专利名称：烟曲霉醇衍生物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及新的具有优异血管生成抑制活性的烟曲霉醇或其可药用盐、其制备方法和含有它们作为活性组分的药物组合物。
背景技术：
血管生成是生成新毛细血管的现象，它是一种正常的生理功能，也是一种由多种疾病诱发的病理机能。血管生成与实体癌、风湿关节炎、糖尿病视网膜病、牛皮癣等密切相关[Billington,D.C.《药物设计和发现》(1991),8,3.]。哈佛大学医学院的JudahFolkman在1971年提出通过抑制血管生成治疗实体癌的新概念[J.Folkman，《新英格兰医学》(1971),185,1182.]。
目前，通过控制血管生成方式治疗的治疗剂的临床重要性业已受到重视，并且对血管生成进行了许多研究。特别是根据应用血管生成抑制剂的抗癌药物的临床结果，人们认为此类药物不会引起普通抗癌药物所导致的问题，其中包括副作用和耐受性。换言之，血管生成抑制剂不直接作用于肿瘤细胞，而是作用于活生物的内皮细胞，因此，可不再出现耐受性的问题，并且期望通过在治疗中与目前已被应用的常规抗癌药物联合给药产生协同抗癌作用。
现已报导了多种抑制血管生成的烟曲霉素化合物。例如，已知通过培养烟曲霉可以生产具有血管生成抑制作用的烟曲霉素，烟曲霉是一支分离自土壤样本的生产性菌株[Eble,T.E.,Hanson,F.R.《抗生素和化疗》，1,54(1951)；Eble,T.E.Hanson,F.R.《细菌杂志》(J.Bact.)58,527(1949)][Ingbr,G.,Fujita,T.,Kishimoto,S.,Sudo,K.,Kanmaru,T.,Bre,H.,Folkmanm,J.,《自然》248,555(1990)]。
此外，现已公开了EP-A-354787、EP-A-357061、JP-A01-233275和EP-A-415294；并且报导了6-氨基-6-脱氧烟曲霉醇[《化学和药学通讯》(Chem.Pharm.Bull.)(1992),40,575]、6-酰基、6-0-磺酰基、6-0-烷基和6-0-(N-取代氨基甲酰基)烟曲霉醇[《化学和药学通讯》(Chem.Pharm.Bull.)(1992),40,96]具有血管生成抑制作用。
然而，仍然需要开发出具有低毒性和高效性的血管生成抑制剂。
发明详述本发明人为解决上述问题进行了大量研究，由此开发出新的衍生自烟曲霉醇的烟曲霉醇衍生物，烟曲霉醇是通过微生物发酵产生的烟曲霉素的水解产物，从而完成了本发明。
本发明的一个目的是提供化学式1表示的烟曲霉醇衍生物。
本发明的另一个目的是提供化学式1所示烟曲霉醇衍生物的制备方法。
本发明涉及化学式1所示烟曲霉醇衍生物或其可药用盐 其中X代表羟基和Y代表卤素，或X和Y可形成环氧乙烷环；B代表氧或氢；和
R1、R2、R3、R4和R5独立地代表氢、羟基、乙酰氧基、取代或未取代氨基、取代或未取代烷基、取代或未取代氨基烷氧基、C1-C6烷氧基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基、亚烷基二氧基、甲酰基、乙酰氨基或亚甲氧基羰基，条件是R1、R2、R3、R4和R5不同时代表氢。
化学式1的化合物的可药用盐包括盐酸盐、溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对-甲苯磺酸盐。
在化学式1的化合物中，优选的那些化合物或其可药用盐是其中X代表羟基且Y代表卤素，或X和Y形成环氧乙烷环；B是氧或氢；和R1、R2、R3、R4和R5独立地代表氢、羟基、乙酰氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、二烷基氨基烷基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、C1-C6烷氧基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基或亚甲基二氧基，条件是R1、R2、R3、R4和R5不同时代表氢。
在化学式1的化合物中，更优选0-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氯肉桂酰基)烟曲霉醇；4-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇；0-(4-三氟甲基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(硝基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-二甲氧基-6-硝基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙酰氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇；
0-(4-乙酰氧基-3,5-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇；4-(4-甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇；0-(4-二甲基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氰基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-二甲基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3-二甲基氨基甲基-4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-亚甲基二氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-二甲氧基-6-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-二甲基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；和4-(4-二甲基氨基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇。
化学式1的化合物可以由化学式2所示的化合物(烟曲霉醇)制备，化学式2的化合物是通过微生物发酵的烟曲霉素的水解产物[Tarbell,D.D.等人《美国化学学会会志》83,3096(1961)]。 按照本发明的一个优选实施方案，化学式1所示的化合物可以经过酰化或醚化来制备。制备方法通过以下反应流程来说明(1)酰化反应 [在式中，X、Y、R1、R2、R3、R4和R5具有与上文相同的定义]。
反应流程1的酰化反应可以通过作为起始原料的化学式2的化合物与化学式3所示的取代肉桂酸衍生物或其反应性衍生物在碱的存在下反应来完成，所述取代肉桂酸衍生物的反应性衍生物例如是酸酐、混合酐、酰氯、酸对甲苯磺酸酐、酸甲磺酸酐、2-吡啶硫醇酯和苯基酯。
化学式3的化合物或其反应性衍生物在该酰化反应中的用量可以是以化学式2的化合物用量计的1-10当量，优选1-3当量。
作为适用于该酰化反应中的碱，可以以1-10当量的量应用叔胺如三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶和二甲基氨基吡啶，或碱金属氢化物如氢化钠和氢化钾。优选以1-3当量应用三乙胺、二甲基氨基吡啶或氢化钠。
作为酰化用溶剂，可以应用二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙腈、苯或甲苯。在所述溶剂中，优选二甲基甲酰胺、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈和苯。
酰化的反应温度是-80℃至100℃，优选0至50℃。
所得化学式4的化合物进行环氧乙烷环开环反应，得到化学式5的化合物。
该环氧乙烷开环反应是通过式4的化合物与1-3当量的酸反应，或与盐在酸性催化剂的存在下反应来进行的。
作为适用于环氧乙烷开环反应的酸，可以应用盐酸、溴酸或碘酸；并且作为催化剂，可以应用乙酸、硫酸、对-甲苯磺酸、盐酸、磷酸或硝酸，但优选乙酸或盐酸。
作为适用于环氧乙烷开环的盐，可以应用溴化锂、氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钾、溴化钠、碘化钾、碘化钠或碘化锂。在这些盐中，优选氯化锂、溴化锂和碘化锂。(2)醚化 [在式中，X、Y、R1、R2、R3、R4和R5具有与上文相同的定义]。
反应流程2的醚化是通过作为起始原料的化学式2的化合物与化学式6的取代肉桂醇或其反应性衍生物如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐或卤化物(氯化物、溴化物或碘化物)在碱的存在下反应来进行，得到化学式7的化合物。
化学式6的化合物或其反应性衍生物在该醚化反应中的用量可以是以化学式2的化合物用量计的1-10当量，优选1-3当量。作为醚化用的碱，可以以1-10当量，优选1-3当量采用叔胺如三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶和二甲基氨基吡啶，或氢化钠、氢化钾、丁基锂、二异丙基酰氨基锂。
作为醚化用溶剂，可以应用二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、二噁烷、乙腈、苯或甲苯。在所述溶剂中，优选二甲基甲酰胺、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈和苯。
醚化的反应温度是-80℃至150℃，优选0-100℃。
本发明还提供血管生成抑制组合物，该组合物含有治疗有效量的化学式1的化合物或其可药用盐作为活性组分，和可药用载体。
本发明的化学式1的化合物及其盐可以通过将该化合物或其盐与可药用惰性载体混合，配制成为固体、半固体或液体型的适合于口服或非肠道给药的药物制剂。
由于化学式1的化合物或其盐具有优良的血管生成抑制作用，所以它们可以作为抗癌药物或癌转移抑制剂，或用于治疗风湿性关节炎、牛皮癣或糖尿病性视网膜病的治疗药来应用。
为了评估本发明化学式1的化合物的全身毒性，利用小鼠进行了急性毒性实验。结果是，各化合物在口服给药情况中的半数致死剂量(LD50)不小于2g/kg，所以认为这些化合物是十分安全的化合物。
因此，本发明的化学式1的化合物可以在第一阶段以每天0.2mg/kg至2g/kg，优选0.2至200mg/kg的量给药。但该剂量可以根据患者的需要、被治疗疾病的情况和所用的化合物来变化。
通过以下实施例对本发明作出更详细的说明，但应注意本发明不以任何方式限定于这些实施例。实施例1:0-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇(1)向烟曲霉醇(107mg)的四氢呋喃(5ml)溶液中加入氢化钠(46mg)，将该混合物搅拌1小时。
(2)室温下将吡啶(60mg)加入到3,4-二甲氧基肉桂酸(158mg)在二氯甲烷(5ml)中的溶液内。向其中滴加草酰氯(96mg)，将所得混合物搅拌1小时。随后在减压下通过蒸发除去溶剂。将四氢呋喃(3ml)加入残余物，将所得混合物滴加到(1)的溶液中。搅拌1小时后，向反应混合物中加入水(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)稀释该混合物。用水(10ml)和盐水(20ml)洗涤后，有机层用无水硫酸镁干燥且过滤。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到白色粉末的标题化合物(84mg)。1H-NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=15.9Hz)7.12～7.05(m,2H)6.86(d,1H,J=8.9Hz)6.37(d,1H,J=15.9Hz)5.73(m,1H)5.22(brt,1H,J=7.3Hz)3.93(s,3H)3.92(s,3H)3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.45(s,3H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.58(t,1H,J=6.4Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.41～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.66(s,3H)1.24(s,3H)1.18～1.06(m,1H)实施例2:0-(4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(500mg)、60％氢化钠(120mg)、4-甲氧基肉桂酸(490mg)、吡啶(218mg)和草酰氯(349mg)，得到280mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H NMR(CDCl3)δ7.63(d,1H,J=15.9Hz),7.47(d,2H,J=8.7Hz),6.90(d,2H,J=8.7Hz),6.36(d,1H,J=15.9Hz),5.74(m,1H),5.23(t,1H,J=7.4Hz),3.84(s,3H),3.71(dd,1H,J=11.1,2.7Hz),3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.61(t,1H,J=6.4Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.39-1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.67(s,3H),1.24(s,3H),1.12(m,1H).实施例3:0-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、3,4,5-三甲氧基肉桂酸(101mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到42mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H NMR(CDCl3)δ7.59(d,1H,J=15.8Hz),6.76(s,2H),6.42(d,1H,J=15.8Hz),5.73(m,1H),5.22(t,1H,J=7.2Hz),3.89(3s,9H),3.72(dd,1H,J=11.1,2.6Hz),3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.63(t,1H,J=6.4Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.37(m,1H),2.19-1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.67(s,3H),1.24(s,3H),1.11(m,1H).实施例4:0-(氯肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、4-氯肉桂酸(77mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到51mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=16.0Hz),7.45(d,2H,J=8.5Hz),7.36(d,2H,J=8.5Hz),6.46(d,1H,J=16.0Hz),5.22(t,1H,J=7.7Hz),3.71(dd,J=11.1,2.8Hz),3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.62(t,1H,J=6.3Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.38-1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.67(s,3H),1.23(s,3H),1.12(m,1H)实施例5:4-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇向由实施例3制得的化合物(100mg)在四氢呋喃中的溶液内加入氯化锂(48mg)和乙酸(0.12ml)，在30℃下将该混合物搅拌36小时。向该反应混合物中加入水(10ml)和乙酸乙酯(100ml)后，分离有机层，用盐水(10ml)洗涤，无水硫酸镁干燥且过滤。减压下通过蒸发除去溶剂，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到标题化合物(105mg)，该化合物为白色固体。1H NMR(CDCl3)δ7.59(d,1H,J=15.8Hz),6.76(s,2H),6.42(d,1H,J=15.8Hz),5.73(m,1H),5.22(t,1H,J=7.2Hz),3.93(d,1H,J=11.8Hz),3.89(3s,9H),3.72(dd,1H,J=11.1,2.6Hz),3.52(d,1H,J=11.8Hz)3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.63(t,1H,J=6.4Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.37-1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.67(s,3H),1.24(s,3H),1.11(m,1H).实施例6:0-(4-三氟甲基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、4-三氟甲基肉桂酸(101mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到31mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.68(d,1H,J=14.4Hz),7.62～7.61(m,4H),6.56(d,1H,J=14.4Hz),5.77(m,1H),5.21(brt,1H),3.72(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.63(t,1H,J=6.3Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.39～1.85(m,6H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H),1.16～1.07(m,1H)实施例7:0-(4-硝基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、4-硝基肉桂酸(101mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到66mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ8.25(d,2H,J=8.8Hz),7.71～7.66(m,3H),6.61(d,1H,J=16.1Hz),5.78(m,1H),5.22(t,1H,J=6.9Hz),3.72(dd,1H,J=2.8,11.2Hz),3.46(s,3H),3.02(d,1H,J=4.4Hz),2.61(t,1H,J=6.4Hz),2.58(d,1H,J=4.4Hz),2.43～1.85(m,6H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H),1.17～1.08(m,1H)实施例8:0-(3,4-二甲氧基-6-硝基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、3,4-二甲氧基-5-硝基肉桂酸(179mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到42mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ8.23(d,1H,J=15.7Hz),7.65(s,1H),7.04(s,1H),6.35(d,1H,J=15.7Hz),5.78(m,1H),5.20(brt,1H,J=7.2Hz),4.05(s,3H),3.98(s,3H),3.73(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.47(s,3H),3.01(d,1H,J=4.4Hz),2.61(t,1H,J=6.4Hz),2.57(d,1H.J=4.4Hz),2.39～1.85(m,6H),1.74(s,3H),1.65(s,3H),1.23(s,3H),1.18～1.05(m,1H)实施例9:0-(4-乙酰氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(72mg)、60％氢化钠(17mg)、4-乙酰氧基肉桂酸(105mg)、吡啶(31mg)和草酰氯(49mg)，得到31mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.49(d,1H,J=15.9Hz),7.28～7.26(m,2H),6.82(d,2H,J=8.6Hz),6.1(d,1H,J=15.9Hz),5.75(m,1H),5.22(t,1H,J=5.7Hz),3.73(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.44(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.68(t.1H,J=6.3Hz),2.57(d,1H,J=4.3H2),2.48～1.82(m,6H),2.38(s,3H),1.76(s,3H),1.67(s,3H),1.26(s,3H),1.18～1.05(m,1H)实施例10:0-(4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇向由实施例9获得的化合物(50mg)在水∶甲醇=1∶1(1ml)的混合溶剂中的溶液内加入碳酸氢钠(15mg)，将该混合物搅拌12小时。用乙酸乙酯(30ml)稀释该反应混合物，有机层用水(10ml)和盐水(20ml)洗涤。有机层用无水硫酸镁干燥和过滤后，残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/1)，得到36mg的标题化合物，该化合物为白色粉末。1H-NMR(CDCl3)δ7.49(d,1H,J=15.9Hz),7.28～7.26(m,2H),6.82(d,2H,J=8.6Hz),6.1(d,1H,J=15.9Hz),5.75(m,1H),5.22(t,1H,J=5.7Hz),3.73(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.44(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.68(t,1H,J=6.3Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.48～1.82(m,6H),1.76(s,3H),1.67(s,3H),1.26(s,3H),1.18～1.05(m,1H)实施例11:0-(4-乙酰氧基-3,5-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(100mg)、60％氢化钠(24mg)、4-乙酰氧基-3,5-二甲氧基肉桂酸(188mg)、吡啶(43.6mg)和草酰氯(70mg)，得到56mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.60(d,1H,J=15.9Hz),6.78(s,2H),6.44(d,1H,J=15.9Hz),5.72(m,1H),5.22(brt,1H),3.86(s,6H),3.72(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.45(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.63(t,1H,J=6.3Hz),2.57(d,1H,J=4.3Hz),2.34(s,3H),2.39～1.85(m,6H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H),1.16～1.07(m,1H)实施例12:0-(3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例10相同的方法但采用实施例11的化合物(40mg)，得到26mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.58(d,1H,J=15.9Hz),6.78(s,2H),6.37(d,1H,J=15.9Hz),5.75(s,1H),5.72(m,1H),5.22(brt,1H),3.93(s,6H),3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.45(s,3H),3.01(d,1H,J=4.4Hz),2.63(t,1H,J=6.4Hz),2.57(d,1H,J=4.4Hz),2.45～1.82(m,6H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.09(s,3H),1.18～1.05(m,1H)实施例13:4-(4-甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇重复与实施例5相同的方法但采用实施例2的化合物(150mg)、氯化锂(21mg)和乙酸(60μl)，得到120mg的标题化合物，该化合物是白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.67(d,1H,J=15.9Hz),7.49(d,2H,J=8.8Hz),6.91(d,2H,J=8.8Hz),5.59(m,1H),5.19(brt.1H,J=6.6Hz),3.90(d,1H,J=10.9Hz),3.84(s,3H),3.50(d,1H,J=10.9Hz),3.32(s,3H),2.99(t.1H,J=6.6Hz),2.65～1.32(m,7H),1.73(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H)实施例14:0-(4-二甲基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇1)向4-二甲基氨基肉桂酸(950mg)在甲苯(20ml)中的溶液内加入二吡啶基二硫化物(1.64g)和三苯基膦(1.97g)，将该混合物搅拌12小时。
(2)将1)所得的溶液在室温下加入烟曲霉醇(5000mg)中。向其中加入氢化钠(142mg)，将该反应混合物搅拌30分钟。加入饱和氯化铵溶液(20ml)后，用乙酸乙酯(100ml)提取该反应混合物。有机层用盐水洗涤并且用无水硫酸镁干燥。过滤后，减压下蒸馏溶剂，残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到黄色固体(470mg)。1H-NMR(CDCl3)δ7.60(d,1H,J=15.8Hz),7.41(d,2H,J=8.9Hz),6.67(d,2H,J=8.9Hz),6.27(d,1H,J=15.8Hz),5.71(m,1H),5.22(brt,1H),3.70(dd,1H,J=2.8,11.0Hz),3.45(s,3H),3.02(s,6H),3.01(d.1H,J=4.3Hz),2.63(t,1H,J=6.3Hz),2.56(d,1H,J=4.3Hz),2.41～1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.67(s,3H),1.22(s,3H),1.15～1.06(m,1H)实施例15:0-(4-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇向乙酸镍(62mg)在甲醇(2ml)中的溶液内加入硼交换树脂(680mg)，将该混合物搅拌20分钟。室温下将由实施例7获得的化合物(250mg)在甲醇(5ml)中的溶液加入其中，将所得混合物搅拌30分钟。过滤出硼交换树脂，减压下蒸除溶剂。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到黄色油状物(100mg)。1H-NMR(CDCl3)δ7.57(d,1H,J=15.9Hz),7.33(d,2H,J=8.4Hz),6.54(d,2H,J=8.4Hz),6.27(d,1H,J=15.9Hz),5.72(m,1H),5.22(brt,1H,J=7.9Hz),3.70(dd,tH,J=2.7,11.1Hz),3.45(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.62(t,1H,6.5Hz),2.56(d,1H,J=4.3Hz),2.37～1.81(m,6H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H),1.16～1.05(m,1H)实施例16:0-(4-氰基肉桂酰基)烟曲霉醇1)向4-氰基肉桂酸(17mg)在四氢呋喃(2ml)中的溶液内加入二环己基碳二酰亚胺(37mg)、苯酚(10mg)和4-二甲基氨基吡啶(2mg)，室温下将该混合物搅拌18小时。
2)将氢化钠(2mg)加入烟曲霉醇(5mg)在四氢呋喃(1ml)中的溶液内，将该混合物在室温下搅拌30分钟。将1)中获得的溶液滴加到其中，将所得混合物搅拌30分钟。加入水后，用乙酸乙酯(3×30ml)提取该反应混合物。合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压下蒸发除去溶剂。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到4mg的白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.69～7.54(m,5H),6.57(d,1H,J=16.1Hz),5.77(m,1H),5.22(brt,1H,J=6.9Hz),3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz),3.46(s,3H),3.01(d,1H,J=4.3Hz),2.61(t,1H,J=6.4Hz),2.19(d,1H,J=4.3Hz),2.42～1.81(m,6H),1.74(s,3H),1.66(s,3H),1.23(s,3H),1.16～1.04(m,1H)实施例17:0-(3,4,5-三甲氧基肉桂基)烟曲霉醇将氢化钠(130mg)加入烟曲霉醇(600mg)在四氢呋喃(10ml)中的溶液内，将该混合物在室温下搅拌1小时。三甲氧基肉桂基溴化物(600mg)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液加入其中，室温下将所得混合物搅拌1小时。减压下通过蒸发除去溶剂后，残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到550mg的白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ6.62(s,2H),6.53～6.49(m,1H),6.29～6.23(m,1H),5.20(brt,1H,J=7Hz),4.28(d,IH,J=6Hz),4.13(m,1H),3.87(s,6H),3.84(s,3H),3.58(dd,1H,J=2.4,11.1Hz),3.46(s,3H),2.95(d,1H,J=4.3Hz),2.57(t,1H,6.5Hz),2.51(d,1H,J=4.3Hz),2.41～1.92(m,6H),1.74(s,3H),1.65(s,3H),1.21(s,3H),1.06～0.98(m,1H)实施例18:0-(4-二甲基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇1)将氢化钠(80mg)加入烟曲霉醇(190mg)在四氢呋喃(10ml)中的溶液内，将该混合物搅拌1小时。
2)室温下，将亚硫酰氯(240mg)加入4-二甲基氨基乙氧基肉桂酸(240mg)在苯(20ml)中的溶液内，减压下将该混合物加热回流1小时。减压下蒸发除去溶剂，向残余物中加入四氢呋喃(10ml)。将该溶液滴加到1)所得的溶液中，将该混合物搅拌1小时。加入水(20ml)后，用乙酸乙酯(100ml)稀释该反应混合物。有机层用水(20ml)和盐水(40ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶甲醇/氯仿=1/6)，得到标题化合物(60mg)，该化合物为白色粉末。1H-NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=15.9Hz)7.46(d,2H,J=8.7Hz)6.91(d,2H,J=8.7Hz)6.36(d,1H,J=15.9Hz)5.73(m,1H)5.22(brt,1H,J=7.3Hz)4.12(t,2H,J=5.6Hz)3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.45(s,3H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.79(t,2H,J=5.6Hz)2.58(t,1H,J=6.4Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.37(s,6H)2.20～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.66(s,3H)1.24(s,3H)1.18～1.06(m,1H)实施例19:0-(3-二甲基氨基甲基-4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇1)将氢化钠(9mg)加入烟曲霉醇(20mg)在四氢呋喃(2ml)中的溶液内，将该混合物搅拌1小时。
2)室温下，将亚硫酰氯(25mg)加入3-二甲基氨基甲基-4-甲氧基肉桂酸(25mg)在苯(2ml)中的溶液内，减压下将该混合物加热回流1小时。减压下蒸发除去溶剂，向残余物中加入四氢呋喃(1ml)。将该溶液滴加到1)所得的溶液中，将该混合物搅拌1小时。加入水(2ml)后，用乙酸乙酯(10ml)稀释该反应混合物。有机层用水(2ml)和盐水(4ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶甲醇/氯仿=1/5)，得到标题化合物(5mg)，该化合物为白色粉末。1H-NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=15.9Hz)7.10(m,2H)6.94(d,1H,J=8.9Hz)6.37(d,1H,J=15.9Hz)5.73(m,1H)5.22(brt,1H,J=7.3Hz)3.93(s,3H)3.82(s,2H)3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.45(s,3H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.58(t,1H,J=6.4Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.37(s,6H)2.20～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.66(s,3H)1.24(s,3H)1.18～1.06(m,1H)实施例20:0-(3,4-亚甲基二氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例1相同的方法但采用烟曲霉醇(500mg)、60％氢化钠(120mg)、3,4-亚甲基二氧基肉桂酸(490mg)、吡啶(218mg)和草酰氯(349mg)，得到280mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=15.9Hz)7.21～7.08(m,2H)6.86(s,1H)6.37(d,1H,J=15.9Hz)5.73(m,1H)5.31(s,2H)5.22(brt,1H,J=7.3Hz)3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.45(s,3H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.58(t,1H,J=6.4Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.41～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.66(s,3H)1.24(s,3H)1.18～1.06(m,1H)实施例21:0-(3,4-二甲氧基-6-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例15相同的方法但采用实施例8的化合物(200mg)、硼交换树脂(420mg)和乙酸镍(41mg)，得到105mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.57(d,1H,J=15.7Hz)7.31(s,1H)7.04(s,1H)6.35(d,1H,J=15.7Hz)5.78(m,1H)5.20(brt,1H,J=7.2Hz)4.05(s,3H)3.93(s,3H)3.92(s,3H)3.73(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.47(s,3H)3.01(d,1H,J=4.4Hz)2.61(t,1H,J=6.4Hz)2.57(d,1H,J=4.4Hz)2.39～1.85(m,6H)1.74(s,3H)1.65(s,3H)1.23(s,3H)1.18～1.05(m,1H)实施例22:0-(4-乙基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇室温下将乙酸(8mg)加入实施例15所得化合物(60mg)和乙醛(20mg)在甲醇(2ml)中的溶液内，随后向其中加入氰基硼氢化钠(9mg)。搅拌1小时后，用乙酸乙酯(50ml)稀释该反应混合物，有机层用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)、水(10ml)和盐水(20ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤。残余物通过柱层析纯化(洗脱剂∶乙酸乙酯/正己烷=1/2)，得到标题化合物(19mg)，该化合物是黄色油状物。1H-NMR(CDCl3)δ7.60(d,1H,J=15.8Hz)7.41(d,2H,J=8.9Hz)6.67(d,2H,J=8.9Hz)6.27(d,1H,J=15.8Hz)5.71(m,1H)5.22(brt,1H)3.70(dd,1H,J=2.8,11.0Hz)3.45(s,3H)3.09(q,2H,J=6.5Hz)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.63(t,1H,J=6.3Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.41～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.67(s,3H)1.22(s,3H)1.18(t,3H,J=6.5Hz)1.15～1.06(m,1H)实施例23:0-(4-乙基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇重复与实施例18相同的过程但采用烟曲霉醇(190mg)、氢化钠(80mg)和4-乙基氨基乙氧基肉桂酸(240mg)，得到73mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.62(d,1H,J=15.9Hz)7.46(d,2H,J=8.7Hz)6.91(d,2H,J=8.7Hz)6.36(d,1H,J=15.9Hz)5.73(m,1H)5.22(brt,1H,J=7.3Hz)4.12(t,2H,J=5.6Hz)3.71(dd,1H,J=2.8,11.1Hz)3.45(s,3H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.79(t,2H,J=5.6Hz)2.63(q,2H,J=6.8Hz)2.58(t,1H,J=6.4Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.20～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.66(s,3H)1.24(s,3H)1.22(t,3H,J=6.8Hz)1.18～1.06(m,1H)实施例24:0-(4-二甲基氨基肉桂基)烟曲霉醇重复与实施例17相同的过程但采用烟曲霉醇(600mg)、氢化钠(130mg)和二甲基氨基肉桂基溴化物(570mg)，得到250mg的标题化合物，该化合物为白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ6.62(s,2H)6.53～6.49(m,1H)6.29～6.23(m,1H)5.20(brt,1H,J=7Hz)4.28(d,IH,J=6Hz)4.13(m,1H)3.70(dd,1H,J=2.8,11.0Hz)3.45(s,3H)3.02(s,6H)3.01(d,1H,J=4.3Hz)2.63(t,1H,J=6.3Hz)2.56(d,1H,J=4.3Hz)2.41～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.67(s,3H)1.22(s,3H)1.15～1.06(m,1H)实施例25:4-(4-二甲基氨基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇重复与实施例5相同的方法但采用实施例14的化合物(100mg)、氯化锂(41mg)和乙酸(0.1ml)，得到86mg的标题化合物，该化合物是白色固体。1H-NMR(CDCl3)δ7.60(d,1H,J=15.8Hz)7.41(d,2H,J=8.9Hz)6.67(d,2H,J=8.9Hz)6.27(d,1H,J=15.8Hz)5.71(m,1H)5.22(brt,1H)3.93(d,1H,J=11.8Hz)3.70(dd,1H,J=2.8,11.0Hz)3.52(d,1H,J=11.8Hz)3.45(s,3H)3.02(s,6H)2.41～1.81(m,6H)1.75(s,3H)1.67(s,3H)1.22(s,3H)1.15～1.06(m,1H)药剂实施例1．片剂的制备活性组分 5.0mg乳糖BP 150.0mg淀粉BP 30.0mg预胶凝玉米淀粉BP15.0mg硬脂酸镁 1.0mg筛分活性组分，与乳糖、淀粉和预胶凝玉米淀粉混合。向该混合物中加入纯水。将糊状物制粒，干燥，与硬脂酸镁混合，随后压缩得到片剂。2．胶囊的制备活性组分 5.0mg淀粉1500100.0mg硬脂酸镁BP1.0mg将活性组分筛分，与添加剂混合。将该混合物装填到明胶胶囊中，得到胶囊。3．注射剂的制备活性组分 100g/mld-HCl 调节pH至3.5注射用盐水BP 最多1ml将活性组分溶解在适当体积的注射用盐水BP中。用d-HCl BP将所得溶液的pH调控在pH3.5，随后用注射用盐水BP调控溶液体积。将完全溶解的溶液装填到5ml型玻璃安瓿中。安瓿的顶部熔合密封。将含在安瓿中的溶液在120℃下高压灭菌15分钟，得到注射剂。对血管生成的抑制活性的实验(体外)将溶于DMSO中的化合物样品用没有加入FBS(胎牛血清)的MEM培养基(在CPAE细胞的情况中)，和RPMI 1640培养基(在EL-4和P388D1细胞的情况中)稀释10倍，对于每种浓度梯度，一式三份地将20μl所述溶液倾入96孔平板的各个孔内。随后，制备各个细胞悬浮液并且倾入以检测对血管生成的抑制作用。
在CPAE(牛肺动脉内皮)细胞(采用2-3次代培养物后的细胞)的情况中，用MEM(+10％FBS+50μg/ml EGGS)培养基制备含有7×103个细胞／ml的细胞悬浮液，在将悬浮液(180μl)倾入96孔平板的各个孔中之后，在CO2恒温箱(5％CO2加湿)中将它们培养4天。利用SRB法测定对血管生成的抑制活性，结果如表1所示。
在EL-4(淋巴组织瘤，鼠科)和P388Dl(白血病，小鼠)细胞的情况中，用RPMI 1640(+10％FBS)制备含有1×104个细胞／ml的细胞悬浮液，在将悬浮液(180μl)倾入96孔平板的各个孔中之后，在CO2恒温箱(5％CO2，加湿)中将它们培养3天。利用MTT法测定对血管生成的抑制活性，结果如表1所示。
表1．IC50的结果(g／ml)
由表1的结果可以看出，本发明的化合物及其盐强有力地遏制血管内皮细胞的增殖，从而抑制了血管生成。
工业实用性所以，本发明的化学式1的化合物及其盐可以用作血管生成抑制剂。
权利要求
1．化学式1所示的烟曲霉醇衍生物或其可药用盐 其中X代表羟基和Y代表卤素，或X和Y可形成环氧乙烷环；B代表氧或氢；和R1、R2、R3、R4和R5独立地代表氢、羟基、乙酰氧基、取代或未取代氨基、取代或未取代烷基、取代或未取代氨基烷氧基、C1-C6烷氧基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基、亚烷基二氧基、甲酰基、乙酰氨基或亚甲氧基羰基，条件是R1、R2、R3、R4和R5不同时代表氢。
2．按照权利要求1所述的烟曲霉醇衍生物或其可药用盐，其中X代表羟基和Y代表卤素，或X和Y形成环氧乙烷环；B是氧或氢；和R1、R2、R3、R4和R5独立地代表氢、羟基、乙酰氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、二烷基氨基烷基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、C1-C6烷氧基、卤素、氰基、三氟甲基、硝基或亚甲基二氧基，条件是R1、R2、R3、R4和R5不同时代表氢。
3．按照权利要求1所述的烟曲霉醇衍生物，其选自0-(3,4-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氯肉桂酰基)烟曲霉醇；4-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇；0-(4-三氟甲基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(硝基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-二甲氧基-6-硝基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙酰氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙酰氧基-3,5-二甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酰基)烟曲霉醇；4-(4-甲氧基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇；0-(4-二甲基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-氰基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4,5-三甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-二甲基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3-二甲基氨基甲基-4-甲氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-亚甲基二氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(3,4-二甲氧基-6-氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-乙基氨基乙氧基肉桂酰基)烟曲霉醇；0-(4-二甲基氨基肉桂酰基)烟曲霉醇；和4-(4-二甲基氨基肉桂酰基)氧基-2-(1,2-环氧-1,5-二甲基-4-己烯基)-3-甲氧基-1-氯甲基-1-环己醇。
4．按照权利要求1所述的烟曲霉醇衍生物的盐，其中所述可药用盐是盐酸盐、溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对-甲苯磺酸盐。
5．一种用于制备化学式5的化合物或其盐的方法，其中包括使烟曲霉醇与化学式3的化合物或其反应性衍生物反应的步骤； 其中，X、Y、R1、R2、R3、R4和R5如权利要求1所述定义。
6．一种用于制备化学式8的化合物或其盐的方法，该方法包括使烟曲霉醇与化学式6的化合物或其反应性衍生物反应的步骤 其中，X、Y、R1、R2、R3、R4和R5如权利要求1所述定义。
7．一种抑制血管生成的组合物，其中包括治疗有效量的权利要求1的化合物或其盐作为活性组分，和可药用载体。
全文摘要
本发明涉及化学式(1)所示的烟曲霉醇衍生物或其可药用盐、其制备方法和含有它们作为活性组分的药物组合物。化学式(1)的化合物及其盐可以用作优良的血管生成抑制剂。
文档编号A61K31/336GK1301260SQ99806188
公开日2001年6月27日 申请日期1999年5月11日 优先权日1998年5月15日
发明者洪清一, 金正优, 李相俊, 安舜吉, 崔南松, 洪隆基, 金炯植, 文升基, 韩哲奎 申请人:株式会社钟根堂