专利名称：治疗或预防前列腺癌的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗或预防前列腺癌的新组合物、化合物在制备治疗或预防前列腺癌的药物制剂中的应用和通过对温血动物给药有效量的该化合物来治疗或预防前列腺癌的方法。
背景技术：
已知睾酮5α还原酶抑制剂可作为良性前列腺肥大的治疗试剂，其是通过抑制过量雄性激素(主要为二氢睾酮)引起的前列腺细胞生长的机理缩小前列腺体积。另外，睾酮5α还原酶抑制剂如非那司提在美国和欧洲作为良性前列腺肥大的治疗试剂出售。还有一些睾酮5α还原酶抑制剂，为了开发它们作为前列腺癌的治疗试剂，正在对它们进行临床研究。
对前列腺的缩小作用与睾酮5α还原酶抑制剂活性的效能相对应。与良性前列腺肥大不同，对前列腺癌的治疗作用不只与睾酮5α还原酶抑制剂活性的效能相对应，因为前列腺癌增生涉及到许多因素。发明公开所有本申请的化合物并不都是未知化合物；例如日本专利申请(公开)号平8-73492和日本专利申请(公告)号平8-19151公开了化合物N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，其为睾酮5α还原酶抑制剂。
本发明的发明人对具有睾酮5α还原酶抑制剂活性的衍生物的合成及其药理活性进行了多年认真的研究。本发明人发现正如上面提到的具有特定结构的化合物具有良好的前列腺癌治疗或预防作用，从而完成了本发明。
本发明的目的是提供治疗或预防前列腺癌的组合物。另外，本发明的还有一个目的是提供上述化合物在制备治疗或预防前列腺癌的药物中的应用，和通过对温血动物给药有效量的上述化合物来治疗或预防前列腺癌的方法。
也就是说，本发明的用于治疗或预防前列腺癌的新组合物含有作为活性成分的下面式(I)所示的化合物、其可药用的盐或者该化合物的其它衍生物，优选的活性成分是N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，更优选的是口服给药。
另外，下面式(I)所示的化合物、其可药用的盐或者该化合物的其它衍生物在制备治疗或预防前列腺癌的药物中的新应用，优选N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺在制备治疗或预防前列腺癌药物中的应用，更优选地，该药物以口服给药。
而且，本发明的新治疗或预防方法是一种治疗或预防前列腺癌的方法，包括对温血动物给药有效量的下面式(I)所示化合物、其可药用的盐或者该化合物的其它衍生物，一种优选的治疗或预防前列腺癌的方法包括对温血动物给药有效量的N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，更优选地口服给药。
其中，R1和R2可以相同或不同，它们表示H、OH或低级烷氧基。
在式(I)中术语“低级烷氧基”表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基团，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、s-丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、2-甲基丁氧基、新戊氧基、正己氧基、4-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、2-甲基戊氧基、3，3-二甲基丁氧基、2，2-二甲基丁氧基、1，1-二甲基丁氧基、1，2-二甲基丁氧基、1，3-二甲基丁氧基和2，3-二甲基丁氧基，优选具有1-4个碳原子的直链或支链烷氧基团，更优选甲氧基。
术语“其可药用的盐”表示可转变成其盐的本发明化合物(I)的盐，这样的盐的例子优选包括碱金属盐如钠盐、钾盐和锂盐，碱土金属盐如钙盐和镁盐，和金属盐如铝盐、铁盐和锌盐。
另外，本发明的化合物(I)置于空气中时可能吸湿，因此该化合物可能含有一部分吸收水，或者它可转变成相应的水合物。这样的化合物也包括在本发明的范围中。
根据下面所示的方法可以制备本发明的化合物(I)。方法A
其中的R1和R2的意义如上所述。
方法A是通过羧酸衍生物(II)和胺衍生物(III)的缩合反应制备所需要的化合物(I)的方法。
步骤A1是通过化合物(II)或其活性衍生物与化合物(III)的反应制备化合物(I)。该反应根据传统的肽合成方法进行，例如叠氮化物方法、活性酯方法、混合酐方法或缩合方法。
在上述方法中，叠氮化物方法进行如下在惰性溶剂(例如二甲基甲酰胺)中，化合物(II)或其酯与肼在室温下反应生成氨基酸酰肼。该氨基酸酰肼与亚硝酸化合物反应得到叠氮化物衍生物，然后用胺衍生物(III)处理该叠氮化物衍生物。
此处所用的亚硝酸化合物可以包括例如，碱金属亚硝酸盐如亚硝酸钠或亚硝酸烷基酯如亚硝酸异戊酯。
优选反应在惰性溶剂中进行，此处所用的溶剂可以包括例如，酰胺类如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺、亚砜类如二甲亚砜和吡咯烷酮类如N-甲基吡咯烷酮。两步反应(制备叠氮化物和酰胺衍生物(I))通常在一个反应罐中进行。前一反应的反应温度为-50℃-0℃，反应时间为5分钟到1小时；后一反应的反应温度为-10-10℃，反应时间为10小时到5天。
活性酯方法如下进行化合物(II)与活性酯化试剂反应生成活性酯，然后该活性酯与胺衍生物(III)反应。
这两个反应均优选在惰性溶剂中进行，此处所用的溶剂可以包括例如卤代烃类如二氯甲烷和氯仿、醚类如乙醚和四氢呋喃、酰胺类如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺和腈类如乙腈。
此处所用的活性酯化试剂可以包括例如N-羟基化合物如N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑和N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二羧酰胺或二硫化物如二硫联吡啶。活性酯化反应优选在缩合试剂存在下进行，如在二环己基碳二亚胺、羰基二咪唑或三苯基膦存在下进行。
活性酯化反应的反应温度为-10-100℃，活性酯与胺衍生物(III)的反应约在室温下进行，两个反应的反应时间均为30分钟至80小时。
在活性酯与胺的反应中，可以把4-二甲基氨基吡啶加入到反应系统中。
混合酐方法进行如下制备化合物(II)的混合酐，然后该混合酐与胺衍生物反应。
制备混合酐衍生物的反应是这样完成的化合物(II)与形成混合酐衍生物的试剂[例如，卤代碳酸低级(C1-C4)烷基酯如氯碳酸乙酯和氯碳酸异丁酯、低级烷酰氯如新戊酰氯、低级烷基或二芳基氰基磷酸酯如氰基磷酸二乙酯和氰基磷酸二苯酯、或磺酰卤如2，4，6-三异丙基苯磺酰氯、对甲苯磺酰氯和甲磺酰氯]在惰性溶剂(如上面所述的卤代烃、酰胺和醚)中反应。该反应优选在有机胺如三乙胺和N-甲基吗啉存在下进行，反应温度为-10℃至50℃，反应时间为30分钟至20小时。
混合酐衍生物与胺衍生物(III)的反应优选在惰性溶剂(例如上面所述的卤代烃、酰胺和醚)存在下进行。反应温度为0-80℃，反应需要的时间为1-48小时。
该反应是在化合物(II)、化合物(III)和形成混合酐衍生物的试剂的共同存在下并且在不分离混合酐衍生物的情况下进行。
缩合方法如下进行在缩合试剂如二环己基碳二亚胺、羰基二咪唑或2-氯-1-甲基吡啶噁碘化物/三乙胺存在下，化合物(II)与胺衍生物(III)直接反应。通过与制备活性酯反应中记载的相似方式进行该反应。
如果R1和R2中存在保护的羟基，可以根据传统方法除去该保护基团。
原料化合物(II)或其活性酯是已知的，或者根据已知方法制备[例如，药物化学杂志(J.Med.Chem.，)27，1690(1984)；药物化学杂志(J.Med.Chem.，)29，2298(1986)]。
另外，化合物(III)是已知的或根据已知方法制备[例如合成(Synthesis)，593(1976)；有机化学杂志(J.Org.Chem.，)36，305(1971)Angew.Chem.，82，138(1970)；合成(Synthesis)，24(1978)；合成通迅(Synthetic Commun.，18，777(1988))；合成通迅(Synthetic Commun.，18，783(1988))；有机反应(Organic Reaction)，3，337(1946)；有机合成(Org.Synthesis)，51，48(1971)；四面体(Tetrahedron)30，2151(1974)；和有机化学杂志37，188(1972)]，和例如，根据合成(Synthesis)，P.24(1978)中记载的方法制备本发明中具有H2N-C(Me)(Me)-Ph(R1)(R2)部分的原料化合物。该反应方案表示如下
(其中R1和R2具有上面所述同样的意义，Me表示一个甲基，Ph表示一个苯基)，和包括一个格利雅反应、一个羟基的叠氮化反应和一个还原反应。[附图的简要说明]
图1表示实施例1中对人前列腺癌的抗肿瘤效应。
纵坐标 肿瘤体积的相对比例(以对数表示)横坐标 开始给药后的天数交叉点 对照组黑点非那司提给药组圆点化合物I给药组化合物IN-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[本发明的最佳实施方式]下面将以实施例和参考实施例更详细地描述本发明，但本发明的范围不局限于此。实施例1 抗肿瘤活性试验1购自美国典型培养物中心(ATCC)的培养细胞系人前列腺癌细胞株LNCaP，在雄性和雌性裸鼠中再次皮下培养5-6次，得到能可靠地从皮下取出的实体瘤。该人前列腺癌细胞株用于本试验。把该细胞株一个3平方毫米的实体瘤部分移植到BALB/cAJcl-nu裸鼠(Nippon Clea，雄性，已出生8星期)腋窝部分皮下。把20天后可靠地取出肿瘤的小鼠随机指定到每组含有8-10只动物的组中。N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(化合物I，100mg/kg)或非那司提(100mg/kg)对小鼠口服给药，每天早晨一次，每次剂量0.1ml/10g体重，连续给药28天。一星期测量肿瘤直径两次，从最大轴(a)和最小轴(b)算出肿瘤体积V(V＝ab2/2)。每只鼠的相对体积比用Vn/Vo表示。根据每只鼠的相对体积比确定肿瘤生长抑制率(％)。
肿瘤生长抑制率(％)＝(1-Vn/Vo)×100
Vn第n天的肿瘤体积Vo给药第1天的肿瘤体积结果图1显示相对体积比数据。
非那司提购自美国和欧洲，其作为良性前列腺肥大的治疗药物，目前其作为治疗前列腺癌药物的临床研究正在进行。
图1表明非那司提不显示任何肿瘤生长抑制活性，然而化合物1显示肿瘤生长抑制活性，其中经28天最大的肿瘤抑制率为30％。因此，化合物1作为前列腺癌的治疗试剂是有用的。实施例2抗肿瘤活性试验2本试验中应用没有胸腺的雄性裸鼠(年龄约4-5星期)。在无菌条件下饲养裸鼠。
人前列腺癌LNCaP细胞购自美国典型培养物中心(ATCC)。LNCaP细胞(5×106)皮下移植到裸鼠中形成实体瘤，然后用于本试验。
麻醉状态下，裸鼠的下腹切开约2cm，暴露前列腺。小心切开前列腺膜，然后把LNCaP肿瘤部分插入其中。用可吸收的缝线缝合前列腺膜开口。前列腺返回至腹腔中，用可吸收的缝线缝合下腹部切口。这些小鼠随机分配至每组20只动物的组中。这些组指定如下化合物1组给药化合物1(20mg/kg)，非那丝提组给药非那丝提(20mg/kg)，对照组不给药。
当鼠的肿瘤长至能在体外测量时即可证实该移植的肿瘤已经进入到鼠中，然后开始给药化合物1和非那司提。每天以如上所述的剂量口服给药化合物1和非那司提。根据实施例1公式算出移植肿瘤的体积。另外，当小鼠由于癌症死亡时立即进行尸体剖检，对肿瘤称重。同时确证转移的存在。通过用10％福尔马林固定后植入石蜡制备转移的组织部分。用苏木紫和曙红对这些组织部分着色，然后检测转移。
对所有组的移植肿瘤重量进行“学生”t-检验。另外，每组的移植情况进行Fisher’s检验。关于寿命延长作用，将用于比较的两组进行Mann-Whitney U-检验和“学生”t-检验。特别地，对肿瘤移植63天后的存活率进行Pearson的x2检验。在这些检验中，低于5％的危险率视为显著。结果表1实验组存活率(％)对照组0化合物1 56非那司提 22表1明显表明与非那司提组相比，化合物1组显示有高得多的存活率。参考实施例1N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺1克3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17-羧酸、1.6克三苯基膦和1.4克2，2′-二吡啶二硫化物依次加入到30毫升无水甲苯中，该混合物室温搅拌过夜。然后反应混合物在35g硅胶上进行柱色谱，用丙酮-二氯甲烷(1∶9-1∶1)洗脱，得到1.11克2-吡啶硫代酯衍生物按照上面类似方式合成的5.0克2-吡啶硫代酯衍生物和5.0克1-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基胺依次加入到30毫升无水二氯甲烷中，该混合物室温搅拌3天。然后用100ml二氯甲烷稀释该反应混合物，依次用1N盐酸、水、碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，减压浓缩。残余物在15g硅胶上进行柱层析，用丙酮-二氯甲烷(1∶9-1∶1)洗脱。得到5.2g标题化合物。NMR谱(CDCl3)δppm0.68(3H，s)，0.98(3H，s)，0.90-2.20(16H，m)，1.70(3H，s)，1.72(3H，s)，3.35(1H，t，J＝9Hz)，3.80(3H，s)，5.48(1H，br).5.76(1H，br)，5.83(1H，d，J＝10Hz)，6.82(1H，d，J＝10Hz)，6.88(2H，d，J＝9Hz)，7.32(2H，d，J＝9Hz)IR谱vmax cm-1(KBr)2969，2938，1672，1599，1514，1455，1248，1181，1035，825[工业实用性]本发明的化合物1具有良好的抗肿瘤活性，并且其毒性低。因此它可用作治疗肿瘤或预防前列腺癌的组合物。
本发明的化合物(I)或其可药用的盐可以用作治疗或预防前列腺癌的组合物。化合物(I)本身或化合物(I)与合适的可药用辅料和稀释剂等组成的混合物可以作为片剂、胶囊、粒剂、粉剂或糖浆剂口服。
熟练本领域的技术人员应用添加剂通过熟知的标准技术可以制备这些药物制剂。其中的添加剂是辅料(例如，有机辅料如糖衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙和内桥式羧甲基纤维素钠；阿拉伯树胶；葡聚糖和Pullulan；和无机辅料如硅酸盐衍生物，如轻质二氧化硅，合成硅酸铝和镁偏硅酸铝酸盐；磷酸盐如磷酸钙；碳酸盐如碳酸钙；和硫酸盐如硫酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸金属盐如硬脂酸钙和硬脂酸镁；滑石粉；胶态硅；蜡如蜂蜡和鲸蜡；硼酸；己二酸；硫酸盐如硫酸钠；脂肪族二元醇类；富马酸、苯甲酸钠；DL亮氨酸；脂肪酸钠；月桂基硫酸盐如月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁；硅酸如硅酸酐和硅酸水合物；和上面提到的淀粉衍生物)；粘合剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮，Macrogol和上面辅料中记载的相同化合物)；崩解剂(例如，与上面辅料中记载的相同化合物)；和化学改性淀粉和纤维素如Crosscarmelose钠，羧甲基淀粉钠和桥式聚乙烯吡咯烷酮)；稳定剂(例如对羟基苯甲酸酯如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)；醇类例如氯丁醇、苯甲醇和苯乙醇；苯扎氯铵；酚类如苯酚和甲氧甲酚；硫汞撒；脱氢醋酸；和己二烯酸)；矫味剂(例如，甜味剂、致酸剂和常用的芳香化学品)；和稀释剂。
根据患者的年龄和健康状况，所用的剂量可以变化。例如下列剂量是可取的每次给药下限为0.001m/Kg体重(优选0.01mg/kg体重)，每次给药上限为20mg/kg体重(优选1mg/kg体重)，根据症状不同，一天可给药一次到数次。
下面表示制剂实施例。然而，本发明的范围不限于这些实施例。
制剂实施例1胶囊参考实施例1中化合物 20.0mg乳糖158.7mg玉米淀粉70.0mg硬脂酸镁1.3mg250mg混合上面所述的粉末，用60目的筛子过筛，得到的粉末在250mg的3号明胶胶囊中包封，得到胶囊。
制剂实施例2片剂参考实施例1中化合物20.0mg乳糖 154.0玉米淀粉 25.0硬脂酸镁 1.0200mg混合上面所述的粉剂，用压片机制成片剂，得到200mg的片剂。如果必要，该片剂可以包糖衣。
权利要求
1.治疗或预防前列腺癌的组合物，含有式(I)化合物或者具可药用的盐或该化合物的其它衍生物作为活性成分
其中R1和R2可以相同或不同，它们表示H、OH或低级烷氧基。
2.根据权利要求1所述的治疗或预防前列腺癌的组合物，其中的活性成分为N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺。
3.根据权利要求1或2所述的治疗或预防前列腺癌的组合物，其中该组合物口服给药。
4.式(I)化合物或其可药用的盐或该化合物的其它衍生物在制备治疗或预防前列腺癌药物制剂中的用途，
其中R1和R2可以相同或不同，它们表示H、OH或低级烷氧基。
5.权利要求4所述的N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺在制备治疗或预防前列腺癌药物制剂中的用途。
6.根据权利要求4或5所述的化合物在制备治疗或预防前列腺癌药物制剂中的用途，其中该化合物口服给药。
全文摘要
下式(Ⅰ)化合物用于一种新组合物;该组合物具有治疗或预防前列腺癌的作用。其中R
文档编号A61K31/58GK1252805SQ98804295
公开日2000年5月10日 申请日期1998年2月26日 优先权日1997年2月26日
发明者小岛孝一, 小林知雄 申请人:三共株式会社