专利名称：抑制细胞增殖的取代双吲哚基马来酰亚胺的制作方法
技术领域：
本发明涉及下式的取代吡咯 其中，R1是氢且R2是甲基，或者R1是甲基且R2是氢，或者R1是羟甲基且R2是甲基还涉及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。
式Ⅰ的化合物具有抗增殖活性，具体地说，它们抑制细胞周期的G2／M期中的细胞分裂，所以，通常被称为“G2／M期细胞周期”抑制剂。
式Ⅰ的化合物被U．S．P．5，057，614的式Ⅰ覆盖(但未作为一类或单独地具体公开)。此外，U．S．P．5，057，614中未公开或表明本发明化合物的上述活性，所以，本发明化合物的上述活性令人感到意外。上式Ⅰ包括如下三种化合物 术语“药物上可接受的前体药物”表示这样的化合物在生理条件下或通过溶剂解可将它转化为式Ⅰ的任意化合物或转化为所述化合物的药物上可接受的盐。
式Ⅰ的化合物以及所述化合物的药物上可接受的盐是通过下列示意图所表示的反应制备的。这些化合物中每一种的合成还被描述于实施例1～3中。
化合物Ⅰ-1可这样制备将(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(3)与[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(7)反应，再用碱处理反应产物。
化合物Ⅰ-2可这样制备将(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(17)与[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(19)反应，再用碱处理反应产物。
化合物Ⅰ-3可这样制备将(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(10)与(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(15)反应，再用酸处理反应产物。
下面阐述本发明化合物的抗增殖活性。这些效果启示所述化合物适用于治疗癌(尤其实体瘤)。
雌激素受体阴性上皮乳腺癌系(MDA-MB-435)购自美国典型细胞培养物保藏中心(ATCC；Rockville，MD)并在ATCC推荐的培养基中生长。要分析试验化合物对这些细胞生长的影响，将细胞以每孔2000个细胞铺板于96孔组织培养板(“试验板”)，并在37℃和5％CO2存在下保温一夜。次日，将试验化合物溶于100％二甲亚砜(DMSO)而得10mM储备溶液。用无菌蒸馏水稀释每种化合物至1mM，然后加到96孔“主平板”的三份孔中(孔内盛有形成40μM的最终浓度的足量培养基)。用培养基逐个稀释所述“主平板”中的化合物。将四分之一终体积的已稀释化合物转到两份“试验板”上。将DMSO加到一排“对比细胞”中，使每孔的最终DMSO浓度为0．1％。将“试验板”放回培养箱，在添加试验化合物3天后按下述方法分析一块“试验板”。类似地，在添加试验化合物5天后，按下述方法分板第二块“试验板”。
将3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-溴化四唑鎓(噻唑基蓝(thiazolyl blue)；MTT)加到每孔中至1mg／ml的最终浓度。再在37℃下将平板保温3小时。然后，除去含MTT的培养基，往每孔添加50μl 100％乙醇而溶解生成的甲_代谢物。为保证完全溶解，在室温下将平板振荡15分钟。在微量滴定板读数器(MolecularDynamics)中读取570nm波长处的吸光度(以650nm为参比)。通过从所有的孔扣除空白，再从1．00减去每次试验三份的平均吸光度除以对比物的平均值所得的商而计算抑制百分数。从浓度的对数与抑制百分数的曲线图的线性回归确定抑制浓度(IC50和IC90)。
结肠腺癌系SW480和结肠癌系HCT-116也得自ATCC并按前面提供的同样方案(作如下修改)试验。将细胞系SW480以每孔1000个细胞铺板并在添加试验化合物6天后分析。将细胞系HCT-116以每孔750个细胞铺板并在添加试验化合物4天后分析。至于MTT分析，在吸出含MTT的培养基之前，将平板在1000rpm下离心5分钟，应用100μl100％乙醇溶解甲_。
将前面体外试验的结果列于表Ⅰ～Ⅲ中。
表Ⅰ在细胞系MDA-MB-435中的抗增殖活性
*至少三个独立试验的平均值表Ⅱ在细胞系HCT-116中的抗增殖活性
*至少三个独立试验的平均值表Ⅲ在细胞系SW480中的抗增殖活性
*至少三个独立试验的平均值要分析所述化合物对细胞周期进展的影响，将MDA-MB-435细胞(ATCC；Rockville，MD)以每10cm皿1×106个细胞／10ml铺板于如下生长培养基中RPMI1640+10％热灭活的胎牛血清，2mM L-谷氨酰胺和5U／ml pen-strep(都得自GIBCO／BRL，Gaithersburg，MD)。在37℃和5％CO2存在下将细胞保温一夜。次日，将10μl每种待测化合物于100％DMSO中的溶液加到各个皿中而得1／1000x最终浓度的储备溶液。此外，将10μl 100％DMSO加到对比皿中。包括对比板在内的所有平板中DMSO的最终浓度是0．1％。将这些平板放回培养箱中。
然后，在各时间段，将每块平板中的培养基转移到50ml离心管中。再用5ml磷酸盐缓冲盐水(PBS；GIBCO／BRL)洗涤残留在皿中的细胞层。移出PBS并与相应管中的培养基合并。在37℃下将细胞用胰蛋白酶消化5分钟，收集溶液并与相应管中的培养基和PBS合并。然后，在1200rpm下将这些管离心5分钟。这样固定细胞移出上清液，轻敲离心管使粒状沉淀物分散开，再在缓缓旋转的同时添加5ml冷的70％乙醇。然后，在-20℃下将细胞贮存24小时以上。
从冷冻机中取出所述盛有细胞的管，在室温下放置20～30分钟。在3000rpm下将这些管离心5分钟。移出上清液，用5ml PBS洗涤粒状沉淀物，象上述那样将管离心。接着，移出上清液，将粒状沉淀物重悬浮于0．5ml PBS中。此后，往每支管中添加0．5ml RNA酶A(RNAseA)(1mg／ml于PBS中)，将这些管在37℃下保温15分钟。往每支管中添加100μl碘化丙锭(Sigma，St．Louis，MO)(1mg／ml于PBS中)，再在室温下将管保温2～3分钟。将每份形成的溶液滤过滤器帽管(filtercap tube)(Becton Dickinson，San Jose，CA，#2235)。
在FACSort仪(Becton-Dickinson)中应用厂商的CellQUEST程序读取样品，并利用厂商的ModFIT软件分析。该检测提供了下列每个期内细胞的百分数指示G0／G1期、DNA合成(S)期和G2／M期。
在添加试验化合物Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3一天后分析细胞周期进展实验的结果并总结于下表Ⅳ中。
表Ⅳ试验化合物对细胞周期的影响
前述表Ⅰ～Ⅳ中总结的结果表明化合物Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3具有抗增殖活性；确切地说，它们引起细胞周期的G2／m期中细胞的积聚。
前述式Ⅰ的吡咯及其前述盐可被用作药物(例如，呈药物制剂的形式)，它们可被经口施药，例如，呈片剂、包衣片、锭剂、硬或软明胶胶囊、溶液、乳液或悬浮液的形式。它们还可被经直肠施药，例如，呈栓剂的形式；或者肠胃外施药，例如，呈注射液的形式。
要生产药物制剂，可将这些化合物与治疗上惰性的无机或有机载体配制。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸(steric acid)或其盐可作为这样的载体用于片剂、包衣片、锭剂和硬明胶胶囊。用于软明胶胶囊的合适的载体有植物油、蜡、脂肪、半固态或液态多元醇。不过，根据所述活性物质的性质，就软明胶胶囊来说通常不需要载体。生产溶液和糖浆剂的合适的载体有水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。用于注射液的合适的载体有水、醇、多元醇、甘油、植物油、磷脂和表面活性剂，用于栓剂的合适的载体有天然油或硬化油、蜡、脂肪和半液态多元醇。
药物制剂还可以含防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、增甜剂、着色剂、调味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们甚至还可以含其它治疗上有用的物质。
如前所述，式Ⅰ的吡咯及其前述盐可被用于治疗或控制肿瘤病。剂量可在宽范围内变动，当然，应被调节到各具体情况下个体的需要。通常，就给体重约为70kg的成人经口或肠胃外施药来说，约10mg～约10，000mg、优选约200mg～约5，000mg、更优选约200mg～约1000mg的日剂量应是合适的，不过，必要的话可以超出该上限。该日剂量可作为单剂量或均分剂量施药，或者用于肠胃外施药时，可作为连续输注给药。
如下实施例阐述了本发明。
实施例13-(1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(Ⅰ-1)的制备A．1-甲基-6-硝基-1H-吲哚(2)在0～5℃下10分钟期间，往0．33g(8．3mmol)NaH(60％油中分散液)于30ml干二甲基甲酰胺(“DMF”)的浆液中添加0．973g(6．00mmol)可商购的6-硝基-1H-吲哚(1)。在同样温度下搅拌1小时后，添加0．75ml(12．1mmol)碘代甲烷，在相同温度下将混合物搅拌30分钟，再在室温下搅拌1小时，倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，在MgSO4上干燥，浓缩而得0．814g(77．5％)1-甲基-6-硝基-1H-吲哚(2)黄色固体。未经纯化而直接应用该物质。B．(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(3)在0～5℃的氩气氛中，往1．33g(7．55mmol)1-甲基-6-硝基-1H-吲哚(2)的40ml乙醚溶液中添加1．5ml(17．2mmol)草酰氯。有沉淀形成。搅拌3小时后，过滤形成的固体，用少量乙醚洗涤，干燥后得1．9g(95％)(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(3)黄色固体。未经纯化而直接应用该物质。C．[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-乙腈(6)应用上述子部分A的操作方法，用8．7ml(71mmol)三甲基乙酰氯和3．4g(85mmol)用作碱的NaH(油中的60％分散液)在115ml DMF中对10．2g(65mmol)可商购的(1H-吲哚-3-基)-乙腈(5)进行N-烷基化反应，用色谱法纯化后得6．6g(38．7％)[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-乙腈(6)黄色油。D．[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(7)在0～5℃下20分钟期间，往6．6g(27．5mmol)得自如上步骤C的[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-乙腈(6)于105ml 2-丙醇中的浆液中滴加40ml(0．563mol)乙酰氯。在室温下将反应混合物搅拌一夜，浓缩，用大约75ml乙酸乙酯稀释残余物，在蒸汽浴上加热15分钟，冷却后放入冷冻机中。过滤沉淀，干燥后得6．0g(65．0％)[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(7)白色固体。E．3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(4)在0℃的氩气氛中，往1．25g(4．69mmol)得自如上步骤B的(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(3)和1．6g(4．75mmol)得自如上步骤D的[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(7)的80ml二氯甲烷溶液中添加2．6ml(18．65mmol)三乙胺。在相同温度下搅拌30分钟后，再在室温下将反应混合物搅拌31／2小时，用更多二氯甲烷稀释。用水、0．5N HCl溶液、盐水洗涤有机相，在MgSO4上干燥，浓缩而得3．01g泡沫体。将该物质溶于50ml甲苯，在0℃下用987．9mg(5．19mmol)对-甲苯磺酸处理。在室温下搅拌3小时后用二氯甲烷萃取反应混合物。用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤有机相，在MgSO4上干燥，浓缩得3．9g粗物质。在硅胶柱上用色谱法纯化，得1．7g(77％)3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(4)橙色固体。mp＞146℃(分解)。MS(M+)，m／z470。F．3-(1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡略-2、5-二酮(Ⅰ-1)用5．6ml(8．96mmol)的1．6摩尔NaOCH3甲醇溶液处理1．7g(3．61mmol)得自如上步骤E的3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(4)的60ml甲醇溶液。在室温下搅拌反应1小时，倾到2NHCl／冰中，用乙酸乙酯萃取。在无水MgSO4上干燥有机萃取物，浓缩，用色谱法纯化后得394．7mg(28％)3-(1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-1)红色固体，mp＞280℃。MS(M+)m／z386。
实施例23-(1-羟甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-3)的制备A．1-甲氧基甲基-1H-吲哚(9)应用实施例1中步骤A的操作方法，用1ml(13．1mmol)氯甲基甲基醚和0．48g(12mmol)作为碱的NaH(油中60％分散液)在22mlDMF中对1．17g(10mmol)可商购的吲哚(8)进行N-烷基化反应，用色谱法纯化后得1．4g(86．9％)1-甲氧基甲基-1H-吲哚(9)无色油。B．(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(10)应用实施例1中步骤B的操作方法，将得自如上步骤A的0．23g(1．43mmol)1-甲氧基甲基-1H-吲哚(9)与0．25ml(2．86mmol)草酰氯在3．5ml乙醚中反应而生成0．174g(48．5％)(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(10)黄色固体。未经纯化而直接应用该物质。C．(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(13)在0～5℃下一小时期间，边搅拌边往44．27g(0．204mol)6-硝基芦竹碱(12)[Jackson B．Hester，有机化学杂志(J．Org．Chem．)291158(1964)]的450ml乙腈溶液中添加44．59g(0．31mol)碘代甲烷。在室温下搅拌反应混合物达三小时，然后，一次性添加26．6g(0．543mol)氰化钠的225ml水溶液。在32℃下将反应混合物加热一夜，冷却到室温，用总量为800ml的乙酸乙酯和300ml水将产物萃取3次。用水、1N HCl溶液、饱和碳酸氢钠溶液洗涤合并的萃取液，在MgSO4上干燥，真空蒸发溶剂。将橙棕色残余物(41．3g)溶于200ml温热的乙酸乙酯，通过小硅胶垫片，蒸发溶剂后产生28．9g(70．4％)(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(13)黄色固体。D．(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(14)在室温下，将65．5g(0．474mol)粉状碳酸钾加到28．9g(0．143mol)得自如上步骤C的(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(13)于230ml二甲基甲酰胺的溶液中。搅拌该悬浮液达40分钟，然后在65分钟内滴加25．48g(0．179mol)碘代甲烷。在室温下搅拌一夜后，冷却反应混合物，倾入总量为600ml的水中。过滤沉淀，用少量水洗涤，在磷酐(phosphor anhydride)上干燥直至恒重。该操作产生30．4g(95．4％)(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(14)，未进一步纯化而直接应用它。E．(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(15)在0～10℃下，将HCl气流鼓泡通入搅拌下82g(0．382mol)得自如上步骤D的(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙腈(14)于1000ml 2-丙醇的悬浮液中。添加约350g HCl后，往反应混合物中添加乙醚直至形成沉淀。收集固体，用乙醚洗涤并真空干燥而得102g(85．7％)(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(15)。F．3-(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(11)应用实施例1中步骤E的操作方法，将1．3g(5．17mmol)得自如上步骤B的氧代乙酰氯(10)与1．7g(5．45mmol)得自如上步骤E的(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚)-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(15)在95ml二氯甲烷中进行缩合反应，生成1．08g(48．5％)3-(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(11)橙色固体，mp＞250℃(分解)。MS(M+)，m／z430。
G．3-(1-羟甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-3)用大约40ml 2N HCl处理727．5mg得自如上步骤F的3-[1-(甲氧基甲基)-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(11)于65ml THF中的溶液。将反应混合物回流5小时，冷却，用乙酸乙酯萃取产物。在MgSO4上干燥有机相，蒸发溶剂而得橙色固体。用色谱法纯化该物质而得123．3mg 3-(1-羟甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-3)红色固体，mp210～213℃。MS(M+)，m／z416。
实施例33-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-2)的制备A．(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(17)应用实施例1中步骤B的操作方法，用6ml(47mmol)可商购的1-甲基-1H-吲哚(16)与8ml(92mmol)草酰氯在120ml乙醚中反应，生成7．6g(73．2％)(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(17)黄色固体。未经纯化而直接应用该物质。B．[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-乙腈(18)应用实施例1中步骤A的操作方法，用0．3ml(2．44mmol)三甲基乙酰氯和70．8mg(1．77mmol)作为碱的NaH(油中60％分散液)在8mlDMF中对346．6mg(1．72mmol)得自实施例2步骤C的6-硝基-1H-吲哚基-3-乙腈(13)进行N-烷基化反应，用色谱法纯化后得287．7mg(43．2％)[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-乙腈(18)黄色油。C．[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(19)在0～5℃下，将HCl气流鼓泡通入不断搅拌下的1．45g(5．08mmol)得自如上步骤B的1[-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚基]-3-乙腈(18)于90ml 2-丙醇的悬浮液中。在室温下将反应混合物搅拌21小时。真空蒸发溶剂而得1．95g(100％)黄色固体(19)。未进一步纯化而直接应用该物质。D．3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(20)应用实施例1中步骤E的操作方法，将1．1g(4．96mmol)得自如上步骤A的氧代乙酰氯(17)与1．95g(5．08mmol)得自如上步骤C的[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(19)和2．1ml(17．94mmol)三乙胺在120ml二氯甲烷中反应，用1．1g(5．78mmol)对甲苯磺酸一水合物的80ml甲苯溶液处理生成的产物，得1．3g(62．1％)3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(20)橙色固体；mp＞245℃(分解)。MS(M+)，m／z470。E．3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-2)应用实施例1中步骤F的操作方法，用4．3ml(6．88mmol)的1．6摩尔NaOCH3于65ml甲醇中的溶液对1．3g(2．76mmol)得自如上步骤D的3-[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(20)进行N-去保护反应，从乙酸乙酯和己烷中结晶后得300．6mg(28．1％)3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(I-2)红色固体；mp＞260℃。MS(M+)，m／z386。
实施例4片剂配方
*化合物A代表本发明的化合物。制备操作1．将第1、2和3项在合适的混合器中混合15分钟。
2．将步骤1的粉状混合物与20％聚维酮K30溶液(第4项)一起造粒。
3．在50℃下干燥步骤2的粒化物。
4．使步骤3的粒化物通过合适的研磨设备。
5．将第5项加到步骤4的研磨后的粒化物中并混合3分钟。
6．在合适的压制机上压制步骤5的粒化物。
实施例5胶囊配方
*化合物A代表本发明的化合物。制备操作1．将第1、2和3项在合适的混合器中混合15分钟。
2．添加第4&5项并混合3分钟。
3．填入合适的胶囊。
实施例6注射溶液／乳液制剂
*化合物A代表本发明的化合物。制备操作1．将第1项溶于第2项中。
2．将第3、4和5项加到第6项中并混合直至分散，然后均化。
3．将步骤1的溶液加到步骤2的混合物中，均化直至分散液变成半透明。
4．通过0．2μm滤器进行无菌过滤并注入小瓶。
实施例7注射溶液／乳液制剂
*化合物A代表本发明的化合物。制备操作1．将第1项溶于第2项中。
2．将第3、4和5项加到第6项中并混合直至分散，然后均化。
3．将步骤1的溶液加到步骤2的混合物中，均化直至分散液变成半透明。
4．通过0．2μm滤器进行无菌过滤并注入小瓶。
权利要求
1．下式的化合物 其中，R1是氢且R2是甲基，或者R1是甲基且R2是氢，或者R1是羟甲基且R2是甲基及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。
2．下式的权利要求1的化合物 和所述化合物的药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。
3．下式的化合物 和所述化合物的药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。
4．下式的化合物 和所述化合物的药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。
5．一种药物组合物，它包含下式的化合物 其中，R1是氢且R2是甲基，或者R1是甲基且R2是氢，或者R1是羟甲基且R2是甲基或者所述化合物的药物上可接受的盐或前体药物以及药物上可接受的载体。
6．用作抗肿瘤药物的权利要求1～4任一项的化合物。
7．权利要求1～4任一项的化合物在治疗实体瘤方面或在制备药物组合物方面的应用。
8．本文上述化合物、组合物、方法和应用。
全文摘要
式(Ⅰ)(其中,R
文档编号A61K31/40GK1293671SQ99804045
公开日2001年5月2日 申请日期1999年3月10日 优先权日1998年3月17日
发明者U·H·德格拉, D·M·胡瑞恩, J·柯, G·F·威伯 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司