此溶液中添加0.150g Hg(OAc)2(0.47mmol)，并将此混合物搅拌过夜。此溶液用EtOAc稀释并依次用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和盐水洗涤。干燥此有机相并除去溶剂。残余物在硅胶上进行色层分离后得到0.170g作为非对映体混合物的产物。Rf＝0.60，0.62，5%MeOH/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg(Z)2-C(OH)-CH2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(12)向在5ml二噁烷中的0.228g(0.262mmol)(11)的溶液中添加0.656ml在二噁烷中的HCl。将此溶液搅拌1小时并再添加0.656ml的在二噁烷中的HCl。在再搅拌1小时后，除去溶剂并将残余物置于真空下过夜。将水解产物溶于5ml CH2Cl2中并与0.120g(0.262mmol)的Adoc-D-t-Bug-Phe-OH相混合。向该溶液添加0.073ml(0.525mmol)的TEA，接着添加0.043ml的DECP。将所生成的混合物搅拌过夜。除去溶剂并对残余物在硅胶上进行色层分离，得到作为非对映体混合物的0.086g产物。Rf＝0.65，0.68，4%ipa/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg(Z)2-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe向在5ml CH2Cl2中的0.094g(0.16mmol)Dess Martin periodinane的淤浆，通过注射器添加溶于0.5ml×××的0.091g(0.052mmol)的(12)。将此混合物搅拌0.5小时并添加在饱和的NaHCO3中的0.385g(1.55mmol)Na2S2O3。0.5小时后，用EtOAc提取此溶液，并分开有机相，用MgSO4干燥。除去溶剂，产生0.94g粗产物。Rf＝0.68，0.71，4%ipa/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg-OMe·TFA(13)将粗醇溶于2ml DMF中并加入50mg钯黑。把此淤浆进行脱气并加入0.040ml的在二噁烷中的4.0M HCl。在50psi下在Paar装置中将此混合物氢化20小时。通过硅藻土过滤此淤浆，并除去溶剂。残余物在反相柱(CH3CN/H2O/TFA)上进行色层分离，得到0.044g的纯产物。
N，N′-双羰基苄氧基-S-甲基-异硫脲(14)向在冷(0℃)的1N NaOH(36.0ml，36.0mmol)中的S-甲基异硫脲硫酸盐二聚物(5.00g，18.0mmol)的溶液中，通过各别加料漏斗滴加11.3ml(79.0mmol)氯甲酸苄酯和79.0ml(79.0mmol)1N NaOH。将此淤浆在0℃下搅拌0.5小时，在室温下搅拌1.5小时。用乙酸乙酯提取此溶液，用硫酸镁干燥并蒸发此滤液。在硅胶上进行色层分离得到2.62g纯产物。Rf＝0.40(15%EtOAc/石油醚)。
Ⅲ.N-封端的连接部分的合成Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn在氩气氛下向5ml的在甲苯中的15%碳酰氯溶液中添加0.140ml TEA(1.00mmol)。接着通过注射器滴加入在1ml甲苯中的0.112g(0.750mmol)1-金刚胺。将所得的淤浆搅拌0.3小时并通过用氩气吹洗除去过量的碳酰氯。通过抽吸穿越烧结玻板漏斗滤出固体，除去溶剂。残余物再溶解于二氯甲烷中并在氩气氛下冷却到0℃。向此溶液中添加0.140ml TEA(1.00mmol)，接着一次加入0.100g(0.250mmol)d-t-Bug-Phe-OBn·HCl。取出生成的溶液。经在硅胶上进行色层分离得0.350g产物。
将此化合物氢化，随之与(11)的水解产物偶合，生成一化合物，后者被成功地加工成另一种N-封端的连接成份。
化合物的活性测定方法下面的非限制性方法是测定本发明的二氟五肽衍生物的消炎和/或镇痛活性的方法。
已知对若干酶抑制作用的测定能预言化合物的消炎活性。这样的酶测定法可用来测定本发明化合物的活性。这样的酶测定法包括以下的各点猪胰激肽释放酶(PPK)-见参考文献A、E和F;人尿激肽释放酶(HUK)-见参考文献E和F;人血浆激肽释放酶(HPK)-见参考文献B和E;人血纤维蛋白溶酶(HP)-见参考文献B和C;以及尿激酶(UK)-见参考文献D。所指出的文献是以下的一些，它们被引入本文作为参考文献
(A)Lottenberg，R.，U.Christensen，C.M.Jackson & P.L.Coleman，“Assay of Coagulation Proteases Using Peptide Chromogenic and Fluorogenic Substrates，”Methods in Enzymology，Vol.80，Academic Press，New York，NY(1981)，pp.341-361;(B)Geiger，R.“Kallikrein，”Methods of Enzymatic Analysis，Vol.V，3rd Edition，Bergmeyer，ed.，Academic Press，New Nork，NY(1984)，pp.129-143;(C)Morris，J.P.，S.Blatt，J.R.Powell，D.K.Strickland & F.J.Castellino，“Role of Lysine Binding Regions in the Kinetic Properties of Human Plasmin，”Biochemistry，Vol.20，No.17(August 18，1981)p.4811;(D)Wohl，R.C.，L.Summaria & K.C.Robbins，“Kinetics of Activation of Human Plasminogen by Different Activator Species at pH 7.4 and 37℃”The Journal Biological Chemistry，Vol.255，No.5(March 10，1980)，pp.2005-2013;(E)Okunishi，H.，J.Burton & J.Spragg，“Specificity of Substrate Analogue Inhibitors of Human Urinary Kallikrein，”Hypertension，Vol.7，No.3，Suppl.1(May-June，1985)，pp.I-72-175;(F)Amundsen，E.，J.Putter，P.Friberger，M.Knos，M.Larsbraten & G.Claeson，“Methods for the Determination of Glandular Kallikrein by Means of a Chromogenic Tripeptide Substrate，”In Kinins-II part A，Fuji，S.，et al.，eds.，Plenum Press，New York，NY(1979)pp.83-95.
活性的其他有效测定法是基于公开在Imperiali，B.和R.H.Abeles的“Inhibition of Serine Proteases by Peptidyl Fluoromethyl Ketones”，Biochemistry，Vol.25(1986)pp.3760～3767中的测定慢束缚酶抑制作用的方法。为了研究人血纤维蛋白溶酶、猪胰激肽释放酶和人血浆激肽释放酶的缓慢束缚抑制作用，对该方法按以下所述进行了改进。
反应反应混合物含78mM的Tris-Hcl缓冲剂、pH7.4，78mM NaCl，0.2mg/ml的牛血清蛋白，0.2mM S-2251(D-Val-Leu-Arg-对硝基N(某)酰苯胺)，0.5U/ml血纤蛋白溶酶(1μM)，以及可变浓度的被研究的试验化合物。反应混合物的总体积为1ml。血纤蛋白溶酶的储液为1U/ml(在50%甘油中)。S-2251的酶裂解所释放的对-硝基苯胺所导致的吸光度变化使用一测度设定在A400-410～A470-490的HP-8450分光光度计系统进行监控。温度为30℃。
计算K观测和Vs(稳定状态抑制速率)是使用Labtech Notebook 软件，通过为综合的速率方程式(ⅰ)选配连续曲线(前20分钟)而测定的。从Vs和未抑制的速率V(方程式ⅱ)为每次操作计算出所估计的K1值，而(S)＝0.2mM和Km＝0.77mM。
(ⅰ)A＝Vst-[(Vs-Vo)/K观测][1-exp(-K观测t)]+Ao(ⅱ)K1＝(I)/[(V/Vs-1)(1+(S)/Km)]然后将不同次操作的K观测相对于试验化合物浓度的点连成线。Y＝mx+b(见方程式ⅲ)相配;然后计算K开＝m[1+(S)/Km]和K关＝b。最后，由方程式ⅳ计算K1。
(ⅲ)K观测＝(I)[(V/Vs-1)(1+(S)/Km)](ⅳ)K1＝K关/K开已知几种体内测定可用来预言化合物的消炎活性。这样的体内测定适用于测定本发明化合物的活性。这样的体内测定公开在被收作本文的参考文献的以下参考文献中
Winter，C.A.，E.A.Risley，G.V.Nuss，“Carrageenin-Induced Edema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Antiinflammatory Drugs，”Proc.Soc.Exp.Biol.，N.Y.，Vol.111(1962)，pp.544-547;Vander Wende，C. & S.Margolin，“Analgesic Tests Based Upon Experimentally Induced Acute Abdominal Pain in Rats，”Federal Proceedings.，Vol.15(1956)，p.494;Blackham，A.，J.W.Burns，J.B.Farmer，H.Radziwonik，J.Westwick，“An X-Ray Analysis of Adjuvant Arthritis in the Rat.The Effect of Prednisolone and Indomethacin，”Agents and Actions，Vol.7/1(1977)，p.145-151;Winter，C.A. & G.W.Nuss，“Treatment of Adjuvant Arthritis in Rats with Anti-Inflammatory Drugs”Arthritis and Rheumatism，Vol.9，No.3(June，1966)，pp.394-404;and Francis，M.D.，K.Hovancik & R.W.Boyce，“NE-58095A Diphosphonate Which Prevents Bone Erosion and Preserves Joint Architecture in Experimental Arthritis，”Int.J.Tiss.Reac.，Vol.XI，No.5(1989)，pp.239-252.
使用本化合物的组合物与方法下列非限制性的实施例例举性地说明本发明所关注的组合物与用途。
实施例 Ⅰ按常规方法制成药片，每片含有以下的组成组分 数量(mg)Noc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe 400微晶纤维素 200预胶化淀粉 200Povidone K-30 40硬脂酸镁 20
给病人口服施药，每次一片，一日四次，以减轻由于关节炎引起的关节炎症。
实施例 Ⅱ按常规方法制成洗剂，洗剂具有以下组成组分 数量(%)eBroc-D-tBug-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMe 2.5甘油 4.0对羟基苯甲酸甲酯 0.2对羟基苯甲酸丙酯 0.1Carbopol934 0.15NaOH 0.46棕榈酸鲸蜡醇十八烷醇酯 1.0硬脂酸 0.5羊毛脂脂肪酸 0.5鲸蜡醇 3.0黄原胶 0.3硬脂酰-2-乳酸钠 0.75肉豆蔻酸异丙酯 2.0水 适量将一克洗剂局部敷施到皮肤的烧伤面上，一日二次以减轻发炎和疼痛。
实施例 Ⅲ按常规方法配制溶液，每2ml该溶液含有以下组成组分 数量(mg)Adoc-D-Phe-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-D-Phe-Arg-OH 80氯苄烷铵 40灭菌盐水溶液 适量将该溶液的2ml剂量肌肉注射给关节炎病人以减轻发炎和疼痛。
实施例 Ⅳ按常规方法配制此溶液，该溶液含以下组成组分 数量(%)Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Ala-Arg-OH 5.0氯苄烷铵 0.02羧甲基纤维素钠 0.01盐水溶液 适量将0.2ml剂量的此溶液通过吸入施给所需的病人以减轻由于哮喘引起的上呼吸道不适。
尽管对本发明的具体实施方案已作介绍，但是对本领域的熟练人员来说，在不背离本发明的精神和范围的前提下，显然是能够对本发明作出种种变化和改进的。所附的权利要求书被用来覆盖所有处于本发明范围内的这样的改进。
权利要求
1.一类具有以下结构的化合物，及其药物上可接受的盐和水合物
其中(a)X选自含有从4至约15个碳原子的环烷基；含有至少二个分支和从6至约15个碳原子的支化烷基；以及含有从6至约15个碳原子的芳基；(b)n是一个选自从0至2的整数；(c)-V-选自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-以及-P(O)(OH)-；(d)-Q是氢；或者是直链或支链的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至6个碳原子的烷基；或者-Q和-X以共价键连结，形成一包含键合有-Q的氮原子和从约5至约20个碳原子的环状部份；(e)Z是-O-或-NH-；当V是-OC(O)-时，-Z-是-NH-；(f)-R1选自直链的或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基；饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10个碳原子的环烷基；以及其中脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基；而键合到-R1的碳原子既可处于D构型也可处于L构型；(g)-R2选自直链的或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基；饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10个碳原子的环烷基；以及其中脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基；而键合到-R2的碳原子既可处于D构型也可处于L构型；(h)-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)=NH，其中m是一个选自1至约6的整数，-A-是一共价键或对-苯基或对-环己基，-B-是一共价键或-NH-；而键合到-R3的碳原子处于L构型；(i)-R4选自直链的或支化的、饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从1至约6个碳原子的烷基；饱和的或带有1或2个双键的不饱和的、含有从3至约10个碳原子的环烷基；以及其中脂族部份是饱和的并含有1或2个碳原子的芳烷基；而键合到-R4的碳原子既可处于D构型也可处于L构型；(j)-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)=NH，其中m是一个从1至约6的整数，-A-是一共价键或对-苯基或对-环己基，-B-是一共价键或-NH-；而键合到-R5的碳原子既可处于D构型也可处于L构型；以及(k)-Y是氢或甲基。
2.权利要求1的化合物，其中-V-是-OC(O)-或-NHC(O)-，而-Z-是-NH-。
3.权利要求2的化合物，其中(a)n是0或1;(b)m是一个从1至5的整数;以及(c)-R1、-R2和-R4选自含有从1至约5个碳原子的直链或支化烷基，含有从3至约6个碳原子的环烷基，以及苄基。
4.权利要求3的化合物，其中-X是含有从8至约12个碳原子的饱和的和未取代的双环或三环烷基，或者是含有从约8至约12个碳原子的未取代的芳基。
5.权利要求4的化合物，其中(a)-R3是-(CH2)m-A-NH2，其中-A-是一共价键，而m是从3至5;和(b)-R5是-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中-A-是一共价键，-B-是-NH-，而m是从2至约4。
6.权利要求5的化合物，其中-Y是甲基，-V-是-OC(O)-，而X是三环烷基。
7.权利要求6的化合物，其中-R1和-R4是含有从1至约4个碳原子的、饱和的和未取代的直链或支化烷基，而-R2是苄基。
8.一类具有以下结构的化合物，及其药物上可接受的盐和水合物
<p>在此所用术语“minoxidil”(长压定)意指下式结构化合物
“Minoxidil”化学上称为2，4-嘧啶二胺，6-(1-哌啶基)-3-氧化物。Minoxidil是Rogaine 中的活性成分，由Upjohn Company，Kalamazoo，Michigan出售用作刺激头发生长的局部使用溶液。</p><p>在此所用术语“芳香酶抑制剂”涉及一组已知的甾族和非甾族的化合物，它阻止雄激素转化为雌激素，例如Gormley等在国际专利公开WO92/18132中所公开。芳香酶抑制剂由Gormley等公开，当其与5-α-还原酶抑制剂结合使用时，可用于治疗良性前列腺肥大。</p><p>用于本发明组合物中和方法中的优选芳香酶抑制剂是4-(5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-α]吡啶-5-基)苄腈(fadrazol)。Fadrazole在US4728645中公开。此外，所有Gormley等在国际专利公开WO92/18132中公开的作为具有芳香酶抑制活性的化合物是本文所用的优选芳香酶抑制剂。</p><p>如在此所用，当本文所述的5-α-还原酶抑制剂和另外的一种或多种活性成分一起使用时，所述5-α-还原酶抑制剂可与所述另<claim>13.权利要求12的化合物，其中X′选自金刚基氧基羰基、内冰片基氧基羰基和异松莰氧基羰基。
14.权利要求13的化合物，其中-AA1是叔丁基甘氨酰基，-X′是金刚基氧基羰基和-Y是甲基。
15.权利要求10的化合物，其中-Y是甲基。
16.一种药物组合物，它包含(1)权利要求1、5、7、8、10、14或15中的任一种化合物;以及(2)一种药物上可接受的载体。
17.一种治疗发炎或疼痛的方法，它包括向需要这样治疗的人或低等动物施以安全和有效量的权利要求1、5、8、10或14中的任一种化合物。
全文摘要
本发明涉及消炎化合物，其结构如式。本发明还涉及包含以上化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物和组合物来治疗炎症或疼痛的方法。
文档编号A61K38/08GK1095072SQ93119938
公开日1994年11月16日 申请日期1993年12月22日 优先权日1992年12月22日
发明者J·M·麦伊弗 申请人:普罗格特-甘布尔公司