专利名称：七叶亭衍生物和其制造方法与用途及其医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及七叶亭(esculetin)衍生物、其制造方法、用途及医药组合物，特别是软骨保护剂。本发明的七叶亭衍生物可以有效地投药给患有例如关节炎症的哺乳类动物。
关节炎症有慢性关节风湿病、风湿病热、变形性关节炎症等。其中慢性关节风湿病以及变形性关节炎症患者居多，并作为主要关节炎症而被研究。变形性关节炎症有先天性的或二次性的和由于老龄化、关节软骨的退化变性而引起的一次性关节炎症。近年来随着老龄人口的增加，一次性的变形性关节炎症，也在增加着，因此希望开发出具有新作用机能的药剂。
慢性关节风湿病和变形性关节炎症，在病因、病态上有很大的区别。可是它们有一个共同点就是最终都是通过破坏软骨而损害关节机能的。
对于慢性关节风湿病、风湿病热、全身性红斑狼疮、变形性关节炎症等风湿性疾病的首选药物是阿斯匹林、消炎痛等镇痛抗炎症剂。对于其他慢性关节风湿症，可使用抗风湿药(shiozol)等金制剂、免疫调节剂、类因醇剂、D-青霉胺等，另外对于变形性关节炎症可使用糖醛酸等高分子多糖类。
以往的上述镇痛抗炎症剂，对于关节软骨的破坏没有抑制效果，而且部分镇痛抗炎症剂，在使用软骨细胞的实验中，反而显示了恶化作用。进而，对于上述慢性关节炎症及变形性关节炎症的治疗药，在临床上也未发现可以抑制关节软骨的破坏作用。
关节软骨是由软骨细胞和软骨基质构成的。软骨基质是由软骨细胞产生的纤维蛋白质-Ⅱ型胶原和蛋白多糖复合体-蛋白多糖与糖醛酸非共价结合，通过复杂地交错结合而形成的三维基质结构，其中保持着大量水分，因此才可以维持正常的关节机能。构成蛋白多糖的主要多糖类是由硫酸软骨素和硫酸角质素组成的葡萄糖胺聚糖(以下记作GAG)。
本发明人发现，用公知化合物七叶亭和4-甲基七叶亭，可以强烈地抑制由于内白细胞素1(Interleukin)等的刺激而引起基质中的GAG减少，因此作为软骨保护剂是非常有用的。
本发明人为了研制具有软骨保护作用的新化合物而进行了潜心的研究，结果发现了在七叶亭或4-烷基七叶亭上通过结合类似于软骨基质成分的单糖类可以浸入到软骨基质中，即对基质亲和性提高了的新的七叶亭衍生物。
即本发明是涉及用式(Ⅰ)表示的七叶亭衍生物或其盐(以下有时称为本物质) (Ⅰ)[式中，R1及R2分别独立地表示氢原子、单糖类残基、保护了的单糖类残基、或羟基保护基、R1及R2的至少一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基、R3是氢原子、羟基、烷基、芳基、芳烷基，但是R3是氢原子时，要排除(1)R1和R2都是葡萄糖残基，(2)R1是氢原子或是作为羟基保护基的苄基，R2是葡糖残基，乙酰化了的葡糖残基或者是缩醛化的葡萄糖残基，或(3)R1是葡萄糖残基、R2是氢原子]。
进而，本发明是关于用式(ⅩⅤ)表示的化合物的制造方法 (ⅩⅤ)
(式中，R14及R15分别独立地表示保护了的单糖类残基或羟基保护基、R14及R15的至少一方是保护了的单糖类残基，R3与上述定义的相同)其特征是，将用式(ⅩⅥ)表示的化合物 (ⅩⅥ)(式中，R16及R17分别独立地表示氢原子、保护了的单糖类残基、或羟基保护基、R16及R17的至少一方是氢原子、R3是氢原子、羟基、烷基、芳基、芳烷基)与式(Ⅳ)
(式中，R5是保护了的单糖类残基、X是卤原子)表示的化合物进行反应。
另外，本发明还关于用式(ⅩⅢ)表示的化合物的制造方法 (ⅩⅢ)(R10及R11的一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基、另一方是氢原子、R3与上述定义相同)其特征是，将式(ⅩⅣ)表示的化合物进行氢化分解， (ⅩⅣ)(式中、R12及R13的一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基、另一方是羟基保护基、R3是氢原子、羟基、烷基、芳基或芳烷基)。
进而，本发明还涉及到用式(Ⅺ)表示的化合物的制造方法，(式中，R6及R7分别独立地表示氢原子、单糖类残基、或羟基保护基、R6及R7的至少一方是单糖类残基、R3与上述定义相同)其特征是，将式(Ⅻ)表示的化合物的保护了的单糖类残基脱保护， (Ⅻ)(式中，R8及R9分别独立地表示氢原子、保护了的单糖类残基、或羟基保护基，R8及R9的至少一方是保护了的单糖类残基，R3是氢原子、羟基、烷基、芳基或芳烷基)。
进而，本发明也涉及含有用上述式(Ⅰ)表示的七叶亭衍生物或制剂上可允许的盐制成的医药组合物。
以下详细说明本发明本说明书中所说的单糖类残基是指除去单糖类化合物上1位羟基的残基。
这些单糖类化合物不仅是用(CH2O)n[n是3以上的整数]表示的化合物，也包括了它们的衍生物的脱氧糖、氨基糖、糖酸、糖醇等，进而包括了硫酸酯、磷酸酯等酯类及这些酯类的盐类、甲基醚等醚类、氨基糖、糖酸的盐类等。作为单糖类的具体例可举出由水野和卓·西泽一俊共同编著的“图解糖质化学便览”(共立出版株式会社、1971)上记载的化合的。
优选的单糖类是戊糖及己糖。戊糖的优选例是阿拉伯糖、木糖、核糖以及脱氧核糖。己糖的优选例是甘露糖、阿洛糖、阿卓糖、塔罗糖、葡萄糖、半乳糖、艾杜糖、古洛糖、果糖、鼠李糖、岩藻糖、葡萄糖胺、N-酰基葡萄糖胺、半乳糖胺、N-酰基半乳糖胺、N-酰基胞壁酸、葡萄糖醛酸、古洛糖酸、艾杜糖醛酸、抗坏血酸、甘露糖酸及山梨糖醇等。也包括这些单糖类可能形成的硫酸酯、磷酸酯及其盐类。
更为优选的单糖类是甘露糖、葡萄糖、半乳糖、果糖、鼠李糖、岩藻糖、葡萄糖胺、N-酰基葡萄糖胺、半乳糖胺、N-酰基半乳糖胺以及葡萄糖醛酸。也包括这些单糖类可能形成的硫酸酯、磷酸酯及其盐类。
N-酰基糖的酰基，优选的是碳数2～20的脂肪族酰基、更优选的是碳数2～5的烷酰基，最优选的是乙酰基。
本说明书中所说的被保护了的单糖类残基是上述单糖类残基的羟基至少1个被保护的基。作为保护基，可以举出糖类的羟基保护基通常使用的任意保护基，例如可举出通过酰化、缩醛化、硫酸酯化或磷酸酯化而产生的保护基，优选的是酰基。作为羟基保护基的酰基优选的是碳数2～20的脂肪族酰基、更优选的是碳数2～10的烷酰基，最优选的是乙酰基或新戊酰基。作为被保护了的单糖类残基的优选例是上述戊糖或己糖残基的1个～全部的羟基用上述酰基保护了的残基，特别优选的是单糖类残基的全部羟基被乙酰基保护，或者1个羟基被新戊酰基保护。
进而，作为被保护了的单糖类残基的例子可以举出上述的单糖类残基(特别是戊糖或己糖残基)的2个或4个羟基通过醛R18CHO[R18是氢原子、碳数1～6个的烷基、苯基或取代了的苯基，另外取代苯基的取代基(1-5个)是由羟基、碳数1-6个的烷氧基和/或碳数1～6个的烷基]进行环状缩醛化的。特别优选的是单糖类残基(特别是上述戊糖或己糖残基)的4位和6位的羟基通过甲醛、苯甲醛、或甲氧基苯甲醛缩醛化成6元环。具体的说，R18是氢原子时，成为用次甲基，R18是碳数1～6个的烷基时，成为用烷基取代的次甲基，R18是苯基时成为用亚苄基，R18是取代苯基时，成为用取代亚苄基保护了的结构。
这样通过将单糖类残基(特别是上述的戊糖或己糖残基)的羟基通过用酰基、次甲基或亚苄基保护后，增大了本发明的七叶亭衍生物的脂溶性，提高了肠道的吸收性。
进而，作为被保护了的单糖类残基的例子可以举出上述单糖类残基(特别是上述戊糖或己糖残基)的1个～全部的羟基被硫酸酯化或磷酸酯化了的残基。也包括了这些酯的碱金属(例如锂、钠、或钾)盐或铵盐。这样，通过将单糖类残基(特别是上述戊糖或己糖残基)的羟基用硫酸酯或磷酸酯保护后，可以提高本发明的七叶亭衍生物的水溶性，增大血中的浓度。
包括在本发明七叶亭衍生物中的单糖类残基及被保护了的单糖类残基可以是D-型或L-型或者是吡喃糖型或呋喃糖型中的任何一种。
本发明的七叶亭衍生物中，七叶亭或4-取代七叶亭部分和单糖类残基或被保护了的单糖类残基的结合是糖苷结合。糖苷的1位的立体排列可以是α-异头物或β-异头物的任意一种。
上述式(Ⅰ)中的R1或R2的羟基保护基，只要是可通过氢化分解除去的基即可，对此设有特殊的限制，例如可以是苄氧羰基，更好的是苄基。
上述式(Ⅰ)中R3的烷基，优选的是脂肪族烷基，更优选的是碳数1～4个的低级烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，特别优选的是甲基或乙基。
上述式(Ⅰ)中R3的芳基，优选的是碳数6～12的芳基，例如苯基、萘基或联苯基，这些芳基可以被1个或2个以上的取代基例如碳数1～4个的低级烷基、卤原子和/或羟基取代。
进而，上述式(Ⅰ)中R3的芳烷基，优选的是用碳数6～12个的芳基取代了的碳数1～4个的低级烷基，例如苄基、苯乙基、苯丙基、或苯丁基。上述芳烷基的芳基部分也可以用1个或2个以上的取代基，例如碳数1～4个的低级烷基、卤原子和/或羟基取代。
在本发明七叶亭衍生物中，4位取代基R3是氢原子时，七叶亭衍生物是七叶亭配糖体(即七叶亭糖苷)。R3是烷基、芳基或芳烷基时，七叶亭衍生物是4-烷基七叶亭配糖体(即4-烷基七叶亭糖苷)、4-芳基七叶亭配糖体或4-芳烷基七叶亭配糖体。
本发明的七叶亭衍生物中，R1或R2的至少一方是单糖类残基或被保护了的单糖类残基。即只是其中的一方是单糖类残基或者被保护了的单糖类残基情况(单糖苷)和双方都是单糖类残基或被保护了的单糖类残基情况(二糖苷)。
本发明的七叶亭衍生物的盐是在6或7位的羟基、糖的硫酸酯或磷酸酯、糖醛酸等糖酸的羧基、氨基糖的氨基上形成的。
另外，作为制剂学上可允许的盐包括了与无机酸或有机酸的盐以及与无机碱或有机碱的盐。作为酸加成盐可以举出盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐，进而可是草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸或富马酸等的二羧酸盐以及醋酸、丙酸或丁酸等的单羧酸盐等。另外，形成本物质的盐的适当的无机碱可以举出氨、钾、钠、锂、钙、镁、铝等的氢氧化物、碳酸盐及碳酸氢盐等。作为与有机碱的盐可举出如甲胺、二甲胺、三乙胺类的单、二及三烷基胺盐、单、二、及三羟基、烷基胺盐、胍盐、N-甲基葡萄糖胺盐、氨基酸盐等。
再者，因为七叶苷、七叶苷糖苷、菊苣苷、七叶苷-2′，3′，4′，6′-四乙酸酯、7-苄氧基-6-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)香豆素、及其四乙酸酯、及6-[4，6-O)[(3，4-二羟基苯基)-亚甲基]-β-D-吡喃葡萄糖氧基]-7-羟基香豆素是公知的化合物，所以排除在本发明的七叶亭衍生物之外。即上述式(Ⅰ)中，R3是氢原子时，下列的情况要排除在本发明的七叶亭衍生物之外，即(1)R1和R2均是葡萄糖残基，(2)R1是氢原子或作为羟基保护基的苄基、R2是葡萄糖残基、乙酰化的葡萄糖残基、或者缩醛化了的葡萄糖残基，及(3)R1是葡萄糖残基、R2是氢原子。再者上述(1)～(4)情况中的七叶亭衍生物，以往不知道它们具有软骨保护的作用。
本发明的七叶亭衍生物可用下述方法制造。以下分单糖苷和二糖苷两种情况来说明其制造方法的代表例(A)单糖苷的制造制造七叶亭-6-糖苷化合物或4-取代七叶亭-6-糖苷化合物时的基本反应流程图(Ⅰ)如下。
将上述反应流程图(Ⅰ)中的(1)～(10)，以下面的工序1～10进行说明。
此外，在上述反应流程图(Ⅰ)中，若分别更换各化合物的6位和7位的取代基时，则成为制造七叶亭-7-糖苷化合物或4-取代七叶亭-7-糖苷化合物的基本反应流程图。以下，用制造七叶亭-7-糖苷化合物或4-取代七叶亭-7-糖苷化合物时的例子说明反应流程图(Ⅰ)。
在反应流程图(Ⅰ)中，首先合成保护了7位(或6位)羟基的化合物(Ⅲ)。当合成R3是氢原子的化合物(Ⅲ)时，要使用七叶亭的6位羟基上结合了葡萄糖的七叶苷(即7-羟基-6-葡萄糖氧基香豆素)(Ⅷ)或者使用七叶亭的7位羟基上结合了葡萄糖基香豆素)作为原料，通过首先用保护基对羟基保护(工序1)，接着水解(工序2)而得到的。七叶苷及菊苣苷是天然物质，作为试剂是可以得到的。
进而也可以七叶亭为原料，按照与以下记载的工序1相同的反应工序合成用保护基保护2个羟基中任何1个的七叶亭(Ⅲ)。
R3是烷基时，可用如4-甲基七叶亭、4-乙基七叶序、4-正丙基七叶亭、4-异丙基七叶亭、4-正丁基七叶亭、4-异丁基七叶亭、4-叔丁基七叶亭等4-取代七叶亭为原料，合成2个羟基中的1个被保护基保护了的4-取代七叶亭(Ⅲ)。R3是芳基或芳烷基时，也可用与上述相同方法合成4-芳基七叶亭或4-芳烷基七叶亭(Ⅲ)。
4-烷基七叶亭中，4-甲基七叶序可以以试剂形式从东京化成工业株式会社得到。另外，4-取代七叶亭可以用通式(Ⅸ) (Ⅸ)
(式中，R3是烷基、羟基、芳基或芳烷基)表示的化合物与醋酸酐和醋酸钠按照Kostanecki-Robinson反应(参照T.C.Chadha，H.S.Mahal，J.Chem.Soc.，1933，p.1459)进行反应而合成。上述式(Ⅸ)中的R3若使用氢原子化合物时，用同样的反应可以合成七叶亭。
如此得到的4-取代七叶亭为原料，按照与以下记载的工序1相同的反应工序合成2个羟基中的1个被保护基保护了的4-取代七叶亭(Ⅲ)。例如在醇溶剂中及碳酸钾等碱催化剂存在下，通过与苄基氯反应可以很容易地得到在6位或7位的羟基被苄基保护了的4-取代七叶亭。保护了的七叶亭的情况也与此相同。
(1)工序1本工序[反应流程图(Ⅰ)的(1)]是在七叶苷(Ⅷ)(式中Glu表示葡萄糖残基)的7位的羟基上引入保护基，得到化合物(Ⅶ)的反应工序。若以菊苣苷为原料，可以得到6位和7位的取代基相反的化合物。在此反应工序中，将由羟基的保护基Z和卤原子X构成的化合物ZX(例如苄基氯或苄氧羰基氯)和化合物(Ⅷ)，如七叶苷或菊苣苷，在有机溶剂中和碱的存在下，于4～80℃下，反应0.5～48小时后，可以得到化合物(Ⅶ)。此反应最好在螯合剂，例如18-冠-6-醚和碘化钾的存在下进行。作为保护基Z要使用通过氢化分解可以除去的基。例如苄基、苄氧羰基等。有机溶剂例如是二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇等，碱的例子可举出碳酸钠和碳酸钾。
(2)工序2本工序[反应流程图(Ⅰ)的(2)]是将保护了7位羟基的七叶苷化合物(Ⅶ)水解后，得到保护了7位羟基的七叶亭化合物(Ⅲ)的反应工序。同样，将保护了6位羟基的菊苣苷化合物水解，可得到保护了6位羟基的七叶亭化合物。将氢卤酸等的酸水溶液和醇等有机溶剂的混合液和7位羟基被保护了的七叶苷化合物(Ⅶ)或者6位羟基被保护的菊苣苷化合物，在40～120℃，优选的是加热回流下，反应0.5～10小时，可得到化合物(Ⅲ)。
(3)工序3本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(3)]是保护单糖类的羟基(例如酰化)的反应工序。例如将单糖类R4OH(Ⅵ)(式中R4表示单糖类残基)和酸酐A2O(式中A表示酰基)或者酰基卤AX(式中A表示酰基、X表示卤原子)，在吡啶、氢氧化钠等碱存在下，必要时使用适当溶剂如氯仿、甲醇、水等条件下进行反应，可得到酰化了的单糖类R5OA(Ⅴ)(式中R5表示酰化了的单糖类残基，A与上述定义相同)。反应温度通常是-20℃～+50℃、优选的是室温。反应时间通常为1小时～2天。
(4)工序4本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(4)]是将酰化了的单糖类的1位酰氧基置换成卤原子的反应工序。例如将卤化氢气HX(式中X表示卤原子)溶解在醋酐等的羧酸酐A2O(式中A表示酰基)中，通过与酰化了的单糖类R5OA(Ⅴ)反应，可以得到1位的酰氧基被卤原子置换了的酰化单糖类R5X(Ⅳ)。反应温度通常是-20℃～+50℃，优选的是室温。反应时间通常是0.1小时～10天。
(5)工序5本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(5)]是从单糖类R4OH(Ⅵ)通过一段反应得到化合物R5X(Ⅳ)的反应工序。例如使酰基卤(AX)和单糖类(Ⅵ)反应，得到化合物(Ⅳ)。反应温度通常是4℃～80℃。反应时间通常是0.5小时～2天。
再者，以上工序1，3，4及5中的X不一定是相同的卤原子。
(6)工序6本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(6)]是对于7位(或6位)的羟基被保护了的七叶亭化合物(Ⅲ)中的6位(或7位)未保护的羟基上引入保护了的(例如被酰化)单糖类残基的反应工序。例如，可通过在含有苛性碱水溶液-丙酮溶液等的碱性水溶液的有机溶液中，将化合物(Ⅲ)和单糖类衍生物(Ⅳ)，在4～80℃下进行反应而得到化合物(Ⅱa)。或者将化合物(Ⅲ)和单糖类衍生物(Ⅳ)溶解在氯仿、乙腈等有机溶剂中，在4～50℃下向此溶液中滴加溶解在苛性碱水溶液中的具有有机基团的卤化铵盐(相间移动催化剂)或者三乙胺等(碱性催化剂)，而后在4～80℃下反应0.5小时～10天得到化合物(Ⅱa)。此时，苛性碱水溶液的例子是氢氧化钠水溶液，具有有机基的卤化铵盐的例子是氯化苄基三乙基铵。此外，所说的相间移动催化剂是指可以在水层和有机层间自由移动的试剂，例如氯化苄基三乙基铵。
(7)工序7本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(7)]是将具有保护了的(例如酰化)单糖类残基及羟基保护基的化合物(Ⅱa)氢化分解，得到具有保护了的(例如酰化)单糖类残基的七叶亭衍生物(Ⅰa)的工序。本反应是在钯系或铂系催化剂存在下，在4～80℃下与氢气反应0.5～48小时。钯系催化剂优选的是使用钯-硫酸钡、钯-碳等。
(8)工序8本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(8)]是将具有保护了(例如酰化)的单糖类残基及羟基保护基的化合物(Ⅱa)[式中R5表示保护了(例如酰化)的单糖类残基]进行脱保护(例如脱酰基化)，得到具有单糖类残基及羟基保护基的化合物(Ⅱb)(式中R4表示单糖类残基)的反应工序。例如，本反应可通过将化合物(Ⅱa)溶解在甲醇等有机溶剂中，在惰性气体(例如，氮气或氩气)的气流中与溶解在甲醇等醇类中的钾或钠等碱金属进行反应而完成的。反应温度通常是4～70℃，反应时间通常是0.1～72小时。
(9)工序9本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(9)]是将具有单糖类残基及羟基保护基的化合物(Ⅱb)氢化分解，得到具有单糖类残基的七叶亭衍生物(Ⅰb)的反应。本反应是在钯系或铂系催化剂存在下，在4～70℃，与氢气进行0.1～48小时的反应。钯系催化剂优选的是使用钯-硫酸钡、钯-碳等。
将化合物(Ⅱb)的单糖类残基转变成另外的单糖类残基或者将单糖类残基的羟基保护起来，然后实施工序9时，可以得到具有另外的单糖类残基或保护了的单糖类残基的化合物(Ⅰb)。例如，单糖类残基具有-CH2OH时，通过将此基氧化后成为-COOH，可以得到具有-COOH单糖类残基的化合物。如将葡萄糖残基氧化后，可以制成葡萄糖醛酸残基。
作为保护单糖类残基的羟基的反应有酰化和缩醛化等。酰化基本上按工序3的方法进行。缩醛化的例子如下，若将6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2]和醛R18CHO(R18与上述定义相同)进行反应，可以得到单糖类残基的4位和6位的羟基缩醛化成6元环的下式化合物。
(10)工序10本工序[反应流程图(Ⅰ)中的(10)]是将具有保护了(例如酰化)的单糖类残基的七叶亭衍生物(Ⅰa)脱保护(例如脱酰化)后，得到具有单糖类残基的七叶亭衍生物(Ⅰb)的反应工序。本反应基本上按与上述的工序8相同的方法实施。
这里，对于可以得到本发明的新化合物时的重要工序之一的上述工序6举出以下的反应例。
例1由7-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1]和2，3，4，6-四-O-乙酸基-1-溴-α-D-半乳糖[Ⅳ-1]合成6-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-1]。
例2由7-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1]和2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅳ-2]合成6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-2]。
例3由7-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1]和2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-半乳糖[Ⅳ-3]合成6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-3] 此外，单糖类残基N-酰基氨基糖残基时，还可以进一步通过脱酰化反应得到结合了不含酰基的氨基糖残基的七叶亭衍生物。此反应是通过将单糖类残基是N-酰基氨基糖残基的七叶亭衍生物和肼溶液、醇性钾或碱性水溶液，最好是0.1～12N-NaOH，在40～120℃下反应1～48小时而进行的。按这种方法举例，可以从6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-葡萄糖氧基)-7-羟基香豆素［Ib-2］得到6-(β-2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2′]。
另外，同样地可以从6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-半乳糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-3]得到6-(β-2-氨基-2-脱氧-D-半乳糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-3′]。
此脱酰化反应最好对于保护了7位羟基的化合物(Ⅱb)实施。而后，基本上用与工序9相同的条件，通过氢化分解得到结合了不含酰基的氨基糖残基的七叶亭衍生物。例如可参照后述的实施例19及20。
已经知道，软骨基质成分富含有阴性电荷，考虑到对软骨组织的亲和性、集聚性时，具有不含酰基的氨基糖残基的七叶亭衍生物的无机酸或有机酸的盐，作为带有阳性电荷的化合物是很有用的。
(B)二糖苷的制造(B-1)以七叶亭或4-取代七叶亭为起始原料的方法，以下用反应流程图(Ⅱ)表示。
上述反应流程图(Ⅱ)中的(11)和(12)与以下说明中的工序11和工序12相对应。
(11)工序11本工序[反应流程图(Ⅱ)中的(11)]是将七叶亭或4-取代七叶亭(X)的6位及7位上的2个羟基引入保护了(例如酰化)的单糖类残基后，得到具有2个同样的单糖类残基的本发明的七叶亭衍生物(Ⅰa)的反应工序。例如可将化合物(X)和单糖类衍生物(Ⅳ)溶解在氯仿等有机溶剂中，然后，向其中滴加溶解在苛性碱水溶液中的具有有机基的卤化铵，在4～120℃下反应1～72小时，得到化合物(Ⅰa)。单糖类衍生物的用量是化合物(X)的2倍摩尔量以上。此时的苛性碱水溶液是氢氧化钠水溶液，具有有机基的卤化铵是氯化苄基三乙基铵。
(12)工序12本工序[反应流程图(Ⅱ)的(12)]是将具有2个保护了(例如酰化)的同种单糖类残基的本发明的七叶亭衍生物(Ⅰa)进行脱保护(例如脱酰化)，得到具有同种的2个单糖类残基的本发明的七叶亭衍生物(Ⅰb)的反应工序。本反应中通过将化合物(Ⅰa)溶解在甲醇等有机溶剂中，在惰性气流中使其与溶解在甲醇等醇类中的钾或钠等碱金属反应来进行的。反应温度通常是4～70℃，反应时间通常是0.1～72小时。
(B-2)以单糖苷衍生物为起始原料的方法以下示出反应流程图(Ⅲ)。
上述反应流程图(Ⅲ)的(13)和(14)与以下说明的工序13和工序14对应。上述反应流程图(Ⅲ)中的工序13，表示了在7位的羟基上引入保护了(例如酰化)的单糖类的情况，但是更换6位和7位的取代基的反应工序也是本发明的反应工序。
(13)工序13本工序[反应流程图(Ⅲ)中的(13)]是将具有保护了(例如酰化)的1个单糖类残基的本发明七叶亭衍生物(Ⅰa)的羟基上引入同种或异种保护了(例如酰化)的单糖类残基的反应。用此法可以得到具有被同种或者异种保护了(例如酰化)的2个单糖类残基的本发明七叶亭衍生物(Ⅰa)。反应试剂和反应条件基本上与工序6相同。但是最好使用三乙胺等碱性催化剂代替相间移动催化剂。
(14)工序14本工序[反应流程图(Ⅲ)中的(14)]是将具有同种或异种保护了(例如酰化)的2个单糖类残基的本发明七叶亭衍生物(Ⅰa)脱保护(例如脱酰化)，得到具有同种的2个单糖类残基的本发明七叶序衍生物(Ⅰb)的反应工序。反应试剂和反应条件基本上与工序12相同。
这里，对于得到本发明的新化合物的重要工序之一的工序11和13举出以下反应例。
例4由七叶亭[X-1]和2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-半乳糖[Ⅳ-1]合成6，7-双(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)香豆素[Ⅰa-4]
例5由6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-2]和2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-半乳糖[Ⅳ-1]合成7-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖氧基)香豆素[Ⅰa-5]。
可以采用公知的方法将本发明的游离的七叶亭衍生物转变成盐，也可以将某种盐转变成另一种盐，另外，还可以使本发明的七叶亭衍生物的盐转变成游离的七叶亭衍生物。例如，在6位或7位是羟基(酚性羟基)的七叶亭衍生物以及含有游离羧酸的结合了N-乙酰氨基葡萄糖或糖醛酸的七叶亭衍生物的情况下，可以使其形成盐。具体地说，使这些七叶亭衍生物与等摩尔的碱金属氢氧化物(如氢氧化钠或氢氧化钾)相互作用，可以使酚性羟基或游离羰基转变成碱金属盐。另外，用盐酸或硫酸使这些盐的水溶液成为酸性，可以重新恢复成为游离化合物。使有机酸(苹果酸、柠檬酸、乙酸)等对具有游离氨基的化合物等量作用，可以形成相应的盐。使无机酸(例如盐酸或硫酸)对其作用，可以导致形成盐酸盐或硫酸盐。如果使碱作用于该盐，可以再形成游离碱。盐是可溶于水中的，但游离体难溶于水，因而可以使之析出、离析。
反应生成物的提纯方法可以采用萃取、色谱法、结晶、再沉淀等。提纯物的结构可以采用红外吸收光谱、紫外吸收光谱、核磁共振吸收光谱、元素分析、质谱等方法加以鉴别。
对本发明的七叶亭衍生物进行了毒性分析。将上述衍生物的代表例以2000mg/kg(体重)的量对雄性小鼠和雄性大鼠经口给药，随后观察7天，没有死亡例，也没有发现明显的毒性。本发明的七叶亭衍生物是非常安全的化合物(参见下面的实施例27)本发明的七叶亭衍生物，对于小鼠FHC模型具有抑制软骨破坏作用的药理效果(参见下面的实施例28)。
因此，本发明的七叶亭衍生物或其药学上容许的盐，可以用来作为治疗伴有关节的软骨破坏的各种关节病的软骨保护剂的有效成分。这些关节病的例子有慢性关节风湿病、变形性关节病、肩周炎、颈肩腕症候群、腰痛症等。
以本发明的七叶亭衍生物或其药学上可以容许的盐为有效成分的药物组合物，特别是软骨保护剂，可以采用一般的制剂形式。可以单独使用上述衍生物，也可以使用上述衍生物与可药用的载体或稀释剂的混合物，制成制剂。制剂中的有效成分的含量没有特别的限制，例如可以是0.01-100%(重量)，优选的是0.1-70%(重量)。
本发明的药物组合物，特别是软骨保护剂，可以采用经口或不经口的任何一种方式给药。
本发明的药物组合物(特别是软骨保护剂)的用药量依用药对象(哺乳动物，尤其是人)、年龄、个体、病状等而定，没有特别的限制，例如，以人为给药对象时，本发明的七叶亭衍生物的经口给药量一般是每日0.1-500mg/kg(体重)，优选的给药量为是0.5-200mg/kg(体重)。通常，每日的药量分为1次或者2-4次给药。
(6)实施例下面，通过实施例进一步详细地说明本发明，但本发明不受这些实施例的限制。
在下面的实施例中，Ac表示乙酰基，Me表示甲基，Ph表示苯基，Gl表示葡萄糖基，Ar表示芳基。
实施例17-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1]的合成(工序1和2)在茄形烧瓶(100ml)中，加入七叶苷[Ⅷ](1.0g)、苄基氯(1.0g)、碳酸钾(0.7g)、催化量的18-冠-6-醚和碘化钾以及二甲基甲酰胺(40ml)，在60℃下搅拌该混合物8小时使之反应。减压浓缩反应混合物，将残渣注入冰水中，滤取析出的结晶，由甲醇中重结晶，得到7-苄氧基-6-D-葡萄糖氧基香豆素[Ⅶ-1]，熔点184-186℃，质谱(M+)430，收率86.4%。
将化合物[Ⅶ-1](0.6g)在甲醇(35ml)-10%盐酸(35ml)混合液中加热回流1小时，减压浓缩反应混合物，滤取结晶，得到标题化合物[Ⅲ-1]，收率90.3%。
熔点193-195℃质谱(M+)268实施例22，3，4，6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-半乳糖[Ⅳ-1]的合成(糖成分为半乳糖时的工序3和4)按文献记载的方法[Whistler&Wolfrom，Methods in Carbohydrate Chemistry，Vol.I，pp.224-225(1963)]，由D-半乳糖[Ⅳ-1]合成标题化合物。
即，在圆底烧瓶(2000ml)中加入D-半乳糖[Ⅳ-1](18g)、乙酸酐(90ml)和无水吡啶(130ml)，使该混合物在室温下反应36小时，反应后除去溶剂，得到1，2，3，4，6-五-O-乙酰基-D-半乳糖[Ⅴ-1]，它是α-异头物和β-异头物的混合物。在该混合物中添加溴化氢气体的冰醋酸溶液(90ml、在0℃下使之饱和)，在室温下反应约3小时，得到标题化合物[Ⅳ-1]的晶体(40g、收率94%)。
熔点79-81℃实施例36-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-1]的合成(糖成分为半乳糖时的工序6)在茄形烧瓶(500ml)中，加入实施例1制备的7-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1](4.83g)、实施例2制备的2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-半乳糖[Ⅳ-1](14.80g)和氯仿(180ml)，在室温下搅拌该混合物。10分钟后滴加溶解于1.2N-NaOH(36ml)中氯化三乙基苄基铵(1.03g)。在室温下搅拌该反应混合物6天，然后加入蒸馏水(180ml)，用二氯甲烷(200ml)萃取，再用二氯甲烷(100ml)萃取二次。用蒸馏水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩，残渣经硅胶柱色谱法[Kiesel gel60200g，直径5.5cm，正己烷/乙酸乙酯(1∶1)]分离、提纯，得到标题化合物(7.46g、收率69.2%)的白色晶体。
熔点157-157.5℃质谱(EI)598，555，538，331，1691H-NMR(CDCl3，δppm)1.77(s，3H，-Ac)，2.00(s，3H，-Ac)，2.02(s，3H，-Ac)，2.19(s，3H，-Ac)，3.95(t，1H，C-5′)，4.13(dd，1H，C-6′)，4.24(dd，1H，C-6′)，4.94(d，1H，C-1′)，5.08(dd，1H，C-3′)，5.15(s，2H，-CH2-Phenyl)，5.44(d，1H，C-4′)，5.50(dd，1H，C-2′)，6.28(d，1H，C-3)，6.90(s，1H)，7.25(s，1H)，7.39(m，5H)，7.57(d，1H，C-4)红外光谱 (KBr，cm-1)3510w，3112w，1750s，1620m，1570m，1522s实施例46-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-1]的合成(糖成分为半乳糖时的工序7)在茄形烧瓶(100ml)中，加入实施例3制备的6-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-1](300mg)和二恶烷(25ml)，在室温下搅拌该混合物。在水浴上向该溶液中添加10%Pd/C(50mg)，然后在氢气氛下搅拌约7小时。用薄层色谱法(ILC)确定反应已结束后，用硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩滤液，得到呈透明油状的粗产物(299.2mg)，用硅胶柱色谱法[Kiesel gel 60 15g、直径2.5cm、正己烷/醋酸乙酯(1∶2)]分离提纯该粗产物，得到透明油状物。在该油状物中加正己烷，擦烧瓶的壁面得到标题化合物(236.0mg、收率92.8)白色晶体。
熔点92℃质谱(EI)508，464，406，331，169旋光度[α](c＝1，CH3OH)-13.2°1H-NMR(CDCl3，δppm)2.02(s，3H，-Ac)，2.08(s，3H，-Ac)，2.15(s，3H，-Ac)，2.21(s，3H，-Ac)，4.10(d，1H，C-5′)，4.18(m，1H，C-6′)，4.27(m，1H，C-6′)，4.94(d，1H，C-1′)，5.14(dd，1H，C-3′)，5.46(dd，1H，C-2′)，5.48(d，1H，C-4′)，6.28(d，1H，C-3)，6.58(s，1H，-OH)，6.92(s，1H)，7.05(s，1H)，7.54(d，1H，C-4)红外光谱 (KBr，cm-1)3500w，1750s，1620m，1580m，1520m，1380m，1220s实施例56-β-D-半乳糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-1]的合成(糖成分为半乳糖时的工序8)在茄形烧瓶(100ml)中加入钠片(60mg)和干燥甲醇(60ml)，在室温及氩气流下搅拌该混合物，向该溶液中添加实施例3制备的6-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-1](1.0g)，再加入甲醇，在室温下搅拌该混合物约1.5小时。用TLC法确定反应已结束后，向反应液中加蒸馏水(50ml)终止反应，用醋酸乙酯(200ml)萃取2次，再用醋酸乙酯(50ml)萃取4次，用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩，得到标题化合物的粗产物(1.24g)的白色晶体。
实施例66-β-D-半乳糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅰb-1]的合成(糖成分为半乳糖时的工序9)在茄形烧瓶(300ml)中加入实施例5中制备的粗制的6-β-D-半乳糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-1](1.24g)和10%Pd/C(124mg)，接着慢慢地加注甲醇(124ml)和蒸馏水(13ml)然后在室温及氢气氛下搅拌一夜。用TLC法确定反应已结束后用硅藻土过滤反应混合物，减压浓缩滤液，得到黄色的粗结晶(890mg)。将这粗结晶从蒸馏水中重结晶，得到标题化合物(545.8mg、收率55.7%)的白色晶体。
熔点144-147℃质谱(FAB，M+1)341旋光度[α](c＝1，CH3OH)-71.5°1H-NMR(CDCl3，δppm)3.60(dd，1H，C-3′)，3.70(m，1H，C-5′)，3.75(d，1H，C-6′)，3.78(d，1H，C-6′)，3.85(dd，1H，C-2′)，3.90(d，1H，C-4′)，4.79(d，1H，C-1′)，6.22(d，1H，C-3)，6.81(s，1H)，7.45(s，1H)，7.83(d，1H，C-4)红外光谱(KBr，cm-1)3350s，1700s，1560m，1300m，1080s实施例72-乙酰胺-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅴ-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序3)在茄形烧瓶(500ml)中加入醋酸酐(12.25g)和干燥吡啶(18.98g)的混合溶液，接着在室温下一点一点地添加N-乙酰基-D-葡糖胺[Ⅵ-2](4.43g)，在室温下搅拌该溶液一夜，将反应液注入冰水(150ml)中，用乙醚(100ml)萃取2次，在减压及65℃温度下浓缩干固水层，得到粗产物(9.407g)。将其溶解于醋酸乙酯(150ml)中，用水(5ml)洗涤该溶液，用硫酸钠干燥，然后在旋转式蒸发器中减压下固，得到油状物，在该油状物中加入乙醚后崩解，得到标题化合物(6.47g、收率83.1%)的白色晶体。
Rf0.39(乙酸乙酯)熔点185-187℃1H-NMR(CDCl3，δppm)1.94(s，3H)，2.04(s，3H)，2.06(s，3H)，2.09(s，3H)，2.20(s，3H)，4.00(m，1H，C5-H)，4.07(d，1H，C6-H)，4.25(dd，1H，C6-H)，4.48(dt，1H，C2-H)，5.23(m，2H，C3，4-H)，5.72(d，1H，NH)，6.17(d，1H，C1-H)红外光谱 (KBr，cm-1)3360s，3025m，2980m，1740s，1675s，1520s，1425s，1380s，1230s，1130s，1025s，940s，890m，840m实施例82-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅳ-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序4)在茄形烧瓶(50ml)中加入醋酸酐(6ml)，在0℃下向该醋酸酐中加入干燥的氯化氢气体使之饱和，重量增加约1.5g，向该溶液中加入实施例7中制备的2-乙酰胺-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅴ-2](2.0g)，在室温下搅拌该混合物6天，向反应混合物中添加二氯甲烷(25ml)，用饱和碳酸氢钠水溶液(20mol)洗涤2次，用无水硫酸钠干燥合并的有机层然后浓缩，得到粗产物(1.32g)。用硅胶柱色谱法[直径2.5cm×长度10.5cm、硅胶15g、正己烷/醋酸乙酯(1∶4)]分离、提纯该粗产物，得到标题化合物(871.7mg、收率46.4%)的白色晶体。
熔点125-126℃质谱(m/e)731(2M+1)，356(100)，324，306，228，168，1501H-NMR(CDCl3，δppm)1.99(s，3H)，2.06(s，6H)，2.11(s，3H)，4.14(d，1H，C5-H)，4.28(m，2H，C6-H)，4.54(dt，1H，C2)，5.22(t，1H，C4-H)，5.33(t，1H，C3-H)，5.98(d，1H)，6.19(d，1H，C1-H)红外光谱 (KBr，cm-1)3300w，1750s，1650m，1550m，1440m，1380m，1295m，1235s，1215s，1120m，1035m，980w，918w，895w
实施例92-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖[Ⅳ-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序5)在茄形烧瓶(200ml)中加入乙酰氯(25ml)，一面搅拌，一面一点一点地添加N-乙酰基-D-葡萄糖胺[Ⅵ-2](12.5g)，4小时后反应液发热，产生缓慢的回流。搅拌该反应液一晚上，形成浅红色的粘稠固体。向该固体中添加二氯甲烷(100ml)将其溶解，用冷的饱和碳酸氢钠水溶液中和该溶液，用蒸馏水洗涤收集的有机层，用无水硫酸钠干燥后浓缩，得到粗产物(23.8g)。将粗产物由乙醚中结晶，得到标题化合物(16.0g、收率77%)的白色晶体。
实施例106-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序6)在茄形烧瓶(25ml)中，加入上述实施例8或9中制备的2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅳ-2](914.5mg)、上述实施例1中制备的7-苄氧基-6-羟基香豆素[Ⅲ-1](335.5mg)以及氯仿(10ml)，制成悬浮液，向该悬浮液中添加溶解于1.25N-NaOH(12.5ml)中的氯化苄基三乙基铵(113.9mg)，在氩气氛中回流3小时，放冷至室温。用二氯甲烷(40ml)稀释反应混合物后，分离有机层，用二氯甲烷(20ml)萃取水层，用饱和食盐水(10ml)洗涤收集到一起的有机层，用无水硫酸钠干燥后浓缩，得到粗产物(1.16g)。用甲醇/二氯甲烷处理该粗产物，得到标题化合物(150.4mg、收率21.1%)的白色针状结晶。
Rf0.56(乙酸乙酯)熔点224-227℃质谱(m/e)597，537，523，419，329，268，209，167，125(100)1H-NMR(CDCl3，δppm)1.54(s，3H)，2.02(s，3H)，2.03(s，3H)，2.04(s，3H)，3.07(m，1H，C5-H)，4.14(m，2H，C-6，C2-H)，4.26(dd，1H，C6-H)，5.04(d，1H，C1-H)，5.13(s，2H，苄基)，5.11(q，1H，C4-H)，5.23(t，1H，C3-H)，6.29(d，C3)，6.92(s，1H)，7.26(s，1H)，7.46(m，5H)，7.59(d，C4)IRスペクトル(KBr，cm-1)3300m，2975w，2900w，1740s，1660s，1620s，1555m，1520m，1440m，1380s，1230s，1180m，1140m，1120m，1060s，1040s，930m，900m，870m，810s，730m实施例116-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序7)在茄形烧瓶(100ml)中，加入上述实施例10中制备的6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-2](871mg)、10%Pd/C(30mg)和甲醇(80ml)，在室温及氢气氛中搅拌该混合物4小时，原料消失。过滤反应液除去Pd/C，减压浓缩滤液，得到粗产物(749mg)。用硅胶柱色谱法(直径3.0cm×长度10cm、硅胶10g、二氯甲烷/甲醇＝95∶5)分离粗产物，由乙醇/甲醇中重结晶，得到标题化合物(503.4mg、收率70.0%)的浅黄色针状晶体。
熔点225-227℃
Rf0.36(塩化メチレソ/メタノ-ル(95∶5))质量スペクトル(m/e，FAB)508(M+1)，460，330，289，273，242，210，154(100)元素分析C23H25O12N实验值C53.89，H4.89，N2.61理论值C54.44，H4.97，N2.761H-NMR(CDCl3，δppm)1.95(s，3H)，2.02(s，3H)，2.03(s，3H)，3.97(m，1H，C2-H)，4.14(m+t，2H，C5-H，C6-H)，4.32(dd，1H，C6-H)，5.08(t，1H，C4-H)，5.27(d，1H，C1-H)，5.36(t，1H，C3-H)，6.21(d，1H，香豆素)，6.79(s，1H，香豆素)，7.30(s，1H，香豆素)，7.81(d，1H，香豆素)红外光谱 (KBr，cm-1)3320s，3090w，2950w，2900w，1750s，1705s，1665s，1625m，1610m，1560s，1515s，1440s，1410m，1370s，1295s，1220s，1140m，1090s，1050s，980w实施例126-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序8)在茄形烧瓶(100ml)中，加入上述实施例10中制备的6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-2](351mg)和甲醇(90ml)，形成悬浮液，滴加5滴甲醇钠的甲醇溶液(28%)，加热至40℃，搅拌。10分钟后反应液变成透明，20分钟后生成白色沉淀。在室温下搅拌反应液1.5小时，然后用0.1N-HCl中和。用玻璃过滤器滤取沉淀，用甲醇洗涤后在减压下干燥，得到标题化合物(262.6mg、收率95.1%)的白色针状晶体。
熔点244-246℃Rf0.73(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))质谱(m/e)472(M+1)，382，269，253，204，185，168，138，911H-NMR(d6-DMSO，δppm)1.73(s，3H，N-Ac)，3.23(q，1H)，3.43(t，1H)，3.51(m，1H)，3.73(q，2H)，5.02(d，1H)，5.25(s，2H，苄基)，6.30(d，1H，香豆素)，7.12(s，1H，香豆素)，7.31(t，1H，对苄基)，7.39(t，2H，间苄基)，7.43(s，1H，香豆素)，7.48(d，2H)，7.79(d，1H，AcNH)，7.89(d，1H，香豆素)红外光谱 (KBr，cm-1)3405s，3275m，2900w，1750s，1665s，1615m，1540m，1430m，1390m，1380m，1310s，1270s，1240w，1175m，1110m，1090s实施例136-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2]的合成(糖成分为葡糖胺时的工序9)在茄形烧瓶(100ml)中，加入上述实施例12中制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2](315.5mg)和15%的含水二甲氧基乙烷(60ml)，制成溶液。在该溶液中添加10%Pd/C(24mg)，在室温及氢气氛中搅拌该混合物1小时，由反应混合物中减压除去溶剂，得到灰色的粉末。在该粉末中加入水/四氢呋喃/甲醇(5∶1∶0.2)混合液(435ml)，在75℃加热溶解，滤去催化剂，浓缩滤液至50ml后在冰箱中放置一夜，得到标题化合物(228.0mg、收率89.3%)白色针状晶体。
Rf0.56(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))熔点265-266℃元素分析C17H19O9N实验值C53.25，H4.91，N3.55理论值C53.55，H5.02，N3.671H-NMR(CDCl3，δppm)1.83(s，3H)，3.23(t，1H，C3-H)，3.35(m，1H)，3.48(t，1H)，3.52(m，1H)，5.00(d，1H，C1-H)，6.24(d，1H，香豆素)，6.83(s，1H，香豆素)，7.36(s，1H，香豆素)，7.88(d，1H)红外光谱 (KBr，cm-1)3375s，3240w，2930w，1640s，1665s，1600s，1550m，1405m，1275m，1255m，1225w，1172w，1140w，1120m，1085m，1042m，1025w，995m，930m，890m，861m，820m实施例146，7-双(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖氧基)香豆素[Ⅰa-6]的合成(糖成分2个都是葡糖胺时的工序13)
在上述实施例11制备的6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-2](2.15g)和上述实施例9制备的2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅳ-2](2.33g)中加入乙腈(100ml)，在室温和氩气流下搅拌，10分钟后滴加三乙胺(4.29g)，搅拌一夜，用TLC法确定反应已结束后，加入离子交换树脂(CG-50;5g)，终止反应。用G4的玻璃过滤器除去离子交换树脂，减压浓缩滤液，得到粗制油状物(5.09g)，用硅胶柱色谱法(Kiseslgel60;100g，直径6.cm，醋酸乙酯100%)分离，减压浓缩溶液后添加甲醇，得到标题化合物(2.30g、收率53.3%)的白色晶体。
Rf0.37(乙酸乙酯100%)质谱(m/e，FAB)837(M+1)，3301H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.82(s，3H，NHAc)，1.84(s，3H，NHAc)，1.96(s，3H，Ac)，1.97(s，3H，Ac)，1.99(s，3H，Ac)，2.00(s，3H，Ac)，3.85(dd，1H，C2)，4.01(m，4H，C2，C5，C6，C6)，4.21(m，3H，C5，C6，C6′)，4.93(t，1H，C4′)，4.98(t，1H，C4)，5.31(m，2H，C3，C3′)，5.45(d，1H，C1′)，5.55(d，1H，C1)，6.39(d，1H，香豆素)，7.29(s，1H，香豆素)，7.48(s，1H，香豆素)，7.94(d，2H，香豆素，NH)，8.08(d，1H，NH)IRスペクトル(KBr，cm-1)3320m，1750s，1670m，1555m，1435w，1380m，1285m，1240s，1040s实施例157-苄氧基-6-羟基-4-甲基香豆素[Ⅲ-2](向7位的羟基引入保护基)将4-甲基七叶亭[Ⅹ-2](5.0g)溶解于二甲基甲酰胺(52ml)中，在室温下向该溶液中添加碳酸钠(1.80g)，一面在10℃下搅拌，一面滴加苄基氯(4.94g)，然后搅拌一夜。用TLC法确认生成物，将反应液倒入冰水中，用氯仿萃取，用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩。向残渣中加入氯仿，滤取不溶物，由乙醇中重结晶，得到标题化合物(0.85g、收率11.6%)。再用柱色谱法[Kiesel gel、Merck公司制造，氯仿/醋酸乙酯(24∶1)]提纯，分离出6位反应生成物和6，7位反应生成物。
(1)标题化合物[Ⅲ-2](7位反应生成物)Rf0.46(氯仿/乙酸乙酯(12∶1))1H-NMR(DMSO-d6，δppm)2.33(s，3H，C4-Me)，5.24(s，2H，C7-CH2)，6.17(s，1H，C3-H)，7.05(s，1H，C8-H，C5-H)，7.34(m，1H，芳族)，7.41(m，2H，芳族)，7.51(m，2H，芳族)，9.42(s，1H，C6-OH)13C-NMR(DMSO-d6，δppm)18.14(C4-Me)，70.02(C7-CH2)，101.40(C8)，109.41(C5)，111.32(C10)，112.52(C3)，127～128(芳族ic)，136.36(芳族)，143.71(C7)，147.37(C4)，150.37(C6)，152.98(C9)，160.42(C2)(2)6位反应生成物)Rf0.37(氯仿/乙酸乙酯(121))1H-NMR(DMSO-d6，δppm)2.35(s，3H，C4-Me)，5.19(s，2H，C6-CH2)，6.13(s，1H，C3-H)，6.81(s，1H，C8-H)，7.25(s，1H，C5-H)，7.34(m，1H，芳族)，7.41(m，2H，芳族)，7.51(m，2H，芳族)，10.34(s，1H，C7-OH)
13C-NMR(DMSO-d6，δppm)18.26(C4-Me)，70.57(C6-CH2)，103.01(C8)，109.14(C5)，110.50(C10)，111.21(C3)，127.87(芳族)，128.35(芳族)，136.87(芳族)，143.97(C7)，148.92(C4)，150.37(C6)，153.38(C9)，160.39(C2)(3)6，7位反应生成物Rf0.70(氯仿/乙酸乙酯(12∶1))1H-NMR(DMSO-d6，δppm)2.37(s，3H，C4-Me)，5.20(s，2H，C6-CH2)，5.26(s，2H，C7-CH2)，6.19(s，1H，C3-H)，7.15(s，1H，C8-H)，7.30(s，1H，C5-H)，7.34(m，1H，芳族)，7.39(m，2H，芳族)，7.48(m，2H，芳族)13C-NMR(DMSO-d6，δppm)18.23(C4-Me)，70.14(C6-CH2)，70.79(C7-CH2)，101.75(C8)，109.32(C5)，111.43(C10)，112.22(C3)，127～131(芳族)，136.32(芳族)，136.84(芳族)，144.89(C7)，148.75(C4)，151.88(C6)，153.18(C9)，160.20(C2)
实施例167-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱa-12](糖成分为葡糖胺时的工序6)在茄形烧瓶(300ml)中，加入上述实施例8制备的2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-1-氯-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖[Ⅳ-2](6.41g)、上述实施例15制备的7-苄氧基-6-羟基-4-甲基香豆素[Ⅲ-2](3.30g)以及二氯甲烷(120ml)，形成悬浮液。在室温及搅拌的情况下，向该悬浮液中添加溶解于1.25N-NaOH(38ml)中的氯化苄基三乙基铵(1.07g)。在室温下搅拌一夜，过滤析出的结晶，倾析母液，浓缩有机层，将残渣与过滤的结晶体合在一起，用甲醇洗涤，得到标题化合物(5.76g，收率80.7%)的白色晶体。
熔点253-254℃Rf0.69(甲醇/乙酸乙酯(5∶95))质谱 (m/e，EI)612(M+)，330(Ac-Glc)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.70(s，1H，N-Ac)，1.95(s，3H，C6-Ac)，1.97(s，3H，Ac)，2.00(s，3H，Ac)，2.41(d，3H，C4′-Me)，4.06(m，1H，C2-H)，4.09(d，1H，C6-H)，4.14(m，1H，C5-H)，4.17(d，1H，C6-H)，4.96(t，1H，C4-H)，5.23(t，1H，C3-H)，5.26(s，2H，C7′-CH2)，5.38(d，1H，C1-H)，6.24(d，1H，C′3-H)，7.15(s，1H，C8′-H)，7.32(t，1H，芳族)，7.38(t，2H，芳族)，7.40(s，1H，C5′-H)，7.47(d，2H，芳族)，8.04(d，1H，Ac-NH)红外光谱 (KBr disk，νcm-1)3525m，2940w，2880w，1745s，1658s，1618s，1562m，1538m实施例177-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱb-12](糖成分是葡糖胺时的工序8)将上述实施例16制备的7-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱa-12](0.5g)悬浮于甲醇(40ml)中，在室温下用巴斯德吸液管向该悬浮液中滴加2滴甲醇钠的甲醇溶液(28%)，用TLC法确认反应已结束后，用1N-HCl中和，过渡析出的结晶，得到标题化合物(0.36g、收率92.3%)的白色晶体。
熔点263-264℃Rf0.66(氯仿/甲醇/水(7∶3∶1))质谱(m/e，FAB)485(M+1)，283(Bn-EST)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.73(s，1H，N-Ac)，2.37(d，3H，C4′-Me)，3.17(m，1H，C4-H)，3.36(m，1H，C5-H)，3.45(m，2H，C3-H，C6-H)，3.77(m，2H，C6-H，C2-H)，4.75(t，1H，C6-OH)，5.00(d，1H，C1-H)，5.07(d，1H，C3-OH)，5.14(d，1H，C4-OH)，5.24(s，2H，C7′-CH2)，6.21(d，1H，C′3-H)，7.12(s，1H，C8′-H)，7.32(t，1H，Aromatic)，7.39(t，2H，Aromatic)，7.47(d，2H，Aromatic)，7.49(s，1H，C5′-H)，7.79(d，1H，Ac-NH)红外光谱 (KBr disk，νcm-1)3400s，3290s，3150m，2860w，1730s，1716s，1659s，1618s，1560s，1520m
实施例187-羟基-6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅰb-12](糖成分是葡糖胺时的工序9)将上述实施例17制备的7-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱb-12](0.35g)悬浮于15%的二甲氧基乙烷水溶液(40ml)中，在该悬浮液中添加10%Pd/C(10.5mg)在氢气氛下搅拌2小时，用TLC法确认反应结束后，用蒸发器减压干固，得到残渣，将其溶解在二噁烷/水(1∶1)(200ml)中。用硅藻土过滤催化剂，减压浓缩干固滤液，用甲醇洗涤得到的结晶，得到标题化合物(0.27g、收率96.4%)的浅灰色晶体。
熔点263℃(分解)Rf0.50(氯仿/甲醇/水(7∶3∶1))质谱(m/e，FAB)396(M+1)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.83(s，1H，N-Ac)，2.35(d，3H，C4′-Me)，3.16(m，1H，C4-H)，3.32(m，1H，C5-H)，3.48(m，2H，C3-H，C6-H)，3.64(q，1H，C2-H)，3.76(m，1H，C6-H)，4.70(m，1H，C6-OH)，4.96(d，1H，C1-H)，5.08(d，1H，C3-OH)，5.13(d，1H，C4-OH)，6.14(d，1H，C′3-H)，6.80(s，1H，C8′-H)，7.40(s，1H，C5′-H)，7.91(d，1H，Ac-NH)，9.74(s，1H，C7′-OH)红外光谱 (KBr disk，ν cm-1)3425s，3398s，3275s，3152s，3090s，2950s，1688s，1662s，1660s，1580s，1558s，1522m实施例196-(β-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素盐酸盐[Ⅱb-2′](糖成分是葡糖胺时的2-乙酰胺基的脱乙酰基化)在茄形烧瓶(25ml)中，放入上述实施例12制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2](471.5mg)和乙醇(3ml)，形成悬浮液，在该悬浮液中慢慢地滴加新制备的3.02N-KOH的乙醇溶液(6.62ml)，形成黄色溶液。在120℃及氩气氛下使该溶液回流6.5小时，确认原料消失后放冷，然后在减压下浓缩溶剂。在0℃下向残渣中添加蒸馏水(1ml)，然后十分小心地添加浓盐酸(3ml)，使其pH值为1。无色沉淀(KCl)析出。用旋转式蒸发器在减压下浓缩、干固该混合液，再加入苯浓缩干固，充分干燥后，加入乙醇(20ml×2)进行萃取，用3G3的玻璃过滤器滤出固形物(KCl、1.185g)，浓缩滤液得到浅茶色的固形物(1.969g)。加乙醚使之崩解，得到粉末，滤出粉末，用二氯甲烷洗涤，干燥后得到标题化合物(413mg、收率88.6%)的白色针状晶体。
熔点170-172℃(分解)Rf0.58(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))质谱(m/e，FAB)430(M+1)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)3.06(dd，1H，C-2′)，3.33(m，1H)，3.38(m，1H)，3.56(m，1H)，5.27(d，1H，C-1′，β)，5.33(s，1H，苄基 CH2)，6.33(d，1H，C-3)，7.11(s，1H)，7.36(m，1H)，7.41(m，2H)，7.52(m，2H)，7.53(s，1H)，7.93(d，C-4)红外光谱 (KBr，ν cm-1)3375s，2910m，1700s，1608s，1550m，1510s，1430m，1390m，1375m，1275s，1235m，1142m，1062s，930w，820w
实施例206-(β-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素盐酸盐[Ⅰb-2′](糖成分是葡糖胺时的工序9)在茄形烧瓶(25ml)中，加入上述实施例19制备的6-(β-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素盐酸盐[Ⅱb-2’](359.7mg)和甲醇(10ml)，使之溶解。向该溶液中添加10%Pd/C(18.6mg)，在氢气氛中缓慢搅拌2小时，确认原料已消失后，添加活性炭(10%W/W)，然后用绉纹滤纸除去催化剂。在减压下浓缩干固滤液，得到固形物(271.3mg)，将该固形物由甲醇/乙醚中重结晶，得到标题化合物(189.1mg、收率65.4%的浅黄色粉末状晶体。)
熔点198-200℃(分解)Rf0.16(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))质谱(m/e，FAB)340(M+1)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)3.22(dd，1H，C-2′)，3.30(m，1H，C-6′)，3.47(m，1H，C-4′)，3.65(m，1H，C-3′)，3.75(m，1H，C-5′)，3.90(d，1H)，5.18(d，1H，C-1)，6.23(d，1H，C-3)，6.84(s，1H)，7.46(s，1H)，7.84(d，1H，C-4)红外光谱 (KBr，ν cm-1)3320s，2925s，1690s，1627s，1615s，1590s，1565s，1510s，1445s，1415m，1395m，1375m，1300s，1260s，1220m，1180m，1145s，1100s，1070s，1025s，970m，938m，903m，880m，840w，820w，762w实施例216-β-(D-吡喃葡糖醛酸苷)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-7](氧化糖成分是葡萄糖的化合物，将其糖成分变为葡萄糖醛酸的化合物)与实施例1同样，通过七叶苷[Ⅷ]与苄基氯反应合成6-β-D-葡糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅶ-1]，用来作为本实施例的原料。
在氧化铂(1.0g)中加入蒸馏水/二噁烷(1∶1)(20ml)，用中压接触还原装置在1.5大气压下还原约3小时，制得铂黑。
在6-β-D-葡糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅶ-1](1.019g)和碳酸氢钠(0.199g)中加入蒸馏水/二噁烷(1∶1)(100ml)，然后搅拌，再添加上述铂黑，放入80℃的油浴中猛烈吹入氧。取下油浴，待冷却后加入离子交换树脂(Amberlite CG50)(2.4g)，放置30分钟。用硅藻土545过滤CG50，用蒸馏水/二噁烷(1∶1)洗涤，将滤液减压浓缩至原容量的大约2/3，加入硅胶(Lichroprep Si60)(2.052g)进一步浓缩干固，作为残渣得到在Lichroprep Si60上涂满反应物的状态的茶褐色粉末(3.071g)，将该粉末在柱上端叠层，用柱[Lichroprep Si60(10g)、氯仿/甲醇/水(7∶26∶5)提纯，得到浅黄色固体(0.463g)，将其溶解在二噁烷(46ml)和蒸馏水(9ml)中，滤掉不溶分，将滤液溶解在热水中，然后热态过滤，减压浓缩得到浅黄色固体(0.418g)，将该固体由水中再结晶，得到标题化合物(0.305g、收率33.8%)的浅黄色粒状晶体。
熔点190-195℃(分解)Rf0.37(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))质谱(m/e，FAB)489(M+2Na)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)3.28(m，3H，C2，C3，C4)，3.54(d，1H，C5)，5.01(d，1H，C1)，5.27(s，2H，-CH2O)，6.29(d，1H，香豆素)，7.14(s，1H，香豆素)，7.33(t，1H，苯基)，7.40(t，2H，苯基)，7.42(s，1H，香豆素rine)，7.52(d，2H，苯基)，7.89(d，1H，香豆素)红外光谱(KBr，ν cm-1)3430s，1715s，1615m，1560m，1520m，1435m，1395m，1380m，1280s，1245m实施例226-β-(D-吡喃葡糖苷)-7-羟基香豆素[Ⅰb-7](糖成分是葡糖醛酸时的工序9)在上述实施例21制备的6-β-(D-吡喃葡糖醛酸苷)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-7](1.504g)和10%Pd/C(0.15g)中加入甲醇/蒸馏水(4∶6)(30ml)，在室温下搅拌3小时，用TLC法确认反应结束后，用G4的玻璃过滤器滤出Pd/C，减压浓缩滤液，然后用乙醚和氯仿洗涤、干燥，得到标题化合物(1.162g、收率96.9%)的黄色固体。
熔点198℃(分解)Rf0.20(氯仿/甲醇/水(7∶3∶0.5))质谱(m/e，FAB)355(M+1)1H-NMR(D2O，δppm)3.70(m，3H，C2，C3，C4)，3.96(d，1H，C5)，5.14(1H，C1)，6.30(d，1H，香豆素)，6.87(s，1H，香豆素)，7.33(s，1H，香豆素)，7.89(d，1H，香豆素)，红外光谱 (KBr，ν cm-1)3400s，1690s，1610s，1560s，1510w，1395m，1295m，1260m实施例236-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-6-O-三甲基乙酰-D-吡喃糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2P](糖成分是葡糖胺时导入1个酰基)将上述实施例12制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2](10.0g)悬浮在无水吡啶(200ml)中，添加三甲基乙酸酐(4.74g)和4-二甲氨基吡啶(2.59g)，在室温下搅拌3天。反应终止后，减压蒸馏去除溶剂，用硅胶柱色谱法[Kieselgel160(500g)、氯仿/甲醇(15∶1)]提纯残渣，得到标题化合物(9mg、收率77%)的白色固体。
熔点179.5-182.0℃质谱 (m/e，FAB)556(M++1)1H-NMR(CDCl3，500MHz，δppm)1.06(s，9H，tBu)，1.76(s，3H，CH3CO-)，3.24(td，1H，H-4′)，3.48(br q，1H，H-3′)，3.57-3.61(m，1H，H-5′)，3.72(q，1H，H-2′)，4.05(dd，1H，H-6′a)，4.36(d，1H，H-6′b)，5.12(d，1H，H-1′)，5.18(d，1H，3′-OH)，5.24(d，1H，PhCH2-)，5.27(d，1H，PhCH2-)，5.38(d，1H，4′-OH)，6.31(d，1H，H-4)，7.18(s，1H，H-5)红外光谱 (KBr disk，ν cm-1)3400m，1725s，1655m，1615m，1275s
实施例246-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-6-O-三甲基乙酰-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2P](糖成分是葡糖胺时的工序9类似的工序)将上述实施例23制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-6-O-三甲基乙酰-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2P](532mg)溶解在二甲氧基乙烯(16ml)中，添加10%Pd/C(30，mg)，在室温及氢气氛中搅拌该混合物3小时，反应终止后，过滤除去催化剂，减压馏去溶剂，得到浅黄色固体(443mg)，将该固体由热水中重结晶，得到标题化合物(358mg、收率77%)的白色针状晶体。
熔点133.0-136.0℃质谱 (m/e，FAB)466(M++1)1H-NMR(DMSO-d6，500MHz，δppm)1.06(s，9H，tBu)，1.84(s，3H，CH3CO-)，3.23(td，1H，H-4′)，3.53(br q，1H，H-3′)，3.57-3.61(m，1H，H-5′)，3.62(q，1H，H-2′)，4.04(dd，1H，H-6′a)，4.39(d，1H，H-6′b)，5.07(d，1H，H-1′)，5.19(d，1H，3′-OH)，5.38(d，1H，4′-OH)，6.24(d，1H，H-4)，6.81(s，1H，H-5)，7.28(s，1H，H-8)，7.90(d，1H，H-3)，7.94(d，1H，-NHCOCH3)，9.91(br s，1H，ArOH)红外光谱(KBr disk，ν cm-1)3400s，1720s，1650s，1620s，1565s，1300s，1280s，1255s，1170m，1140m，1070s实施例256-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2B](糖成分是葡糖胺时导入亚苄基)在上述实施例12制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素(Ⅱb-2)471.5mg)和二甲基甲酰胺(10ml)的溶液中，加入对甲苯磺酸(5.7mg)和苯甲醛二甲基乙缩醛(761mg)，在室温下搅拌一夜。由于剩余下来一些原料，再加入苯甲醛二甲基乙缩醛(761mg)，在室温下搅拌一夜。将反应液倒入蒸馏水中，过滤析出的结晶，用蒸馏水和乙醚洗涤。将结晶体干燥后，由二噁烷中重结晶，得到标题化合物(0.4402g、收率78.7%)。
熔点251-253℃Rf0.66(氯仿/甲醇(8∶1))质谱 (m/e，FAB)560(M+)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.77(s，3H)，3.58(m，2H)，3.76(m，2H)，3.85(q，1H)，4.25(dd，1H)，5.24(m，3H)，5.45(d，1H)，5.64(s，1H)，6.32(d，1H)，7.14(s，1H)，7.33(t，1H)，7.39(m，5H)，7.46(m，5H)，7.91(d，1H)，7.97(dd，1H)红外光谱 (KBr，ν cm-1)3440m，3250m，3070m，2860m，1720s，1650s，1610s，1550s，1515s，1445m，1430m，1370s，1605m，1275s，1240s，1195m，1165m，1140s，1080s，1020s实施例266-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2B](糖成分是葡糖胺时的工序9类似的工序)
在上述实施例25制备的6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2B]和二噁烷(80ml)的溶液中加入10%Pd/C(36.4mg)，在室温及氢气流下搅拌一夜，用硅藻土过滤反应液，除去Pd/C，减压浓缩滤液得到结晶(567.3mg)，将该结晶由二噁烷中重结晶，得到标题化合物(0.2696g、收率44.2%)。
熔点250-251℃(分解)Rf0.52(氯仿/甲醇(8∶1))质谱 (m/e，FAB)470(M+)1H-NMR(DMSO-d6，δppm)1.83(s，3H)，3.56(t，2H)，3.76(m，3H)，4.26(m，1H)，5.18(d，1H)，5.44(d，1H)，5.64(s，1H)，6.24(d，1H)，6.81(s，1H)，7.38(m，4H)，7.46(m，2H)，7.92(d，1H)，8.02(d，1H)，9.96(s，1H)红外光谱 (KBr，ν cm-1)3370m，3060m，2890m，1720s，1705s，1655s，1610s，1560s，1515m，1440m，1690m，1370m，1300s，1270m，1255s，1210m，1170m，1140m，1085s，1025s
实施例27七叶亭衍生物的急性毒性试验使用CrjCD-1(ICR)雄性小鼠(6周龄)和Wistar雄性大鼠(6周龄)对本发明物质的急性毒性进行了研究。将6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2](实施例13)以1000和2000mg/kg的剂量经口给药，随后观察7天，未发现死亡例。另外，就一般状态和体重变化与对照组比较也没有发现任何变化，对于下列的其它的本发明化合物结果也是一样6-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-1]、6-(β-2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-半乳糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-1]、6-β-D-半乳糖氧基-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-1]、6-β-D-半乳糖氧基-7-羟基香豆素[Ⅰb-1]、6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱa-2]、6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰa-2]、6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2]、6，7-双(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖氧基)香豆素[Ⅰa-6]、7-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-3，4，6-三-O-乙酰基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱa-12]、7-苄氧基-6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅱb-12]、7-羟基-6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-4-甲基香豆素[Ⅰb-12]、6-(β-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素盐酸盐[Ⅱb-2’]、6-(β-2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素盐酸盐[Ⅰb-2’]、6-β-(D-吡喃葡糖醛酸苷)-7-羟基香豆素[Ⅱb-7]、6-β-(D-吡喃葡糖醛酸苷)-7-羟基香豆素[Ⅰb-7]、6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-6-O-三甲基乙酰-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素(Ⅱb-2P]、6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-6-O-三甲基乙酰-D-三甲基乙酰-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2P]、6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡糖氧基)-7-苄氧基香豆素[Ⅱb-2B]、6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-4，6-O-亚苄基-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2B]。另外，在本试验中，每组使用2只动物。
实施例28在小鼠FHC模型中的药物代谢动力学及FHC中蛋白多糖(PG)量减少抑制作用(1)模型的制作本模型的制作按D.A.Willoughby等人的方法进行(见D.A.Willoughby et al.，Agents Actions，Vol.38，P126-134，1993)。
在净化台内的无菌条件下摘出S.D.系雄性大鼠的左右大腿骨软骨(FHC)，用含抗生素的HamF-12培养液洗涤摘出的FHC，测定湿重量，然后用2片约1cm见方的棉花包位FHC，埋入培养液中冰冷。在无菌条件下将该FHC植入背部剃掉毛的BALB/C雄性小鼠的背部皮下，缝合切开部位，用手术用的粘合剂(aron alpha)填塞。
(2)七叶亭和6-(β-2-乙酰胺-2-脱氧-D-吡喃葡糖氧基)-7-羟基香豆素[Ⅰb-2]给药后在FHC中的药物代谢动力学分析使用上述小鼠FHC模型，从动力学上对七叶亭和本物质[Ⅰb-2]进行比较。将七叶亭10mg/kg和与其等摩尔量的本物质[Ⅰb-2]21mg/kg埋入FHC，三天后从背部皮下(FHC周围)给药，给药后，定时回收FHC，用木瓜蛋白酶分解，然后用高速液相色谱法分析被FHC吸取的药剂量。在本试验中，每组使用5只小鼠。
试验结果示于
图1中，图1中，本物质[Ⅰb-2]的吸取量用○表示，七叶亭的吸取量用●表示。如图1所示，与七叶亭相比，本物质[Ⅰb-2]一方，高浓度的药剂可以在FHC中长时间吸取、滞留。
(3)本物质[Ⅰb-2]对FHC中的PG量减少的抑制作用使用上述小鼠FHC模型，研究将本物质[Ⅰb-2]给药而引起的在FHC中的蛋白多糖(PG)量减少抑制作用。在植入FHC后第7天开始，将本物质[Ⅰb-2]400mg/kg每日一次连续给药11天。给药后收回FHC，用木瓜蛋白酶处理，然后以葡糖胺聚糖(GAG)量为指标，采用R.W.Farndal等人的方法(见R.W.Farndal et al.，Con-nective Tissue Research，Vol.9，p.247-248，1982)测定FHC中的PG量。本实验中，每组使用6只小鼠。
图2中以GAG量(μg)为指标表示各组中的FHC50mg中含有的PG量。由图2可以看出，与给药开始时(PHC埋入7天后)(图2A)相比，对照组(图2B)明显的FHC中的PG量减少，相比之下，本物质[Ⅰb-2]给药组(图2C)显示了出抑制PG量减少的作用。
(6)发明的效果本发明的新的七叶亭衍生物，能强有力地抑制构成软骨基质的PG的减少，具有软骨保护作用。另外，与七叶亭和4-烷基七叶亭等相比，向软骨基质中的吸收和亲和性以及局部的药物滞留性都提高了。此外，其毒性很低。因此，本发明的七叶亭衍生物、药物组合物，特别适合作为软骨保护剂用来治疗慢性关节风湿病、变形性关节症、肩周炎、颈肩腕症候群、腰痛症等关节病症。
以上，依据特定的实施方案对本发明进行了说明，本专业的普通技术人员自明的改良也包括在本发明的范围内。
(7)附图的简要说明图1是本说明书实施例28(2)中进行的小鼠FHC模型中的、本发明化合物与七叶亭向大腿骨头软骨(FHC)中的吸收果的示意曲线图;
图2是本说明书实施例28(3)中进行的在小鼠FHC中的、由本发明化合物产生的抑制蛋白多糖量减少的作用的示意曲线图。
权利要求
1.用式(Ⅰ)表示的七叶亭衍生物或其盐， [式中，R1及R2分别独立地表示氢原子、单糖类残基、保护了的单糖类残基、或羟基保护基，R1及R2的至少一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基，R3是氢原子、羟基、烷基、芳基或芳烷基，但是R3是氢原子时，要排除(1)R1和R2都是葡萄糖残基，(2)R1是氢原子或是作为羟基保护基的苄基、R2是葡萄糖残基、乙酰化了的葡萄糖残基或者是缩醛化的葡萄糖残基，或(3)R1是葡萄糖残基、R2是氢原子的情况]。
2.根据权利要求1的七叶亭衍生物或其盐，其中的R3是氢原子、羟基、碳数1～44的低级烷基、或苯基。
3.根据权利要求1的七叶亭衍生物或其盐，其中，保护了的单糖类残基是1～全部的羟基酰化、硫酸酯化或者磷酸酯化的单糖类残基，或者是2或4个羟基缩醛化的单糖类残基。
4.式(ⅩⅤ)表示的化合物的制造方法 (式中，R14及R15分别独立地表示保护了的单糖类残基、或羟基保护基，R14及R15的至少一方是保护了的单糖类残基，R3与上述定义的相同)其特征是，将用式(ⅩⅥ)表示的化合物 (ⅩⅥ)(式中，R16及R17分别独立地表示氢原子、保护了的单糖类残基、或羟基保护基，R16及R17的至少一方是氢原子，R3是氢原子、羟基、烷基、芳基或芳烷基)与式(Ⅳ)(式中，R5是保护了的单糖类残基，X是卤原子)表示的化合物进行反应。
5.根据权利要求4的方法，其中使用了相间移动催化剂。
6.式(ⅩⅢ)表示的化合物的制造方法， (ⅩⅢ)(R10及R11的一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基，另一方是氢原子，R3与上述定义相同)其特征是，将式(ⅩⅣ)的化合物进行氢化分解， (ⅩⅣ)(式中，R12及R13的一方是单糖类残基或保护了的单糖类残基，另一方是羟基保护基，R3是氢原子、羟基、烷基或芳烷基)。
7.式(Ⅺ)表示的化合物制造方法， (Ⅺ)(式中，R6及R7分别独立地表示氢原子、单糖类残基或羟基保护基，R6及R7的至少一方是单糖类残基，R3与上述定义相同)其特征是，将式(Ⅻ)化合物的被保护的单糖类残基脱保护， (Ⅻ)(式中，R8及R9分别独立地表示氢原子、保护了的单糖类残基、或羟基保护基，R8及R9的至少一方是保护了的单糖类残基，R3是氢原子、羟基、烷基、芳基或芳烷基)。
8.医药组合物，其特征是含有权利要求1中所述的用式(Ⅰ)表示的七叶亭衍生物或其制剂学上可允许的盐。
9.根据权利要求8的医药组合物，其是软骨保护剂。
10.权利要求1中用式(Ⅰ)表示的七叶亭衍生物或其制剂学上可允许的盐在医药组合物的制造的应用。
全文摘要
用式(I)表示的七叶亭衍生物、其制造方法、用途及医药组合物，式中，R
文档编号A61K31/7042GK1106398SQ9411831
公开日1995年8月9日 申请日期1994年11月15日 优先权日1993年11月15日
发明者渡边孝寿, 新村浩一, 宫川纯子 申请人:吴羽化学工业株式会社