专利名称：具有雌激素活性的雌－5(10),7－二烯的制作方法
技术领域：
本发明背景使用基本上纯的和低毒性的天然产生的雌激素组合物如结合型雌激素(螯合雌马雌激素的)变成了一种优选的减轻绝经综合症、雌激素缺乏妇女骨质疏松症/骨质减少和其它与激素有关疾病的症状的医学治疗方法。天然产生的雌激素组合物的雌激素成分通常被确定为雌酮、马烯雌酮、马萘雌酮、17β-雌二醇、二氢马萘雌酮和17β-马萘雌酮的硫酸酯(US2834712)。雌激素组合物通常用约6.5-7.5基本上中性pH的有机或无机酸碱金属盐来缓冲或稳定。尿素也被用作稳定剂(US3608077)。在US4154820中讨论了混入抗氧剂来稳定合成的螯合的雌激素而不用三(羟基甲基)氨基甲烷(TRIS)控制pH来防止水解。
本文所描述的化合物之一雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐是结合型雌激素(螯合雌马雌激素的)的较少的成分。美国专利2930805公开了3，17β-二羟基-5(10)，7-雌二烯的制备及其用作抗雌激素剂。美国专利3340278公开了5(10)，7-雌二烯-3，1 7-二酮、3，17β-二羟基-5(10)，7-雌二烯和17β-羟基-5(10)，7-雌二烯-3-酮的制备，这些化合物用作制备马烯雌酮的中间体。
本发明描述本发明提供雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮-3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。本发明也提供一种化合物，该化合物是雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮的3-碱金属盐。这些化合物统称为本发明的化合物。雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮的结构分别为下面所示的化合物5B和化合物5A。
雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯、雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-硫酸酯或雌-5(10)，7-二-烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物包括但不限于碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的二烷基铵盐和每个烷基都含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3的碱金属可以是锂、钠或钾。
因为雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐是结合型雌激素(螯合雌马雌激素的)的较少的成分，本发明也提供大于1％纯度的雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐。
本发明也提供一种基本上由雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐组成的化合物和一种基本上由雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐组成的化合物。
本发明中，治疗包括治疗存在的疾病、缓解疾病，或使疾病减轻，并且抑制包括抑制或防止疾病的进行或发展。
本发明化合物可通过下列方法来制备，该方法包括(a)脱去17-保护的3-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮，例如，17-(1，2-亚乙基)二氧雌-5(10)，7-二烯-3-醇或3-保护的3-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮，例如，3-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧雌-5(10)，7-二烯-17-酮，并且回收3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮或3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-同；或(b)使3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮进行Mitsunobu反应并回收3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮；或(c)通过与三氧化硫-氨、-烷基胺、-二烷基胺或三烷基胺试剂如三氧化硫-三乙基胺或三氧化硫-吡啶反应，以形成铵、烷基铵、二烷基铵、三烷基铵或吡啶鎓3-硫酸酯将3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为它的3-硫酸酯并且，如果需要，通过阳离子交换将3-硫酸酯盐转化为另外的3-硫酸酯盐，例如通过用金属氢氧化物溶液处理形成金属盐；或(d)通过与三氧化硫-氨、-烷基胺、-二烷基胺或三烷基胺试剂如三氧化硫-三乙基胺或三氧化硫-吡啶反应，以形成铵、烷基铵、二烷基铵、三烷基铵或吡啶鎓3-硫酸酯将3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为它的3-硫酸酯并且，如果需要，通过阳离子交换将3-硫酸酯盐转化为另外的3-硫酸酯盐，例如通过用金属氢氧化物溶液处理形成金属盐；或(e)将3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为它的3-葡萄糖醛酸化物或其钠盐；或(f)将3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为它的3-葡萄糖醛酸化物或其钠盐；或(g)通过用碱中和将3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮的3-葡萄糖醛酸化物转化为其可药用盐；或(h)通过用碱中和将3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮的3-葡萄糖醛酸化物转化为其可药用盐；或(i)通过与含碱金属的碱反应，将3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为其碱金属盐；或(j)通过与含碱金属的碱反应，将3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮转化为其碱金属盐；或可从容易获得的起始物制备本发明化合物。例如，在反应流程式I和II由马烯雌酮甲基醚(US3644439，该文献引入本文供参考)和17β-羟基雌-5(10)，7-二烯-3-酮(8)(US2930805，该文献引入本文供参考)开始制备雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐(7)和雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯三乙基铵盐(15)。可按照反应流程式III来制备雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物钠盐(16)和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物钠盐(17)。
如反应流程式I所示，马烯雌酮甲基醚的17-(1，2-亚乙基)二氧基衍生物1用液氨中的锂进行Birch还原而转化为三烯2。弱草酸处理来选择性地水解烯醇醚而提供酮3。连续还原3-酮(氢化锂铝)；并脱去17-酮的保护(对甲苯磺酸)产生混合物形式的本发明产物5A和5B，其中3α-异构体5A为主(4∶1的比例)。通过制备高压液相色谱直接进行分离。另外，通过Mitsunobu反应可将C-3构型转化为以3β-异1构体为主的混合物。通过柱色谱层析容易地分离高结晶的3-(3，5-二硝基)苯甲酸酯，Mitsunobu转化产物。水解后，5B用三乙胺∶三氧化硫试剂转化为它的3β-硫酸酯。
反应流程式I
反应流程式II描述通过需要C-3和C17功能基有区别的保护-脱保护顺序的还原氧化顺序来将17β-羟基雌-5(10)，7-二烯-3-酮(8)转化为5A和5B的混合物(6.6∶1的比例)。C-3位还原采用氢化锂三-叔丁氧基铝，Swern型氧化产生C-17酮。通过HPLC分离5A和5B。例举了用吡啶三氧化硫将5A转化为3α-硫酸酯。通过用在非水溶剂如THF或DMF中的碱金属氢化物如氢化钠处理各自的醇来制备5A和5B的碱金属盐。5A和5B的碱金属盐在制备5A和5B的硫酸酯(通过胺三氧化硫处理)中用作中间体并且也可用作雌激素化合物。
反应流程式II
反应流程式III显示分别由雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)制备雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)3-葡萄糖醛酸化物钠盐(16)和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)3-葡萄糖醛酸化物钠盐(17)。可用弱酸处理(16)和(17)的葡萄糖醛酸化物钠产生各自的3-葡萄糖醛酸化物。
反应流程式III
如下文描述的体外和体内标准药理学试验方法所示，本发明化合物具有雌激素活性，其中化合物雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)和雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)作为本发明的代表性化合物来评价。与雌激素受体结合初步评价检查5B和5A与制成可溶的细胞提取物(细胞溶质)的人雌激素受体(hER-α)的竞争性结合特性。在该标准药理学试验过程中，5B和5A表明没有特异的结合活性。然而，使用全细胞试验方法分析与雌激素受体的结合时，清楚表明特异性结合。该试验方法表明5B的IC50为1.5×10-7M或估计的Ki为150nM。类似地，5A的IC50为2×10-7M。这应当可与Ki分别为51、67和375nM的雌酮、马烯雌酮和马萘雌酮相比较。体外共转染试验方法在该标准的药理学试验方法，hER-α过度表达在用腺-2x-ERE-tk-虫荧光素酶感染的中华仓鼠卵巢(CHO)细胞(一种雌激素反应性的报道基因构建细胞)中，将细胞暴露于改变浓度(10-12-10-5M)的5B或5A24小时。细胞也暴露于10-9M的17β-雌二醇。处理24小时后，将细胞溶胞并测定细胞提取物的虫荧光素酶活性。结果5B的EC50约为29nM并且5A为43nM。使用类似的方法，以前的数据表明雌酮的EC50为5.6nM。体内向子宫活性用改变剂量的5B或5A处理未成熟大鼠3天(S.C.)并且用作阳性和阴性对照的其它组(n＝6)的大鼠分别用0.5μg乙炔基雌二醇和载体处理。该标准药理学试验方法的结果显示在下表中。
所得结果表明几乎在所有剂量下与载体组相比具有显著的子宫刺激作用。剂量在10μg/鼠以上时，5B和5A与载体组的区别是显著的，p-值均小于0.001。由该试验方法估计5B的EC50大约为30μg/鼠或0.6mg/kg并且5A稍低。在类似的试验方法中，估计雌酮的EC50为0.2mg/kg。因此，由体内标准药理学试验方法获得的数据表明5B和5A具有显著的雌激素活性。
基于使用本发明代表性化合物进行的这些标准药理学试验结果，雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮葡萄糖醛酸化物或其可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐、雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-碱金属盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-碱金属盐可用于雌激素缺乏的替代治疗。所以，本发明化合物可用于卵巢切除术或绝经期后的雌激素替代治疗，并且可用于缓解与雌激素缺乏相关的症状，包括血管舒缩症(如热潮红)和其它与绝经相关的疾病，如阴道的萎缩症、阴道炎和可引起增加排尿频率、失禁和排尿困难的尿道下端的萎缩性变化。本发明化合物可用于预防骨丢失和抑制或治疗骨质疏松。本发明化合物具有心脏保护功能，可用于治疗动脉粥样硬化。这些心血管保护特性在用雌激素治疗绝经后病人以防止骨质疏松时和需要雌激素治疗的男性中是极其重要的。本发明化合物也是抗氧剂并因此用于治疗或预防自由基诱导的疾病。证明适用于抗氧剂治疗的特定疾病涉及癌症、中枢神经系统疾病、早老性痴呆、骨疾病、衰老、免疫性疾病、外周血管性疾病、类风湿性关节炎、自身免疫性疾病、呼吸窘迫、肺气肿、预防在灌注损伤、病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、肺结核、牛皮癣、系统性红斑狼疮、成人呼吸窘迫症、中枢神经系统损伤和中风。另外，本发明化合物用于抑制泌乳、预防和治疗流行性腮腺炎并发的睾丸炎。
本发明化合物可单独用作治疗剂或与其它治疗剂如雌激素、孕激素和雄激素一起合用。
本发明化合物可单独给药或与可药用载体配制后给药，其配比取决于该化合物的溶解度和化学性质，所选择的给药途径和标准药理学惯例。可药用载体可以是固体的或液体的。
固体载体可包括一种或多种物质，这些物质也可以作为矫味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂(glidants)、压片助剂、粘合剂或药片崩解剂；该固体载体也可以是胶囊材料。在粉剂中，载体是很好分散的固体，它很好与分散的活性组分形成混合物。在片剂中，活性组分按合适比例与具有所需压片特性的载体混合并冲压成所需的形状和大小。粉剂和片剂优选含有高达99％的活性组分。合适的固体载体包括例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。
在制备溶液、悬浮液、乳剂、糖浆、酏剂和增压组合物时使用液体载体。活性组分可溶于或悬浮于可药用液体载体如水、有机溶剂、两者的混合物或可药用油或脂中。液体载体可含有其它合适的药用添加剂如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、芳香剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。口腔和非胃肠道给药的液体载体的合适例子包括水(部分含有上述添加剂如，纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括单元醇和多元醇，如二元醇)及其衍生物、lethicins和油(如，分馏的椰子油和花生油)。对于非胃肠道给药来说，载体也可以是油酯如乙基油酸酯和异丙基肉豆蔻酸酯。灭菌液体载体可用于非胃肠道给药的灭菌液体形式的组合物。增压组合物的液体载体可以是卤化烃或其它可药用喷射剂。
灭菌溶液或悬浮剂的液体药物组合物可例如通过肌内、腹腔或皮下注射来使用。灭菌溶液也可以静脉给药。本发明化合物也可以以液体或固体组合物形式口服给药。
本发明化合物可以以常规的栓剂形式直肠或阴道给药。通过鼻腔或支气管吸入给药时，本发明组合物可配制成水或部分水的溶液，然后以气雾剂形式来使用。本发明化合物也可以通过使用经皮贴剂来经皮给药，贴剂含有活性组分和对活性化合物惰性的载体对皮肤无毒的并允许活性剂释放经皮肤系统吸收进入血液。该载体可产生各种各样的形式如霜剂和油膏剂、糊剂、凝胶和闭合装置。霜剂和油膏剂可以是粘稠液体或水包油或油包水型的半固体乳剂。含有可吸收粉剂的糊剂也是合适的，所述粉剂分散在含有活性组分的石油和亲水石油中。可使用各种闭合装置来将活性组分释放到血液中，如半渗透膜包裹储库，它含有活性组分和可有可无的载体，或半渗透膜包裹含有活性组分的基质。其它闭合装置在文献中是已知的。
剂量的要求随所采用的特定组合物、给药途径、存在的症状的严重性和被治疗的特定受体发生变化。根据标准药理学试验过程中获得的结果，活性化合物的预计日剂量为0.02μg/kg-750μg/kg。治疗通常以低于化合物最佳剂量的小剂量开始。然后，增加剂量直到在该条件下达到最佳效果；口腔、非胃肠道、鼻腔或支气管给药的精确剂量将由给药医生根据各自被治疗受体的病历来决定。优选地，药物组合物是单剂量形式，如片剂或胶囊。在这种形式时，组合物可被进一步分为含有合适量活性组分的单位剂量；单位剂量形式可被包装成组合物，例如包装的粉剂、小瓶、安瓿、预先填充的注射器或含有液体的小药囊。单位剂量形式可以是如胶囊或片剂本身，或者可以是包装形式的合适量的任何这种组合物。
下文提供本发明代表性化合物的制备方法。特别是描述了显示在反应流程式I和II中的化合物的制备。这些反应流程式使用的化合物标号也用于下列实施例。
实施例1制备雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐(7)17-(1，2-亚乙基)二氧基-3-甲氧基雌-1，3，5(10)，7-四烯(1)将马烯雌酮3-甲基醚(5g，18mmol)、乙二醇(10ml，0.18mol)和对甲苯磺酸单水合物(0.1g，0.53mmol)的甲苯(100mL)悬浮液加热回流8小时以便使用迪安-斯达克装置共沸除去水。用5％碳酸氢钾水溶液(2×25mL)洗涤反应混合物。分出有机层、无水碳酸钾干燥并浓缩而获得白色固体1(5.8g，99％)。1H NMR(CDCl3)7.8-6.74(m，3H)，5.4(br s，1H)，3.88 (m，4H)，3.74(s，3H)，0.75(s，3H)13C NMR(CDCl3)157.94，134.84，130.72，129.48，119.94，114.70，113.13，112.83，65.82，65.14，55.56，50.25，48.32，40.72，34.86，32.80，32.56，30.48，14.6317-(1，2-亚乙基)二氧基-3-甲氧基雌-2，5(10)，7-三烯(2)将液氨(100mL)冷凝到芳烃1(1.63g，5mmol)的THF(25mL)溶液中。在5分钟内于-50℃温度下加入小片新鲜切割的锂丝(0.6g，86mmol)。将深蓝色溶液在-33℃搅拌30分钟并在10分钟内加入乙醇(100％，10mL)。蒸去氨并加入水(20mL)。将两相混合物转移到分液漏斗中并用乙醚(3×30mL)提取。合并乙醚提取液、用盐水洗涤、碳酸钾干燥并浓缩而产生有光泽的白色固体，将其用乙醚(4×20mL)洗涤，得到烯醇醚(1.2g，73％)。1H NMR(CDCl3)5.27(br s，1H)，4.66(br s，1H)，3.91(m，4H)，3.56(s，3H)，0.74(s，3H)13C NMR(CDCl3)152.86，137.94，126.96，123.11，119.97，114.76，90.98，65.64，65.04，54.20，49.90，48.42，42.50，34.74，33.68，31.72，29.31，28.91，20.45，14.8317-(1，2-亚乙基)二氧基雌-5(10)，7-二烯-3-酮(3)向烯醇醚2(0.5g，1.52mmol)在二氯甲烷(30mL)、THF(20mL)和甲醇(20mL)的溶液中加入水(30mL)，然后加入草酸二水合物(1.2g，9.5mmol)并将所得到的二相性混合物充分搅拌8.5小时。将两层分离并将水层用二氯甲烷(2×20mL)洗涤。将有机层合并，用无水碳酸钾干燥并浓缩得到酮3的玻璃状固体(0.47g，98％)。1H NMR(CDCl3)5.27(br s，1H)，3.89(m，4H)，0.73(s，3H)13C NMR(CDCl3)212.21，137.85，129.95，123.85，119.76，114.33，65.61，64.99，49.72，48.19，44.10，43.40，39.56，34.67，31.86，31.73，29.26，28.87，20.34，14.8117-(1，2-亚乙基)二氧基雌-5(10)，7-二烯-3-醇(4)在0℃氮气下，向充分搅拌下的氢化锂铝(0.3g，7.9mmol)的乙醚(20mL)悬浮液中加入酮3(0.47g，1.52mmol)的乙醚(20mL)溶液。搅拌1.5小时后，将反应混合物通过相继加入水(0.3mL)、15％的氢氧化钠水溶液(0.3mL)和水(1mL)并搅拌30分钟骤冷。过滤出无机沉淀物并用乙醚(3×10mL)洗涤。合并乙醚提取物和洗涤液并浓缩得到泡沫状3α-和3β-醇4(0.47g，定量)的混合物(4∶1)。1H NMR(CDCl3)5.17(br s，1H)，3.98(m，0.2H)，3.88(m，0.8H)，3.8(m，4H)，0.66(s，0.6H)，0.65(s，2.4H)3α-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮(5A)和3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮(5B)向醇4(0.46g，1.45mmol)在丙酮(10mL)、THF(3mL)和水(1mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(0.1g，0.52mmol)。搅拌10小时后，反应混合物用乙醚(50ml)稀释并用5％碳酸氢钾(2×20mL)、盐水(25mL)洗涤和用无水硫酸钠干燥。将有机层浓缩得到醇5A和5B的蜡状固体混合物(0.45g，定量)。
HPLC(IB-SIL C18-BD，8μ，50×250mm，60％甲醇水溶液，205nm)分离0.35g醇的α/β混合物得到5A(0.145g)和5B(0.081g)的纯品。5A1H NMR(CDCl3)5.30(br s，1H)，3.86(m，1H)，0.69(s，3H)13C NMR(CDCl3)220.56，136.33，128.45，123.89，116.34，68.07，50.68，50.12，43.47，39.64，36.18，32.58，32.33，32.27，28.41，27.66，20.03，14.145B1H NMR(CDCl3)5.38(br s，1H)，4.08(m，1H)，0.76(s，3H)13C NMR(CDCl3)220.56，136.35，128.40，122.99，116.41，66.59，50.75，50.12，43.24，38.84，36.17，32.41，32.38，30.80，28.39，24.32，20.00，14.143β-(3，5-二硝基苯甲酰氧基)雌-5(10)，7-二烯-17-酮(6)在0℃氮气下，用2分钟的时间，向醇5(0.45g，1.6mmol)、3，5-二硝基苯甲酸(0.44g，2mmol)和三苯基膦(0.52g，2mmol)的甲苯(20mL)悬浮液中滴加偶氮二羧酸二乙酯〔0.32g，2mmol)。让反应混合物温热至室温并搅拌16小时。然后，将其加热至55-58℃4小时并浓缩至干。将粗品通过闪式色谱层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脱得到酯6的黄色固体(0.13g，17.4％)。1H NMR(CDCl3)9.2-8.4(m，3H)，5.54(m，1H)，5.41(br s，1H)，0.80(s，3H)3β-羟雌-5(10)，7-二烯-17-酮(5B)将酯6(0.13g，0.28mmol)在THF(10mL)和水(2mL)中的溶液用碳酸钾(0.02g，0.14mmol)处理并搅拌8小时。加入氢氧化锂(0.02g，0.84mmol)并再持续搅拌30分钟。将反应混合物用乙醚(20mL)稀释，用5％碳酸氢钾(2×20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。将溶剂蒸发掉得到醇7的紫色蜡状固体(0.073g，96％)。发现，该产品被少量3β-羟基雌-5(10)，6，8-三烯-17-酮14污染。
1H NMR(CDCl3)与制备HPLC分离5A和5B得到的样品相符。
GC/MS(硅烷化衍生物)分析5BM/Z＝344；滞留时间15.592分钟。3β-羟基雌-5(10)，7-二烯-17-酮，3-硫酸酯的钠盐(7)将粗品醇5B(0.07g，0.25mmol)溶解在THF(5mL)中并用三乙胺-三氧化硫复合物(0.1g，0.55mmol)处理48小时。通过过滤将结晶沉淀分离，溶解在水(5mL)中并用0.1N NaOH水溶液处理至pH10。将该水溶液用乙醚(2×10mL)洗涤并冷冻干燥得到7的蓬松固体(70mg)。
LC/MS(阴离子电子扫射)分析7M/Z＝351；滞留时间＝31.54分钟。1H NMR(CDCl3)0.78(1H)，1.30(1H)，1.47(td，1H)，1.77(1H)，1.80(1H)，1.84(1H)，1.88(1H)，1.93(1H)，2.02(1H)，2.08(1H)，2.19(dd，1H)，2.21(1H)，2.27(1H)，2.30(1H)，2.40(1H)，2.44(1H)，2.48(dd，1H)，2.54(bd，1H)，2.63(bd，1H)，4.78(m，1H)，5.40(bs，1H).13C NMR(CDCl3)14.2，20.7，25.0，29.1，29.2，32.8，33.2，36.7，36.9，44.2，51.0，51.5，75.3，117.1，123.6.129.3，137.3，223.3.
实施例2制备雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-硫酸酯的三乙胺盐(15)17β-乙酰氧基雌-5(10)，7-二烯-3-酮(9)将17β-羟基雌-5(10)，7-二烯-3-酮(1.24g，4.5mmol)在吡啶(20mL)和二氯甲烷(20mL)混合物中的溶液用乙酸酐(2.0eq，0.86mL)和DMAP(0.1eq，10mg，0.08mmol)处理。将该溶液在室温下搅拌16小时，然后倾入水(50mL)中。分离两层并将水层用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并有机层，用饱和的NaCl水溶液(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并减压浓缩得到油状物，将其通过在硅胶上闪式柱色谱层析纯化，用20％EtOAc/己烷洗脱，得到乙酸酯(1.03g，72％)的白色泡沫状物。将小部分在10％Et2O/己烷中重结晶得到白色针状物(mp113-4℃)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.29(1H，m)，4.77(dd，J＝6.15，3.7Hz，1H)，2.76(m，2H)，2.62(m，2H)，2.50(m，4H)，2.28(m，2H)，2.40(s，3H)，1.96(m，2H)，1.90(m，1H)，1.74(m，1H)，1.42(dt，13.2，3.9Hz，1H)，1.24(dq，J＝12，3.9Hz，1H)，0.69(s，3H).m/z(EI)314(M+).分析(C20H26O3)C，H，N计算值C，76.4，H，8.34，N，0.0；实测值C，76.18，H，8.20，N，0.06。17β-乙酰氧基雌-5(10)，7-二烯-3-醇(10)在0℃氮气下，将酮9(1.03g，3.28mmol)的无水THF(20mL)溶液通过注射器用三叔丁氧基氢化锂铝(1.0M，1.5eq，4.92ml，4.92mmol)处理。2小时后，将该溶液倾入1N HCl(100mL)中。分离两层并将水层用乙醚(3×50mL)提取。合并有机层，用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并减压浓缩得到白色固体(1.08g)，Rf0.3(30％EtOAc/己烷)，该固体不必进一步纯化即可使用。17β-乙酰氧基-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基雌-5(10)，7-二烯(11)向醇10(1.08g，3.42mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入咪唑(1.6eq，0.37g，5.43mmol)，然后加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯(1.6eq，1.42mL，3.64mmol)。将该混合物在室温氮气下搅拌16小时，然后倾入1N HCl(100mL)中。分离两层并将水层用乙醚(3×50mL)提取。合并有机层，用饱和NaCl水溶液(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并减压浓缩得到油状物(2.2g)，Rt0.55(10％EtOAc/己烷)，该油状物不必进一步纯化即可使用。3-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基-17β-羟基雌-5(10)，7-二烯(12)将碳酸钾(1.0eq，55mg，0.4mmol)加到乙酸盐11(2.2g，4.0mmol)在甲醇(60mL)和二氯甲烷(10mL)混合物中的溶液中。搅拌4小时后，再加入另外的碳酸钾(1.0eq，0.55g，4.0mmol)。搅拌混合物16小时并再加入碳酸钾(1.0eq，0.55g，4.0mmol)。24小时后，加入水(100mL)，分层并用二氯甲烷(3×100mL)提取水层。合并有机层，用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，硫酸镁干燥并减压浓缩而获得油状物，通过闪式柱色谱层析在硅胶上用20％乙酸乙酯/己烷洗脱进行纯化以获得醇12(1.34g)，Rf0.5(30％乙酸乙酯/己烷)，为可以直接使用的白色泡沫体。3-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基雌-5(10)，7-二烯-17-酮(13)将三甲胺-三氧化硫复合物(5.4eq，1.97g，14mmol)加到醇12(1.34g，2.6mmol)的含有三乙胺(11eq，4.0mL，28.7mmol)的DMSO(20mL)中。在氮气下搅拌16小时后，将水(100mL)加到混合物中并用乙醚(6×100mL)提取水相。合并有机相并用1N盐酸水溶液(100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)依次洗涤。硫酸镁干燥有机层并减压浓缩而获得油状物，通过闪式柱色谱层析在硅胶上用10％乙酸乙酯/己烷洗脱进行纯化以获得甲硅烷基保护的醇13(1.34g)，Rf0.5(20％乙酸乙酯/己烷)，为可以直接使用的白色泡沫体。雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮(5A)和雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮(5B)在室温和氮气下，通过注射器，将四丁基铵氟化物(1.0M，1.3eq，2.9mL，3mmol)加到甲硅烷基保护的醇13(1.16g，2.3mmol)的THF(10mL)溶液中。搅拌24小时后，将溶液倾入水(100mL)中并用乙酸乙酯(3×100mL)提取水层。合并有机层并用1N盐酸水溶液(100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)依次洗涤。硫酸镁干燥有机层并减压浓缩而获得油状物，通过闪式柱色谱层析在硅胶上用40％乙酸乙酯/己烷洗脱进行纯化以获得白色泡沫体(0.56g)。通过制备性HPLC(起始物(primesphere)，C18-HC，10μ，50×20mm；常液50/50 MeCN/H2O；流速50mL/分钟)进一步纯化，获得标题物14〔tR＝13.85分钟，B-环芳香类似物的立体异构体〕1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.96(brs，2H)4.15(m，1H)，2.97(m，2H)，2.95-2.50(m，6H)，2.50-2.25(m，2H)，2.05(m，2H)，1.85(m，3H)，0.77 and 0.75(2 singlets，2H).m/z(ES-pos)293(M+Na+)5A[tR＝17.16min](330mg)，mp 139-42℃.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.37(m，1H)，3.93(m，1H)，2.61(m，2H)，2.48(m，2H)，2.45-2.10(m，5H)，2.10-1.80(m，7H)，1.7-1.4(m，2H)，1.26(m，2H)，0.76(s，3H).m/z(ES-pos)295(M+Na+).5B[tR＝18.68 m](50mg)，mp124-7℃.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.38(m，1H)，4.10(m，1H)，2.75-2.45(m，3H)，2.45-2.15(m，5H)，2.15-1.95(m，2H)，1.95-1.70(m，7H)，1.65-1.40(m，3H)，1.27(m，12H)，0.76(s，3H).m/z(ES-pos)295(M+Na+)，雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮，3-硫酸酯三乙铵盐(15)将吡啶-三氧化硫复合物(1.3eq，0.14g，0.87mmol)在室温下加到醇5A(0.183g，0.67mmol)的THF(2mL)溶液中。在氮气下将混合物搅拌4天，然后减压除去THF。用乙醚(20mL)洗涤固体残渣并溶于甲醇(10mL)和水(10mL)的混合物中。加入Dowex-50树脂(700mg)，减压浓缩混合物并转移到熔结玻璃漏斗中。用甲醇/水(1∶1)洗涤树脂，直到TLC分析洗涤液表明所有产物(约200mg)均被洗出。经HPLC进一步纯化(色谱层析期间产物转化为三乙铵盐)(起始物，C18-HC，10μ，50×250mm，S#171320；10/90-25/75@5’-50/50@15’-60/40@23’-65/35@26.5-80/20@36’-90/10@31(MeOH/50mM三乙铵乙酸盐(TEAA)；pH＝7)；流速70.0mL/分钟)；950PSI 850UV＝214nm；900PSI得15〔tR＝31分钟〕(21mg，7％)，为胶状物。1H NMR(300MHz，MeOH-d4)5.39(s，1H)，4.55(m，1H)，3.18(q，J＝7.3Hz，7.6H)，2.61(br s，2H)，2.55-1.60(m，16H)，1.50(m，1H)，1.30(t，J＝7.3Hz，12.5H)，0.76(s，3H).m/z(ES-neg)351(M-NH(C2H5)3).
权利要求
1.一种化合物，为雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中3-硫酸酯或3-葡萄糖醛酸化物的可药用盐是碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或各个烷基均含有1-6个碳原子二烷基铵盐或各个烷基均含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
3.权利要求2的化合物，是雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯。
4.雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-硫酸酯钠盐，其纯度至少为1％。
5.一种化合物，为雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
6.权利要求1的化合物，其中3-硫酸酯或3-葡萄糖醛酸化物的可药用盐是碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或各个烷基均含有1-6个碳原子二烷基铵盐或各个烷基均含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
7.权利要求6的化合物，是雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-硫酸酯。
8.权利要求5的化合物，是雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-硫酸酯三乙铵盐。
9.一种抑制或治疗自由基诱导疾病的方法，是给予需要治疗的哺乳动物抗氧量的雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
10.一种抑制癌症疾病发展、中枢神经系统、痴呆、阿尔茨海默症、骨疾病、衰老、炎性疾病、外周血管病、类风湿性关节炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫症、肺气肿、防止再灌注损伤、病毒性肝炎、慢性活跃的肝炎、肺结核、牛皮癣、系统性红斑狼疮、成人呼吸窘迫综合症、中枢神经系统损伤和中风或者再灌注期间的损伤中包含的内源自由基的方法，该方法包括给予需要抑制的哺乳动物雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
11.一种抑制或治疗自由基诱导疾病的方法，是给予需要治疗的哺乳动物抗氧量的雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
12.一种抑制癌症疾病发展、中枢神经系统、痴呆、阿尔茨海默症、骨疾病、衰老、炎性疾病、外周血管病、类风湿性关节炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫症、肺气肿、防止再灌注损伤、病毒性肝炎、慢性活跃的肝炎、肺结核、牛皮癣、系统性红斑狼疮、成人呼吸窘迫综合症、中枢神经系统损伤和中风或者再灌注期间的损伤中包含的内源自由基的方法，该方法包括给予需要抑制的哺乳动物雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
13.一种在需要的哺乳动物中进行雌激素替代治疗或治疗雌激素缺乏症的方法，该方法包括给予雌激素量的雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
14.一种在需要的哺乳动物中进行雌激素替代治疗或治疗雌激素缺乏症的方法，该方法包括给予雌激素量的雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
15.一种在需要治疗的哺乳动物中治疗与雌激素缺乏相关的血管舒缩症的方法，该方法包括给予所述哺乳动物雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
16.权利要求15的方法，其中血管舒缩症是热潮红。
17.一种在需要治疗的哺乳动物中治疗与雌激素缺乏相关的血管舒缩症的方法，该方法包括给予所述哺乳动物雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
18.权利要求17的方法，其中血管舒缩症是热潮红。
19.一种在需要的哺乳动物中治疗或抑制骨质疏松的方法，该方法包括给予所述哺乳动物抗骨质疏松有效量的雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
20.一种在需要的哺乳动物中治疗或抑制骨质疏松的方法，该方法包括给予所述哺乳动物抗骨质疏松有效量的雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
21.一种在需要的哺乳动物中治疗或抑制动脉粥样硬化的方法，该方法包括给予所述动物抗动脉粥样硬化有效量的雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
22.一种在需要的哺乳动物中治疗或抑制动脉粥样硬化的方法，该方法包括给予所述动物抗动脉粥样硬化有效量的雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐。
23.一种药物组合物，该组合物含有雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐和可药用的载体。
24.一种药物组合物，该组合物含有雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮或其3-硫酸酯的可药用盐或雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-葡萄糖醛酸化物或其可药用盐和可药用的载体。
25.一种化合物，它是雌-5(10)，7-二烯-3β-醇-17-酮3-碱金属盐。
26.一种化合物，它是雌-5(10)，7-二烯-3α-醇-17-酮3-碱金属盐。
全文摘要
本发明提供雌－5(10),7－二烯－3β－醇－17－酮或其3－硫酸酯的可药用盐、雌－5(10),7－二烯－3β－醇－17－酮3－葡萄糖醛酸化物或其可药用盐、雌－5(10),7－二烯－3α－醇－17－酮或其3－硫酸酯的可药用盐、雌－5(10),7－二烯－3α－醇－17－酮3－葡萄糖醛酸化物或其可药用盐、雌－5(10),7－二烯－3β－醇－17－酮3－碱金属盐、雌－5(10),7－二烯－3α－醇－17－酮3－碱金属盐,它们均可用作雌激素剂。
文档编号A61P9/10GK1259137SQ9880588
公开日2000年7月5日 申请日期1998年4月2日 优先权日1997年4月7日
发明者孔方明, L·A·麦唐纳德, M·Z·卡甘, S·M·沙, P·拉文德拉纳斯, M·A·科林斯 申请人:美国家用产品公司