专利名称：肾素－血管紧张素系统的抑制剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及肾素-血管紧张素系统的抑制剂的用途。
背景技术：
萎缩病可以被划分为全身性和局部萎缩病这两类。首先对全身性萎缩而言，通过不能萎缩足够的营养和能源，通过其从体内损失(或者在肠内或者以细胞物质的形式)，或者通过不能吸收它们，许多疾病过程都会导致全身体重不断的下降。其它的疾病与体重明显下降有关，而这与任何的营养吸收的下降或营养损失的增加完全不成比例。这种体重的下降可能具有代谢的根源。严重的心力衰竭以及肾病、肝病和恶性病的过程都与这种不正常的体重下降有关。一些神经病如帕金森氏病及综合征同样是相关的，与此相同的是与炎症过程(如严重的脓毒病或脓毒性休克以及自身免疫疾病和结缔组织疾病)有关的病症。这种体重的下降最好的情况是丧失劳动能力，最坏的情况是与死亡率的增加有关。目前的治疗和预防措施主要地集中在营养的供给上。
在局部萎缩中，任何给定的肌肉群的废弃(例如由于骨骼肌或神经的损伤所致)可以导致在病变区域中的萎缩。目前还没有常规用于减慢或限制这种萎缩的可以采用的治疗方法，并且尚未表明通过适当的锻炼或在起始患病状态停止之后该治疗方法可以加快所述萎缩的恢复。
目前用于促进可训练性和健康的措施主要地集中在训练模式的改变。近来，已经提出使用控制糖、脂肪、维生素和氨基酸摄入的等级和性质的营养补充。也已采用了添加其它的底物、如肌酸衍生物。大多数的这种干预或是目前未经证实的，或者已经表明没有或者仅有着适当的影响。已经尝试了内分泌的干预，其中包括使用雄激素和其它甾类激素。使用胰岛素或生长激素也可以起到一定的作用。但是，这些治疗可能伴随着不能接受的副作用，并且还具有必须将它们经肠胃外给药(通常通过肌内注射)的缺点。药理控制目前是不能采用的。
就“预先调节”的现象而言，改善心血管以及其它器官的功能的可能性是公知的。已经表明将器官、尤其是心脏暴露于短时间降低的血流或氧气供应下可提供以防第二次更为严重的类似事件的保护，否则这第二次事件可能会使其细胞或器官致死。目前正在进行许多研究，以致力于鉴别出可以模拟该过程的药剂。对常规的临床实践而言，还没有可以采用的药剂。
肾素-血管紧张素系统(RAS)及其成分描述如下。简而言之，肾小球旁器的细胞产生天冬氨酰蛋白酶肾素，该肾素作用于α-2球蛋白血管紧张素原(在肝脏中合成)以生成血管紧张素Ⅰ(AⅠ)。通过与肽基二肽酶血管紧张素-转化酶(ACE)接触使得这种非加压的十肽转化为血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)(在(1)中进行评述)。ATⅡ刺激醛固酮的释放并且还是一种有效力的血管收缩剂。因此，肾素-血管紧张素系统在血压的维持和控制以及盐和水代谢的调节方面是重要的。在包括心脏(2)和血管的心血管组织中也鉴定出肾素、血管紧张素原和ACE，还有该系统成分如血管紧张素原的mRNA(3-5)。在血管平滑肌细胞上已经发现了血管紧张素Ⅱ的受体(6)。在组织中，RAS因而可能具有局部旁分泌功能(在(7，8)中进行评述)，并且通过如钠限制这样的病理生理刺激可以改变不同成分的表达(5)。动力学研究表明许多循环的血管紧张素Ⅰ和Ⅱ来源于肾组织和非肾组织(9-11)。
ACE是一种锌金属-蛋白酶，它通过水解切割来自羧基末端的二肽His-Leu二肽来催化无活性的十肽ATⅠ转化成有活性的八肽ATⅡ。它还通过两个依次的二肽水解步骤催化缓激肽(一种有效力的血管舒张剂)的失活；在本文的上下文中，ACE又称作激肽酶Ⅱ。
在许多动物物种(如蝗虫和软骨鱼类动物)中存在肾素-血管紧张素系统(RAS)的成分暗示着它们必须比常规循环的RAS具有一些其它的作用。这一功能一定是基本的和重要的，以便在几百万年的时间里在系统发育上保留下来。事实上，目前认为完整的肾素-血管紧张素系统存在于许多人(和动物)的组织中这些组织中RAS成分的生理反应性基因表达、ATⅡ的局部产生、ATⅡ受体的存在以及对这些受体是具有生理活性的证实都得到了证明。因此，在肾、神经和血管组织中鉴定了血管紧张素原的信使RNA(mRNA)，并且局部的合成可能会强烈地影响其在间质液中的浓度(10)。在培养的哺乳动物的血管平滑肌细胞中和贯穿血管壁(13)以及在大鼠的回肠、大脑、肾上腺、脾、肺、胸腺和卵巢中发现了肾素mRNA(12)和产物(13)。肝脏中肾素基因的表达是有生理反应的，通过钠缺乏或卡托普利给药使其提高了3倍(14)。
非肾素血管紧张素原酶也可以存在于组织中。在犬的大脑(15，16)中已经证实了具有类似于肾素活性的中性的天冬氨酰蛋白酶。一些酶(例如血管紧张素转化酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G和组织纤维蛋白溶酶原激活剂)可以直接从血管紧张素原(16)中切下ATⅡ。
ACE的表达不仅在血管的内皮中、而且在小肠的上皮、附睾(17)和大脑(15)中均高水平地发生。组织特异性/年龄相关的ACE基因的转录发生在肾组织中(其中存在着非常高水平的近端小管上皮的表达)以及发生在心血管、肝和肺组织(18)中。
这种局部系统在本质上可能是旁分泌的ATⅡ的受体通常被描述为存在于细胞表面上，使得可以转导内分泌和旁分泌的ATⅡ的效应。但是，真正的自分泌系统(胞内生产及作用)也可以存在。ATⅡ受体也可以存在于细胞核中。ATⅡ的特异性结合位点存在于可以调节基因转录的细胞染色质(19，20)上。
有许多投放市场的或处于研究阶段的抑制RAS活性的药剂，并且这些物质的许多划分成两大类血管紧张素转化酶的抑制剂，其被认可的名称通常以“-普利”结尾或者在有活性的代谢产物的情况下以“-普利拉”结尾；以及血管紧张素受体(目前更具体地为AT1受体)的拮抗剂，其被认可的名称通常以“-沙坦(-sartan)”结尾。同样潜在的重要性正在攀升的物质可能是一类称作中性内肽酶抑制剂的药物，这些药物中的一些也具有ACE-抑制作用或降低RAS活性的潜力。
Brink等人(21)暗示血管紧张素Ⅱ可能在大鼠中具有代谢作用(体内实验工作)，而这与其对血压的作用无关。
有证据表明当与它们的瘦的等同品系进行比较时，在肥胖大鼠中的脂肪组织中血管紧张素原基因的表达受到差别调整(22)。
ACE的抑制作用增加了兔子的后腿在高工作量下的氧气萎缩，但在较低的工作量下却没有增加(23)。
ACE抑制剂(ACEⅠ)增加了进入到肥胖大鼠品系骨骼肌中的依赖于胰岛素的葡萄糖的摄入，其表现出相当的胰岛素的抗性(24)，并且这可能是依赖于激肽的(25)。当在患有糖尿病的大鼠心脏中由AT1受体的拮抗作用维持着葡萄糖转运蛋白的水平时，在该研究中提高了葡萄糖转运蛋白的水平(26)。
ATⅡ增加了大鼠后肢氧气的使用和抽搐的紧张度(27)。该篇论文得出的结论是所述的作用可能是由于对血液流动或神经传递的作用，而不是由于直接代谢的作用。
在狗的心力衰竭中，ACE抑制剂的治疗保存了疲劳抗性纤维(28)。在大鼠中，则保持了毛细管的密度并减少了胶原的体积(29，30)。
已经表明激肽酶(如ACE)存在于人的骨骼肌的细胞膜上(31)。因此，骨骼肌RAS可能是存在的(32)。
在体外，ACE抑制剂造成心肌氧使用的增加。这是由于效率的提高还是降低尚不清楚(33)。该工作涉及心肌的提取物。这一作用可能是由于减少了激肽的分解，从而增加了激肽的水平，尽管事实是血管紧张素Ⅱ可以调整(并增加)激肽的释放(34)。
其它出版物暗示着ACE抑制剂或血管紧张素Ⅱ对肌肉的性能或代谢的作用，但是所有这些都得到了这样一个结论，即这些作用是由有营养的血液流动的改变介导的(35，36)。
在人的前臂中，激肽增加了血液的流动和葡萄糖的摄入，尽管仍未详细地描述RAS的直接作用或对性能的作用(37)。
洛沙坦(Losartan)(一种AT1拮抗剂)改善了在人骨骼肌中胰岛素的敏感性(38)。
其它出版物暗示着ACE的抑制作用在那些患有心力衰竭的人当中在肌肉能量平衡方面没有有益的效果(39)。ACE的抑制作用没有改变20名学生在自行车测力计上被观测到的工作或最大的工作能力。
发明概述现已发现肾素-血管紧张素系统与细胞代谢效率的调节、组织系统(如心肌和骨骼肌)的机械效率以及心肌和骨骼肌生长的调节有关。这一观测结果导致可能可以向下调节该系统的活性(从而降低血管紧张素Ⅱ这一物质的作用并提高激肽的活性)，以便提高代谢效率并增强组织的机械性能。这种提高可以改善与萎缩有关的疾病(包括严重的炎症、严重的心力衰竭和恶性病态)的治疗，可以提高向组织提供相当的保护以免受氧供应减少时段影响的能力，并且可以改善增进人和动物的体能的能力。总而言之，本发明基于发现了RAS抑制剂的前所未知的作用，即用于促进代谢功能或效率的作用。
在代谢功能或效率方面的改善可以视为在相对于需要氧供应较低的情况下细胞的功能和存活的改善；人的骨骼肌和心肌的机械性能的增强；和/或营养状态的改善。
因此，本发明发现了在下列方面的应用a． 治疗和预防萎缩病，诸如恶性病中的恶病质、急性和慢性脓毒病、慢性肝病、晚期肾病、艾滋病和免疫系统疾病以及心力衰竭；b． 促进心血管的健康、人的体能和身体的耐力，并改进这些参数对体育训练产生响应的能力，以及帮助保持这些参数(这适用于个人的体育训练，以及针对具体治疗目的(如心肌成形术)的肌肉训练)；和/或c． 通过改变肌肉和脂肪的含量影响与锻炼有关的身体组成和/或形态的改变。
在这些领域中存在着对新的方法的需求。这种需求尤其适用于人类，但在适当的情况下也可以适用于治疗其它的哺乳动物。
具体地讲，本发明利用了具有低毒性和副作用的有效药剂的可用性，且可以将其经肠道或不经肠道给药，以便可以控制人的体能。这可以分成四个主要的领域a． 运动应用，其中包括改善的运动本领以及在受伤后功能和性能更快的恢复；b． 军队和社会环境，在该环境中增强的体能可能是最重要的，例如军人、消防员和警察所遇到的情况；c． 在氧供应减少的环境中(如在高处)和在与组织氧传递低有关的患病状态中性能的增强；以及d． 在一段长时间的机械通风后呼吸肌训练的增强和呼吸肌功能的恢复，从而有助于断绝对监护室进行机械通风。
改进身体的健康可以使完成任务的能力得以提高。心血管和心搏呼吸的健康也与来源于心血管病因的死亡率和发病率的下降有关。
根据本发明，在与预先调节有关所观察到的类型的临床事件的情况下当施用给冒着这类事件的危险的个体时(例如那些冒着中风或心脏病发作危险的个体，或是那些打算经历与低的氧传递有关的过程的个体，诸如冠状血管成形术或心肺分流术)，所述药剂仍可以用于限制组织(例如大脑或心脏)的损伤。在那些冒着暴露于普遍的(而不是组织特异性的)低的氧传递危险的或是经受所述暴露的个体中，这一作用也可以提供对细胞和组织、并且最终乃至对生命的保护。这类个体包括处于高海拔下的登山运动员(包括其大脑和心脏在内的器官的功能将得以改善，从而可以预防对它们的损害)和那些患有严重的循环衰竭的个体。同样可以受益的患有严重的低血氧症的其它个体包括那些患有严重的肺病或患有与严重的低血氧症有关的循环紊乱的个体。这类病症包括如肺炎这样的传染病、成人呼吸窘迫综合症、肺栓塞病、肺纤维变性、艾森门格尔综合症和心脏左向右分流。
改变组织的代谢效率和肌肉功能的机械效率(并因而改变身体的代谢需求)将会导致在身体中脂肪利用的改变。而且，控制肌肉的机械效率也可以改变肌肉的生长。通过这种方式，提高代谢效率可以改变身体的形态对一段时间的体育训练和对改变的食物摄入的响应。这样的一种提高也将会改变可能对肌肉具有直接的营养作用的系统，从而可以通过第二种机理来改变骨骼肌的生长。代谢效率上的提高也将会限制由过度的锻炼或压力负担导致的心脏的生长。
在本发明的上下文中，感兴趣的具体领域为局部缺血效应的治疗或预防，其中包括普遍的局部缺血、肾和肠局部缺血、中风、不稳定的绞痛、稳定的绞痛、心肌梗死(出现之后即刻)、外周血管病、大脑麻痹、包括呼吸窘迫综合征的慢性或急性呼吸病(该病可能与低血氧症有关)、间质性肺病、低血氧症、肺原性心脏病、涉及在肺与系统的循环之间分流的疾病、导致重要器官的血流灌注不足的病症、心搏停止、包括脑膜炎球菌败血病的败血病状态、镰状细胞性贫血、一氧化碳中毒以及由遇溺而复生。感兴趣的用途和价值为通过向母亲给药来预防在分娩时的缺氧，从而潜在地减少了小孩大脑受损的机会；如果预期分娩将会是困难的，那么这种处理是特别合适的。
下面提供的证据表明RAS抑制剂对线粒体功能的影响与本文提出的理论是一致的。也可以解释这些药剂在心脏问题中的效用，但是可以拓宽其在大脑、肝脏、肾脏等以及骨骼肌中的效用到其它领域，例如非心脏的用途。在降低了氧的可利用性的条件下细胞能够有效地发挥作用和/或能够更有效地利用氧。因此，就治疗或预防中风或其复发来说，在血凝块或出血附近的氧饥饿细胞的半影能够更有效地发挥作用。中风可能会形成血栓或出血，在根源上可能是脑血管的或是偶然的。而且，RAS抑制剂可能对移植器官的运输或存活是有益的。
本发明在一般的治疗中有一定的效用，并且在治疗和预防不利的病症时也有一定的效用。它在治疗与例如萎缩这类病症有关的症状中有一定的效用。它在提高性能方面也具有一定的效用，其中的受试者通常被认为是健康的，即不管任何具体的不利的病症。感兴趣的一个具体的领域是衰老，即其中受试者可能有病也可能没病，但是本发明的用途可以积极地影响受试者的健康。
已将RAS的抑制剂提供给患有高血压的受试者，并且这可能将会产生与本发明有关的效果。本发明的一个方面是实现当受试者具有正常的血压时这类药剂是有用的，并且这些作用与任何对血压的作用无关。本发明的价值在于血压过分的下降没有发生或者不是个问题。
发明的描述本发明可以用于影响任何的RAS。在其它组织中，在大脑、血管壁、心脏、肠、肝和肾中已经表明存在着局部组织的肾素-血管紧张素系统。
上面已经描述了RAS的各种成分，显而易见可以在不同的地方抑制该系统。原则上，所希望的是在本发明中可以使用任何足够没有毒性的化合物，其中该化合物是生物可利用的并且在任何合适的地方都具有抑制RAS系统的活性。本发明预计将所有的这类药剂(或单独或彼此结合和/或与其它类型的药剂结合)以及也将前体药物给药，其中该前体药物在体内被转化为抑制RAS活性的活性药剂。应当注意的是RAS的抑制作用不必是完全的抑制作用；相反地，在本发明中有利的足够的抑制作用是所需要的所有抑制作用。实际上在目前的知识状态下，优选在本发明的实践过程中使用任何公知的RAS的抑制剂，该抑制剂或是市场上有售的或是用于其抗高血压作用研究中的。
肾素-血管紧张素系统的许多抑制剂都是得到了许可的或是在英国处于在人体中使用的研究阶段，并且该抑制剂是在本发明的实践中其用途是优选的化合物。它们包括ACE-抑制剂喹那普利，卡托普利，赖诺普利，哌道普利，群多普利，依那普利，默西普利，福森普利，雷米普利，西拉普利，咪哒普利，斯哌普利，替莫卡普利，贝那普利，阿拉普利，西洛普利，地拉普利，依那普利拉和莫替普利。合适的血管紧张素Ⅱ-抑制剂包括洛沙坦，戊沙坦，依贝沙坦，康地沙坦，依普罗沙坦，他索沙坦和泰米沙坦。
根据本发明，所列具体化合物呈其游离形式时可能是有用的，例如在某些情况下可以为游离的酸或碱，并且视情况它们作为酸加成盐、酯、N-氧化物或其它衍生物时可能也是有用的。合适的前体药物(不管其自身有活性还是没有活性)的用途以及RAS抑制剂的活性代谢物的用途也包括在本发明的范围之中。例如，阿拉普利是卡托普利的前体药物，而依那普利拉是依那普利的活性代谢物。
尽管ACE抑制剂和血管紧张素Ⅱ-受体拮抗剂是目前研究得最为广泛的适用于本发明的药物的类别，但是本发明决不局限于这些物质的用途。RAS系统的其它抑制剂包括肾素抑制剂和中性内肽酶抑制剂ACE抑制剂既可以在ATⅡ的生成下降的整个过程中发挥作用，又可以在激肽代谢降低的整个过程中发挥作用。其它的药剂同样可以抑制激肽的降解，并具有类似的有益效果。这些种类的药物包括中性内肽酶的抑制剂，其中的一些也具有ACE的抑制特性。因此，本发明设想了所有的激肽酶-抑制剂以及激肽受体拮抗剂(如缓激肽)的用途。
在许多情况下，也许具有系统作用(例如降低血压、降低心脏的前负荷或后负荷以及血管舒张)的RAS拮抗剂的组织/代谢作用的结合以及其它结合的作用(例如心室重建)是有价值的。这样的情况可能出现在患有高血压、外周血管病、心力衰竭或心肥大的病人的治疗当中。
在血压正常的受试者中或在低血压的个体中(或者通过其它药物的作用、或者通过自然的表型、或者通过诸如脓毒病或脓毒性休克这样的疾病状态)，任何血压进一步的下降或RAS拮抗剂的其它的系统作用可能都是不利的。在这样的情况下，亲脂剂、甚至是高度亲脂剂的使用可能具有能够使组织-RAS的抑制作用得以实现、而对系统的血压又没有影响的优点。通过许多小组已经表明在动物中可以做到这一点。的确，即使在患有严重高血压的动物模型中，将雷米普利以5微克/千克/天的量给药至大鼠时对收缩期的血压没有影响。同样，已将采用非常低剂量的亲脂ACE抑制剂的这一技术应用于人体中低剂量的雷米普利能够产生显著的生物作用，而对系统血压却没有任何可记录的影响(41)。
本发明设想了一些化合物的用途，其中所述化合物基本上是非亲脂的或者仅仅是适度亲脂的，但是或者通过化学方法(如通过适当的衍生化作用)或者通过物理方法(如通过与亲脂载体或送递系统的配制)已经赋予了所述化合物更高的亲脂特性。
根据本发明，具有如上所述的活性的化合物对促进代谢功能或效率并从而改善生化和机械功能而言是有用的。这可以通过包括下列机理在内的多种机理(上述)来实现·改善血液的供应(并从而改善底物的供应)；·增加底物(例如葡萄糖或氧)的摄入；和/或·提高在这些底物利用过程中细胞的效率(例如使用更少的氧或代谢底物实现相同的机械或生化作用)。
前两个例子可以被视为改善了代谢功能，而第三个例子可以被视为改善了代谢效率。
具体地讲，所设想的是本发明在治疗一些病症以及对付一些情况的过程中将是有用的，其中涉及以上所讨论的目前有着从未遇到的需要的病症和情况。这些包括治疗萎缩病、促进可训练性和健康以及改变身体的组成和/或形态。一般说来，可以将RAS的抑制剂以任何有效的、但却耐受的剂量给药，并且通过基本上常规的试验工作不必过分困难地就可以确立最佳的剂量和生活制度。遵循一些普通的指导，但是最终在本发明范围内针对各种病症的各种药物合适的剂量和生活制度都将在临床医师或内科医师的控制下。一般说来，本发明中有用的化合物可以通过口服治疗(通过嘴)或肠道治疗(通过鼻胃、鼻肠或其它肠饲管给药)或肠胃外治疗(如经静脉内给药，例如通过将化合物加入到肠胃外的营养品的袋中)来给药。
全身性萎缩已经讨论过许多疾病过程都可以通过代谢机制导致全身性的体重下降，其中包括严重的心脏、肾脏、肝脏和恶性病、呼吸疾病、艾滋病和诸如严重的脓毒病(或脓毒性休克)之类的慢性或急性炎症过程以及自身免疫疾病和结缔组织疾病。本发明能够用如上所述的RAS抑制剂来预防或治疗这类病症。可以预料低剂量的这类药剂(例如≤1.25毫克的雷米普利)可能是有效的。但是，原则上，与在治疗心力衰竭中所使用的类似的方案似乎是最有可能使用的，即稳定的增加剂量直至所能耐受的最大值。在治疗中主要的限制因素可能是a． 在用ACE抑制剂治疗的一些个体中出现咳嗽，尽管变换为另一种药剂或另一类药剂是可能的；和/或b． 血压明显的下降。在2.5毫克雷米普利(或等价的其它药剂)的剂量下，首剂量造成的血压下降是以与在治疗急性心肌梗死的试验中用安慰剂所观察到的相同的频率发生的，这暗示着在许多剂量这种剂量会是安全的。
按照本领域普通技术人员公知的合适的方案和/或通过为单个的病人滴定，可以确立对患有危急的血管舒张的病人(诸如那些患有脓毒性休克的病人)合适的剂量。
局部萎缩RAS抑制剂的剂量可以是最大的耐受剂量，这正好在治疗心力衰竭或高血压中使用的各种药剂所公开的范围内。正如上面所讨论的那样，低剂量(如1.25毫克的雷米普利)可以获益而没有任何明显的降血压作用。
预先调节合适的预防性措施将涉及为那些冒着器官局部缺血危险的病人(例如那些有着明显的心肌梗死或中风危险的病人)提供常规剂量的所述药剂。那些具有公知的不良心脏、骨骼肌(例如跛行者)或脑血流的人们也可以从通过增强代谢效率以及向危急的局部缺血细胞提供细胞保护直至可以考虑换血管术的治疗中获益。所述药剂的剂量以最大耐受剂量来分类，这正好在治疗心力衰竭或高血压中使用的各种药剂所公开的范围内。正如上面所讨论的那样，低剂量(如1.25毫克的雷米普利)可以获益而没有任何明显的降血压作用。可能使用肠胃外的组配物来给那些恰好已经经历了这种局部缺血事件的病人或给那些打算经历导致局部缺血的过程(如血管成形术或心脏分流术)的病人提供保护。
促进可训练性和健康RAS抑制剂的剂量可以以最大的耐受剂量来提供，这正好在治疗心力衰竭或高血压中使用的各种药剂所公开的范围内。正如上面所讨论的那样，低剂量(如1.25毫克的雷米普利)可以获益而没有任何明显的降血压作用。通过结合本文所设想的机理，可以预计将RAS抑制剂向那些患有外周血管病的病人给药可以改善训练的持久性和可能的四肢活力。改变身体的组成和/或形态RAS抑制剂的剂量可以以最大的耐受剂量来提供，这正好在治疗心力衰竭或高血压中使用的各种药剂所公开的范围内。正如上面所讨论的那样，低剂量(如1.25毫克的雷米普利)可以获益而没有任何明显的降血压作用。
就组配和给药而言，可以预计能够将本发明中有用的各种药物以与目前存在的相同的组配物给药。针对能够发挥主要的组织作用而没有明显的系统降血压作用这一明确的意图，以与对低剂量雷米普利、或对局部组织传递或对静脉内或动脉内给药所述的相同的方式，可以研制新的组配物。目前，着重于大部分所述药剂的口服给药。但是，允许系统的肠胃外给药的组配物可以提高治疗危急的疾病或那些如上所示的经历导致血管闭塞或血液流速低的干预的个体的能力。此外，新的组配物(例如已经提及的用于局部传递)可能会变得可以采用。
活性剂的给药可以通过任何适合的途径。作为ACE抑制剂一种常规方式，至少口服给药是优选的，尤其是出于实现预防或防御作用的目的。在某些情况下，尤其是当需要实现更为即时的作用时，静脉内给药可能是优选的；例如，可以给刚刚经历了梗死的受试者通过静脉内提供活性剂，这不是出于重建的目的而是为了减轻局部氧的需求并从而有助于治疗。对本领域的普通技术人员来说，用于静脉内给药的合适的配方是显而易见的。
在上面的讨论中，仅仅通过举例的方式给出了预示的剂量，而最佳的剂量可以通过实验和/或临床来确定。应当注意的是本发明有用的剂量可能低于最佳的抗高血压的剂量或者甚至低于有效的抗高血压的剂量。
最佳的剂量的频率和治疗的持续时间同样可以通过实验和/或临床来确定。同样举例来说，口服的雷米普利可以在一段合适的时间里每天给药一次。在本发明中有用的其它化合物剂量的频率将会变化并且尤其取决于所述化合物的药物动力学。
本发明能够提供一种促进代谢功能或效率的方法，该方法包括将肾素-血管紧张素系统的抑制剂向受试者给药。该抑制剂通常以这样的一种剂量给药，即该剂量是没有毒性的或者仅仅具有可以接受的毒性、但是却有效地促进了代谢功能或效率(或者当然同时促进了两者)。受试者通常是人，但非人的动物同样可以从本发明中获益。例如对治疗、预防、社会、军事、娱乐或其它目的而言，可以进行代谢功能或效率的促进。这样的一种治疗方法的优选的特征如上所述。
本发明的其它方面包括一种促进健康受试者中代谢的可训练性或健康的方法，该方法可以是一种非治疗的方法，所述方法包括将肾素-血管紧张素系统的抑制剂向受试者给药；以及一种改变健康受试者中身体的组成和/或形态的方法，该方法也可以是一种非治疗的方法，所述方法包括将肾素-血管紧张素系统的抑制剂向受试者给药。
通过对可以采用本发明的情况的举例说明，登山运动员可以在出发前的训练中服用低剂量(1.25-2.5毫克)的雷米普利4周，以便改善他们的可训练性、在出发前认识到任何的副作用以及为他们的组织输入所述的药物。当他们在跋涉的过程中，他们继续服用该药物。
另一个例子是关于依靠通风器的年老的受伤病人的，可以给该病人提供测试剂量的短时间起作用的ACE抑制剂(卡托普利)并观察副作用(如肾功能的下降或血压的下降)。然后，增加ACE-抑制剂的剂量(通过鼻胃给药)到最大耐受剂量(如20毫克bd或依那普利，或10毫克过量的雷米普利)。可以设想本发明将会减慢预计的肌肉萎缩(既有全身性的系统的萎缩，又有由废用性萎缩造成的局部萎缩)。
可以以同样的方式在手术后治疗病人。通过机械通风供给的稳步减少来“训练”呼吸肌，并且通过ACE抑制剂的治疗用途来加强这种训练。
类似的生活制度可能适合于治疗患有系统氧水平低的病人，而该病症是由于与系统炎症响应综合症有关的成人呼吸窘迫综合症的严重的肺损伤或与吸烟有关的严重的肺病导致的。它也可以用于进行冠状血管成形术的病人(例如在该操作之前服用雷米普利4周)，也可用于患有冠状闭塞并被认为冒着进一步事件的危险的病人，或者也可用于患有外周血管病的病人。此外，它可以用于治疗已经患有股动脉闭塞和经历了血管成形术的病人；将血栓溶解剂的浸液在同一部位上与动脉内的ACE抑制剂一同直接向股动脉中给药，以便当再灌注发生时改善肌肉的可存活能力。另一个适合于治疗的受试者的例子是肥胖的并且发现难于锻炼和减肥的病人；可以提供ACE抑制剂并结合剧烈锻炼的训练计划。另一个合适的病人其一生都过量地吸烟并且患有仅在150码的距离内的间歇性跛行。
本发明也可以用于治疗表现出严重的恶病质的受试者，这正如已在结核病、艾滋病、胸膜渗漏、脑膜炎、肝炎、穿孔性胃溃疡、肝硬变、蜂窝织炎、肝细胞瘤、镰状细胞性贫血、阑尾炎、窦炎、吞咽困难、abcess、肺炎、慢性腹泻、脑病和骨折的情况下观察到的那样。
正如也将由本发明的公开内容显而易见的那样，在本发明的范围内包括各种筛选方法，其中包括针对受试者中代谢功能或效率的可促进性的遗传诱因来诊断或筛选个体的方法，所述方法包括在所述个体中分析检测位于染色体17q23上的ACE基因(DCP1)的等位基因。
因此，本发明包括下列的每一种方法一种筛选对萎缩的治疗或预防产生响应的个体的方法；一种筛选对心脏的预先调节产生响应的个体的方法；一种筛选对促进可训练性和健康产生响应的个体的方法；一种筛选对改变身体的组成和/或形态产生响应的个体的方法；其中在每种情况下，所述方法包括在所述个体中分析检测位于染色体17q23上的ACE基因(DCP1)的等位基因。
具体地讲，这类方法可以包括测定内含子16中287个碱基对的alu重复序列的存在(插入，I)或缺乏(缺失，D)。视情况可以在体外实施该方法。
可以通过许多的方式来确定ACE基因的I/D的基因型。目前大多数依赖于可以来源于许多来源的基因组DNA的聚合酶链反应的扩增。最常用的是使用血液或漱口水。不同的引物可以特异性地扩增D或I的等位基因，然后通常通过电泳分离相应的片段。在出版于1997年8月5日的Montgomery等人的《循环》96(3)741-747(1997)中公开了适用技术的一个例子。
经过进一步的仔细研究，通过聚合酶链反应的扩增(PCR)和接下来对片段的电泳分离可以鉴定出I/D的多态性。具体说来可以使用两种PCR方法。所报道的第一种PCR扩增的方法使用两种引物，从此该方法已在大多数出版的研究中使用，例如Cambien等人在《自然》359641-644(1992)中所述的那样。从此已经变得显而易见的是该系统倾向于系统的偏向，这是因为优先扩增更短的(缺失)片段、而不是更长的插入片段(I)等位基因。这就导致将小部分(5-15％)的杂合子错误地划分为D纯合子的类别之中(Shanmugam等人《PCR方法的应用》3 120-121(1993))。通过特异性地改变PCR的条件(诸如加入增加了反应严格性的变性剂如去甲基亚砜)或者通过使用如Evans(Evans等人《Q.J.Med》87 211-214(1994))所述的插入片段等位基因-特异性第三引物可以防止这种错误的分类。
具有如Evans(Evans等人，出处同上，1994)所述引物的三引物PCR系统可以具有如下所述的改良方案两个引物寡核苷酸位于内含子16中的插入序列的两侧，而第三个寡核苷酸特异性地位于插入序列之中。这种方法产生了更短的等位基因片段。与I～等位基因-特异性扩增一起，这消除了将杂合子错误地划分为DD纯合子的类别之中。我们使用引物的比例对应于Evans等人所使用的处于50微升反应液中50pmol的ACE1(5’或左手寡核苷酸)和3(3’或右手寡核苷酸)与15pmol的ACE2(插入特异性寡核苷酸)，从而得到等位基因ACE D的84bp的扩增产物以及等位基因ACE I的65bp的扩增产物。我们的扩增条件如下1次循环95℃下5分钟；40次循环95℃下1分钟、50℃下1分钟、72℃下5分钟，20微升的PCR反应液含有50mM KCl、10mM Tris HCl(pH 8.3)、1.5mM MgCl2、0.01毫克/毫升的明胶、各200μM的dNTP、0.2单位的Taq聚合酶(Gibco BRL，Paisley，英国)和在插入(Alu)序列之外的8pmol的引物ACE1和ACE3，以及插入序列之内的2.4pmol的引物ACE2。用20微升矿物油覆盖反应液。所有的96个孔总是充满着试剂(混合的或虚设的试剂)以确保在区组上具有恒定的热量。采用在7.5％的聚丙烯酰胺凝胶上的电泳可以看见扩增产物。在以前报道的条件下证实了我们所确定的基因型的准确度(O’Dell，Humphries等人《Br.Heart J.》73 368-371(1995))，以便仅仅使用相对于每20微升PCR反应液同为8pmol的引物对ACE1和ACE3建立的复制PCRs总是证明存在着D等位基因。
DNA片段是采用琼脂糖凝胶电泳(在二引物系统的情况下)以及在8.4％的聚丙烯酰胺凝胶上的电泳(在三引物系统的情况下)来分离的。通过向凝胶中掺入溴化乙锭并在紫外光下观测来鉴定片段。
本发明各方面优选的特征正如各个其它方面那样也可以进行必要的改变。
在血浆的ACE水平方面存在着巨大的个体间的差异，但在家族的内部该水平却是类似的(42)，这暗示着在控制ACE的水平方面有着强烈的遗传影响。人的ACE基因(DCP1)是在染色体17q23上被发现的(43)并且它含有由内含子16(46)中287个碱基对的alu重复序列(45)的存在(插入，I)或缺乏(缺失，D)组成的限制性片段长度多态性(44)。D等位基因的频率约为0.57-0.59(43，45)。
已经表明这种I/D的多态性影响着循环ACE水平。在80个健康的白种人当中，尽管在组与组间存在着相当数量的重叠(44)，但多态性是造成血浆ACE的差异有47％的原因。组织ACE水平可能受到类似的影响。T-细胞表达ACE。大部分ACE的活性是微粒体的以及B-细胞缺乏ACE mRNA的表达而单核细胞的ACE水平低于28倍的事实支持了这样一个结论，即T-细胞的ACE活性是由于细胞的合成、而不是由于从循环中的被动吸收。DD基因型个体中血浆和T-淋巴细胞中ACE的活性分别比II基因型个体中的高出75％和39％(47)。在DD基因型个体中也可以增加人的内部乳动脉中局部的ATⅡ的产生(48)。心脏的ACE活性可能受到类似的影响(49)。但是，没有证据表明ACE基因型与循环ATⅡ水平有关(50)。这些数据暗示着I/D的多态性对组织和血浆ACE活性的影响。因此，增加D-等位基因的负担可能与组织系统中增加的“净RAS活性“有关。如果组织ACE水平在组织RAS中是限速步骤的话，那么通过组织RAS关键性调节的任何表型在那些DD基因型当中的群体中可能更为突出。许多生理刺激导致诱导RAS(包括ACE)基因的表达。因此，未来对于多态性对生理攻击的表型响应的影响的研究不仅可以阐明在控制所述表型的过程中组织RAS的作用，而且可以检查组织ACE表达的分子控制。例如，如果D等位基因与更为灵敏的基因转录有关的话，那么任何给定的生理攻击将会造成与D等位基因有关的依赖于RAS的表型的不相称的变化。
本发明并不局限于将活性剂向具有具体基因型的个体给药。但是，显而易见在比如说存在着增加了水平的ACE的情况下可以看出本发明的优点。这为本发明提供了支持。进行了一项研究，其中在男性白种部队新兵为期10周的身体训练的开始和结束时测量各种参数。总体上在一群士兵中(即在完成了训练的个体当中)观察ACE的基因型对收缩压的可能的影响。当那些II基因型士兵的收缩压明显低于那些DD基因型的士兵(122.7±1.4比118.0±1.5mmHgp＜0.05)时，这一趋向在训练之前在统计学上是不显著的(异质性p=0.35)，但在训练结束时接近显著(异质性p=0.07)。在不同基因型的士兵之间，在基础训练之前或之后舒张压没有区别(分别对II、ID和DD而言，训练前为70.3±1.37比70.6±0.8比69.4±1.3mmHg，p=0.75训练后为69.7±1.23比70.1±0.81比69.9±1.23mmHg，p=0.96)。
在另一项研究中观察了部队新兵上肢的性能，这是因为在部队基础训练的过程中特殊地训练了他们的力量。试验是在选择的时间点进行的，即训练开始、训练中(5周)和训练结束(10周)。
对有关腓肠强度的成对的数据来说，暗示出基因型的作用。成对的百分数变化的平均值为7.6±14.1比-6.4±4.1∶p=0.19。
在训练开始时，在二头肌的力量上没有差别(对于II-等位基因比D-等位基因来说为109.4N±8.5比111.5N±5.6∶p=0.86)。但在训练结束时，在两个小组中都有明显的改善，而在Ⅱ基因型的士兵中有着更大程度的改善(对于II-等位基因比D-等位基因来说为198.7±26.1比141±9.37∶p=0.01)。对于II-等位基因比D-等位基因而言，平均的百分数的变化分别为77.0±24.4％比23.7±6.2％，p=0.003。对那些II基因型的士兵而言，变化的平均值为109.4比198.7，这相比于那些ID基因型的士兵为109.8比144.9，和那些DD基因型的士兵为116.4比125.9∶在训练结束时II＜ID且II＜DD，p＜0.05。这些数据是在锻炼持续的时间里得到的(秒)。
在训练开始时俯卧撑的数据是相似的(对II、ID和DD来说，平均值分别为51.2±4.0比50.4±2.4比47.5±4.3∶n=29，69和22∶对所有的比较而言p＞0.05。在训练结束时，对II、ID和DD来说，该数值分别为61.9±4.2比59.5±3.6比45.0±6.2∶n=19，44和12∶对II比DD和ID比DD来说，p＜0.05)。
VO2max的变化(在所有的基因型中从类似的基准水平计算)为+0.055±0.037比-0.003±0.021比-0.068+0.052∶对II比DD来说p＜0.05。[VO2max为每单位时间(分钟)最大的氧的萎缩(以毫升计)]。
那些II基因型士兵的体重显然要比那些具有D等位基因的士兵增加得多(增加了2.9±0.8％比-0.1+0.6％∶n=20比61∶p=0.01∶对II比ID来说p＜0.05)。这是脂肪和肌肉变化的平衡，它们可能由ACE的基因型不同地进行调节。
在开始时，身体脂肪的百分数是类似的(8.6±0.7％比9.3±0.3％对II等位基因比D等位基因来说，n=29比93∶p=0.33)。但是，这改变了0.20±0.09比0.007±0.003∶n=20比58∶p=0.02的部分，即II分部脂肪含量增加了大约20％，而那些具有D等位基因的士兵则增加了不足1％。
那些具有D等位基因的士兵在开始时有着略为瘦弱的体质(64.6±1.2比62.5±0.67∶n=29比93∶p=0.12)，但该差距在训练后加大了(65.9±1.3比62.6±+0.82∶n=19比57∶p=0.046)。
在开始时脂肪物质是类似的(6.18千克±0.54比6.49千克±0.26∶n=29比93∶p=0.57)。脂肪重量的改变是依赖于基因型的(0.73千克±0.39比-0.26千克±0.20∶n=19比57∶p=0.02)，即对那些II基因型的士兵来说，身体脂肪物质变化的百分数的平均值增加了23％，而对应的在那些具有D等位基因的士兵当中仅仅改变了1％。
在另一项研究中，由英国登山委员会鉴定了33名精干的不相关的男性英国登山运动员，他们在不使用补充吸氧的情况下都具有7000米以上的攀登历史。从25名男性应答者的漱口水样品中提取DNA，并且使用三引物聚合酶链反应(PCR)的扩增来测定ACE的基因型(51)。将他们的基因型分布与1906名未患临床心血管病的英国男人的进行比较(52)。在25名受试者中的平均(SD)年龄为40.6(6.5)岁，在1906名对照者当中的平均年龄为55.6(3.2)岁。这两个小组都处于哈迪-温伯格平衡中。在登山者和对照者之间的基因型分布和等位基因的频率显然都不相同(分别为p=0.02和0.003)，其中II基因型相对过量而缺少DD基因型。在无氧情况下已经攀登到8000米以上的15名登山者当中，没有一个具有DD基因型[其中6个(40％)为II基因型，9个(60％)为ID基因型I等位基因的频率为0.65]。此外，通过对在无氧情况下的坡度数进行评定，第一名攀登超过8000米的完成者是II基因型的(相比于高于8000米的小组的平均坡度为2.4±0.3或全体登山者的平均坡度为1.44±0.3来说，其坡度为5)，相同的是在该小组中对其它7000米的坡度数而言为头两名的完成者(＞100和18，这相比于平均坡度为10.3±6.5)。
此外，在运动员当中，在长跑运动员中发现I等位基因的过剩，而在短跑运动员中发现D等位基因的过剩。临时的数据暗示着在其运动能力(而不是耐力)起主要作用的运动员中发现D等位基因是过剩的。
这些数据暗示着人的体能的许多方面都可能与I等位基因有关，从而也与组织ACE水平较低有关。因此，就每单位的外功而言，那些具有两个D等位基因的人比那些没有所述等位基因的人的心脏总功要高，并且训练提高腓肠的强度、二头肌的力量和俯卧撑的能力都与I等位基因有关，其可训练性的级别排列为II＞ID＞DD。性能上的这些变化可能部分涉及身体组成的改变，当与在那些具有D等位基因的人当中观察到的缺乏合成代谢(或少量的分解代谢作用)相比时，身体物质的保存和少量的总体合成代谢作用与I等位基因有关。由具有肌肉物质更加合适的变化的基因型导致的性能上突出的变化暗示出不仅存在着与基因型有关的对通过肌肉块自身介导的性能的作用，而且存在着通过肌肉代谢效率介导的作用。基因型对以脂肪的形式储存能量的影响支持了这一假说。
由于I等位基因是组织ACE水平较低的替代标志物，似乎可能骨骼肌性能的提高、代谢性能的提高、分解代谢的限制以及合成代谢的促进都可以通过在药理上降低组织RAS的活性来实现。可以预计肾素降解和ATⅡ受体的拮抗剂的抑制作用都具有这样的作用。因此，上面的数据暗示出人的肾素-血管紧张素系统的代谢作用，从总体上看该系统对人具有明显的作用。
尽管在现有技术中有数据支持对患病状态中肌肉血液流动和葡萄糖摄入的可能的有益的作用，但是却没有数据暗示出对整个身体的形态、肌肉或整个人的体能或对整个营养或形态状态的任何临床上或生理上明显的作用，这是事后的认识。但是，这些数据却为本发明提供了支持和潜在的科学原理。
这些数据暗示着通过用指定的药剂进行治疗的确可以提高耐久性能。单纯的力量性能也可以得到提高，但可能不太有效。对综合运动的作用可能更多地取决于力量和耐力对成功的相对贡献。
可能存在着许多手段，通过手段方式可以介导观察到的和预期的作用。这些手段包括(ⅰ)通过血管舒张增加血液流到组织中；(ⅱ)通过血管生成(新血管的生长)增加血液流到组织中；(ⅲ)在(ⅰ)之后，降低外周血管的阻力并增加心脏的输出；(ⅳ)增加组织对代谢燃料(氧、脂肪、糖类和氨基酸)的摄入；(ⅴ)改变所利用的燃料的平衡(例如转变为使用脂肪酸，其中从脂肪酸中比从等量的葡萄糖中可以产生更多的能量)；(ⅵ)改变例如来自脂肪和肝脏储存物中的燃料的供应；(ⅶ)原发性改变由包括肝脏在内的具有代谢活性的组织进行的定性的和定量的底物代谢(诸如乳酸盐的代谢)以及能量储存的释放(诸如脂肪酸的释放)；(ⅷ)改变骨骼肌细胞的类型，这可能反映在Ⅰ型和Ⅱ型肌细胞的相对数量的改变上。这可能是在我们正在观察的性能改变方面的一个重要因素。
(ⅸ)改变细胞内线粒体的数量；(ⅹ)改变细胞或生物体内的代谢效率，这是由针对减少了氧或代谢底物或能量的利用却作更多的外功、机械功或生化功的能力来反映的。其它的机理可能同样适用。
下面的实施例解释了本发明以及其所基于的证据，同样在具体的例子中也表明如何使其生效。
更具体地讲，从新生的Sprague-Dawley大鼠的心脏中分离出心肌细胞，并在37℃以及加湿的5％CO2的环境下在30毫米的组织培养皿中并在补充有1％胎牛血清的DMEM存在下维持该心肌细胞。对该实验来说，在分析Δψm之前，在不同长度的时间里用1μM的赖诺普利或用等量的载体处理培养物。
为了测量Δψm，使用了线粒体-特异性探针罗丹明123(Rh123)和5，5’，6，6’-四氯-1，1’，3，3’-四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)。在37℃和5％CO2下，在新鲜的培养基中用2.5μM的Rh123培养细胞15分钟或用10微克/毫升的JC-1(Molecular Probes)培养细胞10分钟。然后用冷的PBS洗涤细胞两次，通过胰蛋白酶消化使细胞重新悬浮，并在4℃下在黑暗中储存细胞直至分析时(通常在30分钟内)。在FACScan仪器上进行流式细胞计量。搜集数据并使用Lysis Ⅱ软件(Becton Dickinson)分析数据。结果阳离子亲脂的荧光染料如Rh123起到了监测线粒体活性的报道分子的作用。根据Nernst反应式，这些染料在线粒体基质中积累。当与流式细胞计量术联合使用时，它们是估算完整细胞中Δψm变化的有效的探针。正如
图1所示的那样，用1μM赖诺普利预处理心肌细胞36小时导致Rh123的荧光增加了大约30％，这表明ACE的抑制作用诱导Δψm的增加。
JC-1是用于评价Δψm变化的更可靠和更灵敏的荧光探针。在低浓度下，JC-1主要以单体的形式存在，其特征在于发出绿色的荧光。当在线粒体基质中积累的时候，JC-1形成与Δψm的量值成正比的J-聚集体。这些聚集体的特征在于发出红色的荧光。因此，由红色荧光到绿色荧光的比值的增加表明Δψm的增加。图2表明在不同长度的时间里用1μM的赖诺普利处理大鼠心肌细胞造成红色荧光(●)逐渐的增加，相应地绿色荧光(○)逐渐的减少。因此，红色与绿色荧光的比值(□)随着用赖诺普利培养时间的增加而增加。
这些实验说明用ACE抑制剂的治疗增加了Δψm。这表明ACE抑制剂可以预防局部缺血的情况和/或通过提高线粒体中能量转移的效率来改善机械/生物合成的性能。
尽管根据基因型观察到了区别，但对新兵来说，存在着提高其在无氧阈上的VO2max的一致的趋势。该结果表明对服用安慰剂的II基因型来说增值为2.1±6.8毫升/分钟，而对服用安慰剂的DD基因型来说却为-1.1±6.5毫升/分钟，并且对服用洛沙坦的II基因型来说增值为0.3±6.3毫升/分钟，而对服用洛沙坦的DD来说却为-1.8±6.3毫升/分钟。当联合使用时，增值上的差别为对II基因型来说为1.3±6.6毫升/分钟，而对DD来说却为-1.4±6.4毫升/分钟p 0.07。
VO2max的数据表明了类似的趋势，这与肌肉疲劳的测量是一样的。这些数据与在达到无氧阈前完成更多的工作量并从而在适当到剧烈锻炼的情况下对疲劳具有更强抵抗力的能力的提高是一致的，尤其对那些II基因型(从而具有更低的ACE活性)的人来说更是如此。
ATⅡ是通过如下的方法测定的在仰卧休息至少10分钟后收集血样。插入一只肘前聚乙烯导管，并抽取10毫升的静脉血。在立即离心后，在-70℃下贮存等分试样(EDTA血浆样品)直至进行分析。采用商购可得的放射免疫测定仪(IBL，汉堡，德国，灵敏度为1.5pg/ml)测定血管紧张素Ⅱ。在提取血浆样品后，通过竞争放射免疫测定分析ATⅡ。该放射免疫测定使用了兔抗-ATⅡ抗血清和放射性碘化物标记的ATⅡ示踪剂。通过与固相颗粒结合的第二抗体来分离结合相和游离相，接下来是离心步骤。测量结合部分中的放射性，并且可以作出一条典型的标准曲线。测试与AT 1之间有小于0.1％的交叉反应性，并且样品内部和样品之间的重复性介于3.9和8.6％之间。健康受试者的参考范围为20至40pg/ml。
已经研究了多种恶病质病症，例如由慢性心力衰竭、艾滋病、肝硬变和癌症所导致的病症。在图3中给出了结果，其中条棒(从左至右)涉及艾滋病恶病质(n=6)、癌症恶病质(n=7)、心脏恶病质(n=17)、自发恶病质(n=2)、肝硬变恶病质(n=6)、营养不良(n=6)以及非恶病质的心力衰竭(n=11)。
正如由升高的血浆ATⅡ水平所证明的那样(平均的ATⅡ血浆水平明显高于20至40pg/ml这一正常范围的上限)，在恶病质病症中已经发现了RAS的活化。这并不取决于恶病质疾病的任何具体的病因学；事实上，在自发恶病质(即起因不明的恶病质)的情况下也发现了升高的ATⅡ的血浆水平(即RAS的活性)。但是，RAS的活化显然对恶病质疾病具有特异性，而在由营养不良造成的类似程度的体重下降的病人中却没有看到RAS的活化。
采用身体脂肪分析仪(TANITA TBF-305，Tanita公司，IL，美国)以直立的位置进行生物电阻抗分析(病人1和2)。基于由制造商提供的并在仪器中编入程序的公式自动地分析瘦肉和脂肪物质。这些公式基于与健康人群的测量值进行的比较。
双重能量X光吸光测定法(DEXA)(病人1)采用Lunar DPXIQ型全身扫描仪(Lunar照射公司，麦迪逊，WI，美国，Lunar系统软件4.3c版)进行整个身体的DEXA-扫描。每次都使受试者从头到脚成一条直线地进行点扫描。扫描进行了不到20分钟的时间。据报道每次扫描的平均照射剂量约为0.75μSv(53)，即为普通胸部X光的大约1/50。DEXA方法可以用来获得脂肪组织物质、瘦肉组织物质的身体密度分析值。已经描述了DEXA的技术细节、性能和节段分界(54，55)。瘦肉组织的测量误差＞2％，而脂肪组织的测量误差＜5％(56)。
踏车锻炼试验(病人1和2)所述病人进行受症状限制的踏车锻炼试验。采用添加了“0阶段”的标准的Bruce方案，所述“0阶段”是由以每小时1英里的速度以5％的坡度锻炼3分钟组成的。病人通过与呼吸质谱计(Amis 2000，Odense，丹麦)相连的单向阀呼吸，并且采用标准的惰性气体稀释技术每10秒钟联机计算分钟通风量、氧萎缩量和二氧化碳的产量。鼓励病人锻炼到疲劳时。作为锻炼能力的一个指标，测量对总体重修正的处于峰值锻炼的锻炼时间和氧的萎缩(以毫升/公斤/分钟为单位的VO2的峰值)。
四头肌肌肉强度的评定(病人1和2)让受试者坐在一个四条腿自由悬垂的刚性框架中。用没有弹性的带子将踝部附着到压强传感器上。将来自压强传感器的记录(Multitrace 2，§，Jersey，Channel岛)用于评定强度并为受试者提供视觉反馈。最大力量产生的一个平稳段表明收缩是最大的。选取在每条腿上三次自发收缩(之间至少有1分钟的休息时间)的最佳结果来分别表示右腿和左腿自发的四头肌的最大肌肉强度。
结果包括对病人1持续了126天的观察结果和对病人2持续了83天的观察结果。在中间的时间点也对这两个病人进行了研究。在治疗的过程中，两个病人都改善到1 NYHA症状类别。在这两个病人中，在研究过程中的锻炼能力都有所改善(锻炼时间病人1和2，VO2峰值病人2)。有证据表明在这两个病人中，两条腿中四头肌的肌肉强度都有所增加。凭借着这样的一些背景实现了这些临床上的益处，即病人1的体重增加了4.6公斤(瘦肉和脂肪组织的增值)、阻止了体重下降的过程并且明显地改善了普通的临床状态和相对的肌肉性能(即肌肉的质量)(病人2)。没有观察到治疗的副作用。
在这2082个病人当中，随机挑选1055个病人用依那普利进行治疗(每天2.5至20毫克)，并用安慰剂治疗其余的1027个病人。在每个方案中，测量在基准时刻和持续过程中的体重。没有记录身高。
采用非成对t检验进行组间平均值的比较。通过采用卡方检验进行组间的比例的比较。就定义存在着恶病质的差别而言，考虑了事先提出的体重下降5.0％、7.5％、10.0％和15.0％的分界点(58)。为了阐明ACE的抑制剂是否影响首次出现恶病质的危险性的问题，对两个治疗组中恶病质的累计发生率进行绘图，并采用对数-秩(log-rank)统计进行分析(59)。在首次出现心脏恶病质的分析中，在任何给定的随访中，把缺少心脏恶病质方面信息(即在这次访问中没有记录体重)看作经过检查的。采用科克斯比例危险分析评定心脏恶病质对生存的影响(58)。对这些分析而言，把心脏恶病质看作是依赖于时间的共变量。在该分析中采用在4、8和12月时的心脏恶病质的评价。这些时间是在具有相对高比例的有关恶病质状态完整信息的随访阶段中的时间点。
初步的分析是为治疗目的。将统计上的显著性规定为计算出的p值小于0.05(双侧检验)。提供出对作用的估计，其伴随的置信区间为95％。针对事先确定的预测因子如年龄、性别、NYHA功能的类别、LVEF(高达或超过25％)以及治疗状态(在评价心脏恶病质对生存的影响的情况下为依那普利对安慰剂)，修正这些结果。
在该项研究的2082名CHF病人中，在随访过程中有657个病人(31.6％)体重下降等于或多达7.5％。心脏恶病质的累计频率随时间不断地增加。在第1年时体重下降等于或超过7.5％的频率(横切面)为8.5％，而在第2年时增加到15.5％、在第3年时增加到17.2％。在基准时刻，在随访过程中体重下降等于或超过7.5％的发生了心脏恶病质的病人在年龄上要老1.3岁(平均为61.2岁比59.9岁，p＜0.01)，在体重上要重2.7公斤(平均为80.5公斤比77.8公斤，p＜0.001)，并且稍微更频繁地用利尿药进行治疗(87.2％比82.6％，p＜0.01)。在该项研究的病人当中，375名(18.0％)为女性。女性CHF病人更频繁地发生心脏恶病质(对体重下降等于或超过7.5％的病人来说，女性为39.5％而男性为29.8％，p＜0.001)。不同的是发生心脏恶病质的病人和那些没有发生的病人的基准临床特征是类似的，尤其是就NYHA的类别、LVEF和疾病的病因学而言更是如此。在基准时刻随后的临床特征与接下来心脏恶病质的发生是独立相关的年龄(RR，p＜0.001)、NYHA的类别、LVEF和治疗。
心脏恶病质的发生与接下来生存的受损是密切相关的。所有事先确定的心脏恶病质的竞争性分界点都与生存的受损有关，而与年龄、性别、NYHA的类别、LVEF和治疗分配的作用无关。在随访中观察到的756名死亡的病人中，有223例发生在在死亡前的最后一次访问中已被划分为恶病质之类(体重下降等于或超过7.5％)的病人中，即CHF病人中有29.5％的死亡发生在患有心脏恶病质的病人中。在心脏恶病质介于5％和15％之间的不同的分界处，体重下降等于或超过6.5％的是死亡率减少的最有力的预言。恶病质(体重下降等于或超过6.5％)对生存的天然的作用是非常显著的RR 1.47(95％置信区间1.27至1.70)，p=0.00000017。
被分配用依那普利治疗的病人在随访过程中具有明显更低的发生心脏恶病质的危险性。用依那普利治疗的天然的作用明显地与发生心脏恶病质的危险性的降低有关RR 0.81(95％置信区间0.70至0.95)，p=0.0085。同样在SOLVD治疗试验的这一部分病人中，分配依那普利的治疗对生存具有明显有益的作用，而与年龄、性别、NYHA的类别和LVEF的作用无关(p＜0.01)。当同样针对在第4或第8个月时心脏恶病质的存在(体重下降了6.5％)进行调整时，治疗作用仍保持显著。在任何时间点时体重下降了至少7.5％的病人中，发现仅有10个病人在接下来的记录中体重等于或高于基准的体重(依那普利组6，安慰剂组4)。
这说明明显的体重下降(即心脏恶病质)是CHF病人中频繁发生的事件。在3年的时间里，大约1/3的病人体重下降等于或超过7.5％。体重下降的自发性逆转是非常少见的事件，发生该事件的病例少于2％。心脏恶病质与CHF病人的生存受损密切地并独立地产生关联。除了常规的治疗以外，用ACE抑制剂依那普利进行治疗降低了发生死亡的危险性和发生心脏恶病质的危险性的频率。总之，依那普利的治疗使发生心脏恶病质的危险性降低了19％。
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权利要求
1．肾素-血管紧张素系统的抑制剂用于制备治疗或预防与缺氧或代谢功能或效率受损有关的病症的药物的用途。
2．肾素-血管紧张素系统的抑制剂用于制备治疗或预防中风或其复发的药物的用途。
3．肾素-血管紧张素系统的抑制剂用于制备治疗急性心肌梗死或其复发的药物的用途。
4．肾素-血管紧张素系统的抑制剂用于制备治疗或预防萎缩或恶病质或其复发的药物的用途。
5．肾素-血管紧张素系统的抑制剂用于制备治疗衰老的症状和征兆的药物的用途。
6．如权利要求1要求保护的用途，其中所述的病症是在分娩时缺氧。
7．肾素-血管紧张素系统的抑制剂提高代谢功能或效率或者改变身体组成和/或形态的用途。
8．如权利要求4要求保护的用途，其中所述的萎缩为全身性萎缩。
9．如权利要求8要求保护的用途，其中所述的全身性萎缩与衰老、心脏、肾脏、肝脏或恶性疾病或者与慢性或急性炎症过程有关。
10．如权利要求9要求保护的用途，其中所述的全身性萎缩与选自脓毒、脓毒性休克或自身免疫疾病和结缔组织疾病的炎症过程有关。
11．如权利要求4要求保护的用途，其中所述的萎缩是局部萎缩。
12．如权利要求11要求保护的用途，其中所述的局部萎缩与骨骼肌或神经的损伤有关。
13．如权利要求1或权利要求3要求保护的用途，其中所述的病症需要进行心脏的预先调节。
14．如权利要求7要求保护的用途，其中所述的药剂用于促进可训练性和健康。
15．如任一前述权利要求所要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为血管紧张素-转化酶(“ACE”)的抑制剂。
16．如权利要求15要求保护的用途，其中所述的ACE抑制剂选自喹那普利，卡托普利，赖诺普利，哌道普利，群多普利，依那普利，默西普利，福森普利，雷米普利，西拉普利，咪哒普利，斯哌普利，替莫卡普利，贝那普利，阿拉普利，西洛普利，地拉普利，依那普利拉，和莫替普利。
17．如权利要求15要求保护的用途，其中所述的ACE抑制剂选自喹那普利，卡托普利，哌道普利，群多普利，依那普利，默西普利，福森普利，雷米普利，西拉普利和赖诺普利。
18．如权利要求15要求保护的用途，其中所述的ACE抑制剂是雷米普利。
19．如权利要求1至14之任一要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为血管紧张素受体拮抗剂。
20．如权利要求19要求保护的用途，其中所述的血管紧张素受体拮抗剂为AT1受体拮抗剂。
21．如权利要求20要求保护的用途，其中所述的AT1受体拮抗剂选自洛沙坦，戊沙坦，依贝沙坦，康地沙坦，依普罗沙坦，他索沙坦和泰米沙坦。
22．如权利要求20要求保护的用途，其中所述的AT1受体拮抗剂选自洛沙坦，戊沙坦和依贝沙坦。
23．如权利要求1至14之任一要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为中性内肽酶-抑制剂。
24．如权利要求1至14之任一要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为肾素-抑制剂。
25．如权利要求1至14之任一要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为激肽降解的抑制剂。
26．如权利要求1至14之任一要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂为激肽酶-抑制剂。
27．如任一前述权利要求所要求保护的用途，其中所述的肾素-血管紧张素系统的抑制剂是亲脂的。
28．一种针对受试者中代谢功能或效率的可促进性的遗传诱因来诊断或筛选个体的方法，所述方法包括在所述个体中分析检测位于染色体17q23上的ACE基因(DCP1)的等位基因。
29．一种如权利要求28要求保护的方法，所述方法是一种筛选对萎缩的治疗或预防产生响应的个体的方法。
30．一种如权利要求28要求保护的方法，所述方法是一种筛选对心脏的预先调节产生响应的个体的方法。
31．一种如权利要求28要求保护的方法，所述方法是一种筛选对促进可训练性和健康产生响应的个体的方法。
32．一种如权利要求28要求保护的方法，所述方法是一种筛选对改变身体的组成和/或形态产生响应的个体的方法。
33．一种如权利要求28至32之任一要求保护的方法，所述方法包括测定内含子16中的287个碱基对的alu重复序列是否存在。
全文摘要
已经发现肾素－血管紧张素系统的抑制剂对于与缺氧或代谢功能或效率受损有关的病症的治疗或预防来说是有用的。具体地讲,该抑制剂可以与中风或其复发的治疗、心肌梗死的急性治疗以及萎缩或恶病质的治疗或预防结合起来使用,因此它在衰老的症状和征兆的治疗中是有用的。该抑制剂也可以用于增强健康受试者的功能。
文档编号A61K31/22GK1279606SQ9881131
公开日2001年1月10日 申请日期1998年10月19日 优先权日1997年10月17日
发明者H·E·蒙特高莫里, J·F·马丁, J·D·艾卢瑟林姆斯基 申请人:欧洲基因有限公司