专利名称：化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及为氨基嘧啶类衍生物的新化合物。本发明也涉及包括所述化合物的制备方法、含有它们的组合物以及它们作为药物的用途的相关方面。还提供了用于这些化合物生产的的化学中间体。
背景技术：
通过特异的一氧化氮合成酶(NOSs)的作用在哺乳动物细胞中由L-精氨酸产生一氧化氮。这些酶分成两个不同的类型-组成NOS(cNOS)和诱导NOS(iNOS)。目前，已经鉴定了两种组成NOSs和一种诱导NOS。在组成NOSs中，内皮酶(ecNOS)涉及到平滑肌松弛和血压与血流的调节，而神经元酶(ncNOS)用作神经递质并似乎涉及到多种生物功能的调节例如大脑局部缺血。诱导NOS尤其与炎性疾病的发病机理有关。因此调节这些酶将在广泛疾病状态的治疗中提供相当大的潜力(J.E.Macdonald，Ann.Rep.Med.Chem.，1996，31，221-230)。
发明公开依据本发明提供了式(I)化合物
其中R1代表氢、烷基C1至6、烷氧基C1至6、卤素或三氟甲基；R2代表氢或烷基C1至6；A代表含有可以相同或不同的并选自O、N和S的1至3个杂原子的五员杂环芳环；或者为含有1至3个氮原子的六员杂环芳环；(i)R3代表苯基、含有1至3个氮原子的六员杂环芳环或含有为可以相同或不同的并选自O、N和S的1至3个杂原子的五员杂环芳环，其中苯基或杂环芳环可任选由烷基C1至6、链烯基C2至6、炔基C2至6、烷氧基C1至6、卤素、羟基、烷硫基C1至6、氰基、三氟甲基、硝基或基团-NR5R6取代；并且R4、R5和R6独立地代表氢或烷基C1至6；或者(ii)R3代表烷基C1至8、链烯基C2至8或炔基C2至8；并且R4代表氢或烷基C1至6；或者(iii)R3和R4共同代表(CH2)a·Z·(CH2)b，Z代表N(COOR7)，其中R7代表烷基C1至6或卤代烷基C1至6，或R7代表基团(CH2)nYR9其中n代表2至5的整数，Y代表O、S或一个键和R9代表由卤素或硝基任选取代的烷基C1至6或者R9代表由烷基C1至6、卤素或硝基任选取代的苯基；并且a和b独立地代表1至3的整数，条件是a+b是3或4；或者(iv)R3和R4共同代表(CH2)a·Z·(CH2)b，Z代表N(COR8)，其中R8代表苯基、含有1至3个氮原子的六员杂环芳环或含有可以相同的或不同的并选自O、N和S的1至3个杂原子的五员杂环芳环，其苯基或杂环芳环可任选由烷基C1至6、烷氧基C1至6、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、烷基磺酰基C1至6或氨基磺酰基取代；和a和b独立地代表1至3的整数条件是a+b是3或4；或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体和互变异构体。
本发明进一步提供了这样的化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体的制备方法。
本发明也提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体作为药物的使用。
本发明另一个方面提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体在治疗或预防其中抑制一氧化氮合成酶活性是有益的疾病或症状的药物制备中的用途。
本发明的一个更特别的方面提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体在用于治疗或预防炎性疾病的药物的制备中的用途。
本发明也提供了处理或减少其中抑制一氧化氮合成酶活性是有益的疾病或症状的危险的方法，该方法包括对于患有或有患所述疾病或症状危险的人给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体。
更详细地讲，也提供了在患有或有患所述疾病危险的人中治疗或降低炎性疾病的危险的方法，其中该方法包括给予该患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体。
本发明化合物也可有利地同第二种药学活性物质联合使用，特别是与选择性环氧酶(COX-2)的诱导异构形式抑制剂联合使用。因此，在本发明的进一步方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体与COX-2抑制剂联合治疗炎症、炎性疾病和炎性相关疾病的的用途。并且也提供了在患有或有患所述疾病或症状危险的人中治疗或减少炎症、炎性疾病和炎性相关疾病的方法，其中该方法包括给予患者与COX-2抑制剂联合使用的治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体和互变异构体。
A优选地代表噻吩并环。特别优选的实施方案是式(I)化合物为噻吩并[2，3-d]嘧啶或噻吩并[3，2-d]嘧啶。
在另一个优选的实施方案中，A代表吡啶并环。特别优选的实施方案是式(I)化合物为吡啶并[2，3-d]嘧啶、吡啶并[3，2-d]嘧啶、吡啶并[3，4-d]嘧啶或吡啶并[4，3-d]嘧啶。式(I)吡啶并[3，2-d]嘧啶化合物是最佳的。
优选地，R3代表苯基、环丙基、乙基、噻唑基、乙炔基或呋喃基。
在另一个优选的实施方案中，其中R3和R4与式(I)中的选择(iii)一致，Z代表N(COOC2H5)并且a和b每一个具有值2。
本发明特别优选的化合物包括7-氨基-4，5-二氢-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-环丙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-乙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-(2-噻唑基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-(2-呋喃基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；7-氨基-4，5-二氢-5-乙炔基噻吩并[3，2-d]嘧啶；7’-氨基螺[哌啶-4，5’(4’H)-噻吩并[3，2-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-3’-氯螺[哌啶-4，6’(7’H)-噻吩并[2，3-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]；4’-氨基-(2-噻吩基(2-thienoyl))-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，4-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，4-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[4，3-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4-氨基-2-(2-噻吩基)-吡啶并[3，2-d]嘧啶；7’-氨基-1-(6-氰基-3-吡啶羰基)螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并[3，2-d]嘧啶)]；和其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体。
除非另外说明，术语“C1至6烷基”在此指具有1至6个碳原子直链或支链烷基基团或具有3至6个碳原子的环烷基基团。这样基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环戊基和环己基。
除非另外说明，术语“C2至6烯基”在此指具有2至6个碳原子并包括一个双键的直链或支链烷基基团或具有3至6个碳原子并包括一个双键的环烷基基团。这样基团的实例包括乙烯基、1-和2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-丁烯基、环戊烯基和环己烯基。
除非另外说明，术语“C2至6炔基”在此指具有2至6个碳原子并包括一个叁键的直链或支链烷基基团。这样基团的实例包括乙炔基、1-和2-丙炔基、2-丁炔基。
除非另外说明，术语“C1至6烷氧基”在此指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基基团。这样基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、s-丁氧基和叔丁氧基。
其它基团例如烷硫基、卤代烷基、烷基磺酰基可相似地解释。
以上所提及的本发明化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体的制备方法包括(a)使式(II)化合物
其中A、R1和R2如上所定义，与式(III)化合物或其乙缩醛衍生物反应R3COR4(III)其中R3和R4如上所定义；或者(b)使式(IV)或(IV’)化合物
其中A、R1、R2、R3和R4如上所定义，并且R8代表烷基基团；与氨或其等价物反应；或者(c)通过其中R5和R6中一个或两者代表氢的相应的化合物的烷基化来制备式(I)化合物，其中R3和R4是上面所给出的式(I)的总定义中的选择(i)并且R5和R6中一个或两者代表烷基C1至6；或者(d)通过其中R2代表氢的相应的化合物烷基化来制备其中R2代表烷基C1至6的式(I)化合物；或者(e)使其中一个或多个氮原子和/或另一个原子被保护的式(I)化合物脱保护；或者(f)其中R3和R4是上面所给出的式(I)的总定义中选择(iv)的式(I)化合物是通过使式(V)化合物
其中A、R1、R2、a和b如上所定义，与式(VI)化合物反应来制备的X-L (VI)。其中X代表COOR7或COR8，R7和R8如上所定义且L为离去基团；并且如果需要或必要的话，将生成的式(I)化合物或其另一个盐转化为其药学上可接受的盐，或者反过来(如果需要的话)，可将生成的式(I)化合物转化为其旋光异构体。
在过程(a)中，式(II)和(III)化合物的反应可在室温至溶剂的沸腾温度之间，于惰性溶剂中通过搅拌反应物而实施，该反应持续长达72小时或者直至反应完全。我们已经发现使用保护形式例如作为乙缩醛如二乙氧基乙缩醛的式(III)化合物经常是便利的。该过程最好在酸催化剂的存在下进行。所要求的乙缩醛可通过使用本领域熟知的方法使未保护的式(III)化合物与醇例如乙醇反应来形成。
在过程(b)中，该反应通过将氨气鼓泡通入式(IV)或(IV’)化合物在惰性极性溶剂中的溶液来实施。可以替代地，该反应可通过以氨水、乙腈中的氨或以甲醇氨处理式(IV)或(IV’)化合物在极性质子溶剂中的溶液来实施，或者以碘化铵和氨的醇溶液处理式(IV)或(IV’)化合物来实施。
在过程(c)和(d)中，该烷基化反应可通过本领域熟知的方法实施。例如，胺可与烷基卤特别是烷基溴或烷基碘反应。
在过程(e)中，胺的保护基团包括烷基、芳烷基、酰基、酰基磺酰基、芳基磺酰基和三烷基甲硅烷基。末端炔也可使用三烷基甲硅烷基基团保护。当保护基团为三烷基甲硅烷基时，该基团可使用如四正丁基氟化铵除去。其它保护基团和除去它们方法的进一步的细节可从参照Greene和Wuts的权威教科书的“有机合成中的保护基团”第二版(1991)查找到。
在过程(f)中，该反应可通过在碱如吡啶存在下在适宜的温度下于惰性溶剂中化合反应物来实施。虽然许多的标准离去基团L是适宜的，我们宁愿选择L代表卤素尤其是氯或溴。
本发明包括以盐特别是酸加成盐形式存在的式(I)化合物。适宜的盐包括那些同有机酸和无机酸两者形成的盐。这样的酸加成盐正常为药学上可接受的尽管非药学上可接受的酸的盐可用于正被谈论的化合物的制备与纯化。因此，优选的盐包括那些与氢氯酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、构橼酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、甲磺酸和苯磺酸形成的盐。
式(I)化合物的盐可通过使游离碱或其盐、对映体或互变异构体与一当量或几个当量的适合的酸反应来形成。该反应可在溶剂或其中盐是不溶的媒介或在其中盐是可溶性的溶剂例如水、二噁烷、乙醇、四氢呋喃或乙醚、或者在真空或冷冻干燥下可被除去的溶剂混合物中进行。该反应也可为置换反应过程或者其可在离子交换树脂中进行。
式(II)、(IV)、(IV’)和(V)的新中间体构成了本发明的另一个方面。
式(II)化合物可通过还原式(VII)的化合物制备
其中A、R1和R2如上所定义。
该还原反应过程可通过在高温和压力一般为65℃和30个大气压下，在钯碳或者氧化铝上的铑或兰尼镍存在下用氢处理式(VII)化合物来实施。
式(VII)化合物可通过使式(VIII)化合物
其中A、R1和R2如上所定义。与羟胺盐酸盐反应进行制备。
在该反应中，两种反应物可在碱如甲醇钠存在下在甲醇中一起加热。
作为式(II)化合物的可替代制备方法，式(VIII)化合物可在酸存在下用伯醇如乙醇处理，并且随后用氯化铵处理产生式(II)化合物。或者式(VIII)化合物可在溶剂如甲苯中用三甲基铝和氯化铵的混合物处理。
作为式(II)化合物的进一步的可替代制备方法，式(IX)化合物
其中A、R1和R2如上所定义。可用氨处理。
尽管预先活化步骤例如使用米尔文氏试剂是正常必要的，该反应在标准条件下发生。
式(III)、(VIII)和(IX)化合物或者是熟知的或者可通过本来已知的常规方法制备。
其中R2代表烷基C1至6的式(VIII)和(IX)化合物可按照上面的过程(d)通过其中R2代表氢的相应的式(VIII)或(IX)化合物的烷基化来制备。
式(IV)化合物可通过使式(X)化合物
其中A、R1和R2如上所定义。在烷基碘存在下与式(III)化合物反应制备。
该反应条件与上述过程(a)描述的条件相似。
式(X)化合物可通过用Lawesson氏试剂处理式(IX)化合物进行制备。
式(II)化合物可通过使式(X)化合物转化为相应的烷基硫代衍生物进行制备，即通过用烷基卤化物(尤其是烷基碘化物)处理接着按照类似于上述过程(b)的过程与氨反应。
中间体化合物可以保护形式使用。保护基团和除去它们的过程的细节可参照Greene和Wuts的权威教科书“有机合成中的保护基团”第二版(1991)。
本发明化合物及其中间体可从其反应混合物中分离，如果必要的话通过使用标准技术进一步纯化。
式(I)化合物可以对映体形式存在。因此，所有对映体、非对映体、外消旋物和其混合物均包括在本发明范围内。
各种旋光异构体可通过使用例如分级结晶或HPLC的常规技术分离该化合物的外消旋混合物来分离。
中间体化合物也可以对映体形式存在并且作为纯化的对映体、非对映体、外消旋物和其混合物使用。
式(I)化合物可以另外的互变异构体形式存在。式(I)化合物可以另一个互变异构体形式或其混合物来提供。
因为其在动物身上具有药理活性，式(I)化合物和它们的药学上可接受的盐、对映体、外消旋体和互变异构体化合物是有用的。特别地，这些化合物作为一氧化氮合成酶的酶抑制剂是有活性的。更详细地讲，它们是存在于巨噬细胞的一氧化氮合成酶的诱导形式的异构酶抑制剂并且由此可预见在治疗中如作为抗炎药物是有用的。
化合物与其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体适用于治疗或预防其中一氧化氮合成酶的合成或过度合成形成部分病因的疾病或症状。特别地，这些化合物适用于治疗包括人在内的哺乳动物的炎性疾病。
可以明确提到的疾病是骨关节炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、痛风关节炎和其它关节炎症状、发炎的关节；湿疹、牛皮癣、皮炎或者其它炎性皮肤疾病如晒伤；炎性眼部疾病包括眼色素层炎和结膜炎；与炎症相关的肺部疾病例如哮喘、支气管炎、pigeon fancier’s病、农夫肺、急性呼吸窘迫综合征；菌血症、内毒素血症(败血病休克)、口疮溃疡、龈炎、pyresis、疼痛和胰腺炎；胃肠道疾病包括节段性回肠炎、萎缩性胃炎、胃varialoforme、溃疡性结肠炎、腹腔疾病、局限性回肠炎、消化性溃疡、应激性肠道综合症、由于例如幽门螺杆菌感染或者由于非甾体抗炎药治疗导致的胃肠道损坏。和其它与炎症相关的疾病。
这些化合物也可用在急性或持续性炎性疼痛或神经病性疼痛或中枢起因疼痛的治疗和减轻。
式(I)化合物和它们的药学上可接受的盐、对映体、外消旋体和互变异构体也可用于除了上述提到的以外疾病或症状的治疗或预防。例如这些化合物可用于治疗动脉粥样硬化、胆囊纤维变性、与败血病和/或中毒性休克有关的低血压，治疗免疫系统机能障碍，作为在器官移植疗法中短期免疫抑制辅助剂，用于治疗与糖尿病有关的血管并发症以及用于细胞因子例如肿瘤坏死因子或者白细胞介素的合并疗法。
式(I)化合物对一氧化氮合成酶的神经元异构形式也可显示抑制活性。因此也可用于治疗例如在心动停止和中风情况下的缺氧、包括在例如缺氧、低血糖、癫痫和外伤(如脊髓和头部损伤)失调中的神经退化和/或神经坏死的神经变性疾病、高压氧惊厥和毒性、痴呆例如早老性痴呆、阿尔滋海默氏病和与爱滋病相关的痴呆、小舞蹈病、帕金森氏病、图雷特综合征、亨廷顿病、肌萎缩外侧硬化症、科尔萨科夫病、与大脑脉管疾病有关的愚痴、睡眠紊乱、精神分裂症、抑郁症、孤独症、季节性情感失调、飞行时差反应、与月经前综合征(PMS)有关的抑郁症或其它症状、焦虑、败血病休克。也期待着式(I)化合物在对于鸦片制剂和二氮杂类的耐受性方面的预防和逆转显示活性、在药瘾的治疗、偏头痛和其它血管性头疼的治疗、神经性炎症、在胃肠道动力紊乱、癌症的治疗和诱导分娩有活性。
对于以上提及的治疗适应症，所给药的剂量当然随所使用的化合物、给药方式和所期望的治疗而变化。然而，一般地，当这些化合物每天以1mg至2000mg的固体形式的剂量给药时可获得满意的结果。
式(I)化合物和其药学上可接受的衍生物可以其自身或以适合的药用组合物使用，其中该化合物或衍生物与药学上可接受的辅助剂、稀释剂或者载体混合在一起。可以通过(但不局限于)肠道(包括口腔、舌下或者直肠)、鼻内、静脉、局部或其它非肠道途径给药。选择和制备适宜的药用制剂的常规过程如“Pharmaceuticals-The Sciences ofDosage Form Designs”，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988中所描述。该药用组合物优选地包含少于80％且更优选地包含少于50％的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体。
也提供了这样的包括混合有配料的药用组合物制备的过程。
式(I)化合物和其药学上可接受的衍生物也可有利于与COX-2抑制剂联合使用。特别优选的COX-2抑制剂为Celecoxib和MK-966。该NOS抑制剂和COX-2抑制剂可以一起配制在单一剂量单位给药的相同的药用组合物中，或者每一成分可以独立配制以便分开的剂量可以同时给药或连续给药。
本发明通过(但决不局限于此)下列实施例说明制备12-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐(a)3-叠氮基-2-氰基吡啶将3-溴-2-氰基吡啶(Chem.Pharm.Bull，1985，33，565)(2.6g，14.2mmol)和叠氮钠(1.0g，15.3mmol)的DMF(30mL)溶液在90℃下加热16h。冷却生成的混合物，加入水后并全部用乙酸乙酯提取。用饱和盐水洗涤合并的提取液并用硫酸镁干燥。蒸发溶剂给出作为油的产物，其在硅胶上通过快速柱层析纯化，并用乙酸乙酯/石油醚(1∶3至1∶1)作为洗脱液洗脱提供所述产物。MS(EI)m/z145；1H NMR(d6-DMSO)8.50(1H，d)，8.09(1H，d)，7.77(1H，dd).(b)3-氨基-2-氰基吡啶将3-叠氮基-2-氰基吡啶(1.44g，9.9mmol)的乙醇(100mL)溶液在室温和3.5磅/英寸2下以钯碳(10％，50mg)氢化18h。通过硅藻土滤除催化剂，并且浓缩滤液留下产物(1.16g)。1H NMR(d6-DMSO)7.87(1H，d)，7.33(1H，dd)，7.22(1H，d)，6.28(2H，s).(c)3-氨基-2-(氨基(羟基亚氨基)甲基)吡啶将3-氨基-2-氰基吡啶(1.18g，9.9mmol)、甲醇钠(0.64g，12mmol)和羟胺盐酸盐(0.83g，12mmol)的乙醇(10mL)悬浮液回流下加热1h。该混合物过滤并且浓缩滤液成为油，其在硅胶上通过快速柱层析纯化，并用二氯甲烷/甲醇(50∶1至10∶1)作为洗脱液洗脱提供黄色固体产品(0.82g)，MS(+CI)m/z153[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)9.80(1H，br.s)，7.80(1H，dd)，7.10(1H，d)，7.08(1H，d)，6.62(2H，s)，5.90(1H，s).(d)2-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐将3-氨基-2-(氨基(羟基亚氨基)甲基)吡啶(0.82g，5.4mmol)和湿的兰尼镍(ca.0.1g)的乙醇(200mL)悬浮液在60℃和3个氢气压下搅拌16h。过滤除去催化剂并蒸发溶剂给出油状产物，将其溶于少量乙醇中。搅拌下加入乙醚中的氯化氢(1N，11ml)并且过滤收集沉淀给出固体。MS(+CI)m/z137[M+H]+，1H NMR(d6-DMSO)9.15(4H，br.s)，7.93(1H，dd)，7.34(1H，d)，7.26(1H，d).
制备24-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐(a)3，5-二氯-4-甲酰吡啶在0℃下将正丁基锂(在己烷中1.6M，9.3ml，14.9mmol)滴加入二异丙胺(1.95ml，14.9mmol)的THF(30ml)溶液中。在0℃下15分钟后，该溶液冷却至-78℃，并加入3，5-二氯吡啶(2.0g，13.5mmol)。1小时后，加入甲酸甲酯(0.92ml)，该混合物温热至室温2小时，用1N盐酸稀释并用乙酸乙酯提取两次。用盐水洗涤提取液，硫酸钠干燥并蒸发给出固化的黄色的油，m.p.110-111℃。(b)3，5-氯-4-氰基吡啶将3，5-二氯-4-甲酰吡啶(1.0g，5.68mmol)和羟胺-O-磺酸(0.96g，8.5mmol)在水(20ml)中的悬浮液于70℃下加热16小时，然后冷却并用乙酸乙酯提取两次。用盐水洗涤提取液并以硫酸钠干燥。蒸发溶剂给出作为油的产物，其在硅胶上通过快速柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(10∶1)洗脱提供产品。MS(+EI)m/z 172/174/176；1H NMR(CDCl3)8.69(2H，s).(c)5-叠氮基-3-氯-4-氰基吡啶该化合物从3，5-氯-4-氰基吡啶按照制备1(a)的方法制备给出固体。MS(+EI)m/z 151(M+-N2)；1H NMR(CDCl3)8.89(1H，s)，8.69(1H，s).(d)5-氨基-3-氯-4-氰基吡啶将氯化亚锡(II)(1.42g，7.5mmol)加入5-叠氮基-3-氯-4-氰基吡啶(0.9g，5mmol)的乙醇(20ml)和水(0.3ml)的溶液中。确保冒泡。将该混合物搅拌1小时。然后用乙酸乙酯提取两次。该提取液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次并硫酸钠干燥。蒸发溶剂给出作为油的产物，其在硅胶上通过快速柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(10∶1)作为洗脱剂提供产品。MS(+CI)m/z 152[M-H]+；1H NMR(d6-DMSO)8.15(1H，s)，7.87(1H，s)，6.88(2H，s).(e)4-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐该化合物从5-氨基-3-氯-4-氰基吡啶按照制备1步骤(c)和(d)的方法进行制备给出固体。MS(+CI)m/z 171[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)9.54(2H，s)，9.34(2H，s)，8.27(1H，s)，8.00(2H，s)，7.55(2H，d).
制备33-脒基-4-氨基吡啶盐酸盐(a)4-氨基-3-氰基吡啶该化合物按照制备2(b)的方法从4-氨基-3-甲酰吡啶制备，给出白色固体的产物。MS(+EI)m/z 119(M)+；1H NMR(d6-DMSO)8.38(1H，s)，8.12(1H，d)，7.02(2H，s)，6.66(1H，d).
(b)3-脒基-4-氨基吡啶在5℃下将三甲基铝(在己烷中2M，4ml，8.1mmol)加入氯化铵(430mg，8.1mmol)的甲苯中并且在室温下该混合物搅拌2小时。加入4-氨基-3-氰基吡啶(320mg，2.7mmol)并且该反应混合物在80℃下加热隔夜。冷却该混合物，并倾入到氯仿中的氧化铝上，用乙醇骤冷并过滤。浓缩滤液并用乙醚研磨给出固体。MS(+EI)m/z 119(M-NH3)+.
实施例17-氨基-4，5-二氢-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶盐酸盐(a)3-氨基噻吩-2-硫代羧酰胺将3-氨基噻吩-2-羧酰胺(4.5g，31mmol)的四氢呋喃溶液用Lawesson氏试剂(7.7g，190mmol)处理并且室温下搅拌该溶液18小时。除去溶剂且残余物通过硅胶层析纯化，用二氯甲烷作为洗脱剂。获得黄色粉末的产物(2.8g，56％)，m.p.98-99℃.(b)4，5-二氢-7-(甲基硫代)-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐将3-氨基噻吩-2-硫代羧酰胺(1.0g，6.3mmol)、碘甲烷(0.39ml，6.3mmol)和苯甲醛(0.67g，6.3mmol)的乙腈溶液室温下搅拌18小时。过滤收集该产物通过，用乙腈和乙醚依次洗涤并且干燥(1.58g，64％)，m.p.193-194℃.(c)4，5-二氢-7-氨基-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶盐酸盐将4，5-二氢-7-(甲基硫代)-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐(0.5g，1.29mmol)的乙腈溶液用干燥的氨气饱和，然后在回流下加热20小时。除去溶剂且残余物用乙醚/乙醇混合物研磨给出吸湿粉末的氢碘酸盐(92mg)，m.p.179-181℃。该物料通过中和接着用过量乙醚中的氯化氢处理转化为盐酸盐(m.p.229-231℃)。
实施例2下列化合物按照类似于实施例1的过程制备(a)5-环丙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶盐酸盐，m.p.195-196℃。(b)5-乙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐，m.p.177℃。(c)5-(2-噻唑基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐三水合物，m.p.194-195℃。(d)5-(2-呋喃基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐三水合物，m.p.239-240℃。
实施例37-氨基-4，5-二氢-5-乙炔基噻吩并[3，2-d]嘧啶盐酸盐(a)下列化合物按照类似于实施例1的方法制备7-氨基-4，5-二氢-5-(2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻吩并[3，2-d]嘧啶氢碘酸盐，MS m/z 250[M+H]+.(b)7-氨基-4，5-二氢-5-乙炔基噻吩并[3，2-d]嘧啶盐酸盐将步骤(a)的产物(0.47g，1.9mmol)的四氢呋喃溶液用四丁基氟化铵(在THF中1M，2.27ml，2.27mmol)处理。该溶液室温下搅拌18小时并且减压下除去溶剂。残余物用二氯甲烷/甲醇混合物在氧化铝(Brockman 1级，中性)上的色谱法纯化，并且粗品部分用制备型反相高效液相色谱法进一步纯化。浓缩产品部分且以过量的乙醚中氯化氢处理沉淀出盐酸盐。乙醚研磨后获得乳白色粉末的标题化合物盐酸盐(14.2mg)，m.p.194-196℃。
实施例47’-氨基螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并-[3，2-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯氢碘酸盐(a)7’-(甲基硫代)螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并-[3，2-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯氢碘酸盐将3-氨基噻吩-2-硫代羧酰胺(0.5g，3.16mmol)、碘甲烷(0.2ml，3.16mmol)和N-乙氧甲酰-4-哌啶酮(0.47ml，3.16mmol)的乙腈溶液在室温下搅拌18小时。通过过滤收集该产物，乙腈洗涤并干燥留下浅黄色固体(0.88g)，MS(FAB)m/z 326[M+H]+.(b)7’-氨基螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并-[3，2-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯氢碘酸盐将在最少量乙腈中的实施例4(a)的产物(0.88g，1.94mmol)和碘化铵(0.28g，1.94mmol)的混合物以干燥的氨气饱和，然后在回流下加热6小时。蒸发溶剂并且使残余物在中性氧化铝上的层析纯化并用二氯甲烷/甲醇混合物洗脱，乙醚研磨后给出柠檬色粉末的产物(0.15g)，m.p.239℃(在143℃软化)。
实施例54’-氨基-3’-氯螺[哌啶-4，6’(7’H)-噻吩并[2，3-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯盐酸盐(a)3-脒基-2-氨基-4-氯噻吩盐酸盐在5℃下将三甲基铝(在甲苯中2.0M，8.33mmol，4.2ml)滴加入搅拌的氯化铵(446mg，8.33mmol)的甲苯(10ml)溶液中。在室温下2小时后，10分钟内分批添加入2-氨基-4-氯-3-氰基噻吩(440mg，2.78mmol)。并且该溶液加热至80℃下反应2小时，冷却，倾入到二氧化硅(2g)上，该混合物搅拌下用甲醇(10ml)处理。5分钟后过滤该混合物，固体以甲醇洗涤，蒸发滤液给出棕色固体粗品(640mg)，MS(+CI)m/z176[M+H]+，300 MHz1H NMR(d6-DMSO)9.07(1H，br.s)，8.95(1H，br.s)，6.92(1H，br.s)，6.57(1H，s)(对于过量的氯化铵也有信号)。(b)4’-氨基-3’-氯螺[哌啶-4，6’(7’H)-噻吩并[2，3-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯盐酸盐。
使3-脒基-2-氨基-4-氯噻吩盐酸盐(130mg)与N-乙氧甲酰-4-哌啶酮(0.6mmol，0.1ml)在90℃下加热2小时，冷却并蒸发。该残余物在中性氧化铝上通过快速柱层析纯化，并用二氯甲烷/甲醇混合物洗脱，该产物用乙醚中的1N氯化氢处理提供米色固体，MS(+CI)m/z329[M+H]+，1H NMR(d6-DMSO)6.34(1H，s)，4.10(2H，q，J 7.2Hz)，3.79-3.64(4H，m)，2.09-1.99(4H，m)，1.24(3H，t，J 7.2Hz).
实施例64’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’[1’H]-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]盐酸盐将含有2-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐(0.22g，1.05mmol)、1-(4-氰基苯甲酰基)-4-哌啶酮乙二醇缩酮(1.08g，3.98mmol)的1M氯化氢的乙醚(3ml)和乙醇(15ml)溶液在70℃下搅拌18小时。冷却该混合物、浓缩并在中性氧化铝上通过快速柱层析纯化，并用二氯甲烷/甲醇(10∶1至5∶1)作为洗脱液洗脱提供黄色固体产物，m.p.173-175℃。
实施例74’-氨基-(2-噻吩酰基)-螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]盐酸盐该化合物按照实施例6的方法从2-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐制备给出黄色固体，m.p.144-145℃。
实施例84’-氨基螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并-[3，2-d]-嘧啶)]-1-羧酸乙酯盐酸盐该化合物按照实施例6的方法从2-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐制备给出黄色固体，m.p.135-136℃。
实施例94’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并-[3，4-d]-嘧啶)]盐酸盐该化合物按照实施例6的方法从4-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐制备给出黄色固体。MS(+CI)m/z 347[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)10.76(1H，s)，9.66(1H，s)，8.96(1H，s)，8.42(1H，s)，8.15(1H，s)，8.06(1H，d)，7.96(2H，d)，7.81(1H，d)，7.60(2H，d)，3.75-3.95(2H，m)，3.35-3.6(2H，m)，1.8-2.2(4H，m).
实施例104’-氨基螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并-[3，4-d]-嘧啶)]-1-羧酸乙酯盐酸盐该化合物按照实施例6的方法从4-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐制备给出黄色固体。MS(+CI)m/z 290[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)8.24(1H，s)，7.95(1H，d)，7.60(1H，s)，7.50(1H，s)，4.04(2H，q)，3.4-3.6(4H，m)，1.6-1.9(4H，m)，1.19(3H，t).
实施例114’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并-[4，3-d]-嘧啶)]盐酸盐将3-脒基-4-氨基吡啶(0.56g)、1-(4-氰基苯甲酰基)-4-哌啶酮乙二醇缩酮(1.08g，3.98mmol)和碳酸钾(0.5g)的乙醇(20ml)悬浮液在70℃下搅拌48小时。冷却该混合物，浓缩并且在中性氧化铝上通过快速柱层析纯化，并用二氯甲烷/甲醇(20∶1至1∶1)洗脱提供白色固体产物。MS(+CI)m/z 347[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)8.99(1H，s)，8.34(1H，d)，7.97(2H，d)，7.60(2H，d)，7.01(1H，d)，3.3-4.0(4H，m)，1.8-2.2(4H，m)。
实施例124’-氨基螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯盐酸盐(a)3’，4’-二氢-4’-氧代螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯使1M氯化氢的乙醚(3ml)和乙醇(10ml)中的3-酰氨基-2-氨基吡啶(0.5g，3.6mmol)、N-乙酯基-4-哌啶酮(0.7g，4.02mmol)和3A分子筛(4g)回流下加热1小时。该混合物在硅胶上吸收并在硅胶上通过快速柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(20∶1至5∶1)洗脱，提供白色固体产物(0.8g)。MS(+CI)m/z 291[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)8.56(1H，s)，8.36(1H，s)，8.21(1H，d)，8.02(1H，d)，6.80(1H，dd)，4.04(2H，q)，3.4-3.62(4H，m)，1.65-1.92(4H，m)，1.18(3H，t).(b)3’，4’-二氢-4’-硫代氧代螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯将3’，4’-二氢-4’-氧代螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯(0.74g，2.55mmol)和lawesson氏试剂(0.62g，1.5mmol)的二噁烷(15ml)溶液回流下加热2小时。该混合物在硅胶上吸收并在硅胶上通过快速柱层析纯化，以二氯甲烷/甲醇(50∶1)洗脱提供白色固体产物(0.7g)。MS(+CI)m/z 307[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)10.37(1H，dd)，8.34(1H，dd)，8.24(1H，dd)，8.10(H，s)，6.76(1H，dd)，4.04(2H，q)，3.6-3.78(2H，m)，3.3-3.5(2H，m)，1.75-1.90(4H，m)，1.21(3H，t).(c)4’-氨基螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并-[2，3-d]-嘧啶)]-1-羧酸乙酯盐酸盐在室温下将碘甲烷(0.1ml，1.63mmol)加入至3’，4’-二氢-4’-硫代螺[哌啶-4，2’-[1’H]-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯(0.5g，1.63mmol)的乙腈(20ml)溶液中。搅拌该溶液20小时，蒸发并且在硅胶上通过快速柱层析纯化，以二氯甲烷/甲醇(100∶1)作为洗脱剂洗脱提供硫代亚氨酸酯。使该硫代亚氨酸酯溶于用氨饱和的乙腈(20ml)中，在高压气体贮存罐中于150℃加热48小时。蒸发溶液并且残余物在中性氧化铝上通过快速柱层析纯化，以二氯甲烷/甲醇(10∶1)洗脱，并用乙醚中1M氯化氢酸化后提供产物。MS(+CI)m/z 290[M+H]+；1H NMR(d6-DMSO)10.34(1H，s)，9.40(1H，s)，8.61(1H，s)，8.41(1H，s)，8.40(1H，dd)，8.26(1H，dd)，6.89(1H，dd)，4.05(2H，q)，3.4-3.7(4H，m)，1.85-2.01(4H，m)，1.20(3H，t).
实施例134-氨基-2-(2-噻吩基)-吡啶并[3，2-d]嘧啶盐酸盐将2-脒基-3-氨基吡啶盐酸盐(0.10g，0.47mmol)和2-噻吩甲醛(thiophenealdehyde)(60mg，0.54mmol)的乙醇(1ml)溶液在50℃下搅拌18小时。冷却该混合物，然后浓缩并且残余物在中性氧化铝上通过快速柱层析纯化，以二氯甲烷/甲醇(20∶1至10∶1)作为洗脱液洗脱，提供棕/红色固体产物，m.p.186-187℃。
实施例147’-氨基-1-(6-氰基-3-吡啶羰基)螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并[3，2-d]嘧啶)]氢碘酸盐通过实施例4的方法使用1-(6-氰基-3-吡啶羰基)-4-哌啶酮乙二醇缩酮(WO 97/14686)制备。M.p.260-261℃(分解)。
筛选本发明化合物的药理活性在下列筛选中得到测定。筛选1式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体的活性可通过基于Frstermann等，Eur.J.Pharm.，1992，225，161-165的方法筛选其一氧化氮合成酶抑制活性。一氧化氮合成酶将3H-L-精氨酸转化为3H-L-瓜氨酸，后者可通过阳离子交换色谱法分离并经液体闪烁计数量化。
从来自培养的鼠巨噬细胞系J774A-1(从帝国癌症研究基金会实验室获得)经诱导后制备酶。在用10％胎儿牛血清、4mM L-谷氨酰胺和抗生素(100单位/ml青霉素G、100mg/ml链霉素和0.25mg/ml两性菌素B)补充的Dulbeccos改良Eagles培养基(DMEM)中培养J774A-1细胞。细胞保持在37℃下含有35ml的培养基内的并处于含有5％CO2的湿润大气的225cm3烧瓶中常规生长。
通过应答于干扰素-g(IFNg)和脂多糖(LPS)的细胞产生一氧化氮合成酶。除去来自融合培养烧瓶的培养基并用25ml(每瓶)新鲜的含有1mg/ml LPS和10单位/ml的IFNg培养基置换。在培养基中经过17-20小时之后，通过从瓶表面进入培养基刮去细胞层完成细胞的采集。通过离心(10分钟内1000g)收集细胞，并且通过将含有50mM Tris-HCl(在20℃下pH7.5)、10％(v/v)甘油、0.1％(v/v)Triton-X-100、0.1mM二硫苏糖醇与包含(2mg/ml)亮抑蛋白酶肽、大豆胰蛋白酶抑制剂(10mg/ml)、抑肽酶(5mg/ml)和苯甲基磺酰氟(50mg/ml)的蛋白酶抑制剂合剂的溶液加入到细胞沉淀中制备溶解产物。
对于该试验，把25μl的底物合剂(50mM Tris-HCl(在20℃下pH7.5)、400μM NADPH、20μM黄素腺嘌呤二核苷酸、20μM黄素单核苷酸、4μM四氢生物喋呤、12μM L-精氨酸和0.025 mCi L-[3H]精氨酸)加到含有25μl在50mM Tris-HCl中的受试化合物的溶液的96孔滤板(0.45μM孔体积)的加样孔中。通过加入50μl细胞溶胞产物(如上制备)开始反应，且室温下孵育1小时后再加入50μl的3mM硝基精氨酸和21mM EDTA的水溶液终止反应。
使用Dowex AG-50W从标记L-精氨酸中分离标记L-瓜氨酸。在全部滤进96孔板后将150μl的25％的Dowex 50W(Na+形式)水溶性浆状物加入该试验中。滤液取样75μl并将其加入含有固体闪烁剂的96孔板的加样孔中。使样品干燥后L-瓜氨酸通过液体闪烁计数量化。
在一个典型的实验中，基础活性为每75μl样品300dpm，其在试剂对照组中增加至1900dpm。化合物活性用IC50(在本试验中给出50％酶抑制作用的药物物质的浓度)表示，并且给出IC50(50％抑制浓度)为10μM的氨基胍作为检验本方法的试验标准。化合物在浓度范围内试验且计算从抑制作用所获得的IC50值。在100μM下至少抑制25％的酶的化合物归类为有活性的并且使之进行至少一个重复试验。
在以上筛选中，实施例1至14的化合物进行测定并且给出低于25μM的IC50值，表明它们被期待显示有用的治疗活性。筛选2如在下列试验中所证实的那样化合物对于抑制人一氧化氮合成酶诱导形式也显示出活性。
来自培养的人结肠肾上腺素瘤细胞系DLD1(从欧洲动物细胞培养收集会获得-细胞系号90102540)的细胞经诱导后制备酶。在用10％胎儿牛血清、4mM L-谷氨酰胺和抗生素(100单位/ml青霉素G、100mg/ml链霉素和0.25mg/ml两性菌素B)补充的RPMI 1640培养基中培养DLD1细胞。细胞保持在37℃下含有35ml的培养基内的并处于含有5％ CO2的湿润大气的225cm3烧瓶中常规生长。
通过应答于干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-1β(IL-1β)的细胞产生一氧化氮合成酶。除去来自融合烧瓶的培养基并用25ml(每瓶)新鲜的含有250单位/ml IL-1β和1000单位/ml IFN-γ培养基置换。在培养基中经过17-20小时之后，通过从瓶表面进入培养基刮去细胞单层完成细胞的采集。通过离心(10分钟内1000g)收集细胞，并且通过将含有50mM Tris-HCl(在20℃下pH7.5)、10％(v/v)甘油、0.1％(v/v)Triton-X-100、0.1mM二硫苏糖醇与包含(2μg/ml)亮抑蛋白酶肽、大豆胰蛋白酶抑制剂(10μg/ml)、抑酶肽(5μg/ml)和苯甲基磺酰氟(50μg/ml)的蛋白酶抑制剂合剂的溶液加入到细胞沉淀中制备溶解产物。
对于该试验，把25μM的底物合剂(50mM Tris-HCl(pH7.5)、400μM NADPH、20μM黄素腺嘌呤二核苷酸、20μM黄素单核苷酸和4μM四氢生物喋呤)加入至一个96孔板的加样孔中。受试化合物通过和40μl细胞溶胞产物(如上制备)一起加入与酶预孵育，并且在加入50mM Tris-HCl中的10μl含有30μM L-精氨酸和0.025μCi L-[3H]精氨酸开始酶反应后，受试化合物在37℃下孵育1小时。在37℃下孵育再继续1小时。通过加入50μl的3mM硝基精氨酸和21mM EDTA的水溶液终止该反应。
使用Dowex AG-50W从标记L-精氨酸中分离标记L-瓜氨酸。将120μl的25％Dowex 50W水溶性浆状物加入96孔板(0.45μm孔容积)内。对于加入了120μl的已终止试验的该混合物，从滤液中取样75μl并加入到含有固体闪烁剂的96孔板的加样孔中。使样品干燥后L-瓜氨酸通过液体闪烁计数量化。
在一个典型的实验中，基本活性为每75μl试剂对照的样品是300dpm，其在酶存在下增加至3000dpm。化合物活性用IC50(在本试验中给出50％酶抑制作用的药物物质的浓度)表示，并且其中给出IC50为大约0.4μM的L-NMMA作为检定本方法的试验标准。化合物在浓度范围内试验并且计算从抑制作用所获得的IC50值。
在此筛选中，实施例1至14化合物给出少于25μM的IC50值，表明它们被期待显示有用的治疗活性。
权利要求
1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体、外消旋体或互变异构体
其中R1代表氢、烷基C1至6、烷氧基C1至6、卤素或三氟甲基；R2代表氢或烷基C1至6；A代表可以相同的或不同的并选自O、N和S的含有1至3个杂原子的五员杂环芳环；或者为含有1至3个氮原子的六员杂环芳环；(i)R3代表苯基、含有1至3个氮原子的六员杂环芳环或可为相同的或不同的并选自O、N和S的含有1至3个杂原子的五员杂环芳环，其中苯基或杂环芳环可任选由烷基C1至6、链烯基C2至6、炔基C2至6、烷氧基C1至6、卤素、羟基、烷硫基C1至6、氰基、三氟甲基、硝基或基团-NR5R6取代；并且R4、R5和R6独立地代表氢或烷基C1至6；或者(ii)R3代表烷基C1至8、链烯基C2至8或炔基C2至8；并且R4代表氢或烷基C1至6；或者(iii)R3和R4共同代表(CH2)a·Z·(CH2)b，Z代表N(COOR7)，其中R7代表烷基C1至6或卤代烷基C1至6，或R7代表基团(CH2)nYR9其中n代表2至5的整数，Y代表O、S或一个键和R9代表由卤素或硝基任选取代的烷基C1至6或者R9代表由烷基C1至6、卤素或硝基任选取代的苯基；并且a和b独立地代表1至3的整数，条件是a+b是3或4；或者(iv)R3和R4共同代表(CH2)a·Z·(CH2)b，Z代表N(COR8)，其中R8代表苯基、含有1至3个氮原子的六员杂环芳环或为可以相同的或不同的并选自O、N和S的含有1至3个杂原子的五员杂环芳环，其中苯基或杂环芳环可任选由烷基C1至6、烷氧基C1至6、卤素、硝基、氰基、三氟甲基、烷基磺酰基C1至6或氨基磺酰基取代；和a和b独立地代表1至3的整数，条件是a+b是3或4。
2.权利要求1的式(I)化合物，其中A代表噻吩并或者吡啶并环。
3.权利要求2的式(I)化合物，其中该化合物为噻吩并[2，3-d]嘧啶或噻吩并[3，2-d]嘧啶衍生物。
4.权利要求2的式(I)化合物，其中该化合物为吡啶并[2，3-d]嘧啶、吡啶并[3，2-d]嘧啶、吡啶并[3，4-d]嘧啶或吡啶并[4，3-d]嘧啶衍生物。
5.权利要求1至4中任何一项的式(I)化合物，其中R3代表苯基、环丙基、乙基、噻唑基、乙炔基或呋喃基。
6.权利要求1至5中任何一项的式(I)化合物，其中R3和R4与权利要求1中选择(iii)一致，Z代表N(COOC2H5)并且a和b每一个具有值2。
7.式(I)化合物为7-氨基-4，5-二氢-5-苯基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-环丙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-乙基-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-(2-噻唑基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；5-(2-呋喃基)-4，5-二氢-7-氨基噻吩并[3，2-d]嘧啶；7-氨基-4，5-二氢-5-乙炔基噻吩并[3，2-d]嘧啶；7’-氨基螺[哌啶-4，5’(4’H)-噻吩并[3，2-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-3’-氯螺[哌啶-4，6’(7’H)-噻吩并[2，3-d]嘧啶]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]；4’-氨基-(2-噻吩酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，2-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，4-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[3，4-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4’-氨基-(4-氰基苯甲酰基)-螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[4，3-d]嘧啶)]；4’-氨基螺[哌啶-4，2’-(1’H)-(吡啶并[2，3-d]嘧啶)]-1-羧酸乙酯；4-氨基-2-(2-噻吩基)-吡啶并[3，2-d]嘧啶7’-氨基-1-(6-氰基-3-吡啶羰基)螺[哌啶-4，5’-(4’H)-(噻吩并[3，2-d]嘧啶)]；或其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体。
8.权利要求1至7中任何一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体作为药物使用。
9.包括权利要求1至7中任何一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体与药学上可接受的辅助剂、稀释剂或载体的药用组合物。
10.权利要求1至7中任何一项的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体在治疗或预防其中抑制一氧化氮合成酶是有益的人体疾病或症状的药物制备中的用途。
11.权利要求10所要求保护的用途，其中被抑制的诱导一氧化氮合成酶占优势。
12.权利要求1至7中任何一项所定义的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体在治疗或预防炎性疾病的药物制备中的用途。
13.权利要求12中所要求保护的用途，其中所述疾病为哮喘或类风湿性关节炎。
14.权利要求1至7中任何一项所定义的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体在治疗或预防疼痛的药物制备中的用途。
15.权利要求1至7中任何一项所定义的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体与COX-2抑制剂组合治疗或预防炎性疾病的药物制备中的用途。
16.治疗或减少人体疾病或病症或者减少其中抑制一氧化氮合成酶是有益的疾病或症状的危险的方法，该方法包括给予患有或有患这样的疾病或症状的增加危险的患者治疗有效量的权利1至7中任一项要求所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体。
17.权利要求16的治疗方法，其中抑制的诱导一氧化氮合成酶占优势。
18.治疗或减少患有或处在所述疾病的危险中的患者的炎性疾病的方法，其中该方法包括给予患者治疗有效量的权利要求1至7中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体和互变异构体。
19.权利要求18要求保护的治疗方法，其中所述疾病为哮喘或类风湿性关节炎。
20.对患有或处在所述疾病危险中的患者治疗或减少疼痛危险的方法，其中该方法包括给予患者治疗有效量的权利要求1至7中任一项要求所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体和互变异构体。
21.对患有或处在所述疾病危险的患者治疗或减少炎性疾病危险的方法，其中该方法包括联合给予患者治疗有效量的权利要求1至7中任一项所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、对映体和互变异构体与COX-2抑制剂。
22.权利要求1至7中任何一项所定义的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、对映体或互变异构体的制备方法，其中该方法包括(a)使式(II)化合物
其中A、R1和R2如上所定义，与式(III)化合物或其乙缩醛衍生物反应R3COR4(III)其中R3和R4如上所定义；或者(b)使式(IV)或者(IV’)化合物
其中A、R1、R2、R3和R4如上所定义，并且R8代表烷基基团；与氨或其等价物反应；或者(c)式(I)化合物，其中R3和R4是上面所给出的式(I)的总体定义中选择(i)并且R5和R6中一个或两者代表烷基C1至6，可通过其中R5和R6中一个或两者代表氢的相应的化合物的烷基化而制备；或者(d)其中R2代表烷基C1至6的式(I)化合物是由其中R2代表氢的相应的化合物烷基化而制备的；或者(e)其中一个或多个氮原子和/或另一个原子被保护的式(I)化合物的脱保护；或者(f)其中R3和R4是上面所给出的式(I)的总体定义中选择(iv)的式(I)化合物可通过使式(V)化合物
其中A、R1、R2、a和b如上所定义，与式(VI)化合物反应而制备X-L(VI)其中X代表COOR7或COR8，R7和R8如上所定义且L为离去基团；并且如果需要或必要的话，将生成的式(I)化合物或其另一种盐转化为其药学上可接受的盐，或者反过来如果需要的话，将生成的式(I)化合物转化为其旋光异构体。
全文摘要
提供了其中A代表为可以相同的或不同的并选自O、N和S的含有1至3个杂原子的五员杂环芳环或者含有1至3个氮原子的六员杂环芳环并且R
文档编号A61K31/527GK1259131SQ9880584
公开日2000年7月5日 申请日期1998年4月7日 优先权日1997年4月9日
发明者T·麦伊纳尔利, A·廷克 申请人:英国阿斯特拉药品有限公司