专利名称：喹唑啉化合物在治疗多囊肾病中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些喹唑啉化合物在治疗多囊肾病中的应用。
多囊肾病以两种类型发生常染色体隐性(ARPKD)和常染色体显性多囊肾病(ADPKD)。这两种类型的疾病有着不同的遗传基础，现已鉴别出导致ADPKD的两种基因，但还未能识别导致ARPKD的基因。然而这两种疾病的表征非常相似。它们都是肾小管上皮细胞过度增生的结果，细胞增生最终形成囊而破坏肾小管的结构，导致慢性肾衰。囊形成的原因越来越清楚，那就是，有足够的证据表明在所述病变组织的囊液中生长因子EGF/TGFα(这两种生长因子共享同一种细胞受体)的水平大大提高了。此外，人们还注意到在ARPKD和ADPKD中EGF受体错位，它出现在邻近囊液的腔表面，与底外侧区相对，就像在正常肾小管上皮细胞与底外侧区相对一样。据显示，TGFα和EGF还在体外诱发肾组织中囊的形成。另外，转基因小鼠中TGFα的过度表达是一种体内细胞发生，即TGFα连续过度表达的动物将发展为肾囊。此外，肾囊液含有致有丝分裂浓度的EGR和EGF样肽，最终囊样肾组织具有增加了的TGFα的表达。
EP-A-0787722公开了下文定义的用作抗肿瘤剂的式1化合物。
本发明涉及一种治疗或抑制哺乳动物的多囊肾病的方法，包括给需此治疗的哺乳动物施用式1化合物
其中X是可任意地被一个或多个选自下述取代基取代的苯基卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7个碳原子的烷氧羰基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的链烷酰氨基；
R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；Y是选自下述的基团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；n＝2-4；或其可药用盐，条件是Y的各个R3可以相同或不同。
可药用盐由例如下述的有机酸和无机酸衍生乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、葡糖酸、氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸和类似的公知可药用酸。
烷基、烷氧基、烷氧羰基、烷基羰基和链烷酰氨基取代基的烷基部分包括直链和支链的碳链。羧基被定义为-CO2H基团。2-7个碳原子的烷氧羰基被定义为-CO2R”基团，其中R”是1-6个碳原子的烷基。烷基羰基被定义为-COR”基团，其中R”是1-6个碳原子的烷基。当X被取代时，它优选为单、双或三取代的，单取代是最优选的。当本发明的化合物包含非对称中心时，本发明包括各种R和S对映体单体以及这类化合物的外消旋体。
本发明的化合物中，优选的化合物包括其中R、R1和R2是氢的那些化合物；和其中R、R1和R2是氢并且X是未取代的或是被卤素或1-6个碳原子的烷基单取代的那些化合物。
流程图A中描述了式9所包括的本发明化合物的制备，其中R、R1、R2、R3、X和n定义如上并且R4是1-6个碳原子的烷基(优选异丁基)，Y’是选自下述的基团
其中各个R’3独立地是1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基。根据流程图A中所描述的反应顺序，于约100℃在有或没有含过量二甲基甲酰胺醛缩二甲醇的溶剂的存在下，将式2的5-硝基氨茴腈加热转化为式3的脒。将脒3和苯胺4的乙酸溶液加热1-5小时得到式5的6-硝基-4-苯氨基喹唑啉。使用还原剂如铁在乙酸-醇混合液中在升高的温度下还原式5的硝基，得到式6的6-氨基-4-苯氨基喹唑啉。用式7的酰氯或式8的混合酸酐(由相应的羧酸制备)在惰性溶剂，如四氢呋喃(THF)中，在有机碱，如吡啶或三乙胺的存在下，将6酰化得到式9表示的本发明化合物。在所述情况下，其中7或8具有非对称碳原子时，可使用它们的外消旋或者R或S对映体单体的形式，此时，本发明的化合物也将分别是外消旋或者R或S旋光活性形式。制备本发明化合物所需的式2的5-硝基氨茴腈是本领域已知的或者可采用本领域已知的方法制备，可参见例如下述文献描述的方法Baudet，Recl.Tray.Chim.Pays-Bas，43，710(1924)；Hartmans，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas，65，468，469(1946)；Taylor等，美国化学协会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)，82，6058，6063(1960)；Taylor等，美国化学协会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)，82，3152，3154(1960)；Deshpande；Seshadri，化学杂志(Indian J.Chem.)，11.538(1973)；Katritzky，Alan R.；Laurenzo.Kathleen S.，有机化学杂志(J.Org.Chem.)，51(1986)；Niclas，Hans-Joachim；Bohle，Matthias；Rick，Jens-Detlev；Zeuner，Frank；Zoelch，Lothar，Z.Chem.，25(4)，137-138(1985)。
流程图A
流程图B中描述了式12所包括的本发明化合物的制备，其中R、R1、R2、X和n如上所述。各个R5独立地是氢、苯基或1-6个碳原子的烷基。按照流程图B所描述的反应，用式11的环酐在惰性溶剂如四氢呋喃中在碱性催化剂如吡啶或三乙胺的存在下，将式10的6-氨基-4-苯氨基喹唑啉(按流程图A制备)酰化。流程图B
用数种标准的药理学试验方法评价本发明的代表性化合物，表明本发明的化合物具有蛋白酪氨酸激酶抑制剂的显著活性，同时也是抗增殖剂。基于在标准药理学试验过程中所显示的活性，本发明化合物因而可用作抗肿瘤剂。采用的试验方法和获得的结果如下所述。
流程图C中描述了式19所包括的本发明化合物的制备，其中Y’、R4和X如上所述。按照流程图C所描述的反应，使用还原剂如亚硫酸氢钠在四氢呋喃和水组成的两相体系中在少量相转移催化剂的存在下，将4-氯-6-硝基喹唑啉，13(Morley，JS.和Simpson，化学协会杂志(J.Chem.Soc.)，360(1948))还原为6-氨基-4-氯喹唑啉，14。用式15的酰氯或式16的混合酸酐(由相应的羧酸制备)在惰性溶剂，如四氢呋喃(THF)中在有机溶剂，如吡啶或N-甲基吗啉的存在下将14酰化，得到式17化合物。在所述情况下，其中15或16具有非对称碳原子时，可使用它们的外消旋或者R或S对映体单体形式，此时本发明的化物也将分别是外消旋或者R或S旋光活性形式。将式17的化合物与式18的苯胺在惰性溶剂，如异丙醇中加热，得到式19表示的本发明的化合物。流程图C
流程图D中描述了式26所包括的本发明化合物的制备，其中Y’、R4和X如上所述。按照流程图D所描述的反应，使用钯催化剂和氢源(可以是氢本身或环己烯)，将20(按流程图A制备)的硝基还原为相应的氨基化合物21。用式22的酰氯或式23的化合物酸酐(由相应的羧酸制备)在惰性溶剂，如四氢呋喃(THF)中在有机碱，如吡啶或N-甲基吗啉的存在下将21酰化得到式24的化合物。在所述情况下，当22或23具有非对称碳原子时，可使用它们的外消旋体或者R或S对映体单体形式，此时本发明的化物也将分别是外消旋或者R或S旋光活性形式。将式24的化合物与式25的苯胺在惰性溶剂，如乙酸中加热，得到式26表示的本发明的化合物。流程图D
采用如下所述的体外和体内标准药理学试验方法证明本发明化合物治疗或抑制多囊肾病的能力。采用模拟人多囊肾病的这些方法来评价作为本发明代表性化合物的实施例9的化合物。
体外评价后肾器官培养该体外标准药理学试验方法测定了在胚胎小鼠后肾细胞培养中试验化合物抑制EGF受体结合(免疫沉淀的活化RGF-R的蛋白质分析)和抑制肾小管囊肿形成(囊肿指数)的能力。采用的胚胎鼠后肾无血浆培养方法先前已有详细描述[Avner，E.D.，儿科肾病学(Pediatr.Nephrol.)292(1989)；Avner，E.D.，Kidney Int.36960(1989)；儿科肾病学Pediatr.nephrol.)4372(1990)；Sweeney，W.E.，组织培养方法学杂志(J.Tiss.Cult.Meth.)13163(1991)；Pugh，J.P.，Kidney Int.47774(1995)]。概括地说，就是将由瑞士Webster白鼠胚胎中取出的完整后肾(受孕E13±0.4天)或从E-15到P-14天的整个肾脏切成150μm薄切片，使其在特定的化学培养液中在Trowell类的器官培养箱中于36±0.5℃和95％湿度的混合空气-5％CO2中培养。该基础培养液由等体积的Dublecco改性的Eagle培养液和Ham F-12培养液组成，其中补充有胰岛素(8.3×10-7M)、前列腺素E1(7.1×10-8M)、硒(6.8×10-9M)、转铁蛋白(6.2×10-8M)和三碘甲状腺原氨酸(2.9×10-9M)。
向由基础培养液组成的培养液中加入EGF(15ng/ml)或者EGF(15ng/ml)与浓度0.1nM或1nM(在DMSO中增溶)实施例9化合物的混合物。第14天，将囊肿(BPK)和对照(Balb/C)分离块在下列条件下培养120小时1、基础培养液，并加入DMSO作为药物溶剂的对照2、EGF(15ng/ml)3、EGF(15ng/ml)培养120小时，实施例9的化合物(0.1nM)每天培养2小时4、EGF(15ng/ml)和实施例9的化合物(0.1nM)培养120小时5、EGF(15ng/ml)和实施例9的化合物(1.0nM)培养120小时对于每个培养物，每24小时用新鲜配制的培养液置换组织培养液一次。
于120小时时收获组织培养物，匀化并使其通过21号针冲破碎细胞[Donaldson，R.W.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA898477(1992)；Honegger，A.M.，细胞生物学杂志J.Cell Biol.)1101541(1990)]。将细胞碎片沉淀，将上清液转移到microfuge管，按每μm总蛋白加入4.0μm抗-EGFR按。将该混合物培养1小时，加入50μl蛋白A/G和琼脂糖，并将该混合物于4℃再孵育12小时。该管于4℃离心20分钟，收集免疫沉淀物。摒弃上清液，沉淀用1ml含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液洗涤两次。洗涤后，将沉淀再悬浮于25μl RIPA中，加入5倍的Lanelli样品缓冲液。将混合物煮沸5分钟，然后用抗磷酸酪氨酸抗体的蛋白质分析程序进行分析。该试验方法的结果表明EGF受体的磷酰化发生在EGF的存在下，但在实施例9化合物的存在时该磷酰化被抑制，在全部的三种方案中，1.0nM显示出最大抑制作用。这一发现与受体功能的抑制是一致的。
利用囊肿指数定量近曲小管囊肿形成的程度。该指数由基础光形态测量法得到[Loud，A.V.，Lab Invest.50250(1984)]并被标准化为器官培养体系中囊肿形成的定量工具[Pugh，J.P.，Kidney Int.47774(1995)；Avner，E.D.，Kidney Int.28447(1985)；AvnerE.D.，J.Lab.Clin.Med.109441(1987)]。在常规组织学制备后，用目镜测微计对完整培养物的8-10份3μM切片进行分级，囊肿形成以Lotus tetragonolobus-阳性小管片段和Dolichos biflorus-阳性小管片段显示，分为0(观察不到囊肿)-5级(大于0.20mm的多个囊肿)。在孵育120小时后，对每个处理组的6-8份分离块按照下面的分级测定囊肿指数。
囊肿指数0-未观察到囊肿1-一个或多个囊肿0.05mm2-多个囊肿 ＞0.05mm；≤0.10mm3-多个囊肿 ＞0.10mm；≤0.15mm4-多个囊肿 ＞0.15mm；≤0.20mm5-多个囊肿 ＞0.20mm下表概述了观察到的结果。
这些结果显示出实施例9的化合物以剂量依赖方式减少了肾集合管囊肿，证实了囊肿形成的抑制与多囊肾病有关。
孵育120小时后，对对照组和处理组的完整分离块进行组织学评价。将组织在4℃的4.0％多聚甲醛磷酸缓冲液(pH7.4)固定30分钟。然后洗涤分离块，经梯度丙酮脱水，在塑性包埋介质中包埋。在超微切刀上以3μM切片，放在载玻片上，用苏木精或片段特异性凝集素染色。按照先前描述的方法组织学鉴别肾小球[Sweeney W.E.，组织培养方法学杂志(J.Tiss.Cult.Meth.)13163(1991)]。肾曲小管用凝集素Lotus tetragonolobus(LTA)鉴别，肾集合管用凝集素Dolichos biflorus(DBA)鉴别[Pugh J.P.，Kidney.Int.47774(1995)；Nauta，儿科肾病学杂志(J.，Pediatr.Nephrol.)7163(1993)]。这些研究证实了培养液中EGF(15ng/ml)的存在维持了后肾的囊肿结构。这些囊肿用DBA染色-指示了它们的集合管起源。在15ng/ml EGF和1.0nM实施例9的化合物的存在下生长的相同后肾显示出集合管囊肿的明显缩小，同时在周围的后肾中几乎未观察到毒性。
体内评价将小鼠分为4组；第一组是用在第7、14和21天用0.25mg实施例9的化合物处理的BPK(常染色体隐性PKD小鼠模型)动物(胶腔注射给药)；第二组是未加处理的BPK对照组；第三组是处理的正常对照组(与上面的剂量方案相同)；第四组是未加处理的正常对照组。未加处理的BPK鼠仔到第17天有两个可见的囊肿块。在第24天收取各组的组织。将收取的鼠仔的肾和肝在4％多聚甲醛中固定30分钟，冲洗并用梯度丙酮脱水。将组织在免疫床(immunobed)上放置40小时，然后进行包埋。
对处理BPK组的新鲜肾进行粗略分析显示出8只动物中的3只具有多囊肾，这是在动物剖开后才观察到的。该组肾的大小大于其它各处理组，但比未处理组的多囊肾小得多(约是未处理组多囊肾的40％)。处理组的对照肾比未处理组稍小。
对全部四组的总肾体积进行评价。未处理BPK组的肾约是未处理对照组肾大小的6倍。处理BPK组的肾约是未处理BPK组肾大小的2被，但比未处理BPK组的肾小3倍。处理对照组的肾与未处理对照组的肾相比，体积稍小，但形态学上没有明显差别。在用实施例9化合物处理的正常鼠中未观察到肾毒性。
对无论是处理组(用实施例9的化合物)还是未处理组的对照组(非囊的)肾的组织学评价均显示出正常的形态学外观。这些处理组或未处理组的非囊肾的三色染色(观察纤维化)显示出没有纤维化迹象(胶原沉积)。
第24天的未处理组的囊肾组织学切片显示出数种囊肿疾病，伴随正常肾结构的小岛受到扩张囊肿病变的压迫。DBA和LTA的染色显示出在囊肿形成的后期几乎完全是肾集合管起源。值得注意的是，囊肿病变的肾集合管起源是人类ARPKD的特征。
与这些未处理的肾相比，用实施例9的化合物注射处理(每周三次，30mg/kg)的肾仅显示出轻度至中度的囊肿疾病，并清楚地显示了在残余的近曲小管囊肿中存在有正常的肾集合管。此外，对用实施例9的化合物处理过的肾的三色染色(观察纤维化)显示出胶原沉积的明显减少，并具有良好的小管组织排列。
未处理对照组动物肝脏的组织学染色揭示出正常的肝三元入门组。相反，BPK组动物的肝脏显示出多胆管异常和明显的胆囊上皮增生。用实施例9的化合物处理过的BPK动物的肝脏在形态学上显示出大大改善，仅有轻微胆囊(上皮)增殖。实施例9的化合物在肝脏中的作用首次证明了它在该PKD鼠标准药理学试验方法中具有潜在的肝脏疾病的可逆性作用。
根据本发明的代表性化合物获得的结果，本发明的化合物可用于治疗或抑制多囊肾病。
本发明的化合物可单独配制或可与一种或多种可药用载体联合施用。例如溶剂、稀释剂等配制给药，可口服给药，例如以片剂、胶囊、可分散性粉末、颗粒或悬浮液(含有，例如约0.05-5％助悬剂的)、糖浆(含有，例如约10-50％糖)、酏剂(含有，例如约20-50％乙醇)等形式给药；或者以在等渗介质中的无菌注射溶液或悬浮液(含有约0.05-5％助悬剂)形式经非胃肠给药。这类药物制剂可含有，例如约0.05-90％(重量)的活性成分和载体，更通常是含有约5-60％(重量)的活性成分。
活性成分的有效使用剂量可随使用的特定化合物、给药方式和所治疗的适应症的严重程度而变化。但一般来说，当本发明化合物的每日给药剂量为约0.5～1000mg/kg动物体重时可获得令人满意的效果，该每日剂量可任选地分2～4次给药或者以缓释形式给药。对于较大哺乳动物而言，每日总剂量为约1～1000mg，优选为约2-500mg。适于内服的剂型含有约0.5～1000mg的本发明化合物和固体或液体可药用载体的精细混合物。可对给药方案进行调整以获得最佳治疗反应。例如每日可分数次给药或者根据治疗情况的急迫性按比例减少剂量。
这些化合物可口服以及通过静脉内、肌内或皮下途径给药。固体载体包括淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和高岭土，液态载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子表面活性剂和食用油，如玉米油、花生油和芝麻油，只要它们与活性成分的性质相适应并可配制成所需的给药形式。也可包括在药物组合物的配制过程中常用的辅剂，如芳香剂、着色剂、防腐剂和抗氧剂，例如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。
基于易于制备和给药的观点，优选的药物制剂是固体制剂，尤其是片剂和固体或液体填充的胶囊。口服给药的化合物是优选的。
在某些情况下，理想地是将给药化合物以气雾剂形式直接给药于呼吸道。
这些活性化合物也可经非胃肠或经腹膜内给药。这些游离碱或其可药用盐形式的活性化合物的溶液或悬浮液在适当混有表面活性剂，如羟丙基纤维素的水中制备。分散体可在甘油、液态聚乙二醇和它们在油中的混合物中制备。在常规贮存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射用的药物形式包括无菌水溶液或分散液以及临时配制无菌注射溶液或悬浮液用的无菌粉末。在各种情况下，药物形式须是无菌的和可流动的，以易于注射操作。在制造和贮存条件下须是稳定的，同时须防止微生物，如细菌和真菌的污染。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、其适宜的混合物和植物油。
下面描述本发明化合物的代表性实例的制备。
实施例1N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒将40.8g 5-硝基氨茴腈和40ml N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醛在蒸汽浴上加热2小时。减压除去溶剂，将残余物加到二氯甲烷中。使该溶液通过酸式硅酸镁后，除去溶剂。用乙醚洗涤后，获得50.8g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒。
实施例2N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺将23.74ml 3-溴苯胺和40.5g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒在100ml冰醋酸中的溶液搅拌并在148℃的油浴中加热1.5小时。冷却，过滤所得固体，得到定量收率的N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺熔点＝267-270℃；质谱(m/e)345。
实施例3N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺将34.5g N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺和16.8g铁粉在150ml乙醇和150ml冰醋酸中的混合物在120℃的油浴中加热2小时。滤除固体后，往滤液中加入固体碳酸钠，得到一固体。过滤，用甲醇萃取固体两次。萃取液用木炭处理两次，蒸发，得到固体。用乙醚洗涤该固体后，得到27.5g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺质谱(m/e)315。
实施例44-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸将15ml吡啶加到1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺和0.6g马来酸酐中。搅拌过夜后，在旋转蒸发仪上除去溶剂。将固体加到约400ml热乙醇中，滤出不溶性物质，得到0.33g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸质谱(m/e)M+H413，415。
实施例54-[[4-[(3-溴苯基)氧基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯将N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷却，滴加1.22g乙基富马酰氯的10ml二氯甲烷溶液。搅拌1.5小时后，使该反应回温至室温。在减压下除去溶剂，用水处理残余物。滤出红色固体并用热的丙酮萃取。滤除不溶性物质后，浓缩滤液，得到0.45g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯熔点＝259-263℃，质谱(m/e)M+H 441，443。
实施例6N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺将1.58g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷却并滴加0.67ml 3，3-二甲基丙烯酰氯的7ml乙醚溶液。搅拌冷却2小时后，减压下除去溶剂。用水处理残余物，所得固体在甲基溶纤素中重结晶，得到0.97g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺熔点＝300-301℃，质谱(m/e)396，398。
实施例7N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺将1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷却并滴加0.57ml反式-巴豆酰氯的6ml乙醚溶液。搅拌冷却2小时后，减压下除去溶剂。用水处理残余物，将所得固体在正丁醇中重结晶，得到0.69g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺熔点＝153-160℃，质谱(m/e)M+H 383，385。
实施例8N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺将1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷却并滴加0.59ml甲基丙烯酰氯的6ml乙醚溶液。搅拌冷却2小时后，减压下除去溶剂。用水处理残余物，将所得固体加到正丁醇中(温热)。向该冷却的溶液中加入乙醚，得到0.44g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺熔点＝40-245℃，质谱(m/e)M+H 383，385。
实施例9N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺(butynamide)将0.50g 2-丁炔酸的10ml四氢呋喃溶液在冰浴中冷却。加入0.79ml氯甲酸异丁基酯后，再加入0.66ml N-甲基吗啉。约1分钟后，加入1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使该反应回温至室温并搅拌过夜。减压除去溶剂，固体在正丁醇中重结晶，得到1.07g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺质谱(m/e)381，383。
实施例104-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酰胺将2.5ml 10N氢氧化钠水溶液加到2.3g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯(实施例5)的25ml乙醇溶液中。搅拌1小时后，加入2.1ml浓盐酸，该反应再搅拌2小时。所得固体在正丁醇中重结晶，得到0.97g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酰胺质谱(m/e)M+H 413。
实施例11N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺将0.67g 2，4-己二烯酸的10ml四氢呋喃溶液在冰浴中冷却。加入0.79ml氯甲酸异丁基酯后，再加入0.66ml N-甲基吗啉。约1分钟后，加入1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使该反应回温至室温并搅拌过夜。减压除去溶剂，固体重结晶，得到1.0g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺熔点＝258-260℃。
实施例12N-[4-[(3-溴苯基)氧基]-6-喹唑啉基]-2-环戊烯酰胺将0.43g 2-环戊酸的5ml四氢呋喃溶液在冰浴中冷却。加入0.49ml氯甲酸异丁基酯后，再加入0.41ml N-甲基吗啉。约1分钟后，加入1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使该反应回温至室温并搅拌过夜。再加入0.5当量混合酸酐。将该混合物搅拌5小时。减压除去溶剂，固体经硅胶色谱纯化，得到0.30gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-环戊烯酰胺质谱(m/e)409(M+H，EI)。
实施例13N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺将2.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液在冰浴中冷却并在0℃滴加0.61ml丙烯酰氯的30ml乙醚溶液。在室温搅拌3.5小时后，减压下除去溶剂。残余物经硅胶色谱纯化，得到0.2gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺质谱(m/e)M+H369。
实施例14N-[4-[(3-溴苯基)氢基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)将0.93g 3-苯基-2-丙炔酸的10ml四氢呋喃溶液在冰浴中冷却。加入0.82ml氯甲酸异丁基酯后，再加入0.69ml N-甲基吗啉。约1分钟后，加入1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的7ml吡啶溶液。使该反应在0℃进行1小时。减压除去溶剂，固体经硅胶色谱纯化，得到0.01g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)质谱(m/e)443.2，445.2(M+H，电子喷雾)。
实施例156-氨基-4-氯喹唑啉将3.25g 4-氯-6-硝基喹唑啉、10.8g亚硫酸氢钠和0.3g相转移催化剂(C8H17)3NCH3+Cl-在97ml四氢呋喃和32ml水中的混合物快速搅拌2小时。该混合物用乙醚稀释，分离有机层。有机溶液用盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。使该溶液通过一小硅胶柱。于30℃减压除去溶剂，得到6-氨基-4-氯喹唑啉，该产物无需进一步纯化即可用于下步反应。
实施例16[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺将1.64g 2-丁炔酸的46ml四氢呋喃溶液在冰浴中冷却。加入2.34ml氯甲酸异丁基酯后，再加入4.13ml N-甲基吗啉。约10分钟后，将其倾入6-氨基-4-氯喹唑啉的46ml四氢呋喃溶液中。将该混合物在室温搅拌2小时。将混合物倾入盐水和饱和碳酸氢钠的混合液中并用乙醚萃取。乙醚溶液经硫酸镁干燥并过滤。除去溶剂，得到有色油状的[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺，该产物无需进一步纯化即可用于下步反应。
实施例17N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺将1.76g[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺和1.23g 3-溴苯胺在23ml异丙醇中的溶液在惰性气氛下回流40分钟。该混合物冷却到室温并加入200ml乙醚，得到0.4g盐酸盐形式的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺。用碳酸氢钠溶液中和，乙酸乙酯萃取，除去溶剂，用1-丁醇重结晶，得到游离碱形式的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺。
实施例18N’-[4-氨基-2-氰基苯基]-N，N-二甲脒将6.0g(27.5mmol)N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒、33.9g(41.8ml，412.4mmol)环己烯和0.6g 10％Pd/C在360ml甲醇中的溶液回流4小时。将该热的混合物滤过硅藻土。除去溶剂，残余物用氯仿-四氯化碳重结晶，得到4.9g(95％)浅灰色结晶固体的标题化合物。质谱(m/e)188.9(M+H，电子喷雾)。
实施例19N-[3-氰基-4-[[(二甲氨基)亚甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺在0℃、氮气氛和搅拌下，用3分钟时间向2.01g(23.9mmol)2-丁炔酸和2.9ml(22.3mmol)氯甲酸异丁基酯在30ml四氢呋喃中的溶液中加入2.42g(2.63ml，22.3mmol)N-甲基吗啉。搅拌15分钟后，用4分钟时间加入N’-(4-氨基-2-氰基苯基)-N，N-二甲脒和1.6g(1.75ml，15.9mmol)N-甲基吗啉的25ml四氢呋喃溶液。将该混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌30分钟。该混合物用70ml乙酸乙酯稀释后，倾入盐水和饱和碳酸氢钠的混合液中。有机层经硫酸镁干燥并滤过硅胶滤垫。除去溶剂，残余物与50ml乙醚搅拌。收集悬浮的固体，得到3.61g(89％)米白色固体。质谱(m/e)255.0(M+H，电子喷雾)。
实施例20N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺将3.0g(11.8mmol)N-[3-氰基-4-[[(二甲氨基)亚甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺和2.23g(12.98mmol)3-溴苯胺的18ml乙酸溶液在搅拌和氮气氛下轻轻回流1小时15分钟。将该混合物在冰浴中冷却，形成固体。过滤收集固体并用1∶1的乙醚-乙腈洗涤，得到黄色固体，经乙醇重结晶后，得到2.51g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺质谱(m/e)381，383。
权利要求
1.一种治疗或抑制哺乳动物的多囊肾病的方法，包括给需此治疗的哺乳动物施用式1化合物
其中X是可任意地被一个或多个选自下述的取代基取代的苯基卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7个碳原子的烷氧羰基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的链烷酰氨基；R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；Y是选自下述的基团
R3独立地是氢、1-6个碳原子的烷基、羧基、1-6个碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7个碳原子的烷基羰基；n＝2-4；或其可药用盐，条件是Y的各个R3可以相同或不同。
2.权利要求1的方法，其中R、R1和R2是氢，或者其可药用盐。
3.权利要求2的方法，其中X未取代或者被卤素或1-6个碳原子的烷基取代。
4.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺或其可药用盐。
5.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
6.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺或其可药用盐。
7.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺或其可药用盐。
8.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺或其可药用盐。
9.权利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸或其可药用盐。
10.权利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸或其可药用盐。
11.权利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯或其可药用盐。
12.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-环戊烯酰胺或其可药用盐。
13.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺或其可药用盐。
14.权利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)或其可药用盐。
15.下式1化合物在制备治疗或抑制哺乳动物肾痛的药物中的应用，
其中X是可任意地被一个或多个选自下述的取代基取代的苯基卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7个碳原子的烷氧羰基、2-7个碳原子的烷基羰基、氨基和1-6个碳原子的链烷酰氨基；R和R1各自独立地是氢、卤素、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基或三氟甲基；R2是氢、1-6个碳原子的烷基、1-6个碳原子的烷氧基、羟基、三氟甲基；Y是选自下述的基团
16.权利要求15的应用，其中R、R1和R2是氢，或者其可药用盐。
17.权利要求15或16的应用，其中X未取代或者被卤素或1-6个碳原子的烷基取代。
18.权利要求15的应用，其中的化合物是下列化合物之一N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-环戊烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺；和N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)或者它们的可药用盐。
全文摘要
本发明提供了一种治疗或抑制哺乳动物多囊性肾病的方法,该方法包括对需此治疗的哺乳动物施用式(1)的化合物,其中X是可任意被取代的苯基;R和R
文档编号A61P13/00GK1255062SQ98804838
公开日2000年5月31日 申请日期1998年4月28日 优先权日1997年5月6日
发明者P·弗洛斯特 申请人:美国氰胺公司