抑制接合蛋白/酪氨酸激酶相互作用的方法与组合物的制作方法

专利名称：：抑制接合蛋白/酪氨酸激酶相互作用的方法与组合物的制作方法1.引言本发明涉及抑制接合蛋白/磷酸化酪氨酸相互作用，特别是这些相互作用涉及能够同含SH2片段成员的接合蛋白家族相配合的一种蛋白质酪氨酸激酶，该酶与细胞增殖疾病相关。特别是，本发明涉及特别的有机化合物，以及利用这些化合物的方法。2.发明背景2.1蛋白质磷酸化作用与信号传导在很大程度上，细胞依赖于细胞内的分子接受相邻环境的刺激。对于正确地调节诸如辨别、收缩、分泌、细胞分裂、接触抑制和代谢等各种细胞内的过程，这些细胞内的信号是最基本的。这些细胞内的分子包括例如激素、生长因子、淋巴因子或神经传递物质，作为配体结合于特异性的细胞表面受体。这些配体对其受体的结合，导致了一连串的反应，使最初的刺激得以放大和上述提及的各个细胞内过程得以协同调节。除了正常的细胞过程外，受体及其细胞内的配体也会参与到反常的或潜在有害的过程中，例如病毒-受体间相互作用、炎症、和细胞转化至致癌状态。该过程的主要特点，是某些蛋白质的可逆性磷酸化，称之为信号的传导。(最近的综述文献，参见PosadaJ和cooperJA，1992，MolBiolCell3583-592；HardieDG，1990，SympSocExpBiol44241-255)。氨基酸残基的磷酸化或去磷酸化，使常规的蛋白质发生了构象的变化，从而改变了它们的生物活性。蛋白质通过蛋白质激酶磷酸化，也通过蛋白质磷酸酯酶去磷酸化。蛋白质激酶和磷酸酯酶是按它们所作用的氨基酸残基而分类的，当作用于丝氨酸和苏氨酸残基时，属丝氨酸-苏氨酸激酶和磷酸酯酶(参见ScottJD和SoderlingTR1992，2289-295)，当作用于酪氨酸残基时，则属酪氨酸激酶和其磷酸酯酶(参见FischerEH等，1991Science253401-406；SchlessingerJ和UllrichA，1992，Neuron61203-212)。蛋白激酶和其磷酸酯酶可进一步被称之为受体，即该酶是跨膜，结合配体的分子中的一个组成部分；或称之为非受体，意味着它们通过键合于配体的受体而作用，间接地应答于细胞内的分子。磷酸化是一个动力学过程，涉及竞争性磷酸化和去磷酸化作用，任一时刻的磷酸化水平，它反映了该时刻的相对活性，以及催化这些作用的蛋白质激酶和磷酸化酶的水平。当大部分蛋白磷酸化发生了丝氨酸和苏氨酸残基时，也会在酪氨酸残基上发生磷酸化反应，这引起了人们很大的兴趣，因为发现许多癌基因产物和生长因子受体具有内源性的蛋白酪氨酸激酶的活性。现在已证实了在生长因子信号传导，细胞循环过程和肿瘤转移中的蛋白质酪氨酸磷酸化作用的重要性(CantleyL.C.等，1991，Cell，64281-302；HunterT，1991，Cell64249-270；Nurse，1990，Nature344503-508；Schlessinger，J和UllrichA，1992，Neuron，9383-391；UllrichA和SchlessingerJ，1990，Cell61203-212)。已经表明，正常生长控制途径的颠倒，会产生癌基因化作用，这是因为构成大量显性癌蛋白的蛋白质酪氨酸激酶的活化或过度表达(参见HunterT，1991，Cell64249-270综述)。2.2蛋白质酪氨酸激酶蛋白质酪氨酸激酶由蛋白质的一大家族所组成，包括许多生长因子受体和潜在的癌基因，它不同于丝氨酸/苏氨酸特异性的蛋白质激酶，但与它们具有共同的祖先(Hanks等，1988，Science24142-52)。对具有跨膜结构的受体型蛋白质酪氨酸激酶曾进行了广泛的研究。特异性配体结合于细胞内受体蛋白质酪氨酸激酶的区域，被认为能诱导其自身酪氨酸残基受体的二聚和磷酸化作用。受体中个别磷酸化酪氨酸残基的细胞区域，可作为特异性的结合位点与细胞信号分子宿主作用，因此激活了各种信号传导途径(UllrichA和SchlessingerJ，1990，Cell61203-212)。可将细胞内，细胞质，非受体蛋白质酪氨酸激酶，广义地定义为不含疏水跨膜区的蛋白质酪氨酸激酶。在这一广义分类中，可将已知的细胞蛋白质酪氨酸激酶分成11个明显的形态，包括SRC家族(MartinezR等，1987，Science237411-414；SukegawaJ等，1987，MolCellBiol741-47；YamanishiY等，1987，7237-243；MarthJ.D.等，1985，Cell43393-404；DymeckiSM等，1990，Science247332-336)，FES家族(参见RuebrockAJM等，1985，EMBOJ，42897-2903；HaoQ等，1989，MolCellBjol91587-1593)，ABL家族(ShtivelmanE等，1986，Cell47277-284；KruhGD等，1986，Science2341545-1548)，Zap70家族和JAK家族。虽然它们的总分子结构有别，但这些细胞蛋白酪氨酸激酶多形态家族中的每一个成员，除具有共同的催化激酶区域外，还具有共同的非催化区。这些非催化区是SH2区域(SRC同源区2；SadowskiI等，MolCellBiol64396-4408；KochCA等，1991，Science252668-674)和SH3区域(MayerBJ等，1988，Nature332269-272)。据认为该非催化区域在调节信号传导时的蛋白-蛋白相互作用方面具有重要作用(PawsonT和GishG，1992，Cell71359-362)。与受体型蛋白酪氨酸激酶的代谢作用相比较，对细胞质蛋白酪氨酸激酶的代谢作用了解得不多，在解释该类分子涉及的某些过程方面已经取得重要进展。例如，已经表明src家族中lck和fyn，能与CD4/CD8和T细胞受体复合物，这样就意味着T细胞的激活作用(VeilletteA和DavidsonD，1992，TIG861-66)，某些细胞内蛋白酪氨酸激酶同细胞循环的某期相连(MorganDO等，1989，Cell57775-786；KipreosET等，1990，Science248217-220；Weaver等，1991，MolCellBiol114415-4422)，以及细胞蛋白质酪氨酸激酶可能参与神经元的生长(ManessD，1992，DevNeurosci14257-270)。通过突变或过度表达而致的激酶活性的失调，是一个进行细胞转化的一个很好确立的机理(Hunter等，1985，Supra；Ullrich等，Supra)。2.3接合蛋白接合蛋白是细胞内蛋白，具有对信号传导途径具关键作用的特征性保守的肽区域(如下所述的SH2和/或SH3区)。该接合蛋白用来将蛋白酪氨酸激酶，特别是受体型蛋白酪氨酸激酶，与诸如RAS信号途径的下游分子内信号途径相连结。据认为该接合蛋白可能涉及将信号传导蛋白定位于血浆膜或亚细胞单元上的正确位置上，也可能涉及调节细胞内蛋白质的运动。这种接合蛋白是在受体型蛋白质酪氨酸激酶的蛋白质底物之中，具有共同的一个或二个约100个氨基酸长基本特点的重复单位。由于该基本特点最初发现于类似于c-Src细胞内非受体酪氨酸激酶之中，它称为Src同源2(SH2)区。但是含SH2的多肽，在结构和功能上可能与另一含SH2多肽有区别(见KochCA等，1991，Science252668-674)。SH2区能直接识别磷酸化酪氨酸残基。对于识别周围有磷酸化酪氨酸残基的氨基酸，该肽区还具有独立的位点。当受体蛋白酪氨酸激酶与一个分子内的配体相结合时，能诱导受体的二聚作用，这会反过来致使二聚的激酶进行分子间自动磷酸化。(参见SchlessingerJ和UllrichA，1992，Neuron9383-391)。这样，受体磷酸化生成了能键合SH2的位点，一个接合蛋白就可能与之结合。除SH2肽区外，许多接合蛋白在信号传导时涉及第二个含50-75个氨基酸残基的保守基本单元，即SH3区(SchlessingerJ和UllrichA，1992，Neuron9383-391；PawsonT和GishGD，1992，Cell72359-362；MayerBJ和BaltinoreD，1993，Nature352272-275)。关于SH3区的生物学作用，要比SH2区的了解少得多。目前的观点认为SH3区的功能，部分作为与蛋白键合的区，其作用是将从细胞表面的传递信号连接至下游作用基因，如ras基因(PawsonT和SchlessingerJ，1993，CurrentBiology，3434-442)。2.4G-蛋白与信号传导可与鸟嘌呤核苷酸键合的蛋白(即G蛋白；SimonMI等，1991，Science252802-808；KaziroY等，1991，AnnRevBiochem60349-400)，如Ras(参见综述LowyDR和WillumsenBM，1993，AnnRevBiochem62851-891)，在从受体酪氨酸激酶传递促有丝分裂的信号中，发挥重要的作用。就Ras举例，通过配体键合使受体酪氨酸激酶活化，从而导致了活性GTP结合形式Ras分子的积聚(见GibbsJ.B.等，1990，JBiolChem26520437-2044；SatohT.等，1990，ProcNatlAcadSciUSA875993-5997；LiB-Q等，1992，Science2561456-1459；BudayL.和DownwardJ.，1993MolCellBiol131903-1910；MedemaR.H.等，1993，MolCellBiol13115-162)。Ras的激活也要求病毒致癌酪氨酸激酶的转化(见SmithM.R.等，1986，Nature320540-43)。Ras活性受到激活GTP酶的蛋白(GAPs)和鸟嘌呤核苷酸交换因子反作用的调节，同时GAPs促使GTP水解Ras固有的速率变慢，而交换因子促进Ras的GDP与GTP交换的基速率。这样GAPs就作为Ras功能的负调节子，而交换因子则作为Ras的活化子。最近，发现了活化的受体酪氨酸激酶与Ras之间的一种直接的联系，并发现哺乳类GRB-2蛋白，一种由一个SH2区和二个SH3区所组成的(见LowensteinE.J.等，1992，Cell70431-442)分子量为26千道尔顿的蛋白质，能直接将受体酪氨酸激酶，与哺乳类和果蝇的Ras交换子Sos直接相偶联。(参见BudayL和DownwardJ，1993，Cell73611-620；EganS.E.等，1993，Nature36345-51；LiN等，1993，Nature36385-87；GaleN.W.等，1993，Nature36388-92；Rozakis-Adcock等，1993，Nature36383-85；ChardinP等，1993，Science2601338-1343；OliverJ.P.等，Cell73179-191；SimonM.A.等，1993，Cell73169-177)。GRB-2SH2区与受体酪氨酸激酶之中特异性酪氨酸磷酸化的序列相结合，而GRB-2SH3区则与Sos交换因子中存在的富含脯氨酸序列相结合。因此，结合于受体激酶的GRB-2，就可令Sos补充至有Ras存在的血浆膜上(SchlessingerJ，1993，TIBS18273-275)。在其它蛋白质中，已经表明Grb2与CSF-1受体(VanderGeer和Hunter，1993，EMBOJ，12(13)5161-5172)，PDGF受体(Li等，1994，MCB14(1)509-517)，EGF-R(Matuoka等，1993，EMBOJ，12(9)3467-3475；Lowenstein等，1992，Cell，70431-442)和Fak(Schlaepfer，1994，Wature372786-791)相关。2.5细胞增殖疾病生长因子和其受体对正常生长是关键的，但它们又能作为致癌基因，而致使细胞转化、致癌和产生细胞增殖疾病，包括癌症。正常细胞蛋白如蛋白酪氨酸激酶，其癌变可能的激活，可能是通过改变蛋白质相应的酶活性，它们与其它细胞成分的不适当键合，或两者同时存在而发生的。以Philadelphia正性染色体人类白血病为例，已知BCR-ABL致癌蛋白参与该白血病的病理过程之中。BCR-ABL显示出使酪氨酸激酶失调的活性。近来已经证实(PendergastAM等，1993，Cell75175-185)BCR-ABL能与含SH2/SH3区的GRB-2接合蛋白相键合。进一步证实，BCR-ABL/GRB-2的键合，是受GRB-2SH2区和BCR-ABL蛋白质酪氨酸磷酸化区直接相互作用而调导的，这种相互作用要求激活Ras信号途径。这样，沿着一种信号传导途径会发生多个事件，而该途径看来会最终出现细胞增殖疾病，例如上述的白血病。一个治疗癌变即细胞增殖疾病的方法是，通过干扰一个或多个这些不可少的事件，以试图使能出现这些疾病的反常信号传导事件发生“短路”。通过定向或直接抑制涉及细胞增殖疾病的酶的活性，也可能会干扰了对反常激酶活性的改良。现已提出某些化合物可能具有这种抗酪氨酸激酶活性。见Levitzki和Gazit1995，Science2671782-1788，在该文中提出了某些喹唑啉衍生物能直接抑制受体酪氨酸激酶的酶活性。在信号传导事件涉及一种接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶相互作用的情况下，将该相互作用抑制，可能会使细胞增殖疾病症状得到改善。利用细胞内信号失能蛋白的表达，已证明该方法的可用性。例如，细胞表达出一种Bcr-Ab1的突变形式，它缺乏与GrB2SH2区键合所必需的酪氨酸残基，这样信号的失能不再显出一种转形的共同表型(RER)(见Pendergast等，supra)。但到目前为止，还没有识别出接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶的这种抑制剂。3.发明概述本发明涉及抑制接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶蛋白相互作用的方法和组合物，特别是这种相互作用与细胞增殖疾病相关联，涉及能与含SH2和/或SH3成员的接合蛋白家族相配位的一种蛋白质酪氨酸激酶。尤其是，本发明涉及具体的有机化合物，以及利用这些化合物的方法。在这里“蛋白质酪氨酸激酶”将缩写为“PTK”。应当懂得，除非另外指明，“PTK”可代表一种转膜受体型蛋白质酪氨酸激酶，也可代表细胞质蛋白酪氨酸激酶。本发明中的化合物，能抑制PTK/接合蛋白相互作用，特别是PTK/接合蛋白相互作用中，PTK例如是表皮生长因子受体(EGF-R)蛋白酪氨酸激酶分子，源于血小板的生长因子受体(PDGF-R)蛋白酪氨酸激酶分子，或类胰岛素生长因子受体酪氨酸激酶分子(IGF-IR)。本发明中的化合物由下列通式(I)及其可作为药用的盐所描述ID2，5-双吲哚基-3-基-1，4-苯醌其中R1和R2分别独立地代表氢原子，乙酸酯或芳基、烷基芳基以及高级烷酸酯；R3至R14分别独立地代表氢、烷基、烯烃基、炔烃基、羟基、羟烷基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基和巯基，如需要它们也可以由合适取代基所取代。本发明范围内的特别的化合物，由下面的通式(II)所述。通式中R1和R2列于通式后的表I之中。在实例中可以发现这些化合物制备与分离的示例。表1例R1R21H2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)2乙酰基2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)3乙酰基2-(3-甲基-n-丁基)4H2-(3-甲基-n-丁基)5H5-溴6H2-烯丙基7H2-正丙基8H2-胺基羰基9乙酰基2-胺基羰基10苯甲酰基2-烯丙基11H2-氰基12H4-甲氧羰基13H5，7-二甲氧基14H4，7-二甲氧基15H5-硝基16H4-(4-氯苯甲酰胺)17H4-(4-氯苯基)18H2-(4-氟苯基)19H4，6-二甲氧基20H5-羟基-6-甲氧基21H4-氰基22H5-(4-三氟甲基苯基-胺基羰基)23H2-(4-三氟甲基苯基-胺基羰基)24H2-乙基25H5-溴-6-硝基26甲氧基2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)27甲氧基2-(3-甲基-n-丁基)本发明范围内特别化合物，也可由下列通式(III)所描述。式中R1至R12列于式后的表II之中。这些化合物的制备与分离示例，可在实例中找到。表II</tables>注1除非另有指定，一般R3-R10等于H这里所用“烷基”一词系指直链或支链饱和脂肪基团，其具有1至20个碳原子，如甲基、乙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、正辛基和正癸基；“烯烃基”和“炔烃基”系指直链或支链饱和脂肪基团，其具有2至10个碳原子，并分别带有不饱和的双键或叁键，如乙烯基、烯丙基、炔丙基、1-甲基乙烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-2-炔基、1-甲基丁-2-烯基、戊-1-烯基、戊-3-烯基、3-甲基丁-1-炔基、1，1-二甲基烯丙基、2-己烯基和1-甲基-1-乙基烯丙基；“烷基芳基”系指前面提到的烷基被一个苯基所取代，如苄基、苯乙基、苯丙基、1-苄基己基、苯丁基和2-苄基丙基；这里所用的“芳基”包括一个单环或双环，其中至少一个环是芳香环，包括芳环或杂环；“羟基烷基”系指前面所提到的烷基被一个单羟基所取代，如2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基、1-羟基丁基和6-羟基己基。这里所用的“取代的”一词，系指该基团带有一个或多个取代基，包括卤素、羟基、氰基、烷基、芳基、烯烃基、炔烃基、胺基、硝基、巯基、羧基和其它本领域人员所熟知的取代基团，但不限于此。本发明优选的化合物，包括如下化合物1化合物2以及其可作为药用的盐。此外，本发明包括一种含有本发明中一个化合物的药物组合物，以及动物特别是人中使用本发明中的一个化合物或药物组合物的方法，以改善涉及蛋白酪氨酸激酶/接合蛋白相互作用而致细胞增殖疾病的症状。本发明部分是基于发现该公开的化合物，它不显示出对于蛋白质酪氨酸激酶的酶活性的抑制作用，但它能对含SH2肽与酪氨酸磷酸化EGF受体的键合起抑制作用。在下面第6、7和8部分中的例子的数据，说明了该发现。在下面第5部分的例子描述了本发明化合物的生产方法。本发明系首次描述了已经被发现的化合物，它能直接抑制接合蛋白和蛋白酪氨酸激酶分子的相互作用。4.本发明的详细说明下面描述的是，抑制接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶蛋白相互作用，特别是这些相互作用与细胞增殖疾病相关联的方法和组合物。下面特别描述了特殊的有机化合物，合成这些化合物的方法，以及使用这些化合物的技术。4.1化合物本发明化合物由如下式(IV)所示以及其可作为药用的盐其中R1和R2分别独立地代表H、乙酸酯或芳基、烷基芳基和高级烷酸酯；R3至R14分别独立地代表H、烷基、烯基、炔基、羟基烷基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基和巯基，它们可被合适的取代基所取代。例如，本发明化合物中的烷基，可以被一个或多个羧基或芳基所取代。本发明化合物中的烯烃基，可以被一个或多个羧基所取代。在本发明范围内的特定的化合物，可在前面表I和表II中发现。制备示例或分离这些化合物，可在实例中发现。实施方案一，本发明化合物及其药用盐由下面的通式(III)所描述其中R1和R2分别独立地代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯，其中R1和R2至少之一不是氢；R3至R12分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基或2-甲基丁-2-烯-4-基；其中至少R11和R12之一是2-甲基丁-2-烯-4-基。R1至R12基团可按需要，被取代或不被取代。另一实施方案是，本发明化合物以及其可作为药用的盐由上面通式(III)所描述，其中R1和R2均代表H；R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基或2-甲基丁-2-烯-4-基；以及R11和R12分别独立地代表H或2-甲基丁-2-烯-4-基，其中至少R11和R12之一为2-甲基丁-2-烯-4-基；其中至少R3至R10之一不为H。另一实施方案是，本发明化合物及其可作为药用的盐由上面通式(III)所描述，其中R1和R2分别独立地代表芳基、烷基芳基和高级烷酸酯；以及R3至R12分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、氟、氯、碘、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基或巯基。另一实施方案是，本发明中化合物及其可作为药用的盐由上述通式(III)所描述，其中R1、R2、R11和R12代表H；以及R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、烷氧基、羟基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺基、羰酰胺基、羧基、砜基、磺酰胺、胺基或巯基，其中至少R3至R10之一不为H；(a)当R4至R10每个都为H时，R3不能为2-甲基丁-2-烯-4-基或2-羟基-2-甲基丁-4-基；(b)当R4至R6和R8至R10每个都为H时，R3和R7不能同时为2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R3至R4，R6至R8和R10每个都为H时，R5和R9不能同时为2-甲基丁-2-烯-4-基或3-甲基-正丁基；(d)当R3、R5至R7、R9至R10代表H时，R4和R8不能同时为2-甲基丁-2-烯-4-基或2-甲基丁-1，4-二烯-4-基，以及R4和R8不能为2-甲基丁-2-烯-4-基和2-甲基丁-1，4-二烯-4-基。本发明还包括上述通式(III)代表的化合物，以及可作为药用的盐，其中R3至R5和R7至R9代表H，并且R6和R10之一或两者均代表2-甲基丁-2-烯-4-基。另一实施方案是，本发明化合物由上述通式(III)及其可作为药用的盐所描述，其中至少R1和R2之一代表乙酰基；R11和R12代表H；以及R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺基、羰酰胺基、羧基、砜基、磺酰胺基、胺基和巯基，其中(a)当R1和R2均为乙酰基时，或当R1和R2之一是乙酰基，R3至R4，R6至R8以及R10至R12代表H时，R5和R9不能同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(b)当R1和R2均为乙酰基，R4至R6和R8至R10代表H，R3和R7不能同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R1和R2均为乙酰基，R3、R5至R7以及R9至R10代表H，R4和R8不能同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。另一实施方案是，本发明化合物及其可作为药用的盐由上述通式(III)所描述，其中至少R1和R2之一是低级烷基；R11和R12代表H；以及R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺羰酰基、羧基、砜基、磺酰胺、胺基和巯基，其中(a)当R1和R2两者均为甲基时，至少R3至R10之一必须是不等于H的基团；(b)当R1和R2两者均为甲基时，R4至R10为H，R3不能代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R1和R2两者都为甲基时，R4至R6和R8至R10代表H，R3和R7不能同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。(d)当R1和R2两者都为甲基时，R3至R4、R6至R8和R10代表H，R5和R9不能同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。本发明也还包括上述通式(III)所示化合物，及其可作为药用的盐。其中R4代表2-甲基丁-2-烯-4-基，R3和R5至R10代表H，或者R5代表2-甲基丁-2-烯-4-基，R3至R4，R6至R10代表H；或者R6代表2-甲基丁-2-烯-4-基，R3至R5，R7至R10代表H。另一实施方案是，本发明中的化合物及其可作为药用的盐由上述通式(III)所描述，其中R1和R2分别独立代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羧酸酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基、4-甲基苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基；以及R11和R12代表由下面所选基团氢、甲基、乙基、丙基、丁基、芳基、烷基芳基、烷基羧基、烯烃基羧基、丁-1-烯-4-基、2-甲基丁-1-烯-4-基、4-甲基-n-戊基、2-苯基乙基、2-甲基戊-2-烯-4-基，以及4-羧基-n-丁基，其中至少R11和R12之一必须代表除氢之外的基团。另一实施方案是，本发明化合物及其可作为药用的盐由上述通式(III)所描述，其中R1和R2分别独立地代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立地代表H、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺基、羧酸酰胺、羧基、砜基、磺酰胺基、胺基、巯基、4-甲基苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基；以及R11和R12两者均代表3-甲基-n-丁基。再一实施方案是，本发明化合物及其可作为药用的盐由上述通式(III)所描述，其中R1和R2分别独立地代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立地代表氢、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羧酸酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基、4-甲基苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基，其中至少R3至R10之一不能代表氢；以及R11和R12分别独立地代表氢或3-甲基-n-丁基。化合物1化合物2本发明包括上面描述的化合物及其可作为药用的盐。本发明的这些化合物可按本文描述的方法进行合成或分离。本发明中的化合物，可按照标准的有机化学技术，利用易于获得的原料进行合成。或者，可按下面5.2节所述方法，进行分离获取。4.2化合物的制备4.2.1天然产物分离本例使用真菌培养(PenLabsInc.#592)方法，下面是发酵条件酵母麦芽提取物，加上微量元素，22℃。种子基由甘露糖醇60.0g；大豆蛋白12.5g，柠檬酸2.5g，酵母提取物0.5g所组成，用水稀至1升。在置于反应釜之前，种子基的pH调至7.0。每250ml烧瓶中悬浮30ml种子基(28℃，6天)，然后再用1ml孢子/菌丝均浆悬浮液接种(2天)。孢子储液中的肉汤培养基维持于-80℃冰冷。将发酵混合物(菌丝和肉汤)均浆，并用干酪包布吸滤。滤液以0.5v/v乙酸乙酯提取三次，合并乙酸乙酯层，经旋转蒸发除去溶剂。将菌丝用0.4v/v乙酸乙酯提取二次。合并乙酸乙酯层，以旋转蒸发除去溶剂。将均含有星状醌类物质的油状残留物合并，并于真空泵干燥过夜。将上述获得的粗品，经PC公司含三重旋式柱的高速逆流层析仪(HSCC)进行分馏。将1∶3∶3∶3v/v/v/v正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混合，并处理过夜。取下层泵入HSCC柱子中，作为固定相，上层作为流动相。二小时后，将上下层倒过来使用。四小时后HSCC分离完全。粗代谢物8至12分钟流出。将活性成分合并，并减压蒸干。用下面的条件，将合并的HSCC组成份(8-12)进行半制备HPLC分离(WatersHPLC系统，Waters996光导(photodioarray)检测器，用Millennium软件)二根半制备C18-软柱(每根25×100mm，NovaPak，6μ)，流速10mL/min；将合并的HSCC馏分8-12部分共120mg，溶于6mLDMSO中；每次注射250μL；在270nm处PDA检测；于30分钟内进行线性梯度70％H2O/30％CH3CN至100％CH3CN；然后再用100％CH3CN，洗脱6分钟；活性物质于19和24分钟流出。将十次实验收集得到的活性成分，合并后减压蒸干，得到17mg星状醌C-3(化合物I)和3mg前星状醌C-3(化合物II)。用PESciexLC-MS型APIIII(离子喷雾型)仪测定质谱，用高分辨(HR-FAB)测精确分子质量。化合物I的质谱分析，得分子离子峰为507(M+H)+，(分子量506)。分子式C32H31N2O4(M++H)507.2289；测定值为507.2291。用BruckerDRX-500型仪在500MHz记录化合物I(溶于CDCl3中)的1HNMR谱。用内标TMS为0ppm，溶剂(CDCl3)为7.26ppm，这些相对值记录化学位移。化合物I8.18(s，2H)，8.05(s，2H)，7.35-7.10(m，8H)，5.40(m，2H)，3.45(m，4H)，1.81(s，6H)，和1.75ppm(s，6H)。化合物I的13CNMR谱的测定，是在BruckerDRX-500仪在125MHz在溶剂DMSO-d6中进行。按相对于内标TMS为0，溶剂(DMSO-d6)峰39.5ppm，测定化学位移，化合物I138.8，136.6，136.3，128.8，128.2，127.3，122.3，121.8，121.0，120.3，119.5，119.3，112.3，111.8，111.6，105.2，102.2，27.3，26.4和18.5ppm。化合物I的熔点为150-154℃。化合物II的质谱分析，得分子离子峰为439(M+H)+(分子量为438)。化合物II的1HNMR谱，系于DMSO-d6溶剂中，BruckerDRX-500仪在500MHz上进行测定。以相对于内标TMS为0ppm，溶剂峰2.49ppm(DMSO-d6)，测定化学位移11.35(s，1H)，10.96(s，1H)，10.62(s，1H)，7.48(dJ＝1Hz，1H)，7.39(d，J＝10.0Hz，1H)，7.29(d，J＝10.0Hz，1H)，7.14(d，J＝10Hz，1H)，7.07(t，J＝10.0Hz，1H)，6.99(t，J＝10.0Hz，1H)，6.93(t，J＝10.0Hz，1H)，6.88(t，J＝10.0Hz，1H)，5.26(m，1H)，3.30(m，2H)，1.64(bs，3H)和1.61ppm(bs，3H)。化合物II的13CNMR谱，记载于125MHzBruckerDRX-500仪，溶剂CDCl3。相对于内标TMS为0ppm，溶剂(CDCl3)为77.0ppm，测定其化学位移138.4，138.3，135.7，135.2，127.7，121.6，120.0，119.8，119.6，110.7，110.6，100.5，26.8，25.8和18.0ppm。4.2.2化合物的合成例12，5-二羟基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌100mg2，5-二乙酰氧基-3，6-二溴-1，4-苯醌或其它易于从市售2，5-二溴-3，6-二羟基-1，4-苯醌制备的合适的保护苯醌，如3，6-二溴-2，5-双三甲硅氧基-1，4-苯醌；3，6-二溴-2，5-双-(叔丁基二甲基硅氧基)-1，4-苯醌；2，5-二苄氧基-3，6-二溴-1，4-苯醌；3，6-二溴-2，5-二异丁氧基-1，4-苯醌；2，5-二苄氧基-3，6-二溴-1，4-苯醌或2，5-二乙烯氧基羧氧基-3，6-二溴-1，4-苯醌，和用费歇尔吲哚合成法制备的180mg3-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚混合，溶于10mL无水二甲基甲酰胺或吡啶，或二甲基亚砜之中，用粉末状碳酸钾处理，于100℃加热24小时。将混合物冷后，分配于乙酸乙酯和水中，然后将乙酸乙酯层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将粗品以中压液相色谱纯化，流动相为二氯甲烷和甲醇混合溶剂，得25mg2，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌。然后在甲醇中用1N氢氧化钠水溶液水解2，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌。过滤后将上面的混合物酸化，得粗品。用乙醇和水重结晶得标题化合物。其它的前面提到的保护基，可通过常规的脱保护法除去，如稀酸、氟化钾或钯(0)配合物或钯碳用氢气反应，或由Greene和Wuts介绍的其它方法(Protectivegroupsinorganicsynthesis，JohnWileyandSon，1991)。另一方法是，在类似的条件下，将2，3，5，6-四溴-1，4-苯醌，于100℃，在二甲基甲酰胺或二甲亚砜中，在碳酸钾和氧化铝的存在下，与过量的吲哚反应，生成取代的2，5-二溴-3，6-(3-吲哚基)1，4-苯醌，它与碱，如氢氧化钠，反应得取代的2，5-二羟基-3，6-(3-吲哚)-1，4-苯醌。(HoerherJ；Schwenner，E.；Franck，B.；LiebigsAnn.Chem，1986，101765-1771)。例22，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌按例1方法制备2，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌。例32，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(3-甲基-n-丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌在甲醇中，1个大气压氢气，5％钯碳下，使2，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌氢化，生成标题化合物。例42，5-二羟基-3，6-双-〔2-(3-甲基-n-丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌按例1所述方法，将2，5-二乙酰氧基-3，6-双-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌，经碱性水解，得标题化合物。按例1至4所述的相似条件，以2，5-二溴-3，6-二羟基-1，4-苯醌，或2，3，5，6-四溴苯醌为原料，制备如下化合物例53，6-二-〔5-(溴)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例63，6-二-〔2-(乙烯基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例72，5-二羟基-3，6-二-〔2-(正丙基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例83，6-二-〔2-(胺基羰基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例92，5-二乙酰基-3，6-二-〔2-(胺基羰基)引哚-3-基〕-1，4-苯醌例103，6-二-〔2-乙烯吲哚-3-基〕-2，5-二苯甲酰氧基-1，4-苯醌例112，5-二羟基-3，6-二-〔2-氰基吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例122，5-二羟基-3，6-二-〔4-(甲氧羰基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例132，5-二羟基-3，6-二-〔5，7-(二甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例142，5-二羟基-3，6-二-〔4，7-(二甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例152，5-二羟基-3，6-二-〔5-(硝基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例163，6-二-〔4-(4-氯苯甲酰胺基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例173，6-二-〔2-(4-氯苯基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例182，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-氟苯基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例192，5-二羟基-3，6-二-〔4，6-(二甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例202，5-二羟基-3，6-二-〔2-(5-羟基-6-甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例212，5-二羟基-3，6-二-〔4-(氰基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例222，5-二羟基-3，6-二-〔5-(4-三氟甲基苯胺基羰基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例232，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-三氟甲基苯基胺基羰基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例242，5-二羟基-3，6-二-〔2-(乙基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌例253，6-二-〔2-(5-溴-6-硝基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌例262，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌将例1中化合物，在二甲基甲酰胺之中用碘甲烷和碳酸钾进行甲基化，再经纯化，得标题化合物。该化合物也可在粉末状碳酸钾存在下，在甲醇中，通过加热2，5-二溴-3，6-二-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌来制备。例272，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌按例3所述条件，将例26化合物经氢化，制备标题化合物。例282，5-二羟基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备取二甲基甲酰胺(10ml)，加入至一玻璃管中，内含2-(3-甲基正丁基)吲哚(400mg)，四溴代对苯醌(431mg)和碳酸钾(703mg)，加入磁搅拌子。将混合物于室温搅拌40小时。用1N盐酸(100ml)稀释，将粗品用乙酸乙酯(200ml)提取。将有机层用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，通过一短的闪式硅胶过滤，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱。减压除去溶剂，残留物以闪式色谱(15％乙酸乙酯/己烷)纯化，得兰色结晶固状的2，5-二溴-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌(40mg，7％)。将2N氢氧化钠(0.251ml)醇溶液，加入至2，5-二溴-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌(40mg)的甲醇(1.5ml)搅拌液之中。于室温搅拌24小时，再用水(50ml)稀释。将产物用乙酸乙酯(100ml)提取，用盐水(50ml)洗涤，用硫酸钠干燥。减压除溶剂，得黄色晶体2，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌(30mg，90％)。将1N氢氧化钾水溶液(1ml)，加入至2，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌(9mg)的乙醇(2ml)搅拌液之中，于85℃加热该混合物3.5小时，然后用1N盐酸(25ml)稀释。将产物用乙酸乙酯(50ml)提取，用盐水(25ml)洗涤，再用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得红棕色晶体2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌(8mg)。28a)2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚的制备在通氮气下，将1.6M正丁基锂在己烷(14.3ml)溶液，用注射器慢慢滴加至含2-甲基吲哚(1g)在乙醚(76ml)的搅拌液之中。然后加入叔丁醇钾(1.711g)，得一棕黄色混合物。室温通氮搅拌50分钟，将混合物冷至-78℃，注射器滴加3-溴代-2-甲基丙烯(1.54ml)，得红黄色溶液。将反应混合物于-78℃搅拌2小时，再加水(10ml)结束反应。加热至室温后，再加入水(150ml)和1N盐酸(1ml)以中和反应混合物。用乙酸乙酯(250ml)提取混合物，再用盐水(100ml)洗涤有机层，再用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，用闪式色谱(4％乙酸乙酯/己烷)纯化粗品残留物，得蜡状黄色固体2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚(664mg，47％)。28b)2-(3-甲基-正丁基)吲哚的制备于三口园底烧瓶中在通氮下，放置5％钯碳催化剂(771mg)。取2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚(671mg)在乙醇(36ml)的混合液，加入到烧瓶之中，抽空后再压入氢气两次。将混合物在氢气中(1个大气压)剧烈搅拌2小时，再通过硅藻土过滤。减压除去溶剂，将粗品用闪式色谱(3％乙酸乙酯/己烷)纯化，得黄色结晶状固体2-(3-甲基正丁基)吲哚(400mg，59％)。例292，5-二羟基-3，6-二-〔2-(甲基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备参照例28的方法，以2-甲基吲哚为原料制备。例302，5-二羟基-3，6-二-〔2-(乙基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备参照例28方法，用2-乙基吲哚为原料制备。30a)2-乙基吲哚的制备参照例28a)，用碘甲烷作为烷化试剂制备。例313，6-二-〔2-丁基吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28方法，用2-丁基吲哚为起始吲哚原料制备。31a)2-(1-丁烯-4-基)吲哚的制备参照28a)，用溴乙烯作为烷化剂制备。31b)2-丁基吲哚的制备参照28b)，用2-(1-丁烯-4-基)吲哚为起始原料制备。例323，6-二-〔2-(1-丁烯-4-基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用2-(1-丁烯-4-基)吲哚为原料制备。例332，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-甲基正戊基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌的制备参照例28，用2-(4-甲基正戊基)吲哚为原料制备。33a)2-(2-甲基-2-戊烯-5-基)吲哚的制备参照28a)，用4-溴-2-甲基-2-丁烯作为烷化剂制备33b)2-(4-甲基正戊基)吲哚的制备参照28b)，用2-(2-甲基-2-戊烯-5-基)吲哚作为起始原料制备。例342，5-二羟基-3，6-二-〔2-(2-苯乙基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备参照例28，用2-(2-苯乙基)吲哚为原料制备。34a)2-(2-苯乙基)吲哚的制备参照例28a)，用溴苄作为烷化剂制备。例352，5-二羟基-6-(吲哚-3-基)-3-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备该化合物的合成，系在二甲基甲酰胺溶液中，在碳酸钾的存在下，用2个当量的四溴苯醌，与2-(3-甲基正丁基)引哚反应制备，再按例28方法进行处理与纯化。再按上面的相同条件，将所得的单吲哚加成物，与2个当量的吲哚反应，得双吲哚产物。例363，6-二-(5-羧基-2-乙基吲哚-3-基)-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用5-羧基-2-乙基吲哚为起始吲哚原料制备。36a)5-羧基-2-乙基吲哚的制备该物的合成，系以5-氯-2-甲基吲哚为原料，这一原料可从甲基吲哚制备(见例28a)。所得的氯代吲哚，经转化成格式试剂后，再暴露于二氧化碳中即完成合成制备。例373，6-二-〔5-羧基-2-(正丙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的合成参照例28，用5-羧基-2-丙基吲哚为原料制备。37a)5-羧基-2-丙基吲哚的制备参照36a)，用碘乙烷为烷化剂制备。例383，6-二-〔5-羧基-2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用5-羧基-2-(3-甲基正丁基)吲哚为起始原料制备。38a)5-羧基-2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚的制备参照36a)，用3-溴-2-甲基丙烯为原料制备。38b)5-羧基-2-(3-甲基正丁基)吲哚的制备参照28b)，用5-羧基-2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚为原料制备。例393，6-二-〔2-(4-羧基-正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用2-(4羧基正丁基)吲哚为原料。39a)2-(4-羧基-3-丁烯-1-基)吲哚的制备参照28a)，用4-溴-2-丁烯酸为烷化剂制备。39b)2-(4-羧基-正丁基)吲哚的制备参照28b)，用2-(4-羧基-3-丁烯-1-基)吲哚为原料制备。例403-〔5-羧基-2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-6-(吲哚-3-基)-1，4-苯醌的制备参照例35，用5-羧基-2-(3-甲基正丁基)吲哚作为第一步原料合成。例413，6-二-(5-胺基-2-乙基吲哚-3-基)-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用5-胺基-2-乙基吲哚为原料制备。41a)5-胺基-2-乙基吲哚的制备该合成参照引文Yokoyama；Tanaka；Yanane；Kurita；ChemLett；71991；1125-1128中类似的标准硝化方法，用亚硝酸钠和浓硫酸，对α-乙基吲哚进行硝化制备。用类似于28b)的催化氢化方法，将所得5-硝基-2-乙基引哚还原，得所要合成的胺基化合物。例423，6-二-〔5-胺基-2-(正丙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用5-胺基-2-(正丙基)吲哚作为原料制备。42a)5-胺基-2-(正丙基)吲哚的制备参照41a)，用2-正丙基吲哚制备。例433，6-二-〔5-胺基-2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用5-胺基-2-(3-甲基正丁基)引哚为起始吲哚原料制备。43a)5-胺基-2-(3-甲基正丁基)吲哚的制备参照41a)，用2-(3-甲基正丁基)吲哚制备。例442，5-二乙酰氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备在吡啶存在下，用乙酐处理2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌进行合成制备。例453，6-二-〔2-乙基-5-(4-甲苯磺酰胺基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌的制备参照例28，用2-乙基-5-(4-甲苯磺酰胺)吲哚为起始原料制备。45a)2-乙基-5-(4-甲苯磺酰胺)吲哚的制备在三乙胺的存在下，用对甲苯磺酰氯处理5-胺基-2-乙基吲哚，制备上述化合物。例462，5-二羟基-3，6-二-〔5-(4-甲磺酰胺)-2-(正丙基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备46a)5-(4-甲苯磺酰胺)-2-(正丙基)吲哚的制备参照45a)，用5-胺基-2-丙基吲哚合成。例472，5-二羟基-3，6-二-〔2-(3-甲基正丁基)-5-(4-甲苯磺酰胺)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的合成参照例28，用2-(3-甲基正丁基)-5-(4-甲苯磺酰胺)吲哚作为起始原料合成。47a)2-(3-甲基-正丁基)-5-(4-甲苯磺酰胺)吲哚的制备参照45a)，用5-胺基-2-(3-甲基正丁基)吲哚进行合成。例482，5-二羟基-3，6-二-〔2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌的制备参照例28，用2-(2-甲基-1-丁烯-4-基)吲哚作为起始吲哚原料进行合成。4.3蛋白酪氨酸激酶/接合蛋白配合物如下面所述，PTK/接合蛋白配合物，是由至少PTK家族蛋白中的成员之一和接合家族蛋白中的成员之一所组成，该配合物可被本发明中的方法和组合物所分解。在标准的生理条件下，该配合物的组分能与一个或多个其它的PTK/接合蛋白配合物组分，形成稳定的，非共价结合的粘附体。更好的是，本发明化合物能抑制PTK/接合蛋白配合物，其中PTK成分是一种表皮生长因子受体(EGF-R)蛋白质酪氨酸激酶分子，或是一种源于血小板的生长因子受体(PDGF-R)蛋白酪氨酸激酶分子，或是一种类胰岛素生长因子受体酪氨酸激酶分子(IGF-1R)。细胞内PTK/接合蛋白配合物胞质PTK成分，可包括如Src家族成员，这些分子是Src，yes，fgr，fyn，Lyn，hck，lck和blk；Fes家族成员，如fes和fer；Ab1家族成员，如ab1和arg；以及Jak家族成员，如jak1和jak2。转膜PTK/接合蛋白配合物的受体PTK成分，包括如FGF受体成员，Sevenless/ROS，胰岛素受体，PDGF受体，以及生长因子受体家族中EGF受体。PTK/接合蛋白配合物中接合蛋白的成分，包括一个或多个SH2和/或一个或多个SH3非催化区。在关于PTK成分中已描述过的SH2和SH3区，这些区是接合蛋白的一部分。作为PTK/接合蛋白配合物成分的接合蛋白，包括如p85，c-Crk，SHC，Nck，ISGF3α，胍三磷酸酶活化蛋白(GAP)，以及蛋白GRB亚族成员，如GRB1，GRB-2，GRB-3，GRB-4，GRB-7和GRB-10。4.4与PTK/接合蛋白配合物有关的细胞增殖疾病的治疗本发明中的化合物和/或药用组合物(在下面4.4.2节将详述)，可用来治疗细胞增殖疾病，例如癌症疾病，它涉及能与含SH2和/或SH3家族成员的接合蛋白配合的一种PTK。本发明中的化合物可更好地用于治疗涉及PTK/接合蛋白配合物的细胞增殖疾病的治疗，其中PTK成分为EGF-R，PDGF-R，MCT或IGF-1R。能用本发明化合物治疗的癌症疾病，是与BCR-ABL有关联的癌(如慢性骨髓和急性淋巴细胞白血病)、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、黑瘤、人卵巢肿瘤、人乳腺癌(特别是与HER-2/GRB-7有关的人乳腺癌)，以及人前列腺癌。在下面4.4.1节描述了测定了化合物分解PTK/接合蛋白配合物有效性的试验方法。在下面4.4.2节描述了病人服用本发明化合物和/或药用组合物的方法。在这里所用的“分解(disruption)”一词，是意味着不仅PTK/接合蛋白配合物成分的物理上的分离，而且也意味着干扰了PTK/接合物配合体的活性，而不管该配合物在物理上是否仍能形成。这里所用的“活性”一词，是指形成该配合物的细胞内信号流的传导中，PTK/接合蛋白配合物的功能，也就是该配合物作用于或抑制细胞内的信号传导至细胞的功能。但是本发明中的化合物和首用组合物，不能直接干扰(如抑制或加强)该蛋白酪氨酸激酶的酶活性。4.4.1干扰PTK/接合蛋白配合物的试验许多方法可用来试验本发明化合物分解PTK/接合蛋白配合物的能力。如，可在试管内试验配合物的形成，首先将该配合物中的一个成分或其功能部分，固定于一个固体载体上。第二步，将固定化的配合物成分，暴露于一个上述结构确定的化合物以及本配合物的第二个成分或其功能部分。第三步，可以测定在化合物的存在下，第二个成分是否能与固定化成分形成配合物。此外，可利用本领域所熟知的共免疫沉淀技术，试验试管内配合物的形成。简单地说，将一个能形成该PTK/接合配合物的细胞株，暴露于本发明中一个或多个化合物，从该暴露的细胞株中制备细胞溶胞产物。拮抗该配合物成分之一的抗体，可加入至细胞溶胞产物中，进行标准免疫沉淀技术试验。在仍形成配合物的情况下，该技术能使配合物沉淀，而在配合物已被分解时，仅抗体拮抗的配合物成分将产生沉淀。可直接测试本发明中的化合物对于PTK/接合蛋白转化能力的作用。例如，一个或多个本发明化合物，可加入至能形成PTK/接合配合物的细胞，如成纤维细胞或造血细胞之中，这些细胞在没有本发明配合物的存在时，能导致细胞的转化。(Muller，A.J.等，1991，Mol.Cell.Biol111785-1792；McLaughlin，J等，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA846558-6562)。然后在试管中测定细胞的转化态，例如通过控制琼脂中菌落形成的能力来测定。(Lugo和Witte，1989，Mol.Cell.Biol.91263-1270；Gishizky，M.L.和Witte，O.N.，1992，Science256836-839)。另一种方法是，通过测定免疫缺陷裸鼠或严重配合免疫缺陷(SCID)小鼠形成肿瘤的能力，来控制体内细胞的转化态(Sawyers，C.L.等，1992，Blood792089-2098)。此外，也可测定本发明化合物抑制各种肿瘤细胞株的能力，如黑瘤、前列腺、肺和哺乳类肿瘤细胞株等异种SC移植细胞株。4.4.2药用组合物与给药方法上述5.1节所述的本发明化合物，可给病人以治疗有效剂量服用，以治疗或改善涉及PTK/接合蛋白相互作用的细胞增殖疾病。治疗剂量系指化合物足以产生改善细胞增殖疾病症状的量。在下面5.4.2.1节中将描述测定本发明化合物用于治疗细胞增殖疾病有效剂量的方法。在下面5.4.2.2节将进一步描述本发明化合物的配方和药用组合物的方法，以及这些化合物，配方和组合物的服用方法。4.4.2.1有效剂量本发明中化合物的毒性和有效治疗量的确定，可通过细胞培养或实验动物中标准的药物学法，测定其LD50(50％群体的致死量)和ED50(50％群体的治疗有效量)。毒性与治疗有效性的剂量之比是治疗指数，它也表示为LD50/ED50。显示出大的治疗指数的化合物是优选的。而那些所显示毒副反应的化合物在应用时，须小心设计释放系统，使这类化合物直接到达作用的组织部位，以降低对未感细胞可能的危害，由此降低了副反应。从细胞培养以及动物实验中所获得的数据，可用来设计人用的剂量范围。这类化合物的剂量最好是无毒的包括了ED50的浓度范围。这个剂量可以在依使用的剂量和给药途径而定剂量范围之内变化。本发明的方法中任一化合物，其治疗有效剂量，最初可从细胞培养试验中估计。必须设计动物模型中的剂量，以达到包括了在细胞培养中所测的IC50值(即达到症状最大抑制的一半时受试化合物的浓度)在内的血循环浓度范围。这一信息可用来更为精确地测定人用剂量。例如可用高效液相色谱测定血浆水平。可个体地调整剂量以及服药间隔，以保证活性成分的血浆水平，使得药物能充分维持对接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶相互作用的抑制，或维持最低有效浓度(MEC)。每个化合物的MEC可以不同，但应用体外数据来估算，例如用这里描述的试验而得的相互作用数据。MEC剂量的获得，依赖于个体特点和给药途径。但是，可用HPLC试验或生物实验来测定血浆浓度。用MEC值可以测定剂量间隔。应间隔服用化合物以维持血浆水平于10至90％时间内高于MEC，优选30-90％，而更为优选的是50-90％。4.4.2.2配方与给药正如上面所讨论的，接合蛋白属细胞内蛋白。因此不管PTK是转膜或者是细胞内的类型，PTK/接合蛋白的相互作用都是细胞内的。由此，本发明化合物作用于细胞内干扰PTK/接合配合物的形成和/或活性。正如本节所讨论的，对于作用于细胞内的本发明化合物的给药，有许多本领域所熟知的方法。按本发明化合物而使用的药物组合物，可用一个或多个生理上可接受的载体或赋形剂，按常规的方式制成配方这样化合物和其生理可接受的盐与溶剂，可制成配方给药，包括吸入(通过口或鼻)，或经口，口腔，非胃肠系统或直肠给药。对于口服，其药用组合物可采用如片剂或胶囊剂的形式，其制备可按常规方式加入药用赋形剂，如粘合剂(预胶化玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮，或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(即乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(即硬脂酸镁，滑石或硅胶)；崩解剂(如马铃薯淀粉或乙二醇淀粉钠)；或润湿剂(如月桂酸硫酸钠)。也可按本领域所熟知的方法将片剂包膜。口服液体制剂，可采用如溶液剂，糖浆或悬浮剂，或者它们以干品制剂使用，使用前加水或其它合适的溶剂。该液体制剂可按常规方法添加药用添加剂使用，如悬浮剂(如山梨醇糖浆，纤维素衍生物或氢化可食用的脂肪)；乳化剂(如杏仁油、油脂、乙醇或分馏植物油)；以及防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，或山梨酸)。该制剂亦可含缓冲盐，增香剂，增色剂和甜味剂。口服制剂也可制成含活性物质的缓释配方。对于口腔给药，可按常规方式将组合物制成片剂或锭剂配方。对于吸入给药，本发明所用的化合物，可常规地制成气雾剂，用加压容器或喷雾器，并使用一种合适的驱动剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在使用加压气雾剂时，可用一阀释放定量药物，以确定释放的剂量单元。吸入剂中所使用的胶囊或软胶囊，可制成含化合物的粉状混合物和一种合适的粉状基质如乳糖或淀粉的配方。可通过注射，如大量或连续注射的非胃肠道给药方式，将化合物制成配方。注射配方系以单位剂量形式，例如安瓿或多个单剂量的容器，并加入防腐剂。组合物可制成悬浮液，溶液或以油或水状的乳剂，并含有如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂等配方。另外，活性成分可以粉末状形式，并添加合适溶剂所构成，如可在使用之前加入灭菌的无热源的水。化合物也可制成直肠用组合物配方，如栓剂或灌肠保留剂，并含有通常用的栓剂基质如可可油或其它甘油酯。除了上述的配方之外，化合物也可制成仓储形(depot)制剂配方。这种长效制剂可通过埋植(如皮下或肌内)或肌肉内注射给药。例如，该化合物配方可采用合适的高分子或疏水材料(如可用的乳剂)，或离子交换树脂，或难溶衍生物，如难溶盐制成配方。组合物可按需要制成含活性成分的一个或多个剂量形式，包装或分散于容器之中。可用金属或塑料箔包装，如制成泡沫状包装。包装或分散容器上应附有使用说明。5.例化合物对EGF受体/GRB-2SH2区相互作用的抑制本节中所举例证明，化合物I能有效抑制酪氨酸磷酸化EGF-受体对GRB-2SH2蛋白区的结合作用。5.1材料与方法接合体-GST融合蛋白这里所用的接合体-GST(谷胱甘肽-S-转化酶)融合蛋白，系通过GRB-2/pGEX结构转化的E.coli表达而制备。融合蛋白的GRB-2部分，仅由GRB-2蛋白中的SH2区所组成。转化细胞生长于Luria培养基中，并加入青霉素。当达到光密度(OD)为600nm，0.3时，将细胞用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖(IPTG)诱导6小时，以表达融合蛋白。6小时表达期过后，将细胞沉淀，于4℃微球化10,000×g共10分钟，洗涤，并再悬浮于磷酸缓冲液盐水(PBS)中。然后将细胞超声溶解(6次振荡，每次5秒钟)。于4℃将不溶物离心10,000×g共10分钟除去，将上清液过谷胱甘肽-琼脂糖凝胶柱。用递减谷胱甘肽5mM溶液洗脱柱中结合的GRB-2-GST融合蛋白，然后再用PBS透析。固定化的EGF-R酪氨酸激酶分子上皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGF-R)。从过于表达EGF-R的细胞，特别是A431(ATCCCRL1551)细胞株分离EGF-R。将细胞溶于HNTG缓冲液中(20mMHepes/HCl，pH7.4，150mMNaCl，1.0％TritonX-100，5％甘油，1mM苯甲磺酰氟(PMSF)，1mg/Laprotonin，1mg/LLeupeptin，10mg/L苯甲脒)。如下所述，通过固定于微形板上将细胞溶解物中EGF-R蛋白分离出来。再将EGF-R逐渐在试管内磷酸化，如下所阐述的。将EGF-R固定化于微滴板上。微滴板的制备是，于40℃将板覆盖一层直接抗细胞内EGFR区(UBI，#05-101)的抗EGF-R单克隆抗体，浓度为每个微板坑0.5μg(在PBS中)，最终体积为每个板坑150μl，放过夜。经覆盖过夜后，从微滴板坑中除去覆盖液，加入阻断缓冲液(5％干奶的PBS溶液)室温30分钟取而代之，然后再除去阻断缓冲液，用TBST缓冲液洗涤坑5次以除去未结合的EGF-R。大约每个坑中结合了50至100ngEGF-R蛋白质。利用如这里所使用的A431细胞株等能大量表达EGF-R的细胞株是很重要的，它能显示出高的内源性磷酸酶活性。这是因为在用固定化抗体的溶解和孵育期间，磷酸化酶从EGF-R分子中除去了磷酸基团，这样就阻挡了内源性接合蛋白，如GRB蛋白，与EGFR的结合，这可能导致人为的结果。另外，如果所用的细胞株易于饥饿，那么在溶解之前可采用饥饿法。自磷酸化EGF-R的制备下面的试管内激酶反应，得到自磷酸化EGF-R。激酶反应开始是加入15μlATP/Mn2+混合物(在50mMMnCl2中，最终浓度为10μMATP，总体积为150μl)。将板于室温孵育5分钟，振摇，吸出上清液，然后再用TBST洗涤板5次。试验步骤在化合物I的存在下，于室温30分钟内将30ngGRB-2-GST融合蛋白(即EGF-RGRB-2蛋白为1∶1)或5ngGRB-2-GST融合蛋白(即EGF-RGRB-2蛋白之比为4∶1)，加入到含孵育缓冲液(0.1M磷酸钾缓冲液，pH6.5)的经磷酸化EGFR包覆的微滴坑中。对照坑系在不存在化合物I时，与GRB-2-GST融合蛋白孵育。孵育后，将坑用TBST彻底洗涤。将结合于固定化EGF-R上的GRB-2-GST融合蛋白的量，以抗融合蛋白GST-区的纯化抗兔血清(AMRAD，NewVictoria，澳大利亚；目录号0001605)进行测定。于室温孵育30分钟。孵育后，除去抗体，用TBST彻底洗涤坑。为了便于观察，再将坑用TAGO山羊抗兔过氧化酶抗体孵育，室温30分钟。孵育后，除去抗体，先用自来水，再用TBST洗涤坑。将底物溶液，即ABTS(2，2′-连氮基双(3-乙基苄噻唑啉磺酸)/H2O2(1.2μlH2O2加至10mlABTS中)，加入到坑中，于室温孵育20分钟。加入5NH2SO4停止反应。对每个坑测定410nm处的O.D.值。利用这一技术，通常可测定低至相对于背景空白的2ngGRB-2-GST。另外，在EGF-R坑中的受试物质和GRB-2-GST融合蛋白孵育之后，可利用生物素衍生化的单克隆抗体，如EL-6或EL-12，试验融合蛋白的结合能力。通过抗体在GRB-2上SH2区的分布识别其抗原决定簇，但它不干扰GRB-2与磷酸化EGFR的结合。利用链球菌亲和素-生物素化马(horseradish)过氧化酶反应物，测定这些抗体的结合力。此外，在EGF-R坑中的受试物质和GRB-2-GST融合蛋白孵育之后，可在孵育缓冲液中，通过用1mM1-氯-2，4-二硝基苯(CDNB)和1.54mg/ml递减谷胱甘肽孵育，测试融合蛋白对固定化EGFR的结合力。然后测定340nm处O.D.值，该反应在O.D.高达1.0时仍为线性，并按照Mannervik和Danielson所描述的方法(Mannervik，B.和Danielson，U.H.，1988，CRCCriticalReviewsinBiochemistry23238)，加入竞争性GST抑制剂来终止反应。5.2结果按照上述5.1节所述方法，测试化合物对于酪氨酸磷酸化EGF受体与GRB-2接合蛋白中SH2肽区结合的抑制能力。化合物I被证明是GRB-2/SH2结合的强抑制剂，其IC50值是2.9μM。(这里所用的IC50值，系指当无受试化合物存在时GRB-2/SH2结合量被受试化合物抑制一半时，该化合物的浓度)。6.化合物对bcr/ab1活性的抑制这里所提出的例子证明，本发明化合物能抑制bcr/ab1转化细胞株的存活。6.1材料与方法(1)试验所用细胞株是32Dcl.3从属IL-3的鼠胚样细胞。32Dcl.3J2/Leuk与IL-3无关的，表达raf和myc的32Dcl.3。32Dbcr/ab1与IL-3无关的，混合的，大量表达bcr/ab1激酶32D。(2)上述细胞株均生长于37℃，5％CO2的孵育箱中。其生长条件是32Dcl.3RPM1加10％FBS加1ng/mlIL-3加2mM谷氨酰胺。32Dcl.3J2/leukRPM1加10％FBS加2mM谷氨酰胺。32Dbcr/ab1RPM1加10％FBS加2mM谷氨酰胺。IL-3鼠白介素-3(LIBI目录号01-374)(3)PBS(Dulbecco磷酸盐缓冲液)，Gibco目录号450-1300EB(4)MTT(溴化3-〔4，5-二甲基噻唑-2-基〕-2，5-二苯基四唑；噻唑兰)，Sigma目录号M-2128。工作溶液5mg/mlPBS，于4℃暗处贮藏。(5)增溶缓冲液SDS电泳级，Fisher目录号BP166。二甲基甲酰胺(DMF)，Fisher目录号BP1160。冰乙酸，Fisher目录号A38。工作溶液将200gSDS溶于250ml温水和500mlDMF中，低热下搅拌。当SDS几乎全溶后，加入25ml80％乙酸和25ml1NHCl至溶液中。将体积调至1000ml。6.2步骤如果不特别指明，下面每步反应物在室温下进行。6.2.1细胞接种(1)细胞生长于组织培养皿(10cm，Corning25020-100)至约1×106细胞/ml，每三天亚培养1∶10(对32Dbcr/ab1株为1∶20)。(2)按标准步骤，用锥虫兰计数活细胞。(3)将细胞再悬浮于新鲜基质中，密度为2×105细胞/ml，将细胞再转移到96坑的组织培养板上(Corning，25806-96)，每个抗50μl，含约2×104个细胞。每个细胞株均含自身正负对照(负对照仅为基质)置于板上。32Dcl.3种子基应含IL-32ng/ml。6.2.2试验步骤(1)将化合物I药物储液(10mM的DMSO中)稀释至1∶50，组织培养板中的每个细胞株在其8个坑中均按1∶2进行连续稀释。对照坑中仅含基质。细胞和药物于37°，在5％CO2中孵育15小时。(2)将15μlMTT加至每个坑中。将板于37℃孵育4小时。(3)4小时后，将100μl增溶液加至每个坑中。(4)将板用铝箔覆盖，置于ELISA振摇器中，于室温振荡过夜，以使甲晶体溶解完全。(5)用DynatechELISA，MR500型板计数器，记录570nm处波长的吸收，参考波长为630nm。6.3结果测试化合物I影响bcr/ab1活性的能力，发现其是一个bcr/ab1功能的抑制剂。用上述6.1节所述细胞生长试验，测试化合物I对bcr/ab1功能的影响。简化起见，本试验采用三种细胞株。首先，使用依赖IL-3的细胞株(32Dcl.3)它需要在IL-3细胞质的存在下生存。另外使用了不依赖于IL-3的细胞株，包括32Dcl.3J2/leuk，它由raf和myc转型的32Dcl.3细胞株组成；和包括32Dbcr/ab1，它由bcr/ab1转型的32Dcl.3细胞株所组成。后二细胞株由于其被转型的基因序列而产生具有活性的产物，它们是不依赖于IL-3的，如果产物无活性，细胞又不暴露于IL-3，那么细胞就不能存活。例如，如果在32Dcl.3bcr/ab1细胞株中bcr/ab1失活，那么细胞在无IL-3时，就将不会存活。化合物I能抑制无IL-3存在时，32Dcl.3bcr/ab1细胞株的存活能力。由于该细胞株相当强壮，这一结果很有意义。7.例化合物I对细胞增殖的抑制该例证明本发明化合物I是细胞增殖的强抑制剂。7.1材料与方法硫氰酸胺B(SRB)生长试验试验1MCF-7SRB生长试验在常用的含10％FBS/RPMI并添加2mM谷氨酸的生长基质中，将MCF-7(ATCC#HTB22)细胞(H+B22)接种于96个坑的平底板中，每个坑含200个细胞。将细胞经每孔用等体积的化合物稀释使每坑总体积为200μl后，于37℃孵育24小时。将化合物按其所需最高浓度的2倍制备，并在96坑的园底板上连续稀释于常用生长基质中，再转至含细胞的板上，用DMSO作为溶媒对照，加入量为达总浓度的0.2％。在含5％CO2的加湿孵育箱中，将细胞于37℃孵育。加入化合物4天后，弃去基质，按每坑200μl加入冰冷的10％TCA(三氯乙酸)以固定细胞。4℃，60分钟后，弃去TCA，将板用水漂洗5次。将板经空气中干燥，于室温将0.4％SRB(硫氰酸胺B，购于Sigma)20在1％乙酸的溶液按每坑100μl加入使细胞染色10分钟。弃去SRB，用1％乙酸漂洗板5次。当板完全干燥后，按每坑100μl加入10mMTris碱，以溶解染料。5至10分钟后，于570和630nm的双波长DynatechELISA板计数器上记录板的情况。试验2PDGF-R/SRB粘附细胞生长试验用Skehan等，1990，J.Natl.CancerInst.821107-1112所述的量热试验，测试化合物对固定依赖性肿瘤细胞生长的抑制作用。用硫氰酸胺B(SRB，购自Sigma)染料的相反离子的结合作用，测定酸固定化细胞中的蛋白质含量。将化合物溶于DMSO(Sigma，细胞培养级)中，并按最终试验浓度的二倍稀释于合适的生长基质之中。在试验中使用C6细胞(CCL107)，将化合物(100μl)加入至含连有细胞单层(100μl坑中含2000个细胞)的96坑板中。C6(ATCC#CCL107)细胞置于Ham’sF10中，并添加5％胎牛血清(FBS)和2mM谷氨酸(GLN)。4天后(37℃，5％CO2)，该单细胞层用PBS洗三次，用冰冷的10％TCA200μl固定(FisherScientific)，并于4℃放置60分钟。除去TCA，用自来水洗涤固定单层5次，置于吸水纸上使其室温干燥完全。将细胞蛋白质用100μl0.4％SRB溶于1％乙酸的溶液，固定10分钟。用自来水洗涤5次，将染料溶解于10mMTris碱(每坑100μl)中，在MR5000型Dynatech板计读器上记录570nm处吸收。生长抑制数据可表示为，仅以0.4％DMSO处理的对照坑吸收度的百分数。在常规生长基中，DMSO对照与细胞生长组没有区别。用四参数曲线法测定IC50值。对于固定依赖性肿瘤生长试验，系将细胞(每皿3000至5000)在加或不加入化合物时，悬浮于含0.4％琼脂糖的试验介质中(含10％FCS的DMEM)，再铺于35mm的皿中，该皿预先覆盖了一层固定化琼脂糖基质(含0.8％琼脂糖)。于37℃孵育2至3周后，用Omnicon3800肿瘤菌落计数仪测量大于50μm的菌落。试验3MCF-7/HER-2B生长试验。这里所用的方法基本上类似于上述方法(MCF-7生长试验)，区别是在加入化合物I之前，立即将正常的生长基除去，并将添加了2mM谷氨酸的5％FBS/RPMI加入至细胞之中。也可在0.5％血清介质中制备化合物溶液。将板上的细胞孵育4天，并按标准的技术方法进行实验。试验4A431/SRB生长试验。基本上按照上述MCF-7/HER2B生长试验，进行A431(ATCC#CRL1555)细胞试验。7.2结果利用上述7.1节SRB方法，用多种细胞株与化合物相接触，测定化合物I对细胞增殖的作用。正如下面所述，对于受试的四种细胞株的每一种细胞株，化合物I都被证明是细胞增殖的强抑制剂。细胞株化合物I的IC50值(MM)C68A4317.5MCF710MCF-7-HER26这里所用的IC50值，代表抑制未与受试化合物(这里指化合物I)相接触的细胞株细胞增殖的50％时，受试化合物的浓度。因此，本节结果证明化合物I显示出对细胞增殖的抑制作用。加上上述5节中的举例，这些结果证明化合物I对蛋白酪氨酸激酶受体EGFR的SH2区与接合蛋白的结合具有抑制作用，表明化合物I能作为细胞生长的抑制剂，起到阻断接合蛋白与其配对体(例如蛋白质酪氨酸激酶分子)的相互作用的作用。化合物I的活性，表明它是一个抗细胞增殖剂。8.例3T3细胞增殖抑制试验下面的方法描述了，在大量表达EGFr，IGF1r或PDGFr产生3T3的细胞株上，用来测定化合物抑制细胞增殖的能力的步骤。8.1材料与试剂(1)EGF配基储存浓度为16.5μM；EGF201，系购自TOYOBO，Co.，Ltd.Japan。(2)IGF1配基人，重组；G511，PromegaCorp，USA产。(3)PDGF配基人PDGFB/B；1276-956，BoehringerMannheim，德国产。(4)SRB硫氰酸胺B；S-9012，SigmaChemicalCo，USA。SRB染料溶液0.4％SRB在1％冰乙酸中。(5)冰乙酸A38-212，FisherScientific，USA，(6)小牛白蛋白fractionV粉末；A-8551，SigmaChemicalCo.，USA。(7)TCA缓冲液10％三氯乙酸(A32-500，FisherScientific，USA)。(8)Tris碱缓冲液10mMtris碱(BP152-5，FisherScientific，USA)。8.2方法(1)产N-1H3T3(ATCC#1658)的脾细胞3T3-EGFr，3T3-IGF1r，3T3-PDGFr。(2)在一个含96坑的板中，按每坑8000个细胞，将细胞接种于10％FBS加2mMGLNDMEM中。于37℃5％CO2将细胞孵育过夜，以使细胞连接于板上。(3)第二天，将细胞静置于无血清基质(0％FBSDMEM)24小时。(4)第三天，将细胞用配基(EGF为5nM，IGF1为20nM或PDGF为100ng/ml)和药物同时处理。在无血清的DMEM和0.1％小牛白蛋白中制备配基溶液。负对照细胞组仅加入不含血清的DMEM与0.1％牛白蛋白；正对照细胞组加入不含药物的配基(EGF，IGF1或PDGF)。在含无血清DMEM的96坑板内制备药物溶液，并进行连接稀释。将稀释的药物每坑取10μl，加入至细胞中。每坑总体积是200μl。对每个药物，取一式四份(坑数)和11个浓度点。(5)第四天，将配基(EGF，IGF1或PDGF)再加至细胞之中，按前述同样浓度制备细胞内最终配基的浓度。(6)第五天，用PBS洗涤细胞，并在0-5℃条件下用冰冷的10％TCA，按每坑200μl量加入以固定细胞，共1小时。(7)除去TCA，用去离子水漂洗5次。用纸巾上下右左使板干燥。按每坑100μl加入0.4％SRB使细胞染色10分钟。(8)倾去SRB，用1％乙酸漂洗板5次。使板充分干燥。(9)在振荡器中，按每坑100μl加入10mMTris碱，使染料溶解10分钟。(10)在570nm和630nm双波长DynatechElsia板计读器上，记录板的情况。8.3试验步骤(1)在第一个坑内RPMI介质中，按1∶50稀释药物储液(10mMDMSO溶液)，然后在组织培养板上每8个点进行1∶2稀释。将每坑中50μl的该溶液，转至细胞中。对照细胞组仅加入基质。用药物于37℃，5％CO2中孵育细胞共15小时。(2)每坑加入15μlMTT。于37℃孵育板4小时。(3)4小时后，每坑加入100μl增溶溶液。(4)用铝箔覆于板上，令板置ELISA板振荡器上，室温振荡过夜，以使甲结晶完全溶解。(5)用MR500型DynatechELISA板计读器，于570nm波长记录吸收情况，参考波长为630nm。显然，这里对本发明提出了许多改良与变更，但未超过本发明的范围与实质。上面仅以举例形式描述了一些特定的具体情况，本发明仅由附于后面的权利要求书的条款所限定。权利要求1.一种适合于人服用的药物组合物，它包括如下式所示的化合物或该化合物的一种药用的盐；以及一种药用载体2.一种适合于人服用的药物组合物，它包括如下式所示的化合物或该化合物的一种药用的盐；以及一种药用载体3.一种改善细胞增殖疾病症状的方法，其中细胞增殖疾病涉及一种蛋白酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物，使用足量的能干扰细胞内蛋白酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物的化合物，以使细胞增殖疾病的症状得以改善；其中所述的化合物如下列两个化学式所示4.权利要求3中的方法，其中细胞增殖疾病发生于哺乳动物，该化合物与哺乳动物细胞相接触，使得哺乳动物上细胞增殖疾病的症状得到改善。5.权利要求3中的方法，其中细胞增殖疾病是一种与BCR-ABL相关的肿瘤，一种神经胶质瘤，一种恶性胶质瘤、黑瘤、卵巢瘤、乳腺瘤或一种前列腺瘤。6.一种改善细胞增殖疾病症状的方法，其中细胞增殖疾病涉及蛋白质酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物，该方法包括将能形成蛋白酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物的细胞，与能干扰细胞内蛋白质酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物的足量的权利要求1或2中药用组合物相接触，使得细胞增殖疾病的症状得以改善。7.一种如下式所示的化合物或其药用的盐，其中R1和R2分别独立代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯，并且至少R1和R2之一不是氢；R3至R12分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺基、羰酰胺基、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基或2-甲基丁-2-烯-4-基；其中至少R11和R12之一代表2-甲基丁-2-烯-4-基。8.一种如下式所示的化合物或其药用盐，其中R1和R2均各自独立地代表氢；R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃羧基、芳基、烷烃芳基、OH基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基或2-甲基丁-2-烯-4基；以及R11和R12分别独立代表氢或2-甲基丁-2-烯-4-基，其中至少R11和R12之一为2-甲基丁-2-烯-4-基；其中至少R3至R10之一不是氢。9.一种如下式所示的化合物或其药用盐其中R1和R2分别独立代表芳基、烷基芳基和高级烷酸酯；以及R3至R12分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃羧基、芳基、烷烃芳基、OH基、烷氧基、硝基、氟、氯、碘、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基或巯基。10.一种如下式所示的化合物或其药用盐，其中R1、R2、R11和R12代表氢；以及R3至R10分别代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、烷氧基、羟基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺基、羰酰胺基、羧基、砜基、磺酰胺基、胺基或巯基，其中R3至R10之一至少不是氢；(a)当R4至R10分别代表氢时，R3不可代表2-甲基丁-2-烯-4-基或2-羟基-2-甲基丁-4-基；(b)当R4至R6和R8至R10分别代表氢时，R3和R7不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R3至R4，R6至R8和R10代表氢时，R5和R9不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基或3-甲基-正丁基；(d)当R3、R5至R7、R9至R10代表氢时，R4和R8不可都代表2-甲基丁-2-烯-4-基或2-甲基丁-1，3-二烯-4-基，以及R4和R8不可代表2-甲基丁-2-烯-4-基和2-甲基丁-1，3-二烯-4-基。11.权利要求10的化合物，其中该化合物具下列通式其中R3至R5和R7至R9代表氢，R6与R10之一或两者代表2-甲基丁-2-烯-4-基。12.一种如下式所示的化合物或其药用盐其中R1和R2之一至少代表乙酰基；R11和R12代表氢；以及R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃基羧基、芳基、烷基芳基、羟基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺基、羧基、砜基、磺酰胺基、胺基和巯基，其中(a)当R1和R2两者都代表乙酰基；或当R1和R2之一代表乙酰基，R3至R4，R6至R8和R10至R12代表氢；R5和R9不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(b)当R1和R2两者都代表乙酰基和R4至R6以及R8至R10都代表氢时，R3和R7不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R1和R2都代表乙酰基以及当R3、R5至R7以及R9至R10代表氢时，R4和R8不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。13.一种如下式所示的化合物或其药用盐，其中R1和R2至少之一代表低级烷基；R11和R12代表氢；以及R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、烯烃基、烯烃羧基、芳基、烷基芳基、羟基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基和巯基，其中(a)当R1和R2两者都代表甲基时，R3至R10至少之一必须代表除氢之外的基团；(b)当R1和R2都代表甲基，R4至R10代表氢时，R3不可代表2-甲基丁-2-烯-4-基；(c)当R1和R2都代表甲基，R4至R6以及R8至R10代表氢时，R3和R7不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。(d)当R1和R2都代表甲基，R3至R4、R6至R8以及R10代表氢时，R5和R9不可同时代表2-甲基丁-2-烯-4-基。14.权利要求10的化合物，其中R4代表2-甲基丁-2-烯-4-基以及R3和R5至R10代表氢，或R5代表2-甲基丁-2-烯-4-基，R3至R4和R6至R10代表氢；或R6代表2-甲基丁-2-烯-4-基以及R3至R5，R7至R10代表氢。15.下列各化合物(a)2，5-二乙酰氧基-3，6-二-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(b)2，5-二乙酰氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)引哚-3-基〕-1，4-苯醌；(c)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌；(d)3，6-二-〔5-(溴)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基1，4-苯醌；(e)3，6-二-〔2-(烯丙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(f)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(正丙基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(g)3，6-二-〔2-(胺基羰基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(h)2，5-二乙酰氧基-3，6-二-〔2-(胺基羰基)吲哚3-基〕1，4-苯醌；(i)3，6；-二-〔2-烯丙基吲哚-3-基〕-2，5-二苯甲酰氧基-1，4-苯醌(j)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(氰基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(k)2，5-二羟基-3，6-二-〔4-(甲氧羰基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌；(l)2，5-二羟基-3，6-二-〔5，7-(二甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌；(m)2，5-二羟基-3，6-二-〔4，7-(二甲氧基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌；(n)2，5-二羟基-3，6-二-〔5-(硝基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(o)3，6-二-〔4-(4-氯苯甲酰胺)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(p)3，6-二-〔2-(4-氯苯基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(q)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-氟苯基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(r)2，5-二羟基-3，6-二-〔4，6-(二甲氧基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(s)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(5-羟基-6-甲氧基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(t)2，5-二羟基-3，6-二-〔4-(氰基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(u)2，5-二羟基-3，6-二-〔5-(4-三氟甲基苯胺甲酰基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(v)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-三氟甲基苯胺甲酰基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(w)3，6-二-〔2-(5-溴-6-硝基)-吲哚-3-基〕2，5-二羟基-1，4-苯醌；(x)2，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(2-甲基丁-2-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(y)2，5-二甲氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌。16.下列各化合物(a)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(甲基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌；(b)3，6-二-(2-乙基吲哚-3-基)-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(c)3，6-二-(2-丁基吲哚-3-基)-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(d)3，6-二-〔2-(1-丁烯-4-基)吲哚-3-基〕2，5-二羟基-1，4-苯醌；(e)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(2-甲基丁-1-烯-4-基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(f)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(4-甲基-正戊基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(g)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(2-苯乙基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(h)3，6-二-〔(5-羧基-2-乙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(i)3，6-二-〔〔5-羧基-2-(正丙基)〕吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(j)3，6-二-〔〔5-羧基-2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(k)3，6-二-〔2-(4-羧基-正丁基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(l)3-〔〔5-羧基-2-(3-甲基正丁基)〕吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-6-(吲哚-3-基)1，4-苯醌；(m)3，6-二-〔(5-胺基-2-乙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(n)3，6-二-〔〔5-胺基-2-(正丙基)吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(o)3，6-二-〔5-胺基-2-(3-甲基正丁基)〕吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(p)2，5-二乙酰氧基-3，6-二-〔2-(3-甲基-正丁基)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(q)3，6-二-〔〔2-乙基-5-(4-甲基苯磺酰胺)〕吲哚-3-基〕-2，5-二羟基-1，4-苯醌；(r)2，5-二羟基-3，6-二-〔〔5-(4-甲苯磺酰胺)-2-(正丙基)〕吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(s)2，5-二羟基-3，6-二-〔〔2-(3-甲基正丁基)-5-(4-甲基苯磺酰胺)吲哚-3-基〕1，4-苯醌；(t)2，5-二羟基-3，6-二-〔2-(2-甲基戊-2-烯-5-基)吲哚-3-基〕-1，4-苯醌。17.一种如下式所示的化合物或其药用盐其中R1和R2分别独立代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、羟基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基、4-甲基苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基；以及R11和R12系选自氢、甲基、乙基、丙基、丁基、芳基、烷基芳基、烷基羧基、烯烃基羧基、丁-1-烯-4-基、2-甲基丁-1-烯-4-基、4-甲基-正戊基、2-苯乙基、2-甲基戊-2-烯-4-基，以及4-羧基-正丁基，其中R11和R12至少之一不代表氢。18.一种如下式所示的化合物或其药用盐，其中R1和R2分别独立代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、羟基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基、4-甲基苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基；以及R11和R12均代表3-甲基-正丁基。19.一种如下式所示的化合物或其药用盐，其中R1和R2分别独立代表氢、低级烷基、乙酰基、芳基、烷基芳基或高级烷酸酯；R3至R10分别独立代表氢、烷基、烷基羧基、芳基、烷基芳基、烯烃基、烯烃基羧基、羟基、烷氧基、硝基、卤素、三卤甲基、酰胺、羰酰胺、羧基、砜基、磺酰胺、胺基、巯基、4-甲苯磺酰胺或2-甲基丁-2-烯-4-基，其中R3至R10至少之一不代表氢；以及R11和R12分别独立代表氢或3-甲基-正丁基。20.一种适于人服用的药物组合物，包括由权利要求7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19中的化合物；以及药用载体。21.一种改善细胞增殖疾病的方法，其中细胞增殖疾病涉及一种蛋白酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物，该方法包括将能形成蛋白质酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物的细胞，与能干扰细胞蛋白质酪氨酸激酶多肽/接合多肽配合物的权利要求20中的足够量的药物组合物相接触，使得细胞增殖疾病的症状得到改善。全文摘要本发明涉及抑制接合蛋白/蛋白酪氨酸激酶相互作用的方法与组合物,其中这些相互作用系与细胞增殖疾病相关联,涉及能够同含SH2和/或SH3成员的接合蛋白家族相配合的一种蛋白质酪氨酸激酶。特别地,本发明涉及特殊的化合物,特别是喹唑啉衍生物化合物,以及利用这些化合物的方法。文档编号A61K31/40GK1192680SQ96196106公开日1998年9月9日申请日期1996年6月5日优先权日1995年6月7日发明者邓炳初,G·麦马雄,G·D·哈里斯申请人:苏根公司