专利名称：异戊二烯基转移酶抑制剂的制作方法
背景技术：
蛋白质的Ras家族在调节细胞生长的信号转导途径中是很重要的。蛋白质在核糖体中产生，释放到胞质溶胶中，并翻译后修饰。在翻译后修饰系列地第一步是Cys168用法尼基或香叶基香叶基焦磷酸酯在由诸如法尼基转移酶和香叶基香叶基转移酶的异戊二烯基转移酶(prenyltransferase)催化的反应中烷基化(Hancock,JF等，细胞57:1167-1177(1989))。随后，三个C-端氨基酸被裂解(Gutierrez,L等，EMBO J.8:1093-1098(1989))，而末端Cys被转化为甲基酯(Clark,S等，Proc.Nat’lAcad.Sci.(USA)85:4643-4647(1988))。某些形式的Ras也在半胱氨酸残基上紧邻Cys168的N-端可逆地棕榈酰化(Buss,JE等，分子细胞生物学，6:116-122(1986))。人们相信，这些修饰增加了Ras C-端的疏水性，导致其在细胞膜的表面定位。Ras在细胞膜表面的定位对于信号转导是必需的(Willumsen,BM等，科学，310:583-586(1984))。
Ras的致癌形式在相当大量的癌，包括超过50％结肠癌和超过90％的胰腺癌中观察到(Bos,JL，癌症研究，49:4682-4689(1989))。这些观察使人联想到，在介导信号转导的Ras的功能方面的干扰可能在治疗癌症方面有用。
以前，已经显示，Ras的C-端四肽是“CAAX”基序(其中C是半胱氨酸，A是脂族氨基酸，而X是任何氨基酸)。具有此结构的四肽已经显示出是异戊二烯基转移酶的抑制剂(Reiss等，细胞，62:81-88(1990))。这些早期的法尼基转移酶抑制剂较弱的效力促进了具有更理想的药物动力学行为的新抑制剂的研究(James,GL等，科学，260:1937-1942 (1993)；Kohl,NE等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA91:9141-9145(1994)；desolms,SJ等，药物化学杂志，38:3967-3971(1995)；Lerner,EC等，生物化学杂志，270:26802-26806(1995)；Lerner,EC等，生物化学杂志，270:26770(1995)；和James等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA 93:4454(1996))。
最近，已经显示，异戊二烯基转移酶的抑制剂可以在裸鼠体内阻断Ras-依赖的肿瘤的生长(Kohl,NE等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA91:9141-9145(1994))。另外，已经显示，超过70％的大量取样的肿瘤细胞系被异戊二烯基转移酶的抑制剂以超过非-转化的表皮细胞的选择性抑制(Sepp-Lorenzino,Ⅰ等，癌症研究，55:5302-5309(1995))。
发明提要
一方面，本发明涉及式Ⅰ或式Ⅱ化合物
原文P3结构式
式Ⅰ
式Ⅱ其中
R1是H或NR20R21；
R2是(CH2)mSR22,(CH2)mSSR22，取代或未取代的杂环，或取代或未取代的杂环低级烷基，其中m是1-6，而取代基是低级烷基，低级烯基，芳基，或芳基低级烷基；
各个R3和R7独立地是CH2或C(O)；
各个R4和R15独立地是H或低级烷基；
各个R5和R16独立地是H或选自低级烷基，硫代低级烷基，低级烯基，硫代低级烯基，环烷基，环烷基低级烷基，芳基，和芳基低级烷基的取代或未取代的部分，其中取代基是低级烷基，羟基，卤素，C(O)NR23R24，或COOH；
各个R6,R8,R9,R11,R12,R13和R17独立地是H或选自低级烷基，低级烯基，硫代低级烷基，环烷基，芳基，和芳基低级烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低级烷基，卤素，羟基，C(O)NR25R26,或COOH；
R10是S,SO，或SO2；
R18是COOR27或C(O)R28R29，或者，与R16一起形成-COOCH2CH2-。
R19是选自低级烷基，低级烯基，芳基和芳基低级烷基的取代(被一个或多个取代基；下同)或未取代部分，其中取代基是低级烷基(例如，烷基也可以被认为是取代基)，卤素，或烷氧基；和
各个R20,R21,R22,R23,R24,R25,R26,R27,R28和R29独立地是H或低级烷基；条件是，如果R2是(CH2)mSH且R5是硫代低级烷基，则R2和R5的游离的硫基可以形成二硫键；或其药用盐。
在一个方案中，该化合物是式Ⅰ的，其中R2是(CH2)mSR22，杂环，或杂环低级烷基；各个R4和R15独立地是H；R5是低级烷基；R6是H；各个R8,R9,R11和R12独立地是H或低级烷基；R10是S；R13是H；R16是低级烷基或取代的硫代低级烷基，其中取代基是低级烷基；R17是H。在此方案中，R1可以是NR20R21(例如，NH2)；R2可以是(CH2)mSR22(例如，CH2SH)；R3可以是CH2；各个R8和R9独立地可以是H；而R18可以是COOR27；而且，R5可以是CH(CH3)(CH2CH3),(CH2)3CH3,CH(CH3)2，或C(CH3)3；各个R11和R12独立地可以是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3。在同样的方案中，R1可以是H；R2可以是杂环或杂环低级烷基；R3可以是CH2；各个R8和R9独立地可以是H；而R18可以是COOR27，其中R27是H或低级烷基；而且，R2可以是咪唑基或咪唑基低级烷基；R5可以是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各个R11和R12独立地可以是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3。
在另一方案中，该化合物是式Ⅱ的，其中R2是(CH2)mSR20，杂环，或杂环低级烷基；各个R8,R9,R11和R12独立地是H或低级烷基；R10是S；R13是H；R15是H。在此方案中，R1可以是NR20R21；R2可以是(CH2)mSR22；R3可以是CH2；各个R8和R9独立地可以是H；R19可以是取代或未取代的芳基低级烷基，其中取代基是卤素或低级烷基；而且，R1可以是NH2；R2可以是CH2SH；各个R11和R12独立地可以是CH3；R19是2,3-二氯苄基或1-萘基甲基。在同样的方案中，R1可以是H；R2可以是杂环，或杂环低级烷基；R3可以是CH2；各个R8和R9独立地可以是H；R19可以是取代或未取代的芳基低级烷基，其中取代基是卤素或低级烷基；而且，R2可以是咪唑基或咪唑基低级烷基；各个R11和R12独立地可以是CH3；R19是2,3-二氯苄基或1-萘基甲基。
本发明的例子包括如下
化合物1；
化合物2；
化合物3；
化合物4；
化合物5；
化合物6；
化合物7；
化合物8；
化合物9；
化合物10；
化合物11；
化合物12；
化合物13；
化合物14；
化合物15；
化合物16；
化合物17；
化合物18；
化合物19；
化合物20；and
化合物21。
在另一方案中，本发明涉及由第一部分和第二部分组成的二聚化合物，其中第一和第二部分各自独立地是上面所示的式Ⅰ或式Ⅱ，只是第一部分的R2和第二部分的R2各自独立地是-(CH2)mS-和形成二硫键；或其药用盐。第一和第二部分可以相同或不同。确实，第一部分的R2和第二部分的R2也可以相同或不同。这类二聚化合物的例子示于如下
化合物22。
本发明的化合物可以具有不对称中心，并以外消旋体，外消旋混合物，和单个非对映体存在，所有可能的异构体，包括光学异构体，都包括在本发明中。简单地说，其中在结构式中没有描述特定的构型，被理解为表示所有的对映体形式和其混合物。
本文所用的“低级烷基”包括具有1-6个碳原子的饱和脂肪烃基。低级烷基的例子包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，等等。“低级烯基”包括具有2-6个碳原子并具有一个或多个双键的基团。烯基的例子包括乙烯基，烯丙基，异丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，1-丙烯基，2-丁烯基，2-甲基-2-丁烯基，异戊二烯基，等等。“低级烷氧基”包括具有1-6个碳原子的基团。低级烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，等等。所有烷基，烯基和烷氧基都可以是支链或直链的，但是非环状的。术语“环烷基”意指3-7员碳环。环烷基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基和环庚基。术语“卤素”意指氯，溴，碘，或氟。术语“杂环低级烷基”，“硫代低级烷基”，“硫代低级烯基”，“芳基低级烷基”和“羟基低级烷基”分别被1至3个杂环，硫基，硫基，芳基，和羟基取代。
本文中，“芳基”包括任何稳定的在各个环中最多7个成员的单环，双环，或三环碳环，其中至少一个环是芳香的。芳基的例子包括苯基，萘基，蒽基，联苯基，四氢萘基，二氢茚基，苯并蒽基，等等。
本文的术语杂环表示稳定的5-至7-员单环或稳定的8-至11-员双环，或稳定的11-至15-员三环杂环，它既可以是饱和的，也可以是未饱和的，并由碳原子和1至4个选自N,O，和S的杂原子组成，并包括任何其中上面定义的杂环与苯环稠合的双环基。杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子上连接。这类杂环元素的例子包括，但不限于，丫庚因基，苯并咪唑基，苯并异噁唑基，苯并呋咱基，苯并吡喃基，苯并硫代吡喃基，苯并呋喃基，苯并噻唑基，苯并噻吩基，苯并噁唑基，苯并二氢吡喃基，噌啉基，二氢苯并呋喃基，二氢苯并噻吩基，二氢苯并硫代吡喃基，二氢苯并硫代吡喃基砜，呋喃基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，吲哚啉基，吲哚基，异苯并二氢吡喃基，异吲哚啉基，异喹啉基，异噻唑烷基，吗啉基，1,5-二氮杂萘基，噁二唑基，2-氧代丫庚因基，2-氧代哌嗪基，2-氧代哌啶基，2-氧代吡咯烷基，哌啶基，哌嗪基，吡啶基，吡啶基N-氧化物，喹喔啉基，四氢呋喃基，四氢异喹啉基，四氢喹啉基，硫代吗啉基，硫代吗啉基亚砜，噻唑基，噻唑啉基，噻唑烷基，噻吩并呋喃基，噻吩并噻吩基，噻吩基，等等。
当基团被取代时，可以被取代一至四次。各种取代基可以连接在碳原子或杂原子(例如，S,N或O)上。
本发明化合物可以以药用盐的形式提供。可接受的盐包括，但不限于无机酸的加成盐，如乙酸盐，马来酸盐，富马酸盐，酒石酸盐，琥珀酸盐，柠檬酸盐，乳酸盐，甲磺酸盐，对甲苯磺酸盐，pamoate，水杨酸盐，草酸盐，和硬脂酸盐。也在本发明范围内，可应用的是由碱如氢氧化钠或氢氧化钾的盐形式。药用盐的其它例子参见，“药用盐，”J.Pharm.Sci.66:1(1977)。
另一方面，本发明涉及通过对主体施用治疗有效量的式Ⅰ或式Ⅱ化合物，在主体内，例如，哺乳动物如人体内抑制异戊二烯基转移酶(例如，法尼基转移酶或香叶基香叶基转移酶)的方法。具体地，本发明也涉及通过对主体施用治疗有效量的化合物或其盐在主体内治疗再狭窄或组织增生疾病(即肿瘤)的方法。组织增生疾病的例子既包括那些与良性(例如，非-恶性)细胞增生如纤维化，良性前列腺增生，动脉粥样硬化，和再狭窄相关的，也包括与恶性细胞增生，如癌症(例如，ras突变肿瘤)。可治疗的肿瘤的例子包括乳腺，结肠，胰腺，前列腺，肺，卵巢，表皮，和血癌(Sepp-Lorenzino，Ⅰ等，癌症研究55:5302(1995))。
治疗有效量的本发明化合物和药用载体物质(例如，碳酸镁，乳酸，或治疗化合物可以与其形成胶束的磷脂)一起形成对需要该化合物的主体给药(例如，口服，静脉内，经皮，或皮下)的药物组合物(例如，丸剂，片剂，胶囊，或液体)。丸剂，片剂，或胶囊可以用能够保护该组合物，在主体的胃内，足以使组合物在不消化地进入主体小肠的时间周期内不受胃酸或肠道酶作用的物质包衣。
用于治疗上述疾病或病症的本发明化合物的剂量依赖于给药的方式，主体的年龄和体重，被治疗的主体的状况，并最终由主治医生或兽医决定。由由主治医生或兽医决定的这类化合物的量本文称为“治疗有效量”。
也包括在本发明范围内的是式Ⅰ和式Ⅱ化合物的药物制剂，制备式Ⅰ或式Ⅱ化合物的方法，用于如本文所述这些合成中的新化学中间体。
本发明的其它方面和优点从发明详述和权利要求将显而易见。
发明详述
我们相信，本专业熟练的技术人员以本文的说明书为基础，将可以最大限度地应用本发明。因此，下列具体方案仅仅是举例说明，而不在任何意义上限制本发明。
除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的意义。而且，本文提到的所有出版物，专利申请，专利，和其它参考文献都引作本文参考。
下面是化合物1至12合成的叙述。本发明的其它化合物可以由本专业熟练的技术人员以类似的方法制备。
本发明化合物通过用标准液相肽合成法，以及其它标准操作如酯水解和胺通过醛的还原性烷基化制备，例如，如Greenstein等，氨基酸化学，Vols.1-3(J.Wiley,New York(1961))；和M.Bodanszky,et al.，肽合成操作(Springer-Verlag,1984))所述的。对于酰胺形成反应，EDC/HOBt或HBTU/DIEA/DMF被用作偶联剂。保护基的脱保护通过用TFA/DCM进行。用于胺的还原性烷基化的还原剂是氰基硼氢化钠。最终的产物通过用制备性HPLC纯化，并用1H NMR或质谱分析。
实施例1:N-[N’-[2-(S)-(2(R)-氨基-3-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物1)
(a)N-α-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸
将L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(2.5g,15.5mmol)在水(10ml)，二噁烷(20ml)，和2N氢氧化钠(7.8ml)中的溶液搅拌，并在冰水浴中冷却。加入重碳酸二叔丁基酯(3.72g,17.1mmol)，并在室温继续搅拌过夜。将溶液真空浓缩至约25ml，并加入乙酸乙酯(EtOAc；30ml)。溶液的pH值通过在0℃加入2N盐酸调节至2。分出有机层，水层用乙酸乙酯(20ml)萃取。将两个有机层合并，水洗(2次)，无水硫酸镁干燥，过滤，真空蒸发。得到标题化合物白色固体(3.60g；产率89％)，不经进一步纯化用于下步反应。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.68(m,2H),4.39(s,1H)4.23(s,1H),1.60-1.40(m,15H)。
(b)N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸]-L-甲硫氨酸甲酯
将N-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(1.00g,3.83mmol),1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC；0.734g；3.83mmol),1-羟基苯并三唑(HOBt；0.517g；3.83mmol),和二异丙基乙基胺(DIEA；0.495g；3.83mmol)的二氯甲烷(DCM；20ml)溶液在0℃搅拌10分钟。往此溶液中加入甲硫氨酸甲酯盐酸盐(0.765g,3.83mmol)。将混合物温热至室温并搅拌过夜。真空除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯，用5％柠檬酸洗涤(2次)，5％碳酸钠(2次)，和食盐水(2次)，无水硫酸镁干燥，并过滤。浓缩后所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱。得到标题化合物白色固体(1.09g；产率70％)。1H NMR(300MHz,CHCl3)δ6.67(d,1H),4.78-
4.60(m,3H),4.11(s,1H),3.75(s,3H),,2.55(m,2H),
2.24-2.00(m,5H),1.56-1.40(m,15H).
(c)N-(α-(叔丁氧羰基)-N-甲氧基-N-甲基-L-异亮氨酰胺
将N-α-(叔丁氧羰基)-异亮氨酸(8.00g,33.3mmol),O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基尿-六氟磷酸盐(HBTU；12.63g；33.3mmol),DIEA(17.21g；133.2mmol)的二甲基甲酰胺(DMF；35ml)溶液在室温下搅拌2分钟。往此溶液中加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.25g,33.3mmol)，将混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯，用5％柠檬酸洗涤(2次)，5％碳酸钠(2次)，和食盐水(2次)，无水硫酸镁干燥，并过滤。浓缩后所得的残余物通过硅胶柱色谱进一步纯化，用已烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱。得到8.5g(产率90％)标题化合物。1H
NMR (300 MHz,CDCl3)δ5.12(d,1H),4.62(m,1H),3.79(s,
3H),3.23(s,3H),1.72(m,1H),1.58(m,1H),1.45(s,9H),
1.30-1.05(m,1H),1.00-0.85(m,6H).
(d)N-α-(叔丁氧羰基)-L-异亮氨醛
将氢化铝锂(0.20g,5.25mmol)在20ml无水乙醚中于室温下搅拌30分钟。将悬浮液冷却至-45℃，往悬浮液中滴加N-α-(叔丁氧羰基)-N-甲氧基-N-甲基-L-异亮氨酰胺(1.10g,3.89mmol)在6ml四氢呋喃(THF)中的溶液。将混合物温热至0℃并搅拌2小时。然后将混合物冷却至-45℃。往此溶液中慢慢加入硫酸氢钾(1.17g)的水(10ml)溶液。产生的混合物滤过硅藻土。滤液用5％柠檬酸洗涤(2次)，食盐水(2次)，无水硫酸镁干燥，过滤，并浓缩至干。得到0.70g标题化合物无色油状物，并不经纯化立即用于下一步。
(e)N-[N’-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
将N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-L-甲硫氨酸甲酯(1.09g,2.68mmol)溶于TFA(15ml)和DCM(15ml)的混合物中，并搅拌30分钟。将溶液真空浓缩。将产生的残余物和N-α-(叔丁氧羰基)-L-异亮氨醛(0.70g,3.25mmol)溶于甲醇(MeOH；30ml)和乙酸(0.6ml)的混合物中。在30分钟内往此溶液中分批加入氰基硼氢化钠(0.204g,3.25mmol)。真空除去甲醇。往剩下的溶液中加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠。分出有机层并用饱和碳酸氢钠洗涤(1次)，水(1次)和食盐水(1次)，无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所得的残余物通过硅胶柱色谱进一步纯化，用乙酸乙酯/己烷(1∶2)洗脱。得到1.06g(产率78％)标题化合物。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.70(d,1H),4.68(m,1H),4.53(s,2H),3.90(m,1H),3.79(s,1H),3.75(s,3H),
3.42(s,1H),2.95(dd,1H),2.78(dd,1H),2.50-2.70(m,
2H),2.22(m,2H),2.13(s,3H),1.60-1.40(m,12H),1.36
(m,2H),1.38(m,2H),0.92(m,9H)；质谱
(电子喷射)((MS(Es)):505.4，计算的分子量
(calc.MW)=505.7.
(f)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛
通过用与N-α-(叔丁氧羰基)-L-异亮氨醛的合成中所述相同的过程，从N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨酸开始合成标题化合物。
(g)N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
将N-[N’-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(1.06g,2.10mmol)溶于三氟乙酸(TFA；15ml)和DCM(15ml)的混合物中，并在室温下搅拌30分钟。将溶液真空浓缩。将所得的残余物和N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(1.10g,2.46mmol)溶于甲醇(15ml)和乙酸(0.3ml)的混合物中。在30分钟内，往其中分批加入氰基硼氢化钠(0.158g,2.52mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入5ml饱和碳酸氢钠，真空除去甲醇。往剩下的溶液中加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠。分出有机层并用饱和碳酸氢钠(1次)和食盐水(2次)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤。真空干燥给出标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步。
MS(ES):836.5，计算值MW=836.8。
(h)N-[N’-[2-(S)-(2(R)-氨基-3-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸
在0℃将N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(0.50g,0.42mmol)溶于甲醇(16ml)和5N氢氧化钠(4ml)的混合物中并搅拌3小时。该溶液通过加入2N盐酸中和至pH7。真空除去甲醇并加入乙酸乙酯。将混合物冷却至0℃，水层通过加入2N盐酸酸化至pH2。分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取。将有机层澄清，用食盐水(1次)洗涤，无水硫酸镁干燥并过滤。将真空浓缩后所得的残余物溶于三氟乙酸(TFA；6ml),DCM(6ml)和三乙基甲硅烷(0.6ml)的混合物中。将溶液在室温搅拌40分钟。将真空浓缩后的残余物分配在乙醚和0.1％TFA水溶液之分出水相，制备性高效液相色谱(HPLC)纯化，用水/乙腈中的0.1％TFA缓冲液洗脱，冻干给出标题化合物。MS(ES):480.3，计算MW=480.8
实施例2:N-[N’-[2(S)-(2(R)-氨基-3-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(化合物2)
将N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(0.60g,0.718mmol；实施例1(g))溶于TFA(10mL),DCM(10ml)和三乙基甲硅烷(1ml)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。将溶液真空浓缩。残余物分配在1％TFA水溶液和乙醚之间。分出水层，通过HPLC纯化，冻干给出标题化合物。MS(ES):494.3，计算值MW=494.8。
实施例3:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物3)
(a)N-[N’-[(叔丁氧羰基)-t-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
将N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸]-L-甲硫氨酸甲酯(1.63g；4.01mmol；实施例1(b))溶于TFA(5ml)和DCM(5ml)的混合物中，并在室温下搅拌30分钟。将溶液真空浓缩。将残余物溶于甲苯，将溶液真空浓缩。将此过程重复3次，得到白色泡沫体。
将N-α-(叔丁氧羰基)-叔-亮氨酸(1.0g,4.01mmoD,EDC(0.769g,4.01mmol),HOBt(0.650g,4.81mmol)，和DIEA(0.570g,4.41mmol)在DCM(15ml)中的溶液在室温下搅拌30分钟。往其中加入上述白色泡沫体。将混合物搅拌过夜。将溶液用DCM(15ml)稀释，并用5％碳酸氢钠(2次)，5％柠檬酸(2次)，和食盐水(2次)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过柱层析纯化，用己烷∶乙酸乙酯92∶1)和己烷∶乙酸乙酯(1∶1)洗脱。得到0.63g标题化合物(产率30％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3) δ6.48(d,1H),5.25(d,1H),5.12(d,1H),4.95-4.62(m,2H),4.43-4.30(m,2H),3.77(s,3H),2.58(m,2H),2.21,(m,1H),2.11(s,3H),2.04(m,1H),1.55-1.33(m,12H),1.12-0.94(m,12H).
(b)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
将0.6g(1.15mmol)N-[N’-[叔丁氧羰基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯溶于TFA(5ml),DCM(5ml)和三乙基甲硅烷(Et3SiH)(1ml)的混合物中，并在室温下搅拌30分钟。将溶液真空浓缩。将残余物溶于甲苯，并将溶液浓缩至干。重复此过程直至得到白色泡沫体(4次)。将此泡沫体和0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(实施例1(f))溶于4ml甲醇和0.2ml乙酸中。往此混合物中加入NaBH3CN(72mg,1.15mmol)，并将其搅拌30分钟。加入0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛和72mg(1.15mmol)NaBH3CN。将反应混合物搅拌30分钟。然后再加入0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛和72mg(1.15mmol)NaBH3CN，接着加入0.1ml乙酸。将溶液搅拌过夜并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯并用饱和碳酸氢钠(2次)和食盐水(2次)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。残余物通过用柱色谱(硅胶)纯化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶2)和乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。得到930mg(产率95％)标题化合物白色固体。MS(ES):850.5计算值MW=850.8。
(c)N-[N’-[N”(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸
在0℃将230mg(0.27mmol)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯溶于2ml甲醇。往其中加入0.4ml 1N氢氧化钾溶液。通过加入0.8ml THF溶解白色沉淀。将混合物温热至室温并搅拌1.5小时。在0℃往溶液中加入2N盐酸直至pH约为2。通过加入乙酸乙酯将溶液稀释至25ml，然后加入10ml食盐水。分出有机层，无水硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩给出白色固体(220mg)。将白色固体溶于5ml DCM和1ml三乙基甲硅烷(Et3SiH)的混合物中。往其中加入5ml TFA，并将溶液搅拌40分钟。将溶液真空浓缩。将白色固体用己烷研制，然后溶于0.1％TFA水溶液中。将其用制备性HPLC纯化，冻干给出标题化合物(47mg；产率36％)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.28(d,1H),5.02(d,1H),4.74(d,1H),4.66(m,1H),4.53(s,1H),4.47(m,1H),3.30(m,2H),2.77(m,2H),2.58(m,1H),2.51(m,4H),2.03(m,4H),1.82(m,1H)1.54(s,2H),1.38(s,3H),1.03-0.88(m,12H)；MS(ES):494.2,Calc.MW=494.7
实施例4:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(化合物4)
将660mg(0.776mmol)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(实施例3(b))溶于DCM(5ml)和Et3SiH(1ml)的混合物中。往其中加入5mlTFA。混合物被搅拌0.5小时。将溶液真空浓缩。残余物用己烷研制，然后溶于0.1％TFA水溶液中。通过制备性HPLC纯化，梯度洗脱(缓冲液A:0.1％TFA水溶液，缓冲液B:0.1TFA乙腈溶液)。冻干给出标题化合物白色固体(310mg；产率78％)。MS(ES):508.3，计算值MW=508.8。
实施例5:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸(化合物5)
通过用与实施例3的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):476.2，计算值MW=476.3。
实施例6:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸甲酯
通过用与实施例4的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):490.3，计算值MW=490.7。
实施例7:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)缬氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸(化合物7)
通过用与实施例3的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):462.4，计算值MW=462.7。
实施例8:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)缬氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸甲酯(化合物8)
通过用与实施例4的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):476.3，计算值MW=476.7。
实施例9:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)缬氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物9)
通过用与实施例3的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):480.3，计算值MW=480.7。
实施例10:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)缬氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸-甲酯(化合物10)
通过用与实施例4的合成中所述的类似过程合成标题化合物。MS(ES):494.3，计算值MW=494.8。
实施例11:[N-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺(化合物11)
(a)[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺
将N-α-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(0.65g,2.50mmol；实施例1(a)),HBTU(0.948g,2.50mmol)，和DIEA(1.3g,10mmol)DMF(25ml)溶液在室温下搅拌3分钟。往其中加入2,3-二氯苄基胺(0.44g,2.50mmol)。将混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，并将残余物溶于乙酸乙酯中，用5％碳酸氢钠(2次)，5％柠檬酸(2次)，和食盐水(2次)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。用乙酸乙酯∶己烷(1∶2)层析后得到标题化合物(0.83g；产率79％)。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ7.40(m,2H),7.18(m,1H),6.55(bs, 1H),4.65(m,3H),4.52(m,1H),4.07(s,1H),1.58(s,3H), 1.20,(m,12H)。
(b)[N-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺
将[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺(0.419g,1mmol)溶于10ml在DCM中的50％TFA中。将混合物在室温下搅拌0.5小时。真空除去TFA和溶剂。将残余物和N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(2mmol；实施例1(f))溶于甲醇(10ml)和乙酸(0.2ml)。往其中分批加入氰基硼氢化钠(94mg,1.5mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，并将残余物溶于乙酸乙酯。溶液用5％碳酸氢钠(2次)，5％柠檬酸(2次)和食盐水(2次)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。将残余物溶于15ml DCM和2ml三异丙基甲硅烷中。往溶液中加入10ml TFA。反应混合物在室温下搅拌0.5小时。将溶液真空浓缩，产生的残余物分配在0.1％TFA水溶液和乙酸乙酯之间。有机层真空浓缩。残余物用己烷研制，然后通过HPLC纯化。冻干给出标题化合物(339mg；产率83％)。MS(ES):407.0,Calc.Mw=407.4.1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.21(bs,2H),7.61(t,1H),7.41(dd,1H),7.27(dd,1H),7.19(dd,1H),4.55(d,2H),4.43(d,1H),3.88,(d,1H),3.28(s,1H),3.22(m,1H),3.10(m,2H),2.79(m,2H),1.73(bs,1H),1.57(s,3H),1.38(s,3H)。
实施例12:[N-(2(R)-氨基-3-巯基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]萘甲酰胺(化合物12)
用类似于实施例11的过程合成标题化合物。
MS(ES): 389.1,Calc.MW=389.6 1H NMR(300MHz,CDC13)δ8.15(d,1H),7.90(m,1H),7.82(d,1H),7.61-7.41(m,5H),5.22(dd,1H),4.63(dd,1H),4.39(d,1H),3.78(d,1H),3.24(s,1H),2.97(m,2H),2.76(m,1H),2.48(m,2H),1.57(s,3H),1.40(s,3H),1.28(m,1H).
其它方案
应该理解，在本发明结合其详细说明进行描述时，前述说明只是举例说明，而不限制本发明的范围，该范围在权利要求书中定义。其它方面，优点和修饰在权利要求的范围中。
权利要求
1．式Ⅰ或式Ⅱ化合物原文P29结构式
式Ⅰ
式Ⅱ
其中
R1是H或NR20R21；
R2是(CH2)mSR22,(CH2)mSSR22，取代或未取代的杂环，或取代或未取代的杂环低级烷基，其中m是1-6，而取代基是低级烷基，低级烯基，芳基，或芳基低级烷基；
各个R3和R7独立地是CH2或C(O)；
各个R4和R15独立地是H或低级烷基；
各个R5和R16独立地是H或选自低级烷基，硫代低级烷基，低级烯基，硫代低级烯基，环烷基，环烷基低级烷基，芳基，和芳基低级烷基的取代或未取代的部分，其中取代基是低级烷基，羟基，卤素，C(O)NR23R24，或COOH；
各个R6,R8,R9,R11,R12,R13和R17独立地是H或选自低级烷基，低级烯基，硫代低级烷基，环烷基，芳基，和芳基低级烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低级烷基，卤素，羟基，C(O)NR25R26,或COOH；
R10是S,SO，或SO2；
R18是COOR27或C(O)R28R29，或者，与R16一起形成-COOCH2CH2-；
R19是选自低级烷基，低级烯基，芳基和芳基低级烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低级烷基，卤素，或烷氧基；和
各个R20,R21,R22,R23,R24,R25,R26,R27,R28和R29独立地是H或低级烷基；条件是，如果R2是(CH2)mSH且R5是硫代低级烷基，则R2和R5的游离的硫基可以形成二硫键；或其药用盐。
2．权利要求1的化合物，其中所说的化合物具有式Ⅰ；或其药用盐。
3．权利要求1的化合物，其中所说的化合物具有式Ⅱ；或其药用盐。
4．权利要求2的化合物，其中R2是(CH2)mSR22，杂环，或杂环低级烷基；各个R4和R15独立地是H；R5是低级烷基；R6是H；各个R8,R9,R11和R12独立地是H或低级烷基；R10是S；R13是H；R16是低级烷基或取代的硫代低级烷基，其中取代基是低级烷基；R17是H；或其药用盐。
5．权利要求4的化合物，其中R1是NR20R21而R2是(CH2)mSR22；或其药用盐。
6．权利要求5的化合物，其中R3是CH2；各个R8和R9独立地是H；而R18是COOR27；或其药用盐。
7．权利要求6的化合物，其中R1是NH2；R2是CH2SH；R5是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各个R11和R12独立地是CH3；R16是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3，或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3；或其药用盐。
8．权利要求4的化合物，其中R1是H；R2是杂环或杂环低级烷基；或其药用盐。
9．权利要求8的化合物，其中R3是CH2；各个R8和R9独立地是H；而R18可以是COOR27；或其药用盐。
10．权利要求9的化合物，其中R2是咪唑基或咪唑基低级烷基；R5是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各个R11和R12独立地是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3；或其药用盐。
11．权利要求3的化合物，其中R2是(CH2)mSR20，杂环，或杂环低级烷基；各个R8,R9,R11和R12独立地是H或低级烷基；R10是S；R13是H；而R15是H；或其药用盐。
12．权利要求11的化合物，其中R1是NR20R21；而R2是(CH2)mSR22；或其药用盐。
13．权利要求12的化合物，其中R3是CH2；R8和R9是H；而R19是取代或未取代的芳基低级烷基，其中所说的取代基是卤素或低级烷基；或其药用盐。
14．权利要求13的化合物，其中R1是NH2；R2是CH2SH；各个R11和R12独立地是CH3；而R19是2,3-二氯苄基或1-萘基甲基；或其药用盐。
15．权利要求11的化合物，其中R1是H且R2是杂环或杂环低级烷基；或其药用盐。
16．权利要求15的化合物，其中R3可以是CH2；各个R8和R9独立地是H；R19可以是取代或未取代的芳基低级烷基，其中所说的取代基是卤素或低级烷基；或其药用盐。
17．权利要求16的化合物，其中R2是咪唑基或咪唑基低级烷基；各个R11和R12独立地可以是CH3；而R19是2,3-二氯苄基或1-萘基甲基；或其药用盐。
18．权利要求1的化合物，所说的化合物是下式的
19．由第一部分和第二部分组成的化合物，其中所说的第一和第二部分各自独立地是权利要求1式Ⅰ或式Ⅱ，除了第一部分的R2和第二部分的R2各自独立地是-(CH2)mS-并形成二硫键；或其药用盐。
20．权利要求19的化合物，其中所说的第一和第二部分是相同的；或其药用盐。
21．治疗需要治疗的受治者的肿瘤或再狭窄的方法，包括对所说的受治者施用治疗有效量的权利要求1的化合物或盐。
22．权利要求21的方法，其中所说的化合物或盐是权利要求18的。
23．权利要求22的方法，其中所说的化合物或盐是权利要求19的。
全文摘要
一系列可以抑制异戊二烯基转移酶活性的化合物。该化合物由两个式(Ⅰ)和(Ⅱ)之一覆盖。各个R基团在说明书中定义。
文档编号A61K31/33GK1223642SQ9719590
公开日1999年7月21日 申请日期1997年5月6日 优先权日1996年6月28日
发明者董正欣, 金善赫 申请人:生物测量公司