专利名称：稳定的抗乙型肝炎疫苗片的制作方法
发明简述本发明包括稳定表面抗原的方法，所述表面抗原可随后给药以对抗乙型肝炎。具体而言，该抗原为片剂，不需要冷藏，而且其舌下吸收消除了对抗乙型肝炎注射液的需要。这可通过稳定剂来实现。
乙型肝炎是肝脏的一种炎症，通常是由病毒感染导致的，但有时是由于毒性药剂导致的。具体而言，乙型肝炎是由乙型肝炎病毒导致的潜伏期长的病毒性疾病，通常为50-160天，它通常由于注射已感染的血液、血液衍生物或由于使用已污染的针、刀或其他工具而被传染。乙型肝炎在临床上和病理学上与甲型病毒肝炎类似，但是没有交叉保护性免疫。
通常情况下使用静脉或皮下注射疫苗来对抗乙型肝炎疾病。但是，必需冷藏疫苗以保持其活性。本发明包括经稳定并因而不需要冷藏的抗乙型肝炎片。此等新型的片剂由经稳定的乙型肝炎表面抗原组成。
因此，由于缺乏适当的冷藏设备而不能通过注射来使用乙型肝炎疫苗的个人即可使用该抗乙型肝炎疫苗片。这对于生活在第三世界中的患者具有特别现实的意义。
另外，这些片剂消除了对引起疼痛的注射液的需要，并降低了由已污染各种疾病的针头导致可能的感染的危险，所述疾病包括肝炎和HIV等。
本发明的原理是基于以下事实舌下淋巴丛吸收抗原表面蛋白，因此可有效地绕过整个消化道和肝脏。淋巴丛最终将同时以自身稳定机理倾注出表面蛋白至毛细血管，然后进入上腔静脉，在此达到全身分布。因此，该方法达到的结果与通过皮下注射得到的结果相同。
具体而言，任何可被舌下淋巴丛接受的物质(即其组份中没有一种的直径大于淋巴毛细血管的直径)将不会渗透至进入肝脏的门静脉，但最终将会出现在胸导管中。该物质(例如抗原表面蛋白)将从胸导管通过上腔静脉渗透至血流中(已绕过肝脏)，并直接通入右心房，在此将达到全身循环。
本发明的优点有很多，其中包括消除了对冷藏的需要，这使产品特别适合于运输至热带和第三世界的环境中。
本发明还消除了对注射的需要，由此降低了传染如AIDS等疾病的可能性。而且，避免了注射引起的疼痛和不适。
最后，使用本发明的方法可使生产成本降低约60％。优选实施方案的详细描述实施例1本发明涉及一系列的混合步骤。乙型肝炎疫苗为经稳定的舌下片剂形式，首先混合20g经冻干的乙型肝炎抗原表面蛋白(纯度超过97％)和2500ml的重蒸馏水、500g医药级的乳糖以及4g经冻干的高纯(“HP”)白蛋白。然后在该溶液中混入125g的Na2HPO4和110g的NaH2PO4以及40g乙基汞硫代水杨酸钠(thimerosal)。
将上述混合物与预制液混合。所述预制液必需是无醇的，其由以下物质制成用蒸馏水稀释20倍1250g医药级的C5H10O5、7800g医药级的NaCl和8800g医药级的Al2HO3。该混合是在约40华氏度的温度、约60％的相对湿度下进行的。该混合在手术无菌的环境下进行，并可用自动化的设备来完成。预制液的重要性主要是通常已知为阿拉伯胶的稳定剂C5H10O5。
然后将上述混合物微细喷雾在88.35kg赋形剂颗粒上，所述赋形剂由50％乳糖和50％米淀粉制成，这两种物质都是医药级的。稀释液包含11.65kg的溶解固体。干燥后，总重量为100kg，足以压制成1000000片分别重100mg的舌下片。对于上述重量，待压片之颗粒的喷雾必需在不超过100分钟的时间内完成。在该过程中，所有的颗粒必需经过彻底和高速的搅拌。片剂必需压制成高密度的，而且其在舌下崩解的时间不应超过10分钟。整个过程必需在完全与GMP标准一致的环境下进行。片剂然后在6-10℃的温度下于真空中干燥。
最终产品必需在泡罩包装板中储存。在泡罩包装后，最终产品不需要冷藏，并可安全地在最高至28℃的室温下储存。但是，为长期使用，从6个月-5年，建议在中等冷藏温度(6-12℃)下储存。该疫苗不必保持冷冻。
用于抗乙型肝炎疫苗片的表面抗原可从酵母培养基中获得，该培养基已通过插入其基因组、乙型肝炎病毒表面的基因编码，使用重组DNA方法和标准分子生物学技术被变性。经纯制的表面抗原可以聚集体的形式得到，其形成为约22nm的颗粒，并最后吸附在氢氧化铝硅胶(0.5mg A/3+/20g剂量)中，在其中加入乙基汞硫代水杨酸钠作为防腐剂。最终产品的外观为白/灰色，其沉降在容器的底部，分为两个相透明的上清液，基本上没有蛋白质，由磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成，而且其中溶解有防腐剂，以及沉淀的氢氧化铝硅胶，其中吸附超过98％的抗原。在振摇时，形成不透明的灰色悬浮液，持续几分钟，这是用于稳定的物质。发酵和纯化步骤可适当地进行，并放大和标准化，以保持每一批生产的一致性和可重复性。
为测试这些片剂的效力，用标准ELISA试验鉴定出24只没有乙型肝炎抗原的仓鼠。12只仓鼠的舌下环境用疫苗片的溶液涂覆，片剂的质量与仓鼠的体重相适应，在第一天、第七天和第三十天时，每天给药两次。在最后给药后的七天时，使用标准ELISA试验在经乙型肝炎处理的仓鼠血清中检测到乙型肝炎抗体。12只对照仓鼠仍为阴性。随后，所有24只仓鼠都被感染乙型肝炎病毒。用疫苗片处理过的动物中没有一只发现该疾病，而整个对照组都被感染乙型肝炎。
权利要求
1.一种稳定抗原表面蛋白的方法，所述抗原表面蛋白可给药至哺乳动物以对抗乙型肝炎感染，所述方法包括用稳定剂混合乙型肝炎抗原表面蛋白，其中，所述稳定剂是C5H10O5。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例为约75-85重量％的乙型肝炎抗原蛋白约15-25重量％的C5H10O5。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例为约80重量％的乙型肝炎抗原蛋白约20重量％的C5H10O5。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述哺乳动物是人。
5.如权利要求1所述的方法，其中，在所述混合后，所述乙型肝炎抗原表面蛋白和C5H10O5随后成型为舌下片。
6.如权利要求5所述的方法，其中，在与所述乙型肝炎抗原表面蛋白混合前，所述C5H10O5存在于预制液中。
7.如权利要求6所述的方法，其中，20g所述乙型肝炎抗原表面蛋白与所述预制液混合，所述预制液包含1250g医药级的C5H10O5。
8.如权利要求7所述的方法，其中，冻干所述20g的乙型肝炎抗原表面蛋白，然后与水、乳糖和白蛋白混合，以在与所述预制液混合前产生初级混合物。
9.如权利要求8所述的方法，其中，在与所述预制液混合前，在所述初级混合物中加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和乙基汞硫代水杨酸钠。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述预制液还包含重蒸馏水、氯化钠和Al2HO3。
11.如权利要求10所述的方法，其中，将所述初级混合物与所述预制液混合，该混合是在约4华氏度和约60％相对湿度的条件进行的。
12.如权利要求11所述的方法，其中，将所述初级混合物和所述预制液的混合物微细喷雾在赋形剂上以产生最终的混合物，所述赋形剂由约50％乳糖和约50％米淀粉组成。
13.如权利要求12所述的方法，其中，所述最终混合物压制成舌下片，所述片剂在6-10℃之间的温度下真空干燥。
14.一种稳定的抗乙型肝炎疫苗片剂，该片剂在向未感染的哺乳动物给药时，如果所述哺乳动物随后感染乙型肝炎病毒，其能够对抗乙型肝炎病毒，其中，所述片剂包括乙型肝炎抗原表面蛋白和稳定剂C5H10O5。
15.如权利要求14所述的片剂，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例为约75-85重量％的乙型肝炎抗原蛋白约15-25重量％的C5H10O5。
16.如权利要求15所述的片剂，其中，所述乙型肝炎抗原表面蛋白在C5H10O5中的比例为约80重量％的乙型肝炎抗原表面蛋白约20重量％的C5H10O5。
17.如权利要求14所述的片剂，其中，所述未感染的哺乳动物是人。
18.如权利要求14所述的片剂，其中，所述片剂是舌下片。
19.如权利要求18所述的片剂，其中，所述片剂在所述哺乳动物的舌下时需要最多约10分钟来溶解。
全文摘要
一种稳定的抗乙型肝炎疫苗片和制备该片剂的方法,其中所述片剂包含稳定的乙型肝炎病毒抗原表面蛋白,该片剂在给药哺乳动物时可使该哺乳动物对乙型肝炎感染产生免疫作用。该稳定作用的关键是C
文档编号A61K9/00GK1216471SQ97194006
公开日1999年5月12日 申请日期1997年3月31日 优先权日1996年4月22日
发明者彼得·R·罗斯席尔德 申请人:彼得·R·罗斯席尔德