专利名称：用口服剂型ω－3多不饱和酸治疗炎症性肠道疾病的制作方法
技术领域：
本发明涉及ω-3多不饱和酸的口服给药，具体地(但非排他性地)涉及二十碳五-5，8，11，14，17-烯酸(“EPA”)和/或二十二碳六-4，7，10，13，16，19-烯酸(“DHA”)。特别是提供用于治疗炎症性肠道疾病(具体的但非排他性的如节段性回肠炎和溃疡性结肠炎)的ω-3多不饱和酸的肠内吸收剂型。
人们知道，DHA、EPA和其它ω-3多不饱和酸在治疗炎症性肠道疾病上是有用的(例如见EP-A-0244832、EP-A-0289204、EP-A-0311091和WO-A-93/21912)。
EP-A-0244832公开了含有某些多不饱和脂肪酸和某些特定的刺激剂的药物组合物。这些组合物对于治疗伴有前列腺素缺乏的疾病(特别是胃肠道溃疡)是有用的。不饱和脂肪酸是那些具有3-5个孤立双键和排列成直链状的18-22个碳原子，在其2、3、4、16、17、18、19或20位的一个或两个碳原子上可被甲基化和乙基化的脂肪酸。EPA在列举的酸之中。该文献提到含有聚苯乙烯或聚丙烯酸衍生物的pH依赖性缓释制剂和肠溶包衣产品。
EP-A-0289204公开了包含C18-C22的多不饱和脂肪酸的锂盐的消毒剂和药物组合物。具体的多不饱和脂肪酸包括DHA和EPA。药物组合物可以是胃肠道内、非胃肠道和局部给药，可用于对锂和/或多不饱和脂肪酸治疗敏感的疾病的治疗。对多不饱和脂肪酸治疗敏感的具体疾病包括节段性回肠炎和溃疡性结肠炎。该文献涉及提供例如丙烯酸或醋酸邻苯二甲酸纤维素肠溶包衣以延缓盐的吸收直至到达肠道。
EP-A-0311091公开了包含ω-3脂肪酸或酯、中等链长的甘油三酯和乳化剂的生理学上可接受的等渗脂肪乳剂。脂肪酸或酯组分可以纯化合物或鱼油的形式存在，较佳为EPA。乳剂可非经口给药，特别是用于治疗慢性炎症性肠道疾病。
WO-A-93/21912公开了用于非经胃肠道给药治疗包括炎症性肠道疾病的炎症性疾病的包含多不饱和长链ω-3脂肪酸或酯的乳剂。脂肪酸或酯可以鱼油的形式存在，较佳的脂肪酸包括DHA和EPA。
包含DHA或EPA的肠溶包衣产品被报道用于治疗其它疾病(见EP-A-0336662、GB-A-2090529、JP-A-62201823和WO-A-90/04391)。
EP-A-0336662公开了鱼油酸以肠溶包衣形成微囊以提供一种掺入食品用于降低血浆甘油三酯、低密度脂蛋白和胆固醇水平的无臭、无味的稳定组合物。具体的包衣材料为乙基纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素和乙酸偏苯三酸纤维素。该文献提到幽门以下肠道上部活性成分的释放，但未具体提到定向释放到回肠。
GB-A-2090529公开了用DHA或其酯或酰胺预防和治疗血栓形成。该文献提到肠溶包衣片和薄膜包衣片的一般术语。
JP-A-62201823公开了用于治疗肠道异常发酵或腹泻的肠溶包衣胶囊，它是在油中包含细菌。油可以是EPA，很多肠溶材料被具体化，包括紫胶、羧甲基纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟甲基丙基纤维素和邻苯二甲酸聚乙烯醇酯。
WO-A-90/04391(及相应的GB-A-2223943)公开了EPA、DHA及其它ω-3多不饱和脂肪酸的肠溶制剂，它们克服了这些酸口服给药所伴有的打嗝和胃肠胀气的问题。列举的包衣为乙酸邻苯二甲酸纤维素/邻苯二甲酸乙酯但提到用聚甲基丙烯酸酯作为包衣材料。
Belluzzi等(Dig.Dis.Sci.39(1994)2589-2594)报告了一项研究，其中将5组节段性回肠炎患者进行如下处理A组-含500mg”Purepa"鱼油浓缩物(含EPA40％和DHA20％)的不包衣明胶胶囊；B组-含500mg”Purepa"鱼油浓缩物、以耐pH5.5乙酸偏苯三酸纤维素(“CAT”)包衣120分钟的明胶胶囊；C组-含500mg”Purepa"鱼油浓缩物、以耐pH5.5CAT包衣60分钟的明胶胶囊；D组-含500mg”Purepa"鱼油浓缩物、以耐pH6.9乙酸邻苯二甲酸纤维素(“CAP”)包衣120分钟的明胶胶囊；E组-含1000mg”Max-EPA"甘油三酯鱼油(EPA18％和DHA10％)的未包衣明胶胶囊。
CAP于pH6.8溶解，CAT于pH5.5溶解。所有包衣的胶囊于相应的pH在15分钟内崩解。
服用胶囊A-D的4组于用餐时服用9个胶囊(2.7gω-3多不饱和酸)，每天三次，共六周，服用胶囊E的患者每天分次接受12个胶囊(3.4gω-3多不饱和酸)，于用餐时服用，共六周。
所有5种治疗方案均通过置换花生四烯酸、亚油酸及较小程度的油酸而增加ω-3多不饱和酸搀人血浆和红细胞磷脂膜的量。然而，采用含“Purepa”鱼油浓缩物的胶囊比用"Max-EPA"甘油三酯混合物有更多游离ω-3多不饱和脂肪酸混合物被吸收。这种搀入是包衣依赖性的，据推测与胶囊崩解部位有关。C组胶囊(具有pH5.5、60分钟包衣)在血浆和红细胞磷脂膜上有最好的ω-3多不饱和脂肪酸搀入。D组胶囊(具有pH6.9包衣)搀入很差，该组70％患者每天肠道运动增加。用B组胶囊(具有pH5.5、120分钟包衣)显示稍好的搀入，但该组5个患者中50％有腹泻。
Belluzzi等采用的C组胶囊结合了pH和时间依赖性的释放机制，可避免胶囊在胃-十二指肠崩解(pH5.5)，从而避免了胃肠道上部的副作用。因为它们仅抗胃酸60分钟，所以使鱼油浓缩物在小肠快速释放并完全吸收。
令人吃惊的是，现已发现，如果将多不饱和脂肪酸的释放控制在回肠特别是回肠中段出现，则吸收和无副作用达到最适结合。
因此，本发明提供一种口服剂型，包含游离酸形式的ω-3多不饱和酸或其药学上可接受的盐作为活性要素，它在回肠释放酸。
本发明还提供游离酸形式的ω-3多不饱和酸或其药学上可接受的盐在制备于回肠释放酸、用于治疗炎症性肠道疾病的药物上的应用。
本发明进一步提供所述口服剂型在治疗炎症性肠道疾病上的应用。
较佳的是ω-3多不饱和酸为DHA、EPA或其混合物。它以游离酸形式或作为其药学上可接受的盐而存在，可作为单一的活性要素或与其它活性要素一起存在。使用含至少60重量％DHA和EPA的鱼油浓缩物较合适。
ω-3多不饱和酸易被氧化，因此常有抗氧化剂存在。目前较好的抗氧化剂为y-生育酚，但也可使用其它药学上可接受的抗氧化剂，如丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、棓酸丙酯或一种醌。
口服剂型还可包含根据剂型的确切种类而定的药学上可接受的一种或多种赋形剂。较合适的是，口服剂型可以是含微囊形式或载于合适的吸附剂上的ω-3多不饱和酸的包衣片剂。但是，口服剂型以包衣胶囊为佳，特别是软的或更特别是硬的明胶胶囊。
包衣必须是在回肠(以回肠中段为佳)释放酸的种类。通常，包衣的溶出完全是时间依赖性的，但可以使用具时间和pH依赖性组合的包衣。包衣以在pH5.5时30-60分钟不溶出为宜。目前较佳的包衣为中性聚丙烯酸酯，如聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯)，特别是Eudragit NE 30-D(Rohm Pharm GmbH)，其平均分子量约为800,000。
通常，ω-3多不饱和酸以每天剂量20-50mg/kg服用，特别是30-40mg/kg。确切剂量特别根据ω-3多不饱和酸的性质和所治疗的疾病的性质和程度而变动。通常，每一剂量单位包含250-1000mg，特别是400-800mg。
下面仅借助实施例描述本发明目前的优选实施方案。
实施例1每个透明硬明胶胶囊(Elanco Qualicaps size 0；Lilly France SA)充填含至少60重量％DHA和EPA的鱼油浓缩物(Incromega 3F60Croda Universal Ltd，UK)500mg。将充填好的明胶胶囊用EudragitNE 30-D包上薄膜，以提供30-60分钟对pH5.5的抵抗力，包薄膜的方法是采用25℃、0.8巴压力、以35ml/分钟用薄膜包衣组合物(见下面)喷雾，于25℃空气干燥至少30分钟。
薄膜包衣组合物(50,000个胶囊用)的制法是将抗泡沫硅乳剂(0.36mg)、棕色氧化铁(E172；3.00mg)、二氧化钛(2.35mg)和滑石粉(10mg)相继缓慢加入水(75mg)中，搅动1-2小时，形成极细的分散体。将平均分子量约为800,000的聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯)(EudragitNE 30D；60mg)的30％水分散体加到在少量水中的多乙氧基醚(吐温)80(MO55F；0.2mg)中，将所得混合物搅动。滴加抗泡沫硅乳剂(2或3滴)以破坏形成的泡沫，缓慢加入上述分散体。用水(25mg)洗涤该容器，将分散体搅动30分钟，然后过滤(150μm)。
用按照节段性回肠炎活动指数(CDAI)确诊为节段性回肠炎临床缓解并满足如下标准的78个病人进行双盲安慰剂对照随机分组研究。
(a)CDAI＜150至少3个月但少于2年；(b)α-1酸性糖蛋白(＞130mg/dl)、红细胞沉降率(ESR)中至少一个值异常(c)(＞40mm/小时)或α-2球蛋白(＞0.9g/dl)；(d)在前3个月中未用5-氨基水杨酸盐、柳氮磺吡啶(sulphasalazine)或皮质甾类治疗过，或在前6个月中未用免疫抑制剂治疗过；(e)以前未经＞1m的肠切除；和(f)年龄18-75岁。
用盲法将患者随机分成2组，各39人，每天接受9个含500mg鱼油浓缩物的肠溶包衣硬明胶胶囊(″Purepa″，见表1)或9个含500mg安慰剂的同样外观的肠溶包衣胶囊(Miglyol812)。鱼油浓缩物含40％EPA和20％DHA。两种胶囊均用Eudragit NE30D包衣以抵御胃酸或肠液达至少30分钟，在pH5.5时60分钟内崩解，使鱼油释放到小肠中。治疗过程中，患者不服用任何其它药物。两组患者的临床特征列于表2。
表1胶囊内容物的组成Purepa(鱼油) Miglyol(安慰剂)脂类成分 ％游离脂肪酸 中性油C14∶0 -C16∶0 0.4C16∶1 3.2C16∶2 2.1C16∶3 2.4C16∶4 5.2C18∶0 -C18∶1 0.8C18∶2 1.5C18∶3 1.3C18∶4 6.9C20∶1 -C20∶3 1.5C20∶4(AA) 1.7C20∶5(EPA)42.4C21∶5 1.6C22∶5 0.5C22∶6(DHA)19.9
表2患者的临床特征PUREPA安慰剂男性 2019女性 1920年龄 34(18-67) 39(20-65)[岁；中位数(范围)]吸烟者 14/39 13/39病程 68(24-94) 66(20-88)[月，中位数(范围)]既往手术＜1m 14/39 13/39患病部位回肠 2524回肠+结肠1415CDAI中位数(范围) 78(28-120)82(30-122)ESR 36.9 35.7(mm/小时)(SD27-最小 6；最大122)(SD24-最小12；最大90)α-2 9.69.2球蛋白(g/l) (SD1.8-最小6.1；最大13.2) (SD1.3-最小6.5；最大11.9)α-1 136.8 137.1糖蛋白(mg/dl)(SD52-最小J53；最大2572) (SD58-最小J60；最大263)鱼油组患者每天接受1.8gEPA和0.9gDHA，共12个月。在进入研究和3、6和12个月时或其前(如果症状恶化，CDAI从基线值上升至少100点和在150以上持续2周以上)，对患者进行检查。每次随访时，进行血、肾、肝、ESR、α-1酸性糖蛋白、α-2球蛋白和CRP(cAMP受体蛋白)的实验室检查。在时间0、6个月和研究结束时，按Popp-Snijders等所述方法(Scan.J.Clin.Lab.Invest44(1984)39-46)得到2ml压紧的(packed)红细胞和多形核白细胞，按Dodge&Phillips所述方法(J.Lipid Res.8(1967)667-675)，用含0.01％丁基化羟基甲苯(2，6-二叔丁基-对甲酚)作为抗氧化剂的氯仿和甲醇(2∶1)混合物提取它们的膜脂质。在分离磷脂和分析ω-3多不饱和脂肪酸前，样品于-20℃在氮气下最多储存2周。用一维薄层色谱法从所提取的脂类中得到磷脂部分。在硅胶板的一角上点样，用氯仿/甲醇/乙酸/水(25∶14∶4∶2)展开。用溶于甲醇中的1N氢氧化钾和溶于14％甲醇中的三氟化硼将分离所得的磷脂于80℃进行转甲基化10分钟。然后用己烷提取脂肪酸甲酯，再悬浮于100μl苯，用装有毛细管柱(0.32mm内径×25m)和火焰电离检测器的气相色谱(用氦气作为载气，流速3ml/分钟)进行分析。柱温安排在170℃和210℃之间，每分钟升高5℃，进样器和检测器温度分别为220℃和250℃。用市售标准品作比较。鉴定各个脂肪酸甲酯。用十七烷酸(17∶0)为内标(在苯中，1mg/ml)，结果表示为相对百分率。
用卡方测验在“刚能顺从”和“想要治疗(intention to treat)”的基础上分析鱼油和安慰剂组的复发率的差异。用Mann-Whitney U测验分析活性成分组和安慰剂组患者的特征之间的差异，用成对数据Studentt测验分析实验室结果(两种测验均用双侧试验)。按照指定的处理计算保持缓解的患者的Kaplan-Maier生命表曲线。用对数秩分析(10grank analysis)检测曲线的差异。在一些变量(实验治疗、性别、年龄、既往手术史、病程)和临床复发之间进行多元回归分析；前向方法用来选择更具代表性的模型。
鱼油组1个患者退出(搬迁)，4个因腹泻而中途退出。安慰剂组1个患者退出(未门诊随访)，1个患者因腹泻而中途退出。所有5个患者均在治疗的第1个月内开始腹泻，减少每天摄入的胶囊症状未见改善。此腹泻可能系胶囊内容物输送到消化道远端所致。包衣是时间依赖性的(在pH5.5时为30-60分钟)，因此当运行时间短时胶囊会顺着肠保持完整。
鱼油组与安慰剂组相比，复发率显著下降x2＝11.75；p＝0.0004(差异41％，95％可信限(Cl)16-66)。对想要治疗者进行分析，差异也是显著的x2＝9.05；p＝0.0026(差异32％，95％(C1)12-52)。
表3总结了临床结果，表4总结了接受鱼油且在研究结束时仍缓解的患者开始和12个月时的炎症反应的实验室变化。对照组中疾病活动性的实验室结果无一有显著降低。表5显示主要的脂肪酸(AA＝花生四烯酸，LA＝亚油酸)对磷脂膜的搀入。多元回归分析表明只有鱼油胶囊明显地影响临床复发(t＝3.16；p＝0.002；F比＝10；p＝0.002)。
经12个月治疗，研究中所用的鱼油胶囊与安慰剂相比，降低节段性回肠炎的临床复发50％。重要的是，研究中的患者在进入研究前临床缓解不到24个月，且存在炎症的实验室证据。这类患者比长期缓解且实验室检查正常的患者复发的危险性约大75％。
结果表明，鱼油胶囊对于预防节段性回肠炎的临床复发是最有效和安全可行的治疗，其副作用相当少。
表3治疗12个月后的临床结果鱼油(n＝39)安慰剂(n＝39)撤出 11缓解 23/3810/38中途退出41复发(想要治疗)15/38(39,5％)*28/38(73,7％)包括中途退出*x2＝9.05；p＝0.0026排除中途退出 11/34＝32,4％27/37＝73,0％*x2＝11,75； p＝0.0004表412个月后缓解的接受Purepa的23个患者
表5主要脂肪酸掺入红细胞的百分比Purepa Miglvol0时间六个月0时间 6个月18∶2n-6LA 10.2±1 7.0±0.86.4±0.4 10.6±1.59.8±2 11.1±1.520∶4n-6AA 13.9±1.58.4±1.27.1±1.2 13.5±1.312.3±1.8 14.1±1.220∶5n-3EPA0.2±0.1 4.1±0.35.8±0.6 0.3±0.1 0.1±0.10.2±0.122∶6m-3DHA2.9±0.6 7.4±1.211.4±1.2 3.2±0.5 2.8±0.73.0±0.权利要求
1.口服剂型，包含游离酸形式的ω-3多不饱和酸或其药学上可接受的盐作为活性要素，其特征在于在回肠释放酸。
2.如权利要求1所述的口服剂型，其中ω-3多不饱和酸在回肠中段释放。
3.如权利要求1或2所述的口服剂型，其中ω-3多不饱和酸的释放受含所述活性要素的胶囊的外部包衣控制。
4.如权利要求3所述的口服剂型，其中包衣溶解的延缓是时间依赖性而非pH依赖性的。
5.如权利要求4所述的口服剂型，其中包衣在pH5.5时耐受30-60分钟。
6.如权利要求4或5所述的口服剂型，其中包衣是中性聚丙烯酸酯。
7.如权利要求6所述的口服剂型，其中包衣是聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯)。
8.如前面任何一项权利要求所述的口服剂型，其中所述的酸为DHA、EPA或其混合物。
9.如前面任何一项权利要求所述的口服剂型，其中所述的酸作为唯一的活性要素而存在。
10.游离酸形式的ω-3多不饱和酸或其药学上可接受的盐在制备于回肠释放酸、用于治疗炎症性肠道疾病的药物上的应用。
11.如权利要求13所述的应用，其中药物是权利要求2-9之一所定义的口服剂型。
12.如权利要求1-9之一所述的口服剂型在治疗炎症性肠道疾病上的应用。
13.治疗炎症性肠道疾病的方法，其特征在于给患者服用有效量的权利要求1-9之一所述的口服剂型。
全文摘要
服用一种包含游离酸形式的ω－3多不饱和酸或其药学上可接受的盐作为活性要素、在回肠释放酸的口服剂型,治疗炎症性肠道疾病,特别是节段性回肠炎和溃疡性结肠炎。较佳的口服剂型是以聚(丙烯酸乙酯－甲基丙烯酸甲酯)包衣的明胶胶囊。
文档编号A61K47/30GK1184421SQ96193911
公开日1998年6月10日 申请日期1996年5月13日 优先权日1995年5月15日
发明者T·布什, E·P·莰波瑞希 申请人:狄洛特医药有限公司